ОБЗОРЫ
Несмотря на существенные успехи, достигнутые в разработке патогенетических методов лечения пациентов с сахарным диабетом 1-го типа (СД1), и снижение смертности у данной категории больных, по сравнению с общей популяцией разница в ожидаемой продолжительности жизни у пациентов СД1 в возрасте 20 лет составляет около 10-12 лет. Одной из наиболее важных проблем в ведении пациентов с СД1 на данный момент является наличие микрососудистых осложнений, повышающих риск развития сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) и общей смертности. Избыточный риск сохраняется даже при надлежащем контроле всех факторов риска ССЗ, что определяет необходимость углубленных исследований для уточнения и выявления всех факторов развития и прогрессирования микрососудистых осложнений у пациентов с СД1, а также разработки методов их модификации и коррекции. По данным литературы основными патогенетическими звеньями развития микрососудистых осложнений при СД1 являются процессы прямого повреждения эндотелия, опосредованного глюкозой, окислительный стресс, а также фибротические процессы микрососудистого русла, в данном литературном обзоре основное внимание сконцентрировано на описании дополнительного возможного пути развития данных изменений – хроническом воздействии повышенной концентрации липополисахарида граммнегативной флоры (LPS) в системном кровотоке. LPS, повышая генерацию реактивных форм кислорода, через НАДФ-оксидазу и приводит к существенному снижению биодоступности эндотелиального NO, и развитию эндотелиальной дисфункции (ЭД). Активаяция толл-подобных рецепторов 4-го типа (TLR4) сопровождается включением p38MAPK, и последующей транслокацией NF-κB в ядро, увеличивая транскрипцию гена интерлейкина-6 (IL-6) и молекул адгезии (ICAM-1, VCAM-1 и E-селектина). LPS способен ингибировать противовоспалительное действие TGF-β, повышая количество поляризованных М1 макрофагов и приводя к персистенции воспаления, активировать рецепторы TGFBR1, усиливая экспрессию гена PAI-1, повышая риск атерогенеза и тромбообразования в сосудистом русле. Представленные в данном литературном обзоре данные свидетельствуют о наличии возможной оси «LPS-кишечник-микрососудистая сеть», являющейся важным патогенетическим компонентом микроваскулярных осложнений у пациентов с СД1. Хроническое избыточное поступление LPS в системный кровоток может приводить к развитию персистирующего низкоинтенсивного воспаления, сопровождающегося изменением архитектоники экстрацеллюлярного матрикса, потенцировать развитие эндотелиальной дисфункции и сосудистого воспаления. Направление изучения влияния LPS на течение СД1 является перспективным направлением и требует дальнейших более глубоких научных изысканий.
Статья посвящена обзору исследований, посвященных роли антител, цитокинов, белков комплемента, молекул основного комплекса гистосовместимости (MHC) и Toll-подобных рецепторов (TLRs) в иммунном ответе, а также их потенциала как мишеней для иммунотерапии. В настоящем обзоре рассматривается влияние различных носителей на иммунную активность белков, с особым акцентом на роли носителей в разработке методов лечения заболеваний, включая онкологические, аутоиммунные и инфекционные. Результаты исследований подчеркивают важность понимания молекулярных механизмов иммунного ответа и роли различных компонентов иммунной системы.
Антитела, как ключевые компоненты адаптивного иммунитета, играют важную роль в нейтрализации патогенов и могут быть использованы в качестве целей для иммунотерапии. Цитокины и белки комплемента выполняют множество функций, включая активацию иммунных клеток, противовирусную активность и регуляцию воспалительных процессов. MHC-молекулы осуществляют презентацию антигенов и активацию адаптивного иммунитета. TLRs, в свою очередь, распознают патоген-ассоциированные молекулярные паттерны и инициируют иммунный ответ. Исследования также показали потенциал использования носителей на основе липидов, белков, углеводов и нуклеиновых кислот для усиления иммунной активности белков.
В обзоре обсуждается использование носителей для улучшения иммунной активности белков, что может быть полезно для создания новых вакцин и других терапевтических препаратов. В последние годы наблюдается растущий интерес к разработке методов лечения на основе белковых молекул, включая моноклональные антитела, цитокины и другие. Данные методы перспективны для лечения целого ряда заболеваний, но на их эффективность влияет выбор молекулы-носителя. Конъюгация белков с другими молекулами, например, наночастицами или липосомами, может повысить стабильность, специфичность и эффективность. Присутствие носителей на поверхности опухолевых клеток способно стимулировать противоопухолевый иммунный ответ. Однако, все еще существуют проблемы, требующие решения при разработке методов лечения на основе носителей. Одной из них является потенциальная иммуногенность, индуцируемая носителем, которая может вызвать нежелательный иммунный ответ и ограничить эффективность терапии. Кроме того, сложный выбор подходящего белка-носителя для конкретного терапевтического применения требует дальнейших исследований механизмов, лежащих в основе функции белка-носителя и активации иммунитета.
Авторами проведен анализ научной литературы, в результате чего установлено, что использование носителей и лигандов представляет собой перспективный подход для улучшения иммунной активности белков и разработки новых стратегий вакцинации и иммунотерапии.
Резюме. Доминирующими этиологическими факторами стерильного воспаления при иммуновоспалительных ревматических заболеваниях являются провоспалительные вне- и внутриклеточные DAMPs, генерирующиеся при системной прогрессирующей дезорганизации рыхлой волокнистой неоформленной соединительной ткани, регулируемой гибели клеток и некрозе клеток. Стерильное воспаление является многоступенчатым процессом, при котороминдуцируется последовательность реакций, опосредованных лейкоцитами и резидентными клетками макрофагально-моноцитарного ряда, направленных на очищение очага воспаления от клеточного и тканевого детрита, с последующим восстановлением гомеостаза поврежденной ткани. Важная роль в этом процессе принадлежит трансэндотелиальной миграции лейкоцитов в очаг стерильного воспаления и формирование клеточного воспалительного инфильтрата. Ключевой особенностью указанных процессов является реактивность PRR рецепторов и, как следствие PRR-DAMPs взаимодействий, последующий запуск молекулярно-клеточных процессов, итогом которых является картина локальных и/или системных проявлений стерильного воспаления. Следствием PRR-DAMPs взаимодействий является активация врождённого иммунитета и запуск молекулярно-клеточных реакций, позволяющих отнести иммуновоспалительные ревматические заболевания к категории системных стерильных аутовоспалительных процессов. Генерализованность патофизиологических эффектов провоспалительных DAMPs и, соответственно, системность и полиорганность поражения тканей и внутренних органов при иммуновоспалительных ревматических заболеваниях обусловлено широкой распространённостью рецепторов к “сигналам опасности”. В развитии DAMP-опосредованного стерильного воспаления важнейшее место занимает феномен кросс-презентации и аутофагия. Кросс-презентация обуславливает презентацию внеклеточных DAMPs из интернализованных белков с молекулами МНС класса Iаутореактивным CD8+ цитотоксическим Т-лимфоцитам. Аутофагия обеспечивает процессинг внутриклеточных пептидных DAMPs, их загрузку на молекулы МНС класса II с последующей индукцией CD4+ Т-клеточного адаптивного иммунного ответа. Важный вклад в указанные процессы вносят врожденные лимфоидные клетки. Модель функциональной сопряжённости и взаимодополняемости ILCs и Th-CD4+Т-клеток расширило наши представления об иммунной регуляции, распространив активность врождённого и адаптивного иммунитета в область поддержания тканевого гомеостаза, морфогенеза, репарации, регенерации и воспаления. Следствием PRR-DAMP взаимодействий тканевых ILCs и последующего подключения клеточных пар ILC - Th-CD4+Т-клеток является прогрессирование системного стерильного воспаления. Представленные в настоящем обзоре материалы определяют перспективные молекулярные и клеточные мишени с целью регуляции и/или ингибирования активности стерильного воспаления при иммуновоспалительных ревматических заболеваниях.
Резюме
Помимо хорошо известных субпопуляций Т-лимфоциов адаптивного иммунитета и лимфоцитов врожденного иммунитета (innate lymphoid cells) существует промежуточная группа лимфоцитов (innate-like cells), уже обладающая Т-клеточным рецептором, но с ограниченным репертуаром. В эту группу следует отнести γδТ-клетки, субпопуляции NKT-клеток I и II типов, несущих как Т-рецептор, так и рецепторы NK-клеток и mucosal-associated invariant T (MAIT) клетки. Развитие innate-like cells происходит в тимусе, однако положительная и отрицательная селекция их проходит без участия эпителиальных клеток тимуса. Отличительной особенностью является то, что innate-like cells приобретают эффекторный фенотип уже в тимусе, поэтому не требуют сложных реакций активации при распознании антигена. Эти клетки располагаются преимущественно в барьерных тканях и способны распознавать своим Т-клеточным рецептором непептидные антигены, презентированные в неполиморфных молекулах тканевой совместимости (МНС-Ib). Функционально различные субпопуляции innate-like cells позволяют им быстро реагировать на антиген продукцией цитокинов, типичных для Th1, Th2, Th17. Также они обладают цитотоксической и иммунорегуляторной активностью. Эти клетки активно вовлечены в регуляцию гомеостаза барьерных тканей и взаимодействие с микробиотой. Также они участвуют в противоинфекционной защите, направляя развитие иммунного ответа. Более того, они оказались участниками многих аутоиммунных заболеваний. Особенности функционирования innate-like cells делают их перспективной мишенью для терапевтических воздействий.
В настоящем обзоре представлены современные данные о происхождении моноцитов\макрофагов, условиях, необходимых для дифференцировки моноцитов в макрофаги М1 или М2. Описаны три субпопуляции моноцитов периферической крови: (i) классические – основная субпопуляция (85-90%), эффективно осуществляющая фагоцитоз; (ii) промежуточные моноциты (5-10%) – участвуют в процессинге и презентации антигена, в ангиогенезе, восстановлении эндотелия сосудов; (iii) неклассические моноциты (10%) – «патрулируют» сосудистую сеть, удаляют клеточный дебрис, участвуют в ремоделировании тканей. В обзоре приведены подробные характеристики для каждого подкласса макрофагов: провоспалительные (М1), и противовоспалительные (М2), играющие разные роли в инициации и разрешении воспаления; описаны их фенотип, спектр секретируемых цитокинов, экспрессия транскрипционных факторов, выполняемые функции. Для популяции М2 подробно описаны особенности субпопляции: М2a, М2b, М2c, М2d. В обзоре приведены методы и подходы к получению поляризованных макрофагов в условиях in vitro как из моноцитов периферической крови, так и из клеток перевиваемых культур, основанные на сигналах, получаемых макрофагами в условиях in vivo; приведены фенотип, продукция цитокинов и функциональные свойства искусственно поляризованных макрофагов в зависимости от условий их получения. В обзоре подробно рассматриваются особенности контактного и дистантного взаимодействия макрофагов различных подклассов с клетками микроокружения на примере естественных киллеров и клеток трофобласта, приводятся сведения об изменении фенотипа, транскрипционного и секреторного профиля взаимодействующих клеток. Описаны механизмы контроля трофобластом дифференцировки макрофагов в уникальную М2 популяцию децидуальных макрофагов, контролирующих как развитие и функционирование трофобласта, так и его апоптоз. В обзоре подробно рассматриваются известные на сегодняшний день варианты взаимодействия субпопуляций макрофагов с естественными киллерами. Влияние Мф на NK-клетки проявляется в изменении экспрессии последними транскрипционных факторов, определяющих не только их дифференцировку, но и функциональную активность. Макрофаги рассматриваются как клетки, активно влияющие на функциональное состояние и дифференцировку естественных киллеров. В обзоре рассматриваются механизмы взаимоотношений всех трех типов клеток: макрофагов, трофобласта и естественных киллеров в зоне маточно-плацентарного контакта. Изучение взаимодействий этих клеток прольет свет не только на особенности межклеточных взаимоотношений в зоне маточно-плацентарного контакта, но и на взаимоотношения клеток опухолей с NK-клетками и макрофагами.
Наружный генитальный эндометриоз – хроническое рецидивирующее заболевание, патогенез которого остается до конца не изученным. Эндометриоз делит общие черты с опухолевым процессом. Так, для данного заболевания характерно распространение ткани, подобной эндометрию, вне полости матки. Пролиферация и инвазия клеток в эктопических очагах возможна только при нарушении местных процессов иммунной защиты. Одним из механизмов избегания иммунологического надзора, доказанным для опухолевого процесса, является использование контрольных точек. Контрольные точки представляют собой белки, расположенные на поверхности клеток иммунной системы (преимущественно Т-лимфоцитов). Связывание контрольных точек с их лигандами на поверхности опухолевой клетки приводит к ингибированию клеток иммунитета и помогает таким образом опухоли «выжить». В данном обзоре собраны данные литературы об известных на сегодняшний день контрольных точках: CTLA-4, PD-1, LAG-3, Tim-3, TIGIT, 4-1BB, GITR. Рассмотрены наиболее изученные их лиганды такие как (CD80/CD86, PD-1L, Gal-3, Gal-9). В обзоре систематизированы данные о клетках, на которых экспрессируются контрольные точки и их белки с ними связывающиеся, приведены примеры опухолей, которые используют данное взаимодействие для защиты от распознавания. Помимо этого, в обзоре описаны препараты – ингибиторы контрольных точек, успешно используемые в терапии определенных опухолей. Наряду с отсутствием полноты знаний о патогенезе эндометриоза, на сегодняшний день единственным достоверным методом его диагностики является проведение лапароскопии с визуализацией очагов и последующим их гистологическим исследованием. В обзоре собраны результаты исследований, посвященных изучению некоторых биомаркеров для неинвазивной диагностики эндометриоза: CA-125, MCP-1, IL-6, BDNF и других. Авторами рассмотрены результаты нескольких работ, в которых иммунные контрольные точки изучались в аспекте наружного генитального эндометриоза. Следует подчеркнуть, что по результатам этих исследований экспрессия контрольных точек Т-лимфоцитами и концентрация растворимых форм была значимо повышена среди женщин с эндометриозом. Также в обзоре представлены результаты эксперимента, в котором определение уровня одного из лигандов контрольных точек в крови пациенток показало высокую чувствительность и специфичность. Таким образом, изучение контрольных точек в качестве механизма, потенциально используемого эндометриоидными клетками для уклонения от иммунологического ответа, а также биомаркеров неинвазивной диагностики является многообещающим направлением.
При лечении солидных опухолей – восстановление воспалительных иммунных реакций необходимо для достижения ремиссии. Для этой цели NK-клеточный трансплантат имеет ряд преимуществ перед Т лимфоцитами, однако и он требует дополнительных терапевтических воздействий, так как разнообразные механизмы ускользания опухолей блокируют клеточный иммунитет. Одно из разрабатываемых направлений, поддерживающих NK-клетки — это создание «усилителей» (NKCE) - инженерных белков, и делающих клеточную терапию более селективной и адресной. NKCE может активировать целевую миграцию NK-клеток одновременно блокируя ингибирующие лиганды. Блокада ингибирующих сигналов для борьбы с метастатическими опухолями изучается в настоящее время для рецепторов KIR, NKG2A, TIGIT, TIM-3, EGFR, PD1 и PDL1, лигандов NKG2D, что описано в ряде исследований. Повышение специфичности терапии также достигается за счет использования антител нового поколения – наноантител, направленной блокировки экзосом злокачественного происхождения (TDE), а также доменов некоторых белков, усиливающих целевую миграцию NK-клеток, и терапевтических наночастиц.
Иммунные контрольные точки (ИКТ) представляют собой обширный и разнообразный комплекс стимулирующих и ингибирующих сигнальных путей, которые играют важную роль в осуществлении точной регулировки иммунных реакций. Молекулы ИКТ могут существовать как в мембранной, так и в растворимой форме. Традиционно ИКТ считались исключительно связанными с клеточной мембраной системами рецепторов и лигандов, способными запускать или блокировать функционирование иммунных клеток, однако за последнее десятилетие доказано их существование в виде растворимых форм (растворимые молекулы иммунных контрольных точек или sИКТ). Растворимые молекулы ИКТ являются биологически активными регуляторами, участвующими в паракринной и системной модуляции иммунных реакций, подобно цитокинам. В периферической крови здоровых людей присутствуют sИКТ, обладающие свойствами как стимуляторов, так и ингибиторов иммунной системы, и их баланс может нарушаться при многих онкологических заболеваниях, а том числе, злокачественных заболеваниях системы крови, COVID-19, ВИЧ-инфекции, злоупотреблении алкоголем. Накоплено большое количество данных в пользу наличия связи между sИКТ и различными заболеваниями, при этом ряд ключевых аспектов биологии растворимых контрольных точек до конца не уточнен. Наиболее широко известными и изучаемыми являются такие молекулы ИКТ, как PD-1 (programmed death receptor-1) и его лиганды PD-L1 и PD-L2, а также CTLA-4 (cytotoxic T-lymphocyte antigen-4), TIM-3 (T cell immunoglobulin and mucin-domain containing-3), VISTA (V-domain Ig-containing suppressor of T cell activation). Механизмы образования растворимых форм достаточно сложны и разнообразны и включают альтернативный сплайсинг, отщепление мембранных эктодоменов, протеолитическое расщепление. Так среди молекулярных механизмов, лежащих в основе синтеза и высвобождения sPD-1 и sPD-L1, наиболее важными являются альтернативный сплайсинг мРНК и трансляция изоформ, лишенных трансмембранных доменов, тогда как образование растворимой формы TIM-3 происходит путем разрезания внеклеточных участков трансмембранных белков посредством протеазы (шеддазы) ADAM10. В обзорной статье приведены данные об основных sИКТ, включая sPD-1, sPD-L1, экзосомальный sPD-L1, sCTLA-4 и ряд других. Описаны молекулярные механизмы их образования, биологические функции в поддержании иммунного гомеостаза, а также прогностическое значение изменения их содержания у больных злокачественными новообразованиями (включая немелкоклеточный рак легкого, гепатоцеллюлярный рак, рак молочной железы, рак почки, рак кожи, рак желудка и ряд других), а также при злокачественных заболеваниях системы крови (включая лимфомы, хронический лимфолейкоз, острый миелобластный лейкоз, множественную миелому).
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Патофизиология тяжелой формы COVID-19 характеризуется изменением количества, фенотипа и функций нейтрофильных гранулоцитов (НГ). Среди эффекторных противовирусных механизмов НГ одними из наиболее важных являются нейтрофильные внеклеточные ловушки (NETs), но чрезмерное их образование усугубляет воспаление при остром респираторном дистресс-синдроме и способствует тромбозу микрососудов. Их обнаружение и количественная оценка могут иметь важное значение при различных формах течения COVID-19 для определения корреляции с исходом заболевания, оценки риска развития постковидного синдрома и, возможно, мониторинга будущей целевой терапии.
Цель исследования: разработать новый диагностический интеграционный критерий, позволяющий оценить тяжесть течения COVID-19 и риск развития осложнений в постковидном периоде, в т.ч. постковидного синдрома в периферической крови.
Материалы и методы: Исследованы образцы периферической крови (ПК) 31 пациента с острым течением COVID-19 (среднетяжелого течения (n=15) и тяжелого течения (n=16)), 52 пациентов, выписанных из стационара после лечения COVID-19 тяжелой степени тяжести, в сроки от 30 до 60 дней, имеющие постковидный синдром (ПКС) и 100 условно-здоровых добровольцев. Оценивались показатели общеклинического анализа крови (MicroCC-20Plus), в мазках ПК проводился подсчет лейкоцитарной формулы с учетом количества образованных NET и НГ, ушедших в патологический апоптоз. На основе полученных результатах рассчитывался интеграционный диагностический критерий по формуле: ИДК= .
Результаты. Показано снижение ИДК при среднетяжелом течении заболевания в 8,5 раз (p<0,05), а при тяжелом течении в 30 раз (p<0,05) по сравнению со значениями в группе условно-здоровых лиц. Также установлено, что у 88,5 % пациентов с ПКС перенесших SARS-CoV-2 в ПК не выявлено морфологически патологических измененных НГ. В тоже время у 11,5 % пациентов с ПКС отмечено появление NETs и клеток с патологическим апоптозом, при этом ИДК НГ-ПКС был в 8 раз меньше (p<0,05), чем в группе сравнения и не отличался от показателей пациентов со среднетяжелым течением COVID-19 (p>0,05), что диктует необходимость дальнейшего диспансерного наблюдения таких пациентов.
Заключение. Полученные в настоящем исследовании данные свидетельствуют о том, что разработанный интеграционный диагностический критерий позволяет оценить как тяжесть течения COVID-19 в острый период, так и риск возникновения постковидного синдрома. Следует подчеркнуть, что выявленные при COVID-19 характерные изменения НГ можно легко идентифицировать в ПК и последовательно отслеживать по расчетному интегральному диагностическому критерию. Значительное снижение ИДК свидетельствует о сохраняющейся гиперактивации НГ и необходимости проведения таргетной иммунотерапии, направленной на модулирование дисфункций НГ.
Резюме. Основным нейротоксическим осложнением при лечении острого лимфобластного лейкоза у детей является винкристиновая полиневропатия. Недавние исследования продемонстрировали участие иммунной системы в патогенетических механизмах поражения периферической нервной системы. В последние годы появляются сообщения по изучению взаимосвязи между интерлейкином-13 (IL-13) и развитием токсических эффектов химиотерапевтических препаратов.
Цель работы: оценить клиническую ценность уровня IL-13 у детей при винкристиновой полиневропатии.
Материалы и методы: в исследовании участвовало 27 детей с острым лимфобластным лейкозом в возрасте от 3-х до 17-и лет, которые получали химиотерапию по протоколу. Проводили определение уровня IL-13 в плазме крови с последующим сравнительным анализом показателей в двух подгруппах в зависимости от развития винкристиновой полиневропатии. Оценка содержания IL-13 проводилась методом мультипараметрического иммунофлуоресцентного анализа с магнитными микросферами (технология xMAP, Luminex 200, USA) и использованием тест-системы ProcartaPlex Human Cytokine/Chemokine (Invitrogen, USA).
Результаты: в исследуемой группе пациентов винкристиновая полиневропатия регистрировалась у большинства детей (n=15) с дебютом преимущественно на индукционном этапе химиотерапии и доминированием сенсорных нарушений. При сравнительном анализе уровня IL-13 в плазме крови у пациентов с винкристиновой полиневропатией отмечалось статистически значимое повышение его концентрации в отличие от детей, не имеющих признаков поражения периферической нервной системы (p=0,042). При оценке клинической цености данного показателя диагностическая чувствительность составила 75 %, специфичность – 100 %, интегральный показатель, характеризующий точность теста – 0,89. Установлено, что изменение IL-13 имеет достаточно высокий уровень относительного риска, что указывает на его существенную взаимосвязь с развитием винкристиновой полиневропатии.
Заключение: полученные результаты проведенного исследования о содержании IL-13 в плазме крови у детей с винкристиновой полиневропатией позволили выделить его в качестве предикторного биологического маркера поражения периферической нервной системы.
Введение. Метаболизм аргинина играет важную роль в регуляции функций клеток иммунной системы у млекопитающих. Патогенные микробы используют механизм истощения аргинина для подавления иммунного ответа при инфекции. Аргининдеиминаза – микробный аргинин-гидролизующий фермент, необходимый для выживания при низком рН в очаге инфекции или внутри фаголизосом, а также в условиях низкого содержания глюкозы. Влияние бактериальной аргининдеиминазы на функции клеток адаптивного иммунного ответа остается слабо изученным. Цель исследования состояла в изучении влияния стрептококковой аргининдеиминазы на пролиферацию и аутофагию CD4+ и CD8+ популяций Т-лимфоцитов периферической крови человека. Материал и методы. Действие фермента на клетки изучали с использованием супернатантов разрушенных ультразвуком Streptococcus pyogenes M49-16 и его изогенного мутанта с инактивированным геном arcA (Streptococcus pyogenes M49-16delarcA). Исследование проводили с использованием крови здоровых доноров. Фракцию мононуклеарных лейкоцитов выделяли путем центрифугирования на градиенте плотности фиколла. Для оценки пролиферации использовали метод, основанный на окрашивании внутриклеточных белков прижизненным флуоресцентным красителем carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE). Исследование уровня аутофагии в клетках проводили с использованием флуоресцентного красителя Lysotracker Green DND-26. Для анализа пролиферации и аутофагии Т-хелперов (CD3+CD4+) и цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3+CD4-) клеточные суспензии, окрашивали антителами против CD4, CD45RA, и CD3. Долю клеток в состоянии некроза определяли путем их окрашивания флуоресцентным ДНК-связывающим красителем DAPI. Нормальность распределения оценивали тестом Шапиро-Уилка. Данные были проанализированы с использованием критерия Крускала-Уоллиса с последующим применением критерия Манна-Уитни для попарных сравнений и выражены в виде медианы и межквартильных диапазонов [Q25; Q75]. Результаты. Сравнение эффектов супернатантов разрушенных стрептококков исходного и мутантного штаммов, которые отличались по экспрессии одного гена аргининдеиминазы показало, что бактериальный фермент не оказывал влияния на функции неактивированных лимфоцитов. Однако стрептококковая аргининдеиминаза полностью подавляла стимулированную anti-CD2/CD3/CD28 антителами пролиферацию CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов. Эти эффекты сопровождались снижением в клетках уровня аутофагии. В тоже время, аргининдеиминаза не обладала цитотоксическими эффектами в отношении лимфоцитов. Введение супрафизиологических концентраций L-аргинина исследуемые восстанавливало клеточные функции. Различий между исследуемыми параметрами CD4+ и CD8+ популяций Т-лимфоцитов выявлено не было. Заключение. Полученные данные, показывают, что антипролиферативное действие аргининдеиминазы может быть связано со способностью фермента ингибировать аутофагию и доказывают способность бактериального фермента подавлять адаптивные иммунные реакции организма-хозяина.
Резюме. Асептический некроз головки бедренной кости представляет собой стадийный процесс, при котором остеодеструкция, сменяется остеорепарацией. Исход данного заболевания может характеризоваться тяжелой дисконгруэнтностью области тазобедренного сустава, инвалидностью больного. В последнее время значительно возрос интерес к изучению молекулярно-клеточных механизмов нарушения костного гомеостаза и способов его коррекции. Ряд исследований продемонстрировали роль неспецифического воспаления в патогенезе асептического некроза, однако, требуется более детальное изучение динамики изменения активности сигнальных путей остеогенеза. Целью настоящего исследования являлась оценка роли молекулярных паттернов развития воспаления и остеогенеза в течении асептического некроза головки бедренной кости в модельном эксперименте. Проведена хирургическая индукция асептического некроза головки бедренной кости у 16 крыс, которые выводились из эксперимента по 4 особи, каждые 2 недели в течении 8 недель. Исследована экспрессия генов, кодирующих белки, участвующие в регуляции остеогенеза, методом кПЦР с обратной транскрипцией, а так же концентрация белков VCAM1, MMP9 методом иммуноблотинга. Результаты исследования продемонстрировали гетерогенность динамики изменений молекулярно-клеточных нарушений регуляции костного гомеостаза в патогенезе асептического некроза. Так первые две недели после хирургической индукции в качестве предикторных факторов определялась экспрессия гена hif1α и tnfα, а так же концентрация белков MMP9 и VCAM1. Через 1 месяц в качестве протекторов выступали концентрация белка VCAM1 и экспрессия гена tnfα, а предикторов ген il6 и белок MMP9. Через 6 недель развитию асептического некроза способствовала экспрессия гена il4, а через 8 недель гена il6. Таким образом, важная роль в регуляции остеорезорбции принадлежит неспецифическому воспалению, триггером которого может служить острая тканевая гипоксия. Значимое влияние процесса воспаления сохраняется до 8 недель после манифестации аваскулярного некроза головки бедренной кости. Патогенез костной деструкции связан не только с усилением активности остеокластогенеза, но и снижением интенсивности остеобластогенеза. При этом ведущий молекулярно-клеточный патологический паттерн нарушения костного гомеостаза меняется в зависимости от стадии течения асептического некроза.
Атопическая бронхиальной астма является наиболее частым и тяжелым аллергическим заболеванием среди широкого спектра подобных болезней. Основной патогенез этого заболевания характеризуется нарушением гомеостаза T-лимфоцитов, что значительно ухудшает общее состояние здоровья.
При атопической бронхиальной астме происходит нарушение процесса апоптоза T-клеток. Это влечет за собой нарушение регуляции и поддержания гомеостаза периферических лимфоцитов. В нормальном состоянии организма T-клетки должны подвергаться апоптозу, а его продукты должны утилизироваться соседними клетками или профессиональными фагоцитами: моноцитами, макрофагами или дендритными клетками. Этот процесс нарушается при атопической бронхиальной астме.
Нарушение иммунной системы, такие как аутоиммунитет, часто возникают из-за неправильной регуляции апоптоза лимфоцитов. Это особенно актуально в случаях, когда происходит недостаточный клиренс апоптотических телец, или даже его полное отсутствие.
В последние годы в научном и медицинском сообществах большое внимание обращено к такой форме фагоцитоза, как эффероцитоз. Это процесс, при котором апоптические клетки удаляются фагоцитарными клетками путем LC3-ассоциированного фагоцитоза (LAP).
Данный процесс инициирует поглощение за счет взаимодействий рецепторов плазматической мембраны фагоцита с апоптотической клеткой. Далее в клетке при участии определенных белков аутофагии (Beclin1, VPS34, UVRAG, ATG5, ATG12, ATG7, ATG4, ATG4, LC3) формируется одномембранная фагосома. Фагосома обогащается молекулами LC3 белка и сливается с лизосомой, в которой затем происходит лизис захваченного «груза».
В рамках нашей работы был проведен подробный анализ содержания некоторых ключевых белков LAP-пути в моноцитах периферической крови больных бронхиальной астмой тяжелого течения. Было обнаружено, что экспрессия белка Rubicon повышена, что позволяет заключить, что в моноцитах здоровых доноров активируется LAP-путь, по которому происходит фагоцитоз погибающих T - клеток.
В то же время, в моноцитах больных тяжелой формой атопической астмы активируются компоненты характерные как для аутофагии, так и для LC3-ассоциированного фагоцитоза. Однако, стоит отметить, что достоверно установлено снижение экспрессии белка Rubicon, предполагаемого маркера LC3-ассоциированного фагоцитоза.
Инфекционный эндокардит (ИЭ) характеризуется дисфункцией клапанов сердца и вносит значительный вклад в структуру заболеваемости и смертности среди всех патологий сердечно-сосудистой системы. Иммунный ответ играет важную роль в патофизиологии данного заболевания. Целью исследования была оценка локального профиля цитокинов, экспрессируемых нативными клапанами сердца, полученными от пациентов с ИЭ в процессе кардиохирургического вмешательства. Профиль секретируемых цитокинов изучали в нативных клапанах сердца, полученных от 4 пациентов с ИЭ (экспериментальная группа) и 10 пациентов с ревматической болезнью сердца (РБС) (контрольная группа) с помощью дот-блоттинга с использованием наборов Proteome Profiler™ Human Cytokine Array Kit (ARY005B). Результаты дот-блоттинга подтверждали путем оценки уровня экспрессии соответствующих генов с помощью количественной ПЦР. Белки MIF, PAI-1, ICAM-1 и CXCL12 были обнаружены в образцах нативных клапанов как экспериментальной, так и контрольной групп. В результате полуколичественного анализа установлено, что клапаны, пораженные ИЭ, характеризовались четырехкратным повышением секреции PAI-1 и двухкратным снижением секреции ICAM-1 и CXCL12 по сравнению с контролем. MIF экспрессировался на одном и том уже уровне в обеих изученных группах. Белки IL1-ra, IL-6, IL-8, IL-16, CCL4, CCL5 и CXCL1 были обнаружены только в клапанах, пораженных ИЭ. Кроме того, в экспериментальной группе было отмечено повышение экспрессии генов MIF, IL6, IL8; и снижение экспрессии генов PAI1, IL1RA и CXCL1 относительно контроля. Таким образом, нативные клапаны сердца, пораженные ИЭ, характеризуются развитием локального воспаления, вызванного патогенной бактериемией, и активной неоваскуляризацией.
Введение. В настоящее время наблюдается рост заболеваний, нарушением баланса Th1/ Th2 лимфоцитов и цитокинов, таких как: аллергия, аутоиммунные и онкологические заболевания. Известно, что производные пиримидина обладают широким спектром фармакологической активности, в том числе противоаллергенным действием. Цель. Изучить влияние производных 5-оксипиримидинов на реакцию системной анафилаксии, содержание иммуноглобулина Е и цитокинов в сыворотке крови у мышей, сенсибилизированных овальбумином, по сравнению с препаратом Эриус. Материалы и методы. В опыте на 140 самцах мышей линии Balb/c проведено изучение влияния производных 5-оксипиримидина (СНК-411 и СНК-578), которые вводили 7 дней внутрибрюшинно (в/б) в дозах 25 мг/кг и 50 мг/кг, препарата сравнения Эриус (в/б, 1,3 мг/кг) на реакцию системной анафилаксии к овальбумину, уровень иммуноглобулина Е (Ig E) и содержание цитокинов в сыворотках крови животных контрольных и опытных групп. 120 мышам проводили двукратную иммунизацию с интервалом 2 недели подкожным ведением овальбумина (100 мкг/мышь) в смеси с гидроокисью алюминия (5 мг/мышь), 20 мышей использовали в качестве интактного контроля. После второй иммунизации овальбумином в течение 7 дней 120 животным опытных групп вводили СНК-411или СНК-578 и препарат сравнения Эриус. Через 1 час после последнего введения препаратов 70 мышам контрольных и опытных групп в ретроорбитальный синус вводили внутривенно овальбумин (по 100 мкг в 0,1 мл физиологического раствора) и оценивали уровень системной реакции анафилаксии. 70 мышей контрольных и опытных групп забивали методом декапитации, содержание IgE и цитокинов IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-11, IL-17А, IL-17F, IFN-γ, IL-13 в сыворотках крови определяли на проточном цитометре BD FACSCanto ІІ (“BD Biosciences”, США). Результаты. Введение СНК-411 и СНК-578 в дозе 50 мг/кг вызывало подавление системной реакции анафилаксии и снижение содержания IgE в сыворотках крови мышей в 1,5 – 1 6 раз. Введение препарата Эриус не вызывало снижения концентрации IgE в сыворотках крови сенсибилизированных мышей. У сенсибилизированных овальбумином мышей наблюдали уменьшение концентрации Тh1 цитокинов IFN-γ, ИЛ-2 и увеличение концентрации Th2 цитокинов ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-13, а также провоспалительного интерлейкина ИЛ-6. Курсовое введение СНК-411 и СНК-578 в дозах 25 мг/кг и 50 мг/кг и препарата Эриус снижало концентрацию Th2 цитокинов ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-13 по сравнению с активным контролем. Введение СНК-411 и СНК-578 в дозах 25 и 50 мг/кг увеличивало содержание ИЛ-2, введение СНК-578 в дозе 50 мг/кг также увеличивало содержание IFN-γ до уровня интактного контроля и снижало содержание ИЛ-6. СНК-411 и СНК-578 снижали содержание ИЛ-11 по сравнению с активным контролем, СНК-411 снижал содержание ИЛ-17А. Выводы. Производные 5-оксипиримидинов при курсовом 7-дневном введении в дозе 50 мг/кг вызвали подавление реакции системной анафилаксии. СНК-411, СНК-578 и Эриус снизили содержание проаллергенных цитокинов в сыворотке крови сенсибилизированных мышей. При этом производные 5-оксипиримидина, в отличие от Эриуса снизили содержание иммуноглобулина Е.
Главный комплекс гистосовместимости (HLA-система) является одной из наиболее полиморфных генетических систем человека. Распределение HLA-аллелей и гаплотипов отличается в пределах определенных этносов и географических регионов. В связи с влиянием внутренних и внешних факторов (значительная территория России, многонациональный состав населения, межэтнические контакты), русские популяции, сформировавшиеся в различных регионах нашей страны, могут иметь различия иммуногенетических характеристик. Целью настоящего исследования являлось определение генетических дистанций между русскими различных регионов России и другими российскими и мировыми популяциями. Согласно полученным данным, у русских, являющихся жителями Санкт-Петербурга, Нижнего Новгорода и Ростова-на-Дону, наблюдалось схожее распределение групп аллелей HLA-генов. Независимо от региона проживания, максимально распространенными у обследованных русских являлись общеевропейские HLA-гаплотипы A*01-B*08-C*07-DRB1*03-DQB1*02 и A*03-B*07-C*07-DRB1*15-DQB1*06. Девять из десяти наиболее часто встречающихся HLA-гаплотипов у жителей Санкт-Петербурга и Нижнего Новгорода совпадали. Помимо упомянутых выше, к их числу относились: A*02-B*13-C*06-DRB1*07-DQB1*02, A*03-B*35-C*04-DRB1*01-DQB1*05, A*02-B*07-C*07-DRB1*15-DQB1*06, A*02-B*18-C*07-DRB1*11-DQB1*03, A*25-B*18-C*12-DRB1*15-DQB1*06, A*02-B*41-C*17-DRB1*13-DQB1*03, A*30-B*13-C*06-DRB1*07-DQB1*02. Гаплотип A*02-B*15-C*03-DRB1*04-DQB1*03, принадлежавший к числу десяти наиболее распространенных у русских-жителей Санкт-Петербурга, значительно реже определялся у русских-нижегородцев (частота 0,0119 против 0,0034, p=0,03) и не был установлен у русских-ростовчан. Профиль HLA-гаплотипов, характерных для русских, проживающих в Ростове-на-Дону, имел более выраженные отличия. В частности, у русских-ростовчан к числу 16-ти HLA-гаплотипов, встречающихся с частотой более 0,01, принадлежали: A*23-B*44-C*04-DRB1*07-DQB1*02, A*02-B*57-C*06-DRB1*07-DQB1*03, A*24-B*35-C*04-DRB1*11-DQB1*03, A*01-B*52-C*12-DRB1*15-DQB1*06, A*11-B*35-C*04-DRB1*01-DQB1*05, A*02-B*27-C*02-DRB1*01-DQB1*05, A*02-B*44-C*02-DRB1*16-DQB1*05. Два из перечисленных гаплотипов (A*24-B*35-C*04-DRB1*11-DQB1*03 и A*02-B*44-C*02-DRB1*16-DQB1*05) не были установлены у русских Нижнего Новгорода, частота остальных пяти гаплотипов у нижегородцев не достигала 0,01. У русских Санкт-Петербурга перечисленные выше гаплотипы ростовчан определялись с частотой менее 0,01. Статистически достоверные различия были выявлены только для гаплотипа A*23-B*44-C*04-DRB1*07-DQB1*02 (частота 0,0246 против 0,0062, р=0,01). Расчет генетических дистанций между популяциями показал, что наиболее близкими к русским, проживающим в Санкт-Петербурге, являются русские-жители Нижнего Новгорода, а также русские Москвы и белорусы. Генетическая дистанция между русскими-петербуржцами и русскими, проживающими в Ростове-на-Дону и Челябинской области, несколько больше. Сравнение генетических расстояний между представителями различных славянских популяций показало, что наиболее близки друг другу восточные (белорусы, русские) и западные (поляки, словаки, чехи) славяне. Популяции южных славян (сербы, хорваты, македонцы) являются более удаленными. Результаты выполненного исследования могут быть использованы для изучения процессов этногенеза, проведения научных исследований взаимосвязи HLA-генетических факторов с заболеваниями, а также применяться в практической деятельности регистров доноров гемопоэтических стволовых клеток.
Цель работы. Обосновать эффективность терапии антифосфолипидного синдрома (АФС) у беременных с использованием плазмафереза и имммуноглобулинов для внутривенного введения.
Материалы и методы. Обследованы 92 женщины с диагностированным АФС и 47 женщин без АФС с физиологически протекающей беременностью. Пациентки были разделены на группы в зависимости от применяемого способа лечения: только стандартная терапия, плазмаферез в дополнение к стандартной терапии, иммуноглобулины для внутривенного введения (ВВИГ) в дополнение к стандартной терапии, и комплексное лечение – плазмаферез и ВВИГ в дополнение к стандартной терапии. В сыворотках и плазме периферической крови определяли содержание суммарных антифосфолипидных антител и параметров гемостаза, а также Р-селектина, до и после лечения.
Результаты. Установлено, что достоверно более высокая частота благоприятных исходов беременности – 96,3% (срочные роды) - была в группе пациенток с АФС, получавшим сочетанную терапию. Установлено, что наиболее значимое снижение уровня антифосфолипидных антител наблюдалось в группе с сочетанным применением плазмафереза и ВВИГ на фоне традиционной терапии. У женщин с физиологически протекающей беременностью без антифосфолипидных антител экспрессия Р-селектина была достоверно ниже по сравнению с беременными с АФС.
Выводы. Применение комплексного подхода с использованием плазмафереза, иммуноглобулинов для внутривенного введения на фоне стандартной терапии является наиболее эффективным методом лечения невынашивания беременности, связанного с АФС. Использование данного метода позволило сократить частоту акушерских осложнений и улучшить исходы беременности за счет увеличения частоты срочных родов. Определение уровня Р-селектина до и после лечения позволяет оценить уровень активации тромбоцитов, эффективность проводимых методов терапии и корректировать неблагоприятные показатели тромбоцитарного звена гемостаза в ходе терапии.
Цель исследования заключалась в проведении сравнительного анализа содержания естественных нейротропных аутоантител (еАТ) в сыворотке крови больных с COVID-19 ассоциированными ишемическими инсультами (ИИ) в динамике заболевания.
Материалы и методы. Всего в проспективное исследование были включены 150 больных с впервые возникшим ИИ, из которых 100 пациентов были с ИИ на фоне COVID-19 пневмонии (основная или 1 группа) и 50 больных с острым ИИ без симптомов и положительного теста на COVID-19 (группа сравнения или 2 группа). Тяжесть инсульта и сознание оценивались по шкале NIHSS и шкале ком Глазго. Методом иммуноферментного анализа в сыворотке крови больных (n=110) были изучены уровни е-АТ IgG к белкам NF-200, GFAP, S100β, ОБМ, рецепторам к дофамину, серотонину, холину, глутамату, ГАМК. Анализ проводили на 5-й, 14-й и 28-й день заболевания.
Результаты: В 1 группе (n=80) увеличились уровни еАТ к NF-200 (132,9±4,1 усл.ед.) в 1,09 и 1,8 раза, GFAP (118,9±3,9 усл.ед.) в 1,4 и 2 раза, S100β (129,5±10,2 усл.ед.) в 1,05 и 1,6 раза, ОБМ (97,3±4,5 усл.ед.) в 1,14 и 1,6 раза, к рецепторам к дофамину (77,9±4,4 усл.ед.) в 1,2 раза и 1,6 раза, серотонину (81,96±3,25 усл.ед.) в 1,2 и 1,4 раза, холину (61,42±3,6 усл.ед.) в 1,4 и 1,8 раза, глутамату (85,28±4,25усл.ед.) в 1,19 и 1,4 раза, ГАМК (82,4±5,2 усл.ед.) в 1,5 и 1,8 раза соответственно по сравнению с аналогичными показателями во 2-й группе и контроле. Изучение уровня е-АТ у больных с COVID-19 ассоциированными ИИ в динамике заболевания показал наибольший прирост уровня е-АТ на 28 сутки к белку S-100, NF-200 и ОБМ.
Вывод: У больных с COVID-19 ассоциированными ишемическими инсультами выявлена более усиленная продукция сывороточных аутоантител к нейробелкам и рецепторам нейромедиаторов, что сопровождало более худшее течение ИИ и может рассматриваться как предиктор неблагоприятного исхода заболевания.
Титр вируснейтрализующих антител (ВНА) является основным серологическим параметром, используемым для оценки эффективности иммунизации против SARS-CoV-2. Титр ВНА определяется при помощи реакции нейтрализации (РН), результатом которой является последнее разведение анализируемой сыворотки, в котором антитела предотвращают репликацию живого вируса в пермиссивной для него компетентной культуре клеток. Метод является трудозатратным и требует соблюдения условий биобезопасности. В связи с этим, предпринимаются попытки создания эффективного и безопасного метода определения ВНА без использования живого вируса.
В ранее опубликованной нами работе сыворотки крови пациентов, иммунизированных вакциной «Спутник V», были протестированы параллельно в РН на культуре клеток Vero и в псевдонейтрализующем тесте (ПНТ) [4]. ПНТ – конкурентный иммуноферментный метод, позволяющий определять антитела, специфически связывающие RBD-домен (рецептор-связывающий домен субъединицы S1 шиповидного белка) коронавируса SARS-CoV-2 и блокирующие образование инициаторного инфицирующего комплекса между RBD и белком клеток человека ACE2 (ангиотензин-превращающий фермент 2). Коэффициент корреляции между титрами, полученный для ПНТ и РН, составил 0.86 (95% ДИ: 0.79-0.90, р<0.0001), что указывает на то, что ПНТ является привлекательной альтернативой классической вирусологической РН. Метод ПНТ не различает изотипы иммуноглобулинов (IgG, IgM и пр.) и определяет наличие в образце любых антител или препаратов, которые обладают нейтрализующим действием в отношении образования комплекса RBD-ACE2. Важным моментом является то, что твердофазный иммуноферментный анализ обладает ценовой доступностью и высокой пропускной способностью. Кроме того, поскольку ПНТ не является видоспецифичным (определяет ВНА любых иммунных к SARS-CoV-2 животных), он выглядит особенно перспективным для применения в рамках доклинических исследований (ДКИ) вакцин против SARS-CoV-2 на животных моделях.
В настоящем исследовании мы приводим сравнительный анализ данных, полученных в классической РН и в ПНТ для образцов сывороток крови животных (трансгенных мышей, коров и собак) на стадии ДКИ экспериментальных вакцинных препаратов против COVID-19, содержащих белок Spike SARS-CoV-2.
На сегодняшний день, несмотря на медикаментозное и хирургическое лечение, рецидивы полипозного риносинусита (ПРС) остаются неразрешенной проблемой. Поэтому идентификация пациентов, склонных к неконтролируемому течению ПРС, облегчает выбор лечения и улучшает его эффективность.
Цель работы: изучить цитокиновый профиль ткани носовых полипов и клинические характеристики у пациентов с разной степенью медикаментозного контроля и тяжестью течения полипозного риносинусита.
У 99 пациентов с ПРС была выполнена эндоскопическая полипотомия полости носа вне периода обострения ПРС. В гомогенизате ткани полипа методом мультиплексного анализа исследовался уровень тканевых белков интерферона (IFN)-γ, интерлейкина (IL)-1β, IL-4, IL-5, IL-13, фактора некроза опухоли (TNF)-α, и трансформирующих факторов роста (TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3). Далее пациенты проходили лечение у оториноларинголога, согласно алгоритма ступенчатой терапии ПРС с регулярным осмотром и коррекцией лечения 1 раз в 3 месяца [9]. Через 5 лет наблюдения все пациенты на основании степени медикаментозного контроля ПРС были распределены на три группы. 1-я группа – больные с лёгким течением ПРС, 34 человека, в основном получали лечение по I и II ступени лечебного алгоритма за весь период нашего наблюдения. 2-я группа – ПРС средней степени тяжести, 32 человека, терапия ПРС соответствовала II или III ступени алгоритма. 3-я группа – пациенты с тяжелым течением ПРС, которым в течение 5 лет проводился один или несколько курсов лечения по IV ступени лечебного алгоритма. Повторно проведено повторное анкетирование по опроснику SNOT-22, эндоскопический осмотр, оценка клинических симптомов по 3-х бальной визуально-аналоговой шкале. При наличии бронхиальной астмы (БА) ее контроль оценивали по опроснику Asthma Control Questionnaire (ACQ-7). Был сделан анализ первоначального цитокинового профиля в ткани носовых полипов этих пациентов по группам медикаментозного контроля.
Результаты
- Через 5 лет наблюдения по клиническим характеристикам в 1 группе с легким течением ПРС наблюдалась минимальная выраженность основных симптомов ПРС в виде заложенности носа, нарушения обоняния, наименьшее снижение уровня качества жизни пациентов согласно опроснику SNOT-22. Больные с БА, вошедшие в данную группу, имели лучший уровень медикаментозного контроля этого заболевания, продолжительность астмы этих пациентов была достоверно ниже по сравнению с пациентами 3-й группы. Цитокиновый профиль полипозной ткани отличался самой высокой концентрацией IL-4, средними значениями провоспалительных белков IL-1β, TNF-α, IFN-γ и минимальным значением TGF-β1.
- Во 2-й группе при ПРС средней степени тяжести мы отметили более выраженные по сравнению с 1-й группой нарушение обоняние, заложенность носа и ухудшение качества жизни больных по опроснику SNOT-22. Уровень медикаментозного контроля БА, оценивавшийся в баллах по опроснику ACQ-5, также был достоверно ниже, чем у пациентов 1-й группы. Выявлена максимальная концентрация белков всех трёх провоспалительных цитокинов (IFN-γ, IL-1β, TNFα), IL-5 и факторов роста TGF-β1 и TGF-β2.
- В 3-й группе с плохим медикаментозным контролем ПРС были получены максимальные баллы SNOT-22, наибольшая выраженность затруднения носового дыхания и снижения обоняния. Длительность бронхиальной астмы оказалась достоверно выше, чем при течении ПРС в лёгкой форме. Была наибольшая степень БА среди всех групп, с достоверно низким уровнем ее медикаментозного контроля по ACQ-5 по сравнению с 1-й группой. При иммунологическом анализе ткани носовых полипов в этой группе пациентов выявлен минимальный уровень всех провоспалительных цитокинов (IFN-γ, IL-1β, TNFα), цитокинов Th-2 воспаления IL-4 и IL-5, факторов роста TGF-β2 и TGF-β3.
4. Лечение пациентов в зависимости от клинических фенотипов ПРС по наличию или отсутствию коморбидной респираторной аллергии или БА позволяет улучшить медикаментозный контроль и снизить рецидив этого заболевания.
Атопическая бронхиальная астма — это хроническое заболевание, характеризуемое обструкцией дыхательных путей, бронхиальной гиперреактивностью и воспалением. У пациентов наблюдается повышенная активация иммунных клеток в дыхательных путях, в особенности Т-лимфоцитов, что приводит к хроническому воспалению. Известно, что лимфоциты больных астмой имеют нарушенный ответ на программируемую клеточную гибель 1 и 2 типа – апоптоз и аутофагию, что способствует пролонгации и усилению воспалительного процесса. В сравнении с апоптозом, аутофагия также может способствовать выживанию клетки в условиях стресса, а её нарушение и гиперактивация приводить к отягощению аллергических реакций. Основными препаратами для лечения атопической бронхиальной астмы являются глюкокортикоиды, которые активируют глюкокортикоидный рецептор, запускающий в клетке противовоспалительный ответ и, в частности, апоптоз. Однако у некоторых пациентов наблюдается устойчивость к терапии из-за различных факторов, включающих однонуклеотидные полиморфизмы гена глюкокортикоидного рецептора NR3C1. Наибольшая связь тяжести астмы с устойчивостью к терапии была выявлена у GG-варианта полиморфизма BclI. Общие молекулярные пути активации глюкокортикоидного рецептора и программируемой клеточной гибели и опосредующие молекулярные компоненты позволяют предположить значимость роли полиморфного рецептора в уходе клеток от гибели. Целью нашего исследования являлась оценка влияния G-аллели в однонуклеотидном полиморфизме BclI гена NR3C1 глюкокортикоидного рецептора на экспрессию генов-регуляторов апоптоза (BCL2, CASP3) и аутофагии (BECN1, LC3) в лимфоцитах больных средней и тяжёлой формой атопической бронхиальной астмы. Материалом исследования служили образцы периферической крови 24 пациентов в возрасте от 20 до 45 лет с установленным диагнозом атопической бронхиальной астмой средней и тяжелой степени. Методом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов пациенты были распределены по генотипам полиморфизма BclI гена NR3C1: 12 человек CC генотип, 8 человек GC, 4 человека GG генотип. Лимфоцитарную фракцию выделяли на градиенте плотности фиколла и культивировали с дексаметазоном в условиях истощения питательных веществ. Уровень экспрессии генов определяли методом ПЦР в реальном времени. При исследовании влияния различных генотипов BclI полиморфизма на экспрессию генов-маркеров клеточной гибели, в лимфоцитах пациентов с GG полиморфизмом под воздействием дексаметазона были выявлены антиапоптотические реакции, что может являться одним из механизмов развития резистентности к терапии глюкокортикостероидами при астме. Нарушение активации экспрессии гена BECN1 у больных с GG генотипом может предполагать дерегуляцию процесса аутофагии у этой группы пациентов, как способа программируемой клеточной гибели. Несмотря на это, у больных с GC генотипом при длительном культивировании воздействие дексаметазона повышает экспрессию гена LC3, указывающую на более выраженную активацию аутофагии. Таким образом, данная работа демонстрирует различия в ответе лимфоцитов на терапию синтетическими глюкокортикоидами, а также раскрывает влияние G-аллели в генотипе BclI полиморфизма на нарушение регуляции программируемой клеточной гибели под воздействием дексаметазона.
Введение. При респираторных вирусных инфекциях, наряду с механизмами врожденного иммунитета, важную роль в защите организма играет адаптивная иммунная система. Эффективность её клеточного звена имеет решающее значение для элиминации патогена. Т-клеточный ответ выявляется практически во всех случаях COVID-19 и является одним из ключевых факторов контроля SARS-CoV-2 в организме и устойчивости к инфекции, в том числе и повторной. Однако, к настоящему моменту остаются неясными многие аспекты клеточного иммунного ответа к вирусу SARS-CoV-2 спустя год и более после перенесенной инфекции. Цель — изучить динамику лабораторных показателей постинфекционного клеточного иммунитета к SARS-CoV-2 в течение 16 месяцев от момента появления симптомов. Материалы и методы. В исследование было включено 15 здоровых добровольцев и 87 пациентов перенесших COVID-19. Переболевшие участники были разделены на 3 исследуемые группы в зависимости от времени, прошедшего с момента появления первых симптомов до момента взятия образцов крови для исследования (от 14 до 500 суток). Для всех образцов было выполнено определение концентрации S- и N-специфичных Т-лимфоцитов и профиль секретируемых цитокинов. Для обнаружения различных функциональных групп клеток был использован алгоритм автоматической кластеризации Phenograph. Результаты. Приблизительно 1 из 5*103 мононуклеарных клеток периферической крови была специфична к S-белку SARS-CoV-2, и 1 из 104 к N-белку. С первых недель инфекции уровень специфичных CD8+ клеток у переболевших было достоверно выше, чем в группе не болевших участников. С увеличением постинфекционного периода концентрация специфичных CD4+ и CD8+ клеток постепенно снижается, но остается достоверно выше, чем в группе сравнения. Среди CD4+ клеток уменьшается доля IFNγ− IL-2− TNFα+ клеток и увеличивается доля IFNγ+ IL-2− TNFα−. CD8+ лимфоциты в первые недели после начала заболевания представлены преимущественно IFNγ+ IL-2− TNFα− клетками, а к концу наблюдаемого периода − IFNγ− IL-2− TNFα+. По результатам кластеризации было показано, что на ранних постинфекционных сроках вирус-специфичные Т-лимфоциты представлены популяциями IFNγ- и TNFα-продуцирующих CD4+ эффекторных клеток памяти, тогда как на поздних сроках значительную долю составляют TNFα-продуцирующие CD8+ TEMRA и IFNγ-продуцирующие CD8+ Т-лимфоциты центральной памяти. Заключение. Т-клеточное звено адаптивного иммунитета играет важную роль в контроле и элиминации вирусных инфекций. В данной работе были продемонстрированы результаты, показывающие, что устойчивый клеточный иммунитет против SARS-CoV-2 присутствует у подавляющего большинства переболевших начиная с первых недель и вплоть до 16 месяцев с момента появления первых симптомов COVID-19. Иммунная память к SARS-CoV-2 обеспечивается формированием Т-клеток центральной и эффекторной памяти, а полученные данные об их динамике за исследуемый период позволяют надеяться и на более продолжительную клеточную иммунную память к вирусу SARS-CoV-2.
В ответ на повреждающие факторы высвобождается целый каскад цитокинов, запускающих процессы воспаления, фиброгенеза. В связи с этим, цель исследования - изучить уровень цитокинов - IL-6, IL-10, IL-18, TNF-α в плазме крови в условиях табачной интоксикации и при внутримышечном введении аминофталгидразида в течение 3, 7 и 14 суток.
Материал и методы. В опыте использовано 40 беспородных белых крыс – самцов, которых разделили на группы: интактная (n=10) – находились в затравочной камере без табачного дыма. Опытные группы (1,2,3) (n=30, по 10 животных в каждой группе) - находились в табачном дыме на протяжении – 1, 2, 4 месяцев (два раза в день). Для опытов применялась камера - V = 0,3 м3, в которой происходило задымление при сгорании сигарет. Третьей опытной группе (животные находились в затравочной камере 4 месяца) вводили внутримышечно аминодигидрофталазиндион натрия в течение 3, 7, 14 дней. Кровь у животных извлекали из хвостовой вены. Содержание IL-6, IL-10, IL-18, TNF-α в плазме крови опытных животных определяли методом иммуноферментного анализа с помощью прибора Lazurite Automated Elisa System (Dynex Technologies Inc., США).
Результаты. В 1-ой группе уровень TNF-α в плазме крови повысился до 452,14±176,18 пг/мл (у интактных - 15,23±3,13 пг/мл), во 2-ой группе – снизился показатель до 9,8, в 3-ей группе – резко цифры увеличились до 167,44±5,93 пг/мл. Уровень IL-6 был самым высоким после 4-х месячной табачной интоксикации (3-я группа), гистологически в печени определялись признаки фиброза II - III. Противовоспалительный цитокин IL-10: в 1-ой группе цифры увеличились в 1,2 раза, во 2-ой отмечалось резкое снижение показателя в 13,7 раза, в 3-ей группе – уменьшение содержания цитокина в плазме крови в 28,8 раза по сравнению с интактными животными. После введения аминодигидрофталазиндиона натрия в течение 3 и 7 дней содержание TNF-α резко увеличилось в 14,8 раза и в 7,6 раза; через 14 дней применения препарата уровень TNF-α уменьшился в 1,3 раза по сравнению с интактными животными. Отмечены колебания показателей провоспалительных цитокинов - IL-6 и IL-18. Уровень IL-10 в плазме крови имел статистически значимое повышение показателя в 5,3 раза через 3 дня после введения препарата; в 8,2 раза через 7 дней после применения аминодигидрофталазиндиона натрия и в 23 раза после 14 дней эксперимента (сравнение показателей с 3-ей группой). Заключение. В условиях табачной интоксикации отмечаются нарушения в цитокиновом профиле – изменяется концентрация TNF-α, IL-6, IL-10, IL-18. Иммунный ответ обусловлен повышением уровня провоспалительных цитокинов в плазме крови. В условиях коррекции аминодигидрофталазиндионом натрия происходит увеличение противовоспалительного цитокина - IL-10 при системном снижении содержания TNF-α, IL-6, IL-18.
Comprehensive analysis of the adaptive immune response to SARS-CoV-2 is critical for epidemiological monitoring, verd immunity stages tracking and vaccination strategies. Understanding the differences between immunity formed as a result of COVID-19 and immunity induced by a specific vaccine is a specific task within this problem.Moreover it is of obvious interest to assess the effect of repeated antigenic stimulation on immunological protection against SARS-CoV-2.
The aim of present study is a comparative analysis of humoral immunity (anti-SARS-CoV-2 immunoglobulins A and G) development after natural infection with SARS-CoV-2 and/or after vaccination with anti-Covid vaccine“Sputnik V”.
The study involved 36 volunteers. 21 of them had Covid-19 and were then vaccinated about 8-10 months later (group 1). In 15 primary vaccinated people previous SARS-CoV-2 infections were excluded using periodic PCR and serological tests (group 2).
The humoral immune response intensity during primary natural infection with coronavirus and such intensity as a result of adaptive immunity induction against SARS-CoV-2 through vaccination with Sputnik V vaccine is the same in both groups. However both the anti-SARS-CoV-2 IgA and IgG mean maximum values and humoral immune response development rate after vaccination differ significantly between people who have previously had COVID-19 and those who have not previously been infected with SARS-CoV-2. We’ve got statistically significant differences between two groups of participants using Student's t test comparing the average maximum IgA levels after vaccination (P < 0.05). For IgG these differences are somewhat smaller.
In the first group the average maximum values of specific IgA and IgG levels after natural infection with SARS-CoV-2 and after subsequent vaccination differ by more than 2 times.The time interval during which the antibodies levels in the blood reached maximum values after vaccination in people who had previously had COVID-19 turned out to be significantly shorter than in people who had not previously encountered SARS-CoV-2 infection. And in terms of time the IgG antibody response development after vaccination and in the case of diagnosed COVID-19 in the first group we obtained a statistically significant difference according to Student’s t-test (P < 0.05).
Thus people with a previous natural infection develop a faster, stronger and more durable response to the Sputnik V vaccine than people who were not previously infected.
Диагностика специфического Т-клеточного иммунитета к антигенным детерминантам SARS-CoV-2 у пациентов представляется все более важной задачей ввиду накопления данных о роли Т-клеточного иммунного ответа в протекании коронавирусной инфекции и клиренсе SARS-CoV-2 в случае вторичной инфекции. Ранее нами был разработан рекомбинантный антиген CorD_PS для оценки Т-клеточного противовирусного иммунитета, содержащий консервативные и иммуногенные последовательности структурных белков коронавируса SARS-CoV-2. Был получен его штамм-продуцент E. coli CorD_PS со стабильной экспрессией рекомбинантного антигена CorD_PS. Целью настоящей работы является разработка лабораторной технологии получения рекомбинантного антигена CorD_PS, проведение контроля качества полученного химерного белка и изучение его иммунологической активности. Отработку условий культивирования клеток E. coli CorD_PS проводили в конических колбах в среде LB-M_Km при 37°C, затем масштабировали в ферментере объемом 30 л. Экспрессию индуцировали добавлением ИПТГ. Контроль экспрессии осуществляли в лизатах культур в 12% ПААГ в денатурирующих условиях. Полученную биомассу лизировали с помощью ультразвукового дезинтегратора с последующим центрифугированием. Были подобраны составы лизирующего и солюбилизирующего буферов, а также условия рефолдинга рекомбинантного белка. Для очистки растворённого белка использовали последовательно катионобменную (SP-сефароза), гидрофобную (Butyl-сефароза) и эксклюзионную (Sephacryl S-200 HR) хроматографии. Белковые примеси в препарате определяли методами обращенно-фазовой ВЭЖХ и электрофореза в 12% ПААГ, остаточные липополисахариды определяли с помощью гель-тромб варианта ЛАЛ-теста, остаточные белки штамма-продуцента – методом иммуноферментного анализа, остаточную ДНК штамма-продуцента – методом связывания с красителем PicoGreen. Контроль специфичности осуществляли методом непрямого иммуноферментного анализа. Оценку продукции цитокинов CD4+ Т-лимфоцитами в ответ на их стимуляцию рекомбинантным антигеном ex vivo проводили на проточном цитофлуориметре. Выход биомассы при культивировании E. coli CorD_PS в 30л ферментере составил до 20 г/л за 4 часа индукции 0,1мМ ИПТГ. Последовательная отмывка телец включения от бактериальных клеточных компонентов и их последующая солюбилизация в буфере, содержащем 8М мочевину, позволил получить раствор денатурированного антигена с концентрацией 10 мг/мл. Эффективность рефолдинга разведением составила 75%. После трёх этапов хроматографической очистки были получены образцы белка с концентрацией 1,2-1,4 мг/мл, чистотой по ВЭЖХ 98,43%, соответствующие ключевым параметрам качества согласно ОФС.1.7.1.0007.15. Рекомбинантный антиген показал специфическое связывание с образцом Первого Международного Стандарта ВОЗ и образца СОП№3 анти-SARS-CoV-2 иммуноглобулинов человека в установленном диапазоне концентраций. CD4+ Т-лимфоциты эффективно отвечали на обработку рекомбинантным антигеном увеличением продукции IFNγ. Оптимальная концентрация рекомбинантного коронавирусного антигена составила 5 мкг/мл. Разработанный технологический процесс позволяет получать 5-7 грамм антигена коронавирусного рекомбинантного CorD_PS за один цикл культивирования в 30 л ферментационной среды с ключевыми параметрами качества согласно ОФС.1.7.1.0007.15. В результате исследований специфической иммунологической активности рекомбинантного коронавирусного антигена CorD_PS была подтверждена концепция возможности его использования в качестве диагностикума для определения формирования Т-клеточного иммунного ответа.
В последнее десятилетие в связи с широким распространением многоцветной проточной цитометрии для рутинных тестов в зарубежной литературе появились единичные сообщения о выявлении в крови и костном мозге пациентов минорной субпопуляции NK-клеток со слабой коэкспрессией В-клеточного антигена CD19. Практически отсутствует оценка частоты встречаемости и относительного количества CD56+CD19+dim клеток, нет данных о фенотипических особенностях, а также связи этой субпопуляции с какой-либо патологией. Цель исследования: оценить частоту встречаемости, относительное количество и фенотипические характеристики минорной субпопуляции лимфоцитов CD56+CD19+dim в образцах крови пациентов, направляемых на исследование субпопуляционного состава лимфоцитов. Материалом являлась периферическая кровь иммунокомпрометированных лиц. Методом восьмицветной проточной цитометрии определяли субпопуляционный состав лимфоцитов с использованием маркеров CD3, CD4, CD8, CD19, CD25, CD45, CD56, HLADR. Для оценки частоты встречаемости субпопуляции CD56+CD19+dim осуществляли ретроспективный анализ LMD-файлов 1210 исследований для 935 пациентов. Средний возраст обследованных лиц 39,8±14,7 лет, среди них 84 ребенка до 18 лет. Ряду пациентов исследование выполнялось неоднократно. Дополнительное фенотипирование CD56+CD19+dim клеток проводили с использованием широкой панели антител к В-клеточным и T/NK-клеточным антигенам. Результаты и обсуждение: Частота встречаемости образцов крови, содержащих CD56+CD19+dim клетки, составила 1,2%, при относительном количестве субпопуляции 2,1±1,9% от лимфоцитов и 0,8±0,6% от лейкоцитов. Максимальный размер субпопуляции составил 8,8% от лимфоцитов (2,8% от лейкоцитов). Отмечено длительное сохранение субпопуляции на протяжении всего периода наблюдения за пациентами – от двух месяцев до 6 лет. Сопоставление экспрессии дополнительных маркеров субпопуляциями NK-лимфоцитов CD56+CD19+dim и CD56+CD19- выявило особенности первой, а именно высокую экспрессию CD2 и CD57, сниженную плотность экспрессии CD7, CD16, CD38. Определен фенотип изученной субпопуляции: CD56+dimCD19+dimCD2+brightCD7+dimCD11c+CD16+dimCD38+dimCD45RA+CD57+CD94+dimNKG2D+CD3-CD4-CD5-CD20-CD21-CD25-CD45R0-CD62L-CD79b-CD117- с вариабельной экспрессией CD8 и HLADR. Фенотип соответствует активированным терминально дифференцированным адаптивным NK-лимфоцитам, связанным с цитомегаловирусной инфекцией. В нашем работе у лиц с субпопуляцией CD56+CD19+dim лимфоцитов в крови отмечена цитомегаловирусная инфекция в анамнезе и реактивация хронической ВЭБ-инфекции на момент исследования. Вероятной причиной коэкспрессии CD19 может быть трогоцитоз NK-клеткой фрагмента мембраны В-лимфоцита при активной ВЭБ-инфекции. Cубпопуляция CD56+CD19+dim лимфоцитов может достигать заметных величин и искажать результаты иммунологических исследований, выполняемых методом проточной цитометрии. Особенно вероятны ошибки при оценке минимальной определяемой болезни при острых В-клеточных лейкозах. Минорная популяция NK-лимфоцитов CD56+CD19+dim может быть идентифицирована в рутинных иммунологических исследованиях, а ее функциональные особенности и связь с патологией нуждаются в дальнейшем изучении.
Атопический дерматит (АтД) является хроническим рецидивирующем воспалительным заболеванием, которое сопровождается сильным зудом. Ведущим механизмом развития АтД является изменение соотношения иммунного ответа Th1/Th2-клеток, что приводит к повышению синтеза медиаторов воспаления, в том числе цитокинов семейства IL-1. В данное семейство входят открытые относительно недавно IL-33 и IL-37, роль которых активно изучается в патогенезе АтД. IL-33 является эндогенным сигналом опасности и за счет индукции выработки IL-31 вызывает снижение функции кожного барьера, зуд и расчесывание. Обладающий как иммуномодулирующим, так и иммуносупрессивным действием IL-37 снижает степень инфильтрации очага воспаления лейкоцитами и активность провоспалительных цитокинов, а также участвует в регуляции транскрипции ДНК. Целью исследования был поиск ассоциации полиморфных маркеров в генах IL-33 и IL-37 с риском развития АтД. В исследование были включены 98 пациентов с установленным диагнозом АтД, из которых 59 человек имели среднюю и 39 - тяжелую степень тяжести по шкале SCORAD. Контрольная группа состояла из 72 здоровых добровольцев. Материалом исследования была венозная кровь. Для анализа полиморфных маркеров rs7019575 в гене IL-33, rs3811046 и rs3811047 в гене IL-37 проводилось выделение РНК и постановка ПЦР-РВ. При распределение по частотам аллелей и генотипов полиморфных маркеров rs7019575 в гене IL-33 и rs3811047 в гене IL-37 статистически значимых отличий не выявлено. Исследование полиморфного маркера rs3811046 в гене IL-37 показало, что риск развития АтД уменьшается почти в 2 раза у носителей аллеля G и увеличивается более чем в 2 раза у носителей гомозиготы TT. Анализ распределения по гаплотипам в гене IL-37 показал, что у носителей гаплотипа GTAA риск развития АтД увеличивается примерно в 10 раз, а у носителей гаплотипа TTGG - увеличивается более чем в 2 раза. Таким образом, в результате проведенного исследования выявлены SNP-маркеры, которые могут быть использованы при прогнозировании риска развития патологии у лиц с отягощенным семейным анамнезом по атопическому дерматиту.
Бенз(а)пирен – ароматическое соединение первого класса опасности, обладающее канцерогеннным, мутагенным, гематотоксическим, в том числе иммунотропным, эффектами. Изучение клеточных кластеров в условиях воздействия экзогенных гаптенов in vivo с использованием в качестве модельного объекта белых нелинейных мышей позволяет расширить наши знания о механизмах и особенностях иммунотропных эффектов бенз(а)пирена, что определяет актуальность данного исследования. В эксперименте участвовали 12 самок беспородных (нелинейных) белых мышей. Концентрация бенз(а)пирена при однократном поступлении составила 6 мкг/л, в качестве нейтрализатора его эффектов и адаптогена использован концентрат Chlorella Growth Factor (CGF), последовательно поступавший в течении 4-х недель в количестве 60–70 млн/мл живых клеток, оба вещества вводились через пероральный зонд в объеме 1 мл. Исследование фагоцитарной активности клеток проводили по методике Каплина В.Н. Анализ общего количества лейкоцитов и лимфоцитов проводили с использованием унифицируемых общеклинических методов анализа на гематологическом анализаторе. Изучение кластеров клеточной дифференцировки проводилось методом проточной цитометрии (CD25, CD95, CD11а, CD309). Для статистической обработки результатов исследования применяли методы математической статистики с помощью программы Microsoft® Office Excel, Statistica 6.0. Установлено, что субхроническая (подострая) интоксикация бенз(а)пиреном в условиях эксперимента in vivo приводила к значимой модификации клеточного иммунитета по сравнению с контролем, фенотипом которой выступали дефицит факторов врожденного клеточного иммунитета (система гранулоцитарного фагоцитоза) и дисбаланс адаптивного клеточного иммунитета с преимущественным угнетением апоптотической активности (CD95+) и моделированием интегрин- и VEGF-опосредованных сценариев (CD11a, CD309). Причем последовательное поступление природного модификатора Chlorella Growth Factor характеризовалось нормализацией фагоцитарной активности и отменой индуцированных бенз(а)пиреном эффектов. Ограничения исследования, полученных результатов и выводов, обусловлены малым (ограниченным) объемом выборки. В результате изучения in vivo особенностей фагоцитоза и кластеров клеточной дифференцировки иммуноцитов мышей, в условиях последовательной экспериментальной субхронической экспозиции техногенных и природных модификаторов, выявлен дисбаланс показателей неспецифического и адаптивного клеточного иммунитета, сопряженный с формируемыми бенз(а)пиреном гранулоцитарной альтерацией и нарушением контроллинга клеточной пролиферации, отменяемые CGF. Последовательное поступление комплекса CGF приводило к оптимизации работы иммунной системы по ряду его показателей, позитивной модификации иммунотропных эффектов бенз(а)пирена, снимая супрессию гранулоцитарного и сопряженного с интегрином лимфоцитарного ростков крови, оказывая преимущественно фагоцитоз-протективные эффекты, а также антиапоптотическое и интегрин-миметическое действие.
Псориаз является наиболее распространенным воспалительным заболеванием кожи, которым страдает в среднем 2-4% населения Земли. Согласно современным представлениям, псориаз является мультифакториальным заболеванием, возникающим у генетически предрасположенных лиц под воздействием различных факторов окружающей среды, которые запускают нарушение иммунного ответа с серией сложных воспалительных каскадов. Заболевание инициируется и поддерживается взаимным взаимодействием клеток врожденного и адаптивного иммунитета, прежде всего дендритных клеток, Т-лимфоцитов и кератиноцитов, ведущая роль которых на разных стадиях заболевания чередуется и заключается в основном в IL-23/Th17-пути. На сегодняшний день описано множество полиморфизмов генов (SNP), связанных с развитием псориаза. Для понимания патофизиологии псориаза, как сложного аутовоспалительного заболевания представляется интересным изучение межгенных взаимодействий полиморфных вариантов генов цитокинов и С- реактивного белка в отношении риска развития псориаза. Цель работы - изучить межгенные взаимодействия полиморфных вариантов генов IL1b (rs16944), IL6 (rs1554606), IL8 (rs2227306), IL10 (rs1800896), TNFα (rs361525), СRP (rs1205) связанных с риском развития псориаза у жителей Кемеровской области. Обследовано 175 пациентов с обыкновенным папулезно-бляшечным псориазом, с прогрессирующим течением, в средней степени тяжести. Контрольная группа (n=155) сформирована из условно-здоровых доноров того же возрастного интервала. Генотипирование осуществляли с помощью метода ПЦР с использованием TaqMan зондов (Thermo Fisher Scientific, США) на детектирующем амплификаторе ViiATM 7 Real-Time PCR System (Life Technologies, США) следующих полиморфных вариантов генов: IL1b (rs16944), IL6 (rs1554606), IL8 (rs2227306), IL10 (rs1800896), TNFα (rs361525), СRP (rs1205). Анализ межгенных взаимодействий осуществляли при помощи метода сокращения многофакторной размерности (Multifactor Dimensionality Reduction, MDR). Установлено, что детерминирование обыкновенного папулезно-бляшечного псориаза связано как с отдельными полиморфными вариантами генов цитокинов и С-реактивного белка, так и ген-генными взаимодействиями. Для отдельных полиморфных вариантов генов сила (% энтропии) ассоциации с обыкновенным папулезно-бляшечным псориазом была следующая: TNFa_rs361525 (16,99% энтропии), IL1b_rs16944 (6,40% энтропии), CRP_rs1205 (2,55% энтропии), IL6_rs1554606 (1,11% энтропии), IL10_rs1800896 (0,57% энтропии), IL8_rs2227306 (0,30% энтропии). Выявлено, что выраженным синергизмом обладали IL6 (rs1554606) и IL8 (rs2227306); умеренным синергизмом CRP (rs1205) и IL10 (rs1800896) и выраженным антагонизмом IL1b (rs16944) и TNFa (rs361525).
КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
Введение. Гиперчувствительный пневмонит представляет собой сложный интерстициальный синдром легких. Данная нозология характеризуется сенсибилизацией к специфическому антигену, ранняя идентификация которого связана с повышением вероятности благоприятного исхода. Рост уровня смертности при гиперчувствительном пневмоните связан с развитием фиброза легочной ткани. В то же время, из-за недостаточной степени изученности механизмов, лежащих в основе развития данного типа фиброза, клинические вмешательства не позволяют добиться значительного улучшения прогноза течения заболевания. Применение надежных биомаркеров, объективно отражающих биологические процессы, происходящие в процессе фиброзирования легочной ткани, способно повысить вероятность принятия верных клинических решений. В настоящее время разнообразные биомаркеры стали играть решающую роль в диагностике и лечении широкого спектра заболеваний человека. К сожалению, гиперчувствительный пневмонит является исключением из этой общей тенденции. В данной области все еще есть большие возможности для исследований на пути поиска диагностических биомаркеров. Целью настоящего исследования стал поиск биомаркеров развития фиброза легочной ткани у пациентов с гиперчувствительным пневмонитом. В качестве таких диагностических маркеров мы использовали зрелые сывороточные микроРНК, потенциально способные регулировать процессы воспаления и фиброзообразования.
Материалы и методы. В исследование были включены пациенты с диагнозом гиперчувствительный пневмонит (с фиброзом и без фиброза в ткани легкого), а также здоровые лица без хронических заболеваний (группа контроля). У всех пробандов, вошедших в исследование, было получено письменное информированное согласие до момента включения в исследование. У всех пациентов проводилась оценка клинических и лабораторных показателей. Анализ профиля экспрессии генов зрелых сывороточных микроРНК проводили с использованием набора miScript miRNA PCR Array (QIAGEN). Верификацию полученных данных проводили методом полимеразной цепной реакции в реальном времени.
Результаты. В результате проведенного нами исследования исследования был определен набор зрелых микроРНК, вероятно участвующих в процессах образования фиброза и развития воспаления в легких (miR-22, miR-150 и miR-106b). После проведения расширенного исследования, включающего наблюдение за развитием заболевания в динамике, данный набор может быть использован в клинической практике для определения активности заболевания и развития процессов формирования фиброза в тканях легкого у пациентов с различными вариантами течения гиперчувствительного пневмонита.
Резюме. Аллогенная трансплантация гемопоэтических клеток входит в стандарт лечения пациентов с острым лейкозом высокого риска. Пуповинная кровь (ПК) является альтернативным источником аллогенных стволовых гемопоэтических клеток для пациентов, которые нуждаются в трансплантации, но не имеют родственного донора. Цель исследования: изучение особенностей лейкоцитарного пула (клеточного состава, иммунофенотипа) концентрата клеток пуповинной крови (ПК), которые заготавливаются для публичного долгосрочного криохранения для нужд трансплантологии. Проведено исследование 1096 образцов пуповинной крови доношенных новорожденных до и после процессинга (выделения концентрата гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Показано, что при использовании критерия обработки образцов ПК с количеством лейкоцитов не менее 15x108 лейкоцитов в пересчёте на объём заготовленного образца ПК до обработки с антикоагулянтом среднее количество клеток в концентрате ГСК ПК объёмом 25 мл, находящегося на долгосрочном криохранении составляет: лейкоцитов – 17,41+0,36 x108, ГСК с иммунофенотипом (CD34+) – 5,25+3,6 x106, натуральных киллерных клеток (CD3-CD16+CD56+) – 1,65+0,7 x108. Изучена субпопуляционная структура NK-лимфоцитов в концентрате ГСК ПК: иммунофенотип CD56dimCD16dim клеток встречался в большинстве случаев – 45,15±18,1%, а минорные субпопуляции CD56dimCD16bright, CD56- CD16+, CD56brightCD16 составили 0,27±0,2, 1,33±0,7 и 0,99±0,4% соответственно. При анализе популяции NKT-клеток было выявлено 6,22±2,1% клеток с иммунофенотипом СD3+CD16/СD56+, количество CD3+CD56+ клеток составило 3,69±2,4%, количество CD3+CD16+ – 2,53±1,2%. В пуле NKT-клеток выявлены 5,15±2,1% CD56+CD16- клеток, также определены две минорные субпопуляции, которые отличаются по экспрессии антигенов CD56 и CD16: уровень CD56-CD16+ составил 2,91±1,2%, а CD56+CD16+ оказалось равным 0,69±0,3%. Полученные данные о количестве и характеристике иммунофенотипа клеток, также гетерогенности популяции NK и NKT- лимфоцитов в концентрате ГСК ПК, заложенных на долгосрочное криохранение, необходимо учитывать для подбора концентрата ГСК ПК с целью трансплантации при онкогематологических заболевания.
Введение. Естественные киллеры (NK-клетки) представляют собой популяцию лимфоцитов системы врожденного иммунитета, способных к цитолизу инфицированных или трансформированных клеток без предварительной сенсибилизации. Естественные киллеры выявлены в различных органах и тканях и могут отличаться по фенотипическим и функциональным характеристикам в зависимости от локализации. Например, естественные киллеры являются преобладающей популяцией лимфоцитов децидуальной оболочки матки на ранних сроках беременности, их доля может составлять до 70%. В матке NK-клетки могут контактировать с клетками трофобласта плода, в отношении которых также могут проявлять цитотоксичность. Естественные киллеры регулируют инвазию клеток трофобласта в матку, способствуют ремоделированию спиральных артерий и установлению физиологичного кровотока между организмами матери и плода. Обсуждается вклад нарушения функциональной активности NK-клеток в патогенез ранних репродуктивных потерь и бесплодия, вызванного иммунными факторами. Для лечения бесплодия применяют различные препараты, среди которых иммуноглобулины для внутривенного введения (ВВИГ) и рекомбинантный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF). Показано увеличение вероятности имплантации эмбриона и частоты успешных вынашиваний плода у женщин, получавших терапию этими препаратами. Предполагают, что эти препараты могут оказывать влияние на фенотип и функциональную активность NK-клеток. Актуально изучение эффектов препаратов ВВИГ и G-CSF на рецепторный профиль NK-клеток.
Целью настоящей работы была оценка экспрессии цитотоксических рецепторов клеток линии NK-92 в присутствии препаратов ВВИГ и рекомбинантного G-CSF.
Материалы и методы. В работе использовали клетки линии NK-92 в качестве эффекторов и клетки трофобласта линии JEG-3 в качестве клеток-мишеней. Клетки культивировали совместно в присутствии одного из препаратов, а также без добавления препаратов. С помощью проточной цитометрии оценивали экспрессию клетками NK-92 рецепторов CD45, CD56, CD215, KIR2DL3, KIR2DS4, NKG2D, NKp44, NKp30.
Результаты. Установлено, что количество клеток линии NK-92, экспрессирующих рецепторы NKG2D, NKp30, KIR2DL3 и интенсивность экспрессии рецепторов NKG2D и NKp30 снижены в присутствии препаратов ВВИГ. В присутствии препарата G-CSF и клеток трофобласта снижено количество KIR2DL3+ и NKp44+ NK-клеток.
Вывод. Полученные результаты могут быть связаны как с непосредственным, так и с косвенным влиянием исследуемых препаратов на фенотип NK-клеток.
Ревматоидный артрит представляет собой хроническое системное, воспалительное, аутоиммунное заболевание, связанное с аномальной активацией фибробластоподобных клеток синовиальной оболочки, с апоптозом, воспалением и окислительным повреждением. Развитие ревматоидного артрита (РА) ассоциировано с нарушением механизмов контроля численности клеток, баланса процессов пролиферации и апоптоза, как наиболее частого и физиологического варианта гибели клеток. В настоящее время апоптоз не рассматривается как автономное явление, поскольку контакт между апоптотирующими и живыми клетками ассоциирован с множеством физиологических и патологических процессов. Данное исследование является очередным этапом нашей работы, направленной на изучение автономных и не автономных эффектов апоптоза Т- лимфоцитов в условиях «клеточного соседства» пролиферирующих и апоптотирующих клеток in vitro. Основной задачей настоящего исследования являлся комплексный анализ влияния клеточных и гуморальных факторов «апоптотирующей» культуры Т- лимфоцитов на «пролиферирующую» культуру с учетом данных по параметрам «первичной» и «вторичной» индукции апоптоза, активационных маркеров и маркера пролиферации, динамике содержания живых клеток, роли кортизола, каспазы и цитокинов в процессе совместного культивирования в условиях «клеточного соседства» у здоровых людей и пациентов с РА. В исследовании были использованы образцы крови пациенток с РА и здоровых женщин сопоставимого возраста. Проводились эксперименты, направленные на выявление локальной продукции кортизола в модели «клеточного соседства» in vitro у пациентов с РА и здоровых людей. Результаты проведенного в рамках поставленной задачи анализа, с учетом полученных ранее данных, свидетельствовали о том, что взаимодействие между апоптотирующими» и «пролиферирующими» Т-лимфоцитами при инкубации в условиях «клеточного соседства» позволяет определить сходные и различающиеся функции созданных клеточных систем здоровых людей и пациентов с РА. Для обеих исследуемых групп была характерна вторичная индукция апоптоза, относящаяся к его не автономным эффектам, появление значимого количества активированных Т- лимфоцитов, повышение уровней IL-6 и IL-4, низкий уровень IFNγ и снижение потенциала рецепторного и митохондриального апоптоза, а также отсутствие различий по уровню апоптоза между группами доноров и пациентов. В тоже время, у здоровых людей в процессе индукции апоптоза снижался высокий изначально уровень TNFα, а повышение IL-6 было умеренным. Не изменялись уровни внутриклеточных молекул р53 и Bcl-2, сохранялось большое количество положительных корреляционных зависимостей между исследуемыми факторами во всех вариантах смешанных и «апоптотических» культур, что свидетельствовало о сохранении функционального баланса Т-клеток в неблагоприятных условиях у доноров. Пациентов с РА характеризовало повышение числа живых клеток в «апоптотических» культурах, значимый рост количества Ki 67+ Т- лимфоцитов, свидетельствующее о пролиферативных процессах в условиях апоптоза, отсутствие ответа TNFα на индукцию апоптоза, отсутствие связей между исследуемыми молекулами в «апоптотических» культурах и синтез кортизола в них, а также наличие функциональных связей кортизола с исследуемыми молекулами в апоптотических культурах, что свидетельствовало об изменении межклеточных взаимодействий и нарушении гомеостаза Т-лимфоцитов в условиях «клеточного соседства» у пациентов с РА.
γδТ-клетки – это уникальные лимфоциты, занимающие промежуточное положение между клетками врожденного и адаптивного иммунитета. Еще на этапе дифференцировки в тимусе они приобретают статус эффекторов с цитотоксической активностью и становятся мощными продуцентами цитокинов. Образованному γ и δ цепями, распознающему антиген рецептору γδТ-клеток отводят важную роль в активации этих клеток в тканях: он узнает инфицированные и опухолевые клетки по наличию в них молекул внутриклеточного стресса. γδТ-клетки обнаруживают в крови и в слизистых оболочках. Сегодня внимание исследователей сосредоточено на двух субпопуляциях γδТ-клеток: γδ1 и γδ2. Первая обильно представлена в слизистых оболочках, вторая образует основную массу (90%) циркулирующих γδТ-клеток. Целью нашей работы стала оценка уровня циркулирующих γδТ-клеток у пациентов старших возрастных групп при наличии у них патологического процесса в различных отделах слизистой оболочки пищеварительного тракта. Мы сформировали группы из числа пациентов Российского геронтологическом научно-клиническом центра в возрасте от 60 до 90 лет В основную группу (n=28) вошли пациенты с поражением слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки в виде эрозивно-язвенных очагов. Сопоставимую по возрасту группу сравнения (n=33) составили пациенты, не предъявляющие жалоб со стороны пищеварительного тракта, не имеющие показаний к гастродуоденоскопии. В отдельную группу (n=35) вошли пациенты с различной степенью дисбиоза толстой кишки. Количество γδТ-клеток в крови определяли методом двухцветной проточной цитофлюорометрии с использованием моноклональных антител. Циркулирующая популяция γδТ-клеток реагировала на эрозивно-язвенные очаги в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки увеличением своей численности. Пагубным последствием дисбиоза толстой кишки считают снижение барьерной функции кишечника. Среди пациентов с тяжелым дисбиозом третьей степени доля лиц с высоким содержанием γδТ-клеток была достоверно выше, чем среди пациентов с первой (легкой) степенью дисбиоза. То есть, у пациентов старшей возрастной группы циркулирующая популяция γδТ-клеток откликается увеличением своей численности на повреждение (тяжесть повреждения) слизистой оболочки разных отделов пищеварительного тракта. Неспецифичный характер реакции очевиден, тем не менее экспансия этой популяции в крови сигнализирует о том или ином патологическом процессе, требующим дальнейшей углубленной диагностики.
В экспериментах in vitro показано внегеномное биологическое действие антител, специфичных к мембранным рецепторам стероидных гормонов. В сыворотке крови больных раком молочной железы (РМЖ) обнаружены ауто-антитела против эстрогеновых рецепторов (ER), содержание которых коррелировало с пролиферативной активностью опухоли, определяемой по наличию протеина Ki-67. Такие антитела были способны индуцировать пролиферацию опухолевых клеток in vitro. Такой же активностью обладали антиидиотипические антитела против моноклонального антитела, специфичного к эстрадиолу. Однако, участие ауто-антител, специфичных к рецептору прогестерона (PR) оставалось неизвестным. Цель настоящей работы – исследовать взаимосвязи сывороточных антиидиотипических ауто-антител, специфичных к эстрадиолу и прогестерону (IgG2-E2 и IgG2-Pg) с содержанием в опухоли протеина Ki-67 у больных РМЖ. Исследовали IgG2-E2 и IgG2-Pg в 204 образцах сыворотки здоровых женщин и 663 образцах сыворотки больных РМЖ с ER+/PR+ опухолями с помощью ELISA, используя моноклональные антитела против E2 и Pg в качестве адсорбированных антигенов. Ki-67, E2 и Pg в опухолях исследовали с помощью иммуногистохимических методов. У больных РМЖ I стадии высокие уровни IgG2-E2 встречались чаще, чем у здоровых женщин (63,9% против 40,2%, р<0,001). У больных РМЖ I стадии с содержанием в опухоли Ki-67>14 высокие уровни IgG2-E2 обнаруживали чаще, чем при Ki-67≤14 (68,9% против 56,9%, р = 0,03). Аналогичные взаимосвязи IgG2-Pg с Ki-67 у больных РМЖ I стадии отсутствовали. Одновременно низкие индивидуальные уровни IgG2-E2 и IgG2-Pg у больных РМЖ I стадии с Ki-67≤14 обнаруживали в 55,2%, а с Ki-67>30 – в 22,4%. Одновременно высокие уровни IgG2-E2 и IgG2-Pg выявлены у 35,7% больных I стадией РМЖ с Ki-67≤14 и у 28,6% с Ki-67>30 (р = 0,03). У больных РМЖ II–IV стадией с содержанием в опухоли Ki-67>30, наоборот, высокие уровни IgG2-E2 встречались реже, чем при Ki-67≤14 (49,1% против 64,2%, р = 0,03). Аналогичная взаимосвязь имела место при анализе IgG2-Pg (47,2% против 62,2%, р = 0,03). Одновременно высокие индивидуальные уровни IgG2-E2 и IgG2-Pg у больных РМЖ II–IV стадиями обнаруживали при Ki-67≤14 и Ki-67>30 в 38,0% и 37,0% соответственно. При одновременно низких уровнях исследуемых антител или одного из них (при высоких уровнях другого) соответствующие показатели составили 21,5% и 53,9% (р = 0,003). Таким образом, одновременно высокие уровни IgG2-E2 и IgG2-Pg ассоциированы с высокой пролиферативной активностью ER+/PR+ РМЖ на начальных этапах канцерогенеза (на I стадии) и с низкой при последующем росте опухоли (на II–IV стадиях).
Цель настоящей работы - исследовать взаимосвязи содержания в сыворотке крови идиотипических и антиидиотипических антител, специфичных к эстрадиолу (IgA1-E2 и IgG2-E2), с генетическими полиморфизмами ферментов репарации ДНК (hOGG1 (rs1052133); XRCC1 (rs25489); ERCC2 (rs13181); APEX1 (rs1130409)) у больных раком молочной железы (РМЖ) с учётом содержания в опухоли Ki-67 экспрессирующих клеток.
Идиотипические и антиидиотипические антитела исследовали с помощью ELISA в сыворотке крови больных РМЖ: 360 с I стадией и 376 со II–IV стадиями. Полиморфизм локусов генов hOGG1:с.977C>G, p.Ser326Cys (rs1052133); XRCC1:c.839G>A, p.Arg280His (rs25489); APEX1:c.444 T>G, p.Asp148Glu (rs1130409); ERCC2:c.2251A>C, p.Lys751Gln (rs13181) определяли методом аллель-специфической ПЦР с использованием наборов «SNP-экспресс» (НПФ «Литех», г. Москва). У больных РМЖ II–IV стадией с низкими и высокими уровнями IgA1-E2 высокое содержание в опухоли Ki-67 положительных клеток (>30%) обнаруживали в 47,9% и 58,9% (р = 0,035); с низкими и высокими уровнями IgG2-E2 в 61,2% и 46,9% (р = 0,001). Высокие уровни Ki-67 в опухоли выявлялись у 55,6% больных II–IV стадиями с одновременно низкими уровнями IgA1-E2 и IgG2-E2; у 67,6% – с высокими уровнями IgA1-E2 и низкими IgG2-E2; у 43,2% – с низкими уровнями IgA1-E2 и высокими IgG2-E2; у 52,2% больных – с одновременно высокими уровнями IgA1-E2 и IgG2-E2. Таким образом, IgG2-E2 тормозили пролиферацию опухоли, а IgA1-E2 угнетали этот эффект. Не обнаружили взаимосвязи генетических полиморфизмов hOGG1, XRCC1, ERCC2, APEX1 с содержанием в опухоли Ki-67 положительных клеток. Высокие уровни IgA1-E2 обнаружили у 39,9% больных с CC генотипом hOGG1 и у 47,8% с CG генотипом (р = 0,049). Высокие уровни IgG2-E2 обнаружили у 65,3% больных с CC генотипом hOGG1 и у 53,7% с CG генотипом (р = 0,003). Высокие уровни IgG2-E2 в комбинации с низкими IgA1-E2 встречались у 40,6% больных с CC генотипом hOGG1 и у 27,2% с CG генотипом. Остальные сочетания низких и высоких уровней IgA1-E2 и IgG2-E2 встречались чаще у больных с генотипом CG hOGG1. Различия между больными CC и CG генотипами hOGG1 по удельному весу анти-пролиферативного и про-пролиферативных иммунологических фенотипов были статистически значимыми (р = 0,003).
Впервые показано, что образование антител, модулирующих пролиферативную активность опухоли, может быть связано с активностью ферментов репарации ДНК. В частности, образование антител, специфичных к E2, у больных РМЖ ассоциировано с генетическим полиморфизмом hOGG1. Иммуноанализ IgA1-E2 и IgG2-E2 можно использовать у больных РМЖ I стадии для оценки пролиферативной активности опухоли при дальнейшем её росте.
Проанализированы показатели функционального статуса нейтрофилов крови у 100 взрослых пациентов с верифицированным диагнозом первичный дефицит антителопродукции (44 пациента с общим вариабельным иммунодефицитом — ОВИД, 56 человек с селективным дефицитом IgA — SIgAD. Все пациенты с ОВИД получали регулярную заместительную терапию препаратами иммуноглобулинов, а пациенты с SIgAD — симптоматическое лечение при необходимости. Обследование проводилось вне эпизода инфекционно-воспалительного процесса. Выявлена более высокая частота неинфекционных осложнений (аутоиммунный синдром, незлокачественная лимфопролиферация, энтеропатии) при ОВИД по сравнению с SIgAD (χ2 = 10,27; р=0,001). У пациентов обеих групп обнаружены изменения реактивности нейтрофилов по сравнению с контрольными значениями в виде повышения базальной генерации супероксидных радикалов (р<0,001), активности нетоза (р=0,005) и апоптоза (р<0,001) при снижении поглотительной функции (р<0,001) и резерва образования активных форм кислорода (р<0,001). Максимальная степень изменения поглотительной и супероксид-продуцирующей активности наблюдалась при ОВИД, а нетоза – при SIgAD. Развитие осложнений неинфекционного характера сопровождалось значительным повышением параметров стимулированного нетоза (NETст), что делает этот показатель перспективным для оценки стабильности течения и прогноза развития осложнений при врожденных дефектах антителопродукции.
СЛУЧАЙ ИЗ ПРАКТИКИ
Тимэктомия в ряде клинических ситуаций является вынужденным этапом кардиохирургического лечения врожденных пороков сердца, но вопрос о ее влиянии на формирование иммунитета в раннем онтогенезе остается открытым. Одним из направлений в решении этого вопроса может быть морфофункциональное исследование удаленного тимуса с помощью современных методов сканирующей электронной микроскопии. Цель исследования – изучить возможности сканирующей электронной микроскопии в обратно-рассеянных электронах для морфологической и функциональной оценки тимуса, вынуждено удаленного у детей первых недель жизни с врожденными пороками сердца. Материалы и методы. Было проведено исследование тимуса новорожденного ребенка (27 день постнатальной жизни) с дефектом межжелудочковой перегородки при помощи визуализации методом сканирующей электронной микроскопии в обратно-рассеянных электронах после заливки в эпоксидную смолу. Масса тимуса составила 15,7 грамма, размеры тимуса: поперечный – 3,4 см, продольный – 4,1 см, толщина – 1,7 см; объем 12,4 см3. Результаты. Проведенное исследование показало возможности сканирующей электронной микроскопии в обратно-рассеянных электронах в морфологической и в функциональной оценке тимуса, как центрального органа иммунной системы. Поэтапная визуализация от малых к большим увеличениям, от тканей к клеткам и внутриклеточным структурам, а также послойное исследование коркового, мозгового вещества, междольковых перегородок и сосудов, позволяет эффективно оценить функциональность тимуса. Данный метод исследования является достаточным для научных исследований вынужденно удаленного тимуса, так как дает возможность для визуализации его микроанатомии. Позволяет проводить фенотипирования клеток различных слоев тимуса, изучать межклеточные взаимодействия тимоцитов с ретикуло-эпителиальными клетками, тонкие особенности телец Гассаля и, наконец, процесс покидания тимуса Т-лимфоцитами.
ISSN 2313-741X (Online)