Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa и Enterobacter spp. – являются представителями группы ESKAPE, характеризующейся наибольшей устойчивостью к антибиотикам.  В связи с широким распространением патогенов и их опасностью для системы здравоохранения актуальным остается поиск новых путей терапии бактериальных инфекций.

Антибиотики впервые были получены в начале двадцатого века, однако их повсеместно распространение началось в годы Второй Мировой Войны. На сегодняшний день спектр антибактериальных препаратов широк, но несмотря на это проблема устойчивости бактерий к ним стоит остро.

Актуальной задачей современной науки считается поиск преодоления резистентности бактерий к антибактериальным препаратам. Поскольку поиск новых классов веществ является долгим и дорогостоящим процессом, Применяют комбинированные схемы приема препаратов, модифицируют способы доставки антибиотиков к очагу инфекции в организме, изменяют строение молекул действующего вещества, используют адъюванты.

NK-клетки традиционно рассматриваются как часть противоопухолевого или противовирусного иммунитета. Однако в связи с появлением данных, свидетельствующих о наличии в них антибактериальных белков и способности проявлять цитотоксичность против клеток, зараженных внутриклеточными прокариотическими организмами, на сегодняшний день их можно рассматривать, как компонент антибактериального иммунитета.

Клетки линии NK-92 воспроизводят характеристики NK-клеток, обладают сходными свойствами. Кроме того, активно изучается возможность их применения в качестве компонента противоопухолевой терапии, проводятся клинические испытания, находящиеся на разных этапах. В совокупности с антибактериальными свойствами NK-клеток и вышеописанными фактами становится возможным применения клеток линии NK-92 как адъюванта при антимикробной терапии инфекций, вызванных устойчивыми к антибиотикам бактерий.

В обзоре представлены данные о возможности использования клеточной линии NK-92 и продуцируемых ими микровезикул (МВ) для борьбы с устойчивыми к антибиотикам бактерий группы ESKAPE. В настоящее время исследований в этой области недостаточно, однако изложенные в обзоре данные об NK-клетках позволяют предложить клеточную линию, воспроизводящую их характеристики и продуцируемые ими МВ, в качестве перспективного адъюванта антибактериальной терапии.

Ангиогенез – образование сосудов из уже существующих, рассматривается как один из этапов формирования сосудов. Описано два типа ангиогенеза: разветвляющий и неразветвляющий. Ангиогенез задействован как в физиологических, так и патологических процессах, что обусловливает интерес к его изучению со стороны биомедицины. Протекание ангиогенеза состоит из 6 этапов, находящихся под контролем факторов микроокружения, в том числе, цитокинов и ростовых факторов, каждый из которых может обладать активирующим (проангиогенным) или ингибирующим (антиангиогенным) эффектом. Лиганд-рецепторые взаимодействия клеток, окружающих место образования сосудов, также могут оказывать влияние на этот сложный процесс. На сегодняшний день молекулярные механизмы воздействия цитокинов и ростовых факторов, а также межклеточных взаимодействий на ангиогенез остаются не изученными в полной мере. Однако показано, что сигналы, получаемые при ангиогенезе его участниками – клетками эндотелия, вызывают запуск в них каскадов реакций, приводящих к изменению экспрессии генов, влияя на фенотип и функцию клеток, на характер протекание процесса образования сосудов. Целью обзора служила систематизация современных представлений об ангиогенезе, молекулярных механизмах, задействованных в этом процессе. В обзоре представлены данные о характеристиках популяций эндотелиальных клеток в растущем сосуде, этапах ангиогенеза и факторах, контролирующих формирование сосудов. В обзоре освещены последние данные о сигнальных путях PI3K/Аkt, MАPK/ЕRK, mTОR, RhоА, Rас, Notch, Smаd2/3, Smаd1/5/8, STАT3, STАT5, NF-κB и молекулах, индуцируемых в эндотелиальных клетках при их взаимодействии с цитокинами, ростовыми факторами, а также при активации некоторых поверхностных рецепторов эндотелия (VЕGFR1, VЕGFR2, VЕGFR3, Tiе1, Tiе2, FGFR, PDGFR-α, PDGFR-β, TNFR1, TNFR2, VЕ-кадгерин, TβRI, TβRII). Особое внимание уделено описанию взаимодействия TGFβ сигналинга с другими сигнальными путями при ангиогенезе. Также в обзоре представлены современные данные об ингибиторах сигнальных путей, которые могут быть использованы как при изучении ангиогенеза, так и при необходимости его коррекции в терапии. В обзоре суммированы данные о 29 ингибиторах, находящихся на разных стадиях внедрения – от исследований in vitro, до применения в клинической практике.

Тромбоциты – это небольшие постклеточные элементы мегакариоцитов, циркулирующие в крови. На их поверхности представлены молекулы межклеточной адгезии, Toll-подобные рецепторы, рецепторы хемокинов и цитокинов и другие. Тромбоциты содержат соединения с разнообразной биологической функцией, в том числе хемокины, цитокины и ростовые факторы. Благодаря особенностям цитологического строения – мембранной системе и секреторным гранулам – тромбоциты способны быстро активироваться и вступать во взаимодействие с другими клетками. Тромбоциты участвуют в гемостазе, иммунных реакциях, ангиогенезе. Активация, необходимая тромбоцитам для выполнения своих функций, опосредуется через ионы кальция и может инициироваться компонентами субэндотелия, белками системы комплемента, продуктами секреции других тромбоцитов. При активации тромбоциты высвобождают секреторные гранулы, изменяют морфологию. Помимо этого, тромбоциты, подобно другим клеткам организма, в норме и при патологии продуцируют микровезикулы – сравнительно новый объект, интенсивное изучение которого ведется в настоящее время.

Целью настоящего обзора явилось сравнительное описание тромбоцитов и их микровезикул, которым тромбоциты делегируют некоторые свои функции как посредникам коммуникации с другими клетками, в том числе эндотелиоцитами. Микровезикулы являются перспективным объектом исследования, изучается возможность их использования в качестве диагностического и терапевтического агента. Наибольшая часть микровезикул, циркулирующих в периферической крови, имеют тромбоцитарное происхождение. В составе микровезикул тромбоцитов присутствуют цитокины и другие белки, липиды и нуклеиновые кислоты (ДНК, мРНК, микроРНК). На поверхности микровезикул тромбоцитов сохраняются поверхностные маркеры родительских клеток; на их мембране представлен фосфатидилсерин, который дополнительно участвует в тромбообразовании за счет аккумулирования факторов коагуляции. Под влиянием сигналов микроокружения состав, фенотип тромбоцитарных микровезикул, а также их функциональная направленность в отношении эндотелия может варьировать в зависимости от стимула. Эффект, оказываемый ими на ангиогенез и регенерацию недостаточно изучен, экспериментальные данные демонстрируют как положительное, так и отрицательное влияние. При различных патологиях, сопровождающихся эндотелиальной дисфункцией (сердечно-сосудистые патологии, преэклампсия, диабет), наблюдается повышение уровня тромбоцитарных микровезикул, что указывает на их возможное участие в патогенезе заболеваний. Тем не менее, влияние тромбоцитов и их микровезикул на эндотелий, в том числе активации в эндотелии различных сигнальных путей, остается предметом дальнейших исследований.

Резюме

Важнейшей функцией γδТ-клеток является контроль за реакциями врожденного и адаптивного иммунитета. Эти клетки также участвуют в противобактериальном, противовирусном, противоопухолевом иммунитете, регулируют воспаление, определяют гомеостаз барьерных тканей, регулируют взаимодействие клеток в зоне маточно-плацентарного контакта и осуществляют надзор за течением беременности, участвуют в патогенезе аутоиммунных заболеваний, участвуют в ранозаживлении, поддерживают целостность эпителия. За последние годы в литературе появилось большое количество данных о многообразии субпопуляций γδT-клеток, порой противоположных, или даже антагонистических, роли этих субпопуляций в физиологических и патологических процессах. Поэтому целью настоящего обзора явилась систематизация данных о биологии γδT-клеток, их происхождении, фенотипе, функциях и способах применения в клинике. В обзоре изложены современные представления о происхождении γδТ-клеток, стадиях их внутритимической дифференцировки, возможностях внетимической трансдифференцировки одних субпопуляций в другие. В обзоре приведена современная классификация субпопуляций γδТ-клеток человека, основанная на экспрессии γ- и δ цепей Т-клеточного рецептора, описаны фенотип и свойства наиболее распространенных популяций Vδ1, Vδ2, Vδ3 Т-клеток. Приведена классификация γδТ-клеток человека, основанная на продукции ими цитокинов и экспрессии внутриклеточных мессенджеров, подробно описаны свойства и функции наиболее изученных субпопуляций: γδT1, γδT17, γδNKT, γδTreg, γδT_APC, γδTfh. В обзоре особое внимание уделяется фенотипу различных популяций, секреции ими цитокинов, приводятся данные об экспрессии поверхностных рецепторов γδТ-клеток человека и их функциях. В частности, рассмотрены особенности строения и лиганды γδТ-клеточного рецептора, а также рецепторы, контролирующие их активность (LIRB1/ILT2, KIR2DL1, KIR2DL2/3, KIR2DL4, KIR2DS1, KIR2DS2, KIR3DL2, KLRD1, NKG2A, NKG2C, NKG2D, NKG2F, NKp30, NKp44, NKp46, KLRC3, DNAM1, KLRG1/MAFA, FcγRIII, BTLA, PD1, TIGIT, VISTA, LAG3, TIM3, CTLA-4, 2B4, NK1 (NK28), KLRB1, TLR1, TLR2, TLR3, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8), цитотоксичность в отношении клеток-мишеней, хемокиновые CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR9, CCR10, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, цитокиновые и адгезионные рецепторы. В обзоре приведена информация об участии субпопуляций γδТ-клеток человека в различных физиологических и патологических процессах, отмечена их неоднозначная роль в надзоре за опухолевым ростом. На основании описанных данных приводятся сведения о возможных перспективах применения γδТ-клеток в терапии некоторых заболеваний.

Резюме

Цель работы: обобщение существующих результатов в противоопухолевой РНКи-терапии, а также выделение роли миРНК как ремодулятора иммунного ответа при онкологических заболеваниях.

Материалы и методы: литературный обзор включает в себя анализ научных работ из баз данных PubMed, Embase, eLIBRARY, «КиберЛенинка» и Web of Science, CNKI и MEDLINE

Результаты: рак – одна из наиболее актуальных проблем глобального здравоохранения на сегодняшний день. Значимость настоящей проблемы обуславливается иммунной толерантностью опухолей, их лекарственной резистентностью, а также рядом ограничений в использовании традиционных методов лечения. Подходов на основе РНК-интерференции (РНКи), в реализации которых могут быть применены молекулы малых интерферирующих РНК (миРНК), могут предложить перспективную терапевтическую тактику, которая будет сочетать в себе выраженный иммуномодулирующий эффект и целевое подавление экспрессии генов, важных для опухолевого роста. РНКи опосредованное ингибирование регуляторных опухолевых путей (PI3K/AKT, Wnt/β-катенин), позволит нарушить пролиферацию и метастазирование новообразования, параллельно мобилизуя противоопухолевый иммунитет через стимуляцию Toll-подобных рецепторов (TLR7/8), созревание дендритных клеток и инфильтрацию в опухоль цитотоксических Т-лимфоцитов. Ряд проведенных исследований демонстрирует потенциал применения миРНК в терапии опухолевых заболеваний, который заключается в изменении фенотипа опухолеассоциированных макрофагов, снижении продукции противовоспалительных цитокинов, а также в стимуляции блокады иммунных контрольных точек. Исследование подобного подхода на модели in vivo в лабораторных условиях приводило к уменьшению объёма меланомы, опухолей молочной железы и гепатоцеллюлярной карциномы до 5 раз, подавлению метастазирования и повышению общей выживаемости.

Выводы: рак остается одной из наиболее значимых проблем современной медицины, характеризующейся высокой смертностью, сложными механизмами иммунной толерантности и частым возникновением резистентности к существующим терапевтическим подходам. Несмотря на прогресс в современной онкоиммунологии, использование ингибиторов контрольных точек и таргетных противоопухолевых средств, эффективность настоящих подходов ограничена иммуносупрессивным окружением опухоли, гетерогенностью злокачественных клеток, побочными эффектами и токсичностью самих лекарственных средств. В контексте этого, РНК-интерференция является многообещающим подходом, который способен решить одновременно несколько ключевых задач онкоиммунологии, таких как подавление экспрессии критических онкогенов; блокировка опухолевых сигнальных путей, ответственных за опухолевую пролиферацию, инвазию, выживаемость; а также запуск каскада реакций иммуномодуляции, что будет приводить к активации врожденного иммунитета. Двойной эффект РНК-интерференции, который заключается в прямом воздействии на опухолевые клетки и иммунной модуляции опухолевой среды – делает РНКи прекрасным инструментом для преодоления опухолевой иммунотолерантности и обеспечения прямого цитотоксического противоопухолевого эффекта.

Резюме

Глобальное исследование показывает, что клапанная болезнь сердца до настоящего времени занимает одно из ведущих мест в структуре смертности от сердечно-сосудистых заболеваний, являясь одной из значимых причин развития сердечной недостаточности, в том числе среди трудоспособного населения. Ксеногенные ткани широко используются в кардиохирургии для изготовления биологических протезов клапанов сердца, а также для сосудистых и внутрисердечных заплат. Современные методики химической обработки ксеногенной ткани, направленные на устранение ее иммуногенности, полностью не удаляют ксеноантигены с ткани. Считается, что остаточные углеводные антигены животных являются триггером иммунного ответа на ксеноткани. В то же время, дискуссия о роли иммунного ответа на ксеногенные антигены в индукции воспаления, дисфункции и кальцификации клапанных структур сердца продолжается.

 Целью настоящего обзора явилось обобщение данных научных исследований, посвященных иммунному реагированию на ксеногенные ткани, и поиску путей преодоления иммунного конфликта. Модификация перикарда крупных животных различными методами не удаляет углеводные эпитопы внеклеточного матрикса и мембран клеток, которые распознаются предсуществующими антителами класса М и G. Высоко динамичное функционирование ксеногенных биологических протезов увеличивает их антигенность за счет уменьшения первичной сшивки внеклеточного матрикса и активации альтернативного пути комплемента с адсорбцией на ксеногенной ткани компонента комплемента iC3b, как опсонина для микро- и макрофагов. Воспалительные эндотипы индивидуумов, определяются генетически детерминированным повышенным синтезом тех или иных про- и противоспалительных цитокинов. В частности, для ревматической болезни сердца, как основы формирования патологии нативного митрального клапана сердца, характерно повышение TNF-a, INF-g и IL-6. Все эти цитокины могут быть целями для биологической терапии, направленной на ограничение конституционального воспалительного эндотипа. OMICS-технологии, примененные для различных вариантов деградации биологических ксеногенных протезов клапанов сердца с учетом их имплантации и широким клиническим обследованием пациентов, могут открыть новые варианты иммуновоспалительных эндотипов, приводящих к дисфункции биопротезов, с одной стороны, и выявления таргетных молекул, через которые можно ингибировать антиксеногенный иммунный ответ.

Резюме

Сепсис представляет собой гетерогенное и жизнеугрожающее состояние, обусловленное дисрегуляцией иммунного ответа на инфекцию. Наиболее тяжелой формой является септический шок, характеризующийся снижением артериального давления, ухудшением перфузии тканей и гипоксией. Несмотря на развитие антибактериальной и интенсивной терапии, заболеваемость и смертность при сепсисе остаются высокими, что подчеркивает актуальность углубленного изучения его патогенеза. В последние годы акцент в научных исследованиях сместился с клинической симптоматики к анализу его иммунных и молекулярных механизмов, что позволило выделить различные фенотипы и эндотипы заболевания. Фенотипы сепсиса определяются на основании клинических проявлений и биомаркеров. В основе же эндотипов лежат молекулярные механизмы, включая экспрессию генов иммунного ответа.

В данной статье рассмотрены ключевые аспекты врожденного и адаптивного иммунного ответа при сепсисе, включая активацию провоспалительных цитокинов, развитие коагулопатий, нарушение целостности эндотелия и регуляции микрососудистого кровотока. Кроме того, подчеркивается значение таких механизмов, как гипервоспаление, одновременное развитие иммуносупрессии и функционального истощения иммунокомпетентных клеток. В связи с этим, иммунологические биомаркеры рассматриваются как перспективный инструмент для стратификации пациентов, прогнозирования клинических исходов и проведения персонализированной терапии. Также рассмотрены современные подходы в иммунодиагностике, включая количественную оценку уровней цитокинов и определение маркеров дисфункции врожденного иммунитета.

Таким образом, современное понимание сепсиса как иммунологически гетерогенного синдрома существенно расширяет представление о его патогенезе. Наряду с классической концепцией «воспаления, сменяющегося иммуносупрессией», все большее значение приобретает идея одновременного сосуществования этих состояний, что требует пересмотра подходов к диагностике и терапии. Кроме того, стратификация пациентов на основе клинических фенотипов и молекулярных эндотипов позволяет более точно прогнозировать течение заболевания и ответ на лечение. В настоящее время иммунодиагностика приобретает ключевую роль в персонализированном подходе к лечению пациентов с сепсисом.

Резюме

Современные исследования в области иммунологии указывают на немаловажное значение механических факторов в формировании иммунного ответа. Механоиммунология, как новое междисциплинарное направление, изучает влияние механических стимулов на поведение иммунных клеток, в частности T-лимфоцитов. Доказано, что жесткость микросреды, механические взаимодействия с внеклеточным матриксом, а также изменение мембранного натяжения способны модулировать активацию, миграцию, пролиферацию и эффекторные функции T-клеток. Оптимальная механическая среда способствует повышению T-клеточной активности, в то время как увеличение жесткости микросреды, изменение свойств внеклеточного матрикса, могут снижать их функциональные возможности. Известные молекулы такие, как Piezo 1, интегрины, Yes-ассоциированный белок, являются ключевыми регуляторами механотрансдукции в иммунных клетках. Постепенное развитие представлений об их участии в иммунном ответе свидетельствует о значительной сопряженности их модулирующих влияний, формирующих систему, обеспечивающую комплексное реагирование на механические стимулы. Механомодуляция приводит к изменению внутриклеточной среды, выступая в качестве фактора, определяющего метаболический профиль T-клеток. Кроме того, исследования показывают, что механочувствительные сигнальные пути могут участвовать в регуляции межклеточных взаимодействий и адаптивного иммунного ответа, что предоставляет широкие возможности для модификации иммунных реакций. Понимание механизмов механотрансдукции открывает перспективы для разработки новых терапевтических стратегий. Механические сигналы могут быть использованы для повышения эффективности CAR-T-клеток за счет оптимизации их активации, пролиферации и инфильтрации в опухолевую ткань, что особенно важно в лечении злокачественных новообразований, в частности солидных опухолей, где CAR-T-клеточная терапия сталкивается с серьезными ограничениями. Механоиммунологические подходы рассматриваются также в контексте лечения аутоиммунных заболеваний. Предполагается, что механочувствительные пути могут регулировать избыточную активацию T-клеток, препятствуя развитию аутоиммунных процессов и патологической гиперактивации иммунной системы. Не исключено создание эффективных методик предотвращения реакций трансплантат-против-хозяина и отторжения трансплантата, а также методов лечения хронических инфекций. Спектр возможных фармакологических методик включает в себя применение активаторов и ингибиторов Piezo 1, интегринов и Yes-ассоциированного белка. Разрабатываются и биоинженерные подходы. Одним из перспективных направлений является использование наномоторов для ex vivo активации T-клеток, что может повысить эффективность клеточных иммунных технологий в лечении различных заболеваний. Кроме того, настройка иммунных реакций с использованием механических свойств может позволить направленно регулировать иммунный ответ в зависимости от специфики патологического процесса.

Резюме

Цель исследования. Проанализировать современные достижения в области транскриптомных технологий, ориентированных на анализе единичных клеток с акцентом на их применение в исследовании опухолевого микроокружения  и иммунного ландшафта при  раке предстательной железы.

Методы. Были проанализированы научные базы данных PubMed, Medline, Web of Science, Embase.

Результаты. Рак предстательной железы (РПЖ) — злокачественное новообразование, зависящее от гормонов андрогенного происхождения, которое поражает мочеполовую систему мужчин. Данные показывают, что у мужчин младше 40 лет РПЖ встречается крайне редко, в то время как наибольшее количество случаев наблюдается в возрастной группе от 50 до 70 лет. На сегодняшний день РПЖ является одним из наиболее распространенных онкологических заболеваний среди мужчин и представляет собой одну из основных причин смертности от рака. Согласно данным Глобальной онкологической обсерватории (GCO), в 2022 году по всему миру было зарегистрировано 1 467 854 новых случаев РПЖ, что привело к 397 430 летальным исходам, связанным с этим заболеванием. РПЖ занимает четвертое место по заболеваемости и второе — по смертности среди всех онкологических заболеваний у мужчин. В России РПЖ занимает вторую позицию по заболеваемости среди всех видов рака у мужчин, с зарегистрированными 52 712 случаями на 2022 год, и четвертую — по смертности, с 14 635 случаями. Глубокое понимание механизмов патогенеза и прогрессирования РПЖ имеет ключевое значение для эффективной диагностики и разработки методов лечения. В обзоре представлен анализ транскриптомных техологий в разрешении единичных клеток в изучении клеточной гетерогенности при раке предстательной железы. Также подробно представлена методология анализа, охарактеризована клеточная гетерогенность при раке предстательной железы, описаны современные исследования в области транскриптомики единичных клеток при раке простаты  а также обозначены перспективные направления применения полученных результатов в клинической практике. Результаты исследований в этой области имеют значительный потенциал для использования в качестве как прогностических, так и диагностических маркеров опухолевых процессов. Таким образом, работа подчеркивает важность изучения клеточной гетерогенности для совершенствования методов диагностики и терапии рака простаты.

Обсуждение. Технологии  исследования транскриптома единичных клеток предоставляют уникальные возможности для углубленного понимания молекулярных и клеточных механизмов, лежащих в основе иммунного ответа при онкологических заболеваниях. Полученные данные могут стать основой для развития новых направлений в фундаментальной иммунологии, разработки инновационных терапевтических стратегий и внедрения персонализированного подхода к лечению рака простаты, что открывает перспективы для повышения эффективности терапии.

Резюме

В статье анализируется влияние вирусных инфекций, таких как SARS-CoV-2, и липополисахарида (LPS), компонента клеточной стенки грамотрицательных бактерий, на развитие остеонекроза через патологическую ось «лёгкие-суставы». Вирусная инфекция вызывает повреждение клеток лёгких и сосудистого эндотелия, что приводит к воспалительным и коагуляционным нарушениям, увеличивающим риск ишемии костной ткани. LPS, взаимодействуя с рецепторами TLR4, усиливает воспалительный ответ и нарушает кровоснабжение костей, стимулируя резорбцию и препятствуя костеобразованию. Кроме того, в статье подчёркивается роль дисбиоза лёгких, обусловленного вирусной инфекцией, который усиливает воспаление и повышает проницаемость барьеров для эндотоксинов.

Поиск информации проводился по ключевым словам “остеонекроз и липополисахарид”, “вирус Covid-19 и липополисахарид-связывающий белок”, “Виремия и остеонекроз”, «Микрофлора легких и ЛПС» в зарубежных и отечественных наукометрических базах, таких как e-Library и PubMed. Представленные данные позволяют утверждать, что сочетание дисбаланса “липополисахаридсвязывающих систем”, нарушенного легочного барьера, вирусной агрессии и LPS является важным отягощающим провоспалительным фактором. Это сочетание формирует предрасположенность или полноценный остеонекроз, что делает поиск механизмов влияния на эти состояния, как по отдельности, так и в комбинации, перспективным научным и клиническим направлением.

В данном исследовании акцентируется внимание на многообразии механизмов, через которые вирусные инфекции и бактериальные липополисахариды могут влиять на костную ткань. Исследования показывают, что воздействие на эти механизмы может открыть новые пути для разработки терапевтических стратегий. Также рассматриваются перспективы использования целевых терапий для смягчения негативных последствий этих взаимодействий. Эти данные подчеркивают важность комплексного подхода в изучении и лечении остеонекроза, учитывающего как инфекционные, так и воспалительные компоненты процесса.

Резюме

Ишемический инсульт является одним из самых распространенных заболеваний во всем мире, с высоким уровнем заболеваемости и смертности. В патологическом процессе ишемии нервной ткани нейровоспаление является важным фактором, который определяет функциональный прогноз исхода заболевания. При формировании ишемического очага происходит активация клеток микроглии, а также астроцитов, что приводит к запуску каскада нейровоспалительных реакций, играющих важную роль в патофизиологии ишемического инсульта. Активированные клетки микроглии и астроциты способны формировать разнообразные фенотипы в зависимости от соответствующих параметров микроокружения. Данные фенотипы могут оказывать как нейротоксическое, так и нейропротекторное действие. С одной стороны, при повреждении нервной ткани глиальные клетки способствуют удалению клеточного дебриса, поддержанию ионного гомеостаза, регулируют внеклеточное содержание нейротрансмиттеров и обеспечивают трофику нейронов. С другой стороны, микроглия и астроциты могут приобретать провоспалительный фенотип, характеризующийся секрецией воспалительных цитокинов, который способствует прогрессированию нейровоспаления и повреждению тканей. Таким образом, астроциты и микроглия претерпевают как морфологические, так и функциональные перестройки, тем самым активно участвуя в нейровоспалении за счет высвобождения провоспалительных или противовоспалительных факторов. Важно отметить, что эти перестройки сопряжены с метаболическим репрограммированием, которое приводит к изменению активности метаболических путей для компенсации дефицита энергии и строительных материалов, вызванного нарушением мозгового кровотока. Провоспалительный фенотип микроглии характеризуется активацией гликолиза, пентозофосфатного пути, синтеза жирных кислот и глутамина, тогда как противовоспалительный фенотип демонстрирует усиление окислительного фосфорилирования и окисления жирных кислот. Для реактивных астроцитов характерно усиление гликолиза, гликогенолиза и сниженное поглощение глутамата. В последнее время появляется все больше свидетельств того, что манипулирование гомеостазом глиальных клеток может быть использовано для переключения с нейротоксического фенотипа на нейропротекторный. Всестороннее понимание основных механизмов переключения метаболических фенотипов потенциально может позволить направленно репрограммировать глиальные клетки в ходе патологического процесса, что может быть использовано в терапевтических подходах для лечения последствий ишемического инсульта. В данном обзоре представлены современные представления о метаболическом репрограммировании в астроцитах и клетках микроглии в контексте патофизиологических процессов при ишемии мозга.

Резюме

Современные исследования роли кишечной микробиоты у животных и человека показывают, что микроорганизмы является важным фактором, определяющим здоровье хозяина и участвуют в патогенезе различных инфекционных и неинфекционных заболеваний. В настоящее время активно исследуются механизмы формирования функциональной оси «кишечник-легкие» при новой коронавирусной инфекции COVID-19, где желудочно-кишечный тракт может являться входными воротами инфекции, указывая на вовлечение кишечной микробиоты в инфекционный процесс. С одной стороны, изменение микробиоты пациентов (дисбиоз), инфицированных вирусом SARS-CoV-2, является одним из факторов развития вторичной бактериальной инфекции, сепсиса, системного воспаления и полиорганной недостаточности. С другой стороны, нарушение микробиоты кишечника способствует развитию тяжелого течения и летального исхода у пациентов из-за двунаправленной связи кишечной микробиоты через систему иммунитета посредством цитокинов.  Показана связь степени тяжести COVID-19 у пациентов с уровнем цитокинов и выявлением в кишечном биотопе определенных видов «провоспалительных» или «противовоспалительных» бактерий. Иммунологические нарушения у пациентов с COVID-19 также опосредованы изменением профиля метаболома на фоне дисбиотических нарушений микробиоты. Связь между составом микробиоты кишечника, уровнями цитокинов и воспалительными маркерами позволяет предположить, что микробиом кишечника влияет на развитие и течение коронавирусной инфекции, а «симбиотический потенциал» нормобиоты может быть использован для разработки мер профилактики и реабилитации пациентов. Этому может способствовать развитие исследований в направлении проблемы симбиоза человека и микробиоты. Ряд ключевых механизмов изучения интеграции бифидобактерий и лактобацилл с хозяином, опосредованные системой иммунитета, гормонов и нейромедиаторов, открывают новые перспективы для медицины, включая получение новых пробиотических штаммов различной целевой установки для лечебно-профилактической коррекции нарушенных функций организма. Изучение микросимбиоценоза, как одного из векторов ассоциативного симбиоза, позволило разработать метод межмикробного распознавания «свой-чужой», где в качестве тестовой распознающей культуры используются бифидобактерии, т.к. для «своих» штаммов характерен синергизм (поддержка), тогда как при встрече с «чужой клеткой» - антагонизм. Именно этот фундаментальный механизм можно использовать при отборе «своих» для хозяина штаммов, пригодных для создания пробиотической композиции.

Резюме. Беременность характеризуется особым состоянием системы гемостаза и иммунной системы, при котором наблюдается активация их компонентов. Гиперактивация тромбоцитов и моноцитов может являться фактором, вызывающим различные осложнения беременности, в частности, преэклампсию. При этом патогенетическая роль тромбоцитарно-моноцитарных комплексов (ТМК), которые представляют интерес в качестве диагностического маркера и в качестве терапевтической мишени, исследована недостаточно. Целью исследования было определение количественных изменений в содержании и фенотипических характеристиках ТМК периферической крови при преэклампсии, а также оценка влияния тромбоцитов на экспрессию поверхностных маркерных белков моноцитов при физиологическом и патологическом течении беременности. Исследуемые группы составили женщины в возрасте 24-42 года с диагнозом тяжелая преэклампсия (35-41 недель беременности) и женщины с неосложненной (физиологической) беременностью  (33-41 недель беременности). В общей популяции и субпопуляциях моноцитов периферической крови пациенток методами проточной цитофлориметрии определяли содержание ТМК и уровни экспрессии CD62P, CD11b, CD86, CD162, HLA-DR, TREM-1 как в составе комплексов, так и в свободно циркулирующих клетках. Установлено, что при преэклампсии уровень ТМК повышен (29,3% всей популяции моноцитов) в сравнении с беременностью, протекающей без осложнений (17,5%), и это повышение происходит за счет двух субпопуляций моноцитов, их формирующих: классических и промежуточных. При этом в ТМК отмечено повышение уровней экспрессии поверхностных антигенов CD62P, CD162, HLA-DR, CD86, TREM-1, CD11b характеризующих  активацию тромбоцитов и моноцитов. Фракции классических, промежуточных и неклассических моноцитов вносили различный вклад в изменение уровней экспрессии активационных маркеров моноцитов, связанное с преэклампсией. Сравнение ТМК и свободно циркулирующих моноцитов показало, что изменения поверхностного антигенного фенотипа моноцитов в составе ТМК обусловлены как влиянием тромбоцитов, так и другими факторами. При  преэклампсии наблюдается индуцированное тромбоцитами усиление провоспалительных и адгезионных свойств моноцитов, что проявляется  в повышение уровней экспрессии TREM-1 и CD11b в ТМК. В то же время повышение уровней экспрессии HLA-DR и CD86 в моноцитах не связано с их взаимодействием с тромбоцитами. Полученные результаты свидетельствуют о том, что преэклампсия сопровождается повышением содержания ТМК в периферической крови и активацией моноцитов в составе ТМК,  демонстрируют иммуномодуляторное влияние тромбоцитов, а также дают обоснования значимости определения паттернов экспрессии поверхностных антигенных маркеров ТМК в диагностических и терапевтических целях.

Привычное невынашивание беременности представляет собой существенную клиническую проблему, которая затрагивает 1-5% популяции, при этом в более чем половине случаев причина преждевременной потери беременности остается неизвестной. Одной из возможных причин является нарушение баланса в системе гемостаза матери, приводящее к тромбозу маточно-плацентарных сосудов, снижению перфузии плаценты и гипоксии. Изменения морфофункциональных свойств моноцитов и образуемых ими и активированными тромбоцитами агрегатов  могут являться факторами, приводящими к различным осложнениям беременности, в частности, к невынашиванию. Однако, роль тромбоцитарно-моноцитарных комплексов (ТМК), которые представляют интерес в качестве диагностического маркера и в качестве терапевтической мишени, в патогенезе привычного невынашивания беременности практически не изучена. Целью исследования было определение количественных изменений в содержании и фенотипических характеристиках ТМК периферической крови при привычном невынашивании беременности, а также оценка влияния тромбоцитов на экспрессию поверхностных маркерных белков моноцитов при физиологическом и патологическом развитии беременности. Исследуемые группы составили женщины в возрасте 24-42 года с диагнозом привычный выкидыш, имеющие текущую беременность сроком 6-12 недель и женщины с неосложненной (физиологической) беременностью сроком 7-12 недель. В общей популяции и субпопуляциях моноцитов периферической крови пациенток методами проточной цитофлориметрии определяли содержание ТМК и уровни экспрессии поверхностных антигенов тромбоцитов и моноцитов: CD62P, CD11b, CD86, CD162, HLA-DR, TREM-1. Установлено, что при привычном невынашивании уровень ТМК повышен (26,5%) в сравнении с беременностью, протекающей без осложнений (15,3%), и это повышение происходит с участием всех трех субпопуляций моноцитов: классических, промежуточных и неклассических. При этом на уровне общей популяции моноцитов в ТМК отмечалось снижение уровня экспрессии HLA-DR и повышение уровня экспрессии CD11b, тогда как экспрессия CD62P, CD162, CD86 и TREM-1 существеннно не изменялась. Субпопуляции моноцитов вносили различный вклад в изменение уровней экспрессии активационных маркеров моноцитов, связанное с привычным невынашиванием, и эти изменения не всегда проявлялись на уровне всей популяции моноцитов. Сравнение ТМК и свободных моноцитов  показало, что изменения поверхностного фенотипа моноцитов в составе ТМК обусловлены как влиянием тромбоцитов, так и другими факторами. При  привычном невынашивании наблюдалось индуцированное тромбоцитами усиление адгезионных свойств моноцитов, что проявлялось  в повышение уровня экспрессии CD11b. В то же время снижение уровня экспрессии HLA-DR в моноцитах не было связано с их взаимодействием с тромбоцитами. Полученные результаты свидетельствуют о том, что привычное невынашивание беременности сопровождается повышением содержания ТМК в периферической крови и изменениями антигенного фенотипа моноцитов в составе ТМК, демонстрируют иммуномодуляторное влияние тромбоцитов, а также дают обоснования значимости определения паттернов экспрессии поверхностных антигенных маркеров ТМК в диагностических и терапевтических целях.

Белки семейства VEGF участвуют в развитии многих клеточных популяций: эндотелиальных клеток, моноцитов и макрофагов, стволовых клеток, опухолевых клеток, мышечных клеток стенок сосудов, клеток трофобласта и в целом любых клеток, экспрессирующих рецепторы к VEGF. Нарушения, затрагивающие продукцию белков VEGF и проведение сигналов от них приводят ко многим патологическим состояниям, в том числе к аномалиям развития плаценты. Клетки трофобласта являются основной популяцией клеток, формирующей плаценту. Они вовлечены в процессы секреции и рецепции VEGF, фактора, необходимого для обеспечения ангиогенеза. Несмотря на это, на данный момент в литературе недостаточно данных о влиянии проведения сигналов от VEGF в клетках трофобласта на их функциональные особенности. Среди клеток окружения трофобласта, которые могут воздействовать на их активность в ходе беременности особой группой являются материнские иммунные клетки, в частности NK-клетки. Принимая во внимание высокую численность NK-клеток в децидуальной оболочке, необходимо учитывать их вклад в изменение фенотипа клеток трофобласта. В настоящем исследовании изучалась экспрессия NK-клетками и клетками трофобласта белков MICA и MICB, а также рецептора CD105. Молекулы MICA и MICB являются маркерами стресса и позволяют судить о жизнеспособности клеток. Рецептор CD105 экспрессирован на поверхности некоторых популяций клеток и участвует в передаче сигнала от белков семейства TGFβ. В частности, показано, что эндоглин регулирует сигналинг от TGFβ путем направления сигнала через пути SMAD2/3 или SMAD1/5/8. Эндоглин, согласно литературе, ингибирует сигналинг, задействующий белок SMAD3. Играет ли эндоглин ту же роль в случае NK-клеток и трофобласта неизвестно. Изучение изменений в экспрессии эндоглина является актуальной проблемой, поскольку сигналы от TGFβ необходимы при дифференцировке популяций трофобласта, а нарушения в механизмах сигналинга могут приводить к невынашиванию. В результате исследования мы показали, что VEGF играет роль в регуляции активности трофобласта и естественных киллеров. В частности, депривация VEGF-A моноклональными антителами против этого цитокина при сокультивировании трофобласта и NK-клеток приводит к угнетению экспрессии CD105 обеими популяциями клеток. При этом суточная инкубация трофобласта с антителами к VEGF не вызывала изменений в их устойчивости к цитотоксической активности естественных киллеров. Вместе полученные результаты говорят о том, что депривация VEGF приводит к значимым изменениям в рецепции белков семейства TGFβ клетками трофобласта и естественными киллерами.

Хронический вирусный гепатит С (ХВГС) является одной из важнейших проблем здравоохранения. В большинстве случаев инфицирования вирусом гепатита С, инфекция переходит в хроническую форму, для которой характерно развитие фиброза и цирроза печени. При воспалительных процессах в печени вырабатывается большое количество различных цитокинов и хемокинов, которые способны оказывать как протективное, так и повреждающее действие, в частности приводить к гибели гепатоцитов и прогрессированию фиброза печени. Также в патогенезе ХВГС установлено участие ряда ростовых факторов. Целью исследования стала комплексная оценка широкого спектра цитокинов, хемокинов и ростовых факторов в плазме крови больных ХВГС в зависимости от стадии фиброза печени. В исследование было включено 63 пациента с диагнозом «ХВГС», которых в зависимости от стадии фиброза печени разделили три группы. Контрольную группу составили условно здоровые лица (n=32). В плазме крови определяли концентрации следующих цитокинов: интерлейкинов и некоторых цитокинов (IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12 (p40), IL-12 (p70), IL-13, IL-15, IL-17A, IL-17-E/IL-25, IL-17F, IL-18, IL-27, IFNα, IFNγ, TNFα, TNFβ); хемокинов (CCL2/MCP-1, CCL3/MIP-1α, CCL4/MIP-1β, CCL7/MCP-3, CCL11/Eotaxin, CCL22/MDC, CXCL1/GROα, CXCL8/IL-8, CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CX3CL1/Fractalkine) и ростовых факторов (EGF, FGF-2, Flt-3L, G-CSF, M-CSF, PDGF-AA, PDGF-AB/BB, TGFα, VEGF-A) методом мультиплексного анализа, основанного на xMAP-технологии. Для статистического анализа применяли методы непараметрической статистики. В результате исследования установлены повышенные концентрации цитокинов IL-12 (p40), IL-15, IL-17E/IL-25, IL-27, IFNγ, TNFα, хемокинов CXCL9/MIG и CXCL-10/IP-10 и ростовых факторов FGF-2 и M-CSF при всех стадиях фиброза печени. При тяжелом фиброзе/циррозе печени обнаружены повышенные концентрации цитокинов IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-9, IL-10, IL-17F, IFNα, TNFβ, хемокинов CCL2/MCP-1, CCL11/Eotaxin, CCL22/MDC и ростовых факторов G-CSF, TGFα, Flt-3L. Корреляционный анализ выявил связь высокой степени значимости между тяжестью фиброза печени и содержанием цитокинов IL-6, IFNγ, TNFα, IL-7, хемокинов CCL2/MCP-1, CCL11/Eotaxin, CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CXCL1/GROα, ростовых факторов TGFα, PDGF-AA, PDGF-AВ/ВВ. Таким образом, выявлен определенный профиль цитокинов, характерный для ХВГС, обнаружены цитокины, хемокины и ростовые факторы, значимые для фиброза печени при ХВГС.

Повышенное содержание тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов является отражением возрастания протромбогенной и провоспалительной активности клеток периферической крови. Целью данного исследования стало изучение содержания и свойств тромбоцитарно-моноцитарных и тромбоцитарно-лимфоцитарных агрегатов у пациентов с коронарным атеросклерозом. В исследование вошло 19 пациентов с ишемической болезнью сердца и коронарным атеросклерозом (15 мужчин; 4 женщины; 59,0 (55,0; 69,0) лет). Группу сравнения составили 8 пациентов высокого сердечно-сосудистого риска без коронарного атеросклероза. Выраженность атеросклероза оценивали по величине индекса Gensini Score, рассчитанного по данным ангиографии. Для изучения тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов применяли метод проточной цитометрии с визуализацией. Оценивали относительное количество тромбоцитарно-моноцитарных и тромбоцитарно-лимфоцитарных агрегатов от общего количества моноцитов и лимфоцитов, соответственно; долю агрегатов, образованных посредством P-селектина (CD62P); количество тромбоцитов, агрегированных с каждым отдельным лейкоцитом (моноцитом или лимфоцитом). По результатам исследования среди пациентов с наличием коронарного атеросклероза (Gensini Score>0 баллов) значимо меньшее количество моноцитов образовывало небольшие агрегаты, в состав которых входил 1 моноцит и 1 тромбоцит (78,8 (68,1; 86,2) против 84,7 (83,8; 87,1) % у пациентов без атеросклероза (р=0,039)). При этом у пациентов с более выраженным атеросклерозом (Gensini Score³42,5 баллов) мы выявили тенденцию к увеличению доли агрегатов лимфоцитов с более чем 3 тромбоцитами (0,6 (0,3; 1,6) против 0,1 (0; 0,8) % у пациентов с Gensini Score<42,5 баллов (p=0,075)). Доля крупных тромбоцитарно-лимфоцитарных агрегатов (с 3 и более чем с 3 тромбоцитами) прямо коррелировала с величиной Gensini Score, концентрацией IL-1b, системными воспалительными индексами, отношением концентрации триглицеридов к глюкозе и триглицеридов к холестеролу липопротеинов высокой плотности (индексы инсулинорезистентности), и обратно – с содержанием холестерола липопротеинов высокой плотности. Для доли мелких агрегатов (1 лимфоцит с 1 тромбоцитом) были характерны обратные корреляции с выраженностью коронарного атеросклероза, концентрации IL-1b и индексом инсулинорезистентности. Таким образом, отличительной чертой пациентов с коронарным атеросклерозом является не количество тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов, а размер гетеротипических агрегатов. Неблагоприятным признаком является образование крупных агрегатов, в состав которых входит 3 и более тромбоцита, что также взаимосвязано с интенсивностью системного воспаления и метаболическим дисбалансом.

Привычное невынашивание беременности представляет собой существенную клиническую проблему, которая затрагивает 1-5% популяции, при этом в более чем половине случаев причина преждевременной потери беременности остается неизвестной. Изменения морфофункциональных свойств моноцитов могут являться факторами, приводящим к различным осложнениям беременности, в частности, к невынашиванию. Однако, роль моноцитов в патогенезе привычного невынашивания недостаточно изучена. Целью исследования было определение количественных изменений в содержании и фенотипических характеристиках свободных (не связанных с тромбоцитами) моноцитов на уровне всей популяции и отдельных субпопуляций моноцитов периферической крови при привычном невынашивании беременности в сравнении с неосложненной беременностью. Исследуемые группы составили женщины в возрасте 24-42 года с диагнозом привычный выкидыш с текущей беременностью сроком 6-12 недель и женщины с неосложненной (физиологической) беременностью (7-12 недель). В общей популяции и субпопуляциях моноцитов периферической крови пациенток методами проточной цитофлориметрии определяли содержание моноцитов и уровни экспрессии поверхностных антигенов: CD11b, CD86, CD162, HLA-DR, TREM-1. Установлено, что при привычном невынашивании беременности доля свободных моноцитов понижена (74,6%) в сравнении с беременностью, протекающей без осложнений (83,4%), и это изменение происходит во всех трех субпопуляциях моноцитов: классических, промежуточных и неклассических. При этом на уровне общей популяции моноцитов наблюдалось снижение уровня экспрессии HLA-DR и повышение уровня экспрессии CD11b, обусловленные фракцией классических моноцитов, тогда как экспрессия CD162, CD86 и TREM-1 существеннно не изменялась. Субпопуляции моноцитов вносили различный вклад в изменение уровней экспрессии активационных маркеров, связанное с привычным невынашиванием, и эти изменения не всегда проявлялись на уровне всей популяции моноцитов. Полученные результаты свидетельствуют о том, что привычное невынашивание беременности сопровождается уменьшением содержания свободных моноцитов в периферической крови и изменениями антигенного фенотипа моноцитов, характеризующими ослабление провоспалительных свойств и усиление адгезионных свойств этих клеток. Эти изменения могут лежать в основе патофизиологических процессов, приводящих к преждевременному прерыванию беременности ранних сроков. Определение паттернов экспрессии активационных маркеров, характерных для конкретной акушерской патологии способствует не только выявлению патофизиологических механизмов репродуктивных нарушений, но и совершенствованию методов их диагностики и выработке патогенетически обоснованных способов терапии.

Введение. Хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ) относят к числу наиболее распространенных заболеваний бронхолегочной системы. Одним из важных патогенетических механизмов ХОБЛ признано хроническое воспаление, приводящее к необратимому и прогрессирующему ограничению воздушного потока. Определение новых маркеров воспаления для ранней диагностики, оптимизации и мониторинга терапии является перспективным направлением современных исследований. Цель. Оценить уровни YKL-40 и NGAL в сыворотке крови и индуцированной мокроте и определить их значимость в качестве маркеров воспаления у пациентов с ХОБЛ. Материалы и методы. В исследование включили 50 больных ХОБЛ, группу сравнения составили 60 больных БА. Контрольную группу составили 30 добровольцев, сопоставимых по возрасту и полу, без аллергических и бронхообструктивных заболеваний в анамнезе. Оценивали клинико-анамнестические данные, показатели функции внешнего дыхания. Проводили забор индуцированной мокроты с последующей оценкой клеточного состава. Выполнили иммунофенотипирование лимфоцитов методом проточной цитометрии. Определение концентрации YKL-40 и NGAL в сыворотке крови осуществляли с помощью иммуноферментной тест-системы («R&D Systems). Полученные данные обрабатывали с помощью программных систем STATISTICA 13 и SPSS Statistics 27. Результаты. Установлено значимое увеличение абсолютного количества T-лимфоцитов у пациентов исследуемых групп по сравнению с группой контроля. В группе ХОБЛ зарегистрировано наибольшее количество T-цитотоксических лимфоцитов и NK-клеток. Анализ клеточного состава индуцированной мокроты у пациентов с ХОБЛ выявил преобладание нейтрофильного паттерна воспаления. Максимальный показатель концентрации YKL-40 в сыворотке крови зарегистрирован у пациентов с ХОБЛ, который значимо превышал показатель в группе больных БА (p=0,001) и группе контроля (p<0,001). Уровень NGAL в сыворотке крови пациентов с ХОБЛ значимо не отличался от показателя группы БА (p=0,83) и значимо превышал показатель контрольной группы (p=0,022). Уровень NGAL в индуцированной мокроте был значимо выше в группе ХОБЛ по сравнению с группой БА (p<0,001). Корреляционный анализ подтвердил взаимосвязь уровней YKL-40 и NGAL в сыворотке крови с показателями нейтрофильного воспаления, индексом курящего человека, числом госпитализаций в связи с обострением ХОБЛ в течение календарного года. Установлено, что у пациентов с частыми обострениями ХОБЛ по сравнению с группой с редкими обострениями уровни YKL-40 и NGAL были значимо повышены. Выводы. YKL-40 и NGAL – перспективные маркеры нейтрофильного воспаления дыхательных путей у пациентов с ХОБЛ. Полученные данные позволяют рассматривать YKL-40 и NGAL в качестве маркеров неТ2-эндотипа ХОБЛ с нейтрофильным паттерном воспаления и высоким риском обострений.

Резюме

Саркоидоз это системное иммунноопосредованное гранулематозное заболевание неизвестной по настоящее время этиологии, характеризующееся инфильтрацией тканей макрофагами и лимфоцитами, включая CD8+ Т-лимфоциты, и сопутствующим образованием неказеозных гранулем. Целью исследования являлось изучение различных субпопуляций CD8+ Т-клеток в периферической крови больных хроническим течением саркоидоза органов дыхания с применением маркеров созревания, «поляризации», дифференцировки и миграции Т-лимфоцитов. Образцы периферической венозной крови были получены от 34 пациентов с впервые выявленным хроническим саркоидозом органов дыхания на фоне естественного течения без применения иммуносупрессивной терапии. Диагноз саркоидоза был установлен на основе комплексного клинико-лучевого исследования и подтвержден гистологически у 94,12% пациентов. В качестве контрольной группы использовалась периферическая венозная кровь условно-здоровых доноров (n=40), сопоставимых по полу и возрасту с пациентами с легочным саркоидозом. С применением многоцветной проточной цитометрии было показано, что саркоидозе снижалось как относительное, так и абсолютное содержание CD45RA+CD62L+ «наивных» CD8+ Т-клеток и CD45RA–CD62L+ CD8+ Т-клеток центральной памяти относительно значений группы контроля, а также ЕМ1 клеток (CD45RA–CD62L–CD27+CD28+) и пре-эффекторов 1 типа (CD45RA+CD62L–CD27+CD28+). В ходе последующих исследований по экспрессии CXCR3 и CCR6 CD8+ Т-клеток были разделены на Tc1 (CCR6–CXCR3+), Tc2 (CCR6–CXCR3–), Tc17 (CCR6+CXCR3–) и «дважды-позитивные» Tc17.1 (CCR6+CXCR3+). В случае субпопуляций CD8+ Т-клеток, способных к экспрессии CXCR3 (Tc1 и Tc17.1), нами были отмечены достоверные снижения как относительного, так и абсолютного содержания этих клеток у пациентов с саркоидозом относительно значений условно здорово контроля. На фоне снижения Tc1 клеток нами было отмечено увеличение доли Тс2 клеток в периферической крови пациентов с саркоидозом. Более того, при саркоидозе относительное содержание Tc1 клеток находилось в обратной зависимости от уровня АПФ в сыворотке крови (r=–0,456 при р=0,010), а по мере роста АПФ в сыворотке крови больных отмечалось повышение доли Тс2 клеток (r=0,623 при р<0,001). Таким образом, полученные нами результаты указывают на то, что CD8+ Т-лимфоциты могут играть роль в патогенеза саркоидоза. Для дальнейшей систематизации полученных данных требуются более расширенные клинико-иммунологические сопоставления.

Резюме

Наследственный ангиоотек - генетически детерминированное заболевание, которое относится к первичным иммунодефицитам с нарушением системы комплимента. Чаще всего у пациентов заболевание характеризуется дефицитом С1-ингибитора (НАО I типа) или нарушением функциональной активности С1-ингибитора (НАО II типа). В таких случаях ставят диагноз на основании лабораторных показателей. При НАО с нормальным уровнем и активностью С1-ингибитора диагноз может быть поставлен только на основе семейного анамнеза и/или генетического анализа. У пациентов с НАО с нормальным С1-ингибитором наиболее часто встречаются мутации в гене F12, особенно у женщин. Однако нередко выявляются мутации, которые не имеют точного клинического значения. учитывая ограниченное количество больных НАО, невозможно экспериментально определить клиническое значение вновь обнаруживаемых полиморфных вариантов. Решением этой проблемы может стать анализ in silico каждого нового полиморфизма.

Целью нашей работы было оценить предсказательную возможность методов биоинформатического анализа при оценке полиморфных вариантов в гене F12.

Материалом служили четыре полиморфных варианта NC_000005.9:g.176831285C>G, NC_000005.9:g.176831258C>G, NC_000005.9:g.176831232G>C, NC_000005.9:g.176831232G>T с разным статусом клинической значимости. Для предсказания эффекта полиморфных вариантов на белок F12 были использованы различные веб-ресурсы, основанные на разных алгоритмах (SIFT, Polyрhen-2, FATHMM- XF, MutationTaster2021, MutPred2, MUpro и I-Mutant 2, HOPE, СhimeraX).

Результаты. In silico анализ показал, что мутации NC_000005.9:g.176831232G>C (p.Thr328Arg) и NC_000005.9:g.176831232G>T (p.Thr328Lys) обладают патогенным эффектом, что полностью соответствует их ранее установленному клиническому статусу. В то же время, полиморфные варианты NC_000005.9:g.176831258C>G (p.Gln319His) и NC_000005.9:g.176831285C>G (p.Arg310Ser), по-видимому, не являются самостоятельной причиной заболевания, однако не исключается их возможное участие в модификации клинического фенотипа.

Биоинформатический анализ играет ключевую роль в предварительной оценке значимости вновь выявленных мутаций в гене F12, способствует более точному поиску патогенных вариантов. Включение биоинформатических методов в диагностику необходимо при выявлении причины заболевания у пациентов с НАО с нормальным уровнем и функциональной активностью С1-ингибитора.

Резюме

Целью данного исследования было изучение механизмов действия {Mo₇₂Fe₃₀} на эритропоэз и гематологические показатели in vitro и in vivo. Результаты показали, что нанокластерный полиоксометаллат {Mo₇₂Fe₃₀}, продукты его деструкции (низкомолекулярные железо и молибденсодержащие ионы) не влияют на активность неспецифической эстеразы в цитоплазме центральных макрофагов эритробластических островков костного мозга и, следовательно, не нарушают процесс детоксикации эндотоксинов и ксенобиотиков, осуществляемый макрофагами. Однако введение исследуемых веществ приводит к снижению поглотительной способности макрофагов, без изменения вовлеченности клеток в процесс фагоцитоза. Анализ культуры эритробластических островков выявил следующие закономерности: при введении {Mo₇₂Fe₃₀} и продуктов его деструкции происходит более интенсивное созревание эритроидных клеток в короне эритробластических островков. В первые сутки после внесения полиоксометаллата вследствие ускоренного созревания и диссоциации эритробластических островков, наблюдается снижение количества эритробластических островков 3-го класса и инволюцирующих эритробластических островков. Данный процесс подтверждается увеличением числа клеток эритроидного ряда в миелограмме на 1 сутки. Одновременное увеличение числа реконструирующихся эритробластических островков в группах с полиоксометаллатом и продуктами его деструкции свидетельствует о развитии в «короне» островков дополнительной волны эритропоэза. На вторые сутки после внесения {Mo₇₂Fe₃₀} возрастает число пролиферирующих эритробластических островков 2-го и 3-го классов, на фоне сохранения числа островков 1-го класса, что связано с вовлечением новых макрофагов в эритропоэз и активной пролиферацией эритроидных клеток. На третьи сутки после внесения {Mo₇₂Fe₃₀} наблюдается смещение классов эритробластических островков в сторону более зрелых пролиферирующих островков 2 класса. Полученные данные свидетельствуют о том, что на третьи сутки под влиянием ПОМ происходит ускорение процесса созревания эритроцитов в эритробластических островках. Подобная тенденция наблюдается и при воздействии ПД, но в этом случае эффект ускорения эритропоэза выражен слабее.

Анализ миелограммы костного мозга крыс показал, что при введении исследуемых веществ ({Mo₇₂Fe₃₀} и ПД) в течение семи суток наблюдается увеличение клеточности костного мозга, при этом рост показателя объясняется в том числе и увеличением количества клеток эритроидного ряда, а также ретикулоцитов.

Эти данные согласуются с показателями периферической крови крыс. Было выявлено достоверно значимое увеличение количество эритроцитов при введении исследуемых веществ ({Mo₇₂Fe₃₀} и ПД), которое также сопровождается повышением уровня гемоглобина и значений гематокрита.

Результаты экспериментов могут указывать на возможность активации эритроидного ростка костного мозга.

Резюме

Возрастная динамика состава основных субпопуляций лимфоцитов крови у детей изучена достаточно хорошо, но вопрос о границах нормы, особенно в раннем возрасте, остается актуальным. В работе проанализированы данные прямой выборки из 624 образцов крови здоровых детей возраста от 1 недели жизни до 17 лет 11 мес., жителей Москвы и центральных регионов России, которым при проведении профилактических осмотров выполнялся общий клинический анализ крови. Основным критерием включения ребенка в исследование была достоверная информации об отсутствии у него острых и хронических заболеваний. Абсолютное число лимфоцитов определялось в комплексе показателей автоматизированного анализа крови, применялась  5 Diff- технология проточной гемоцитометрии с флюоресцентным окрашиванием нуклеиновых кислот. Из остаточного объема крови методом проточной цитофлюорометрии с 3-4 цветным окрашиванием определены процентные и абсолютные показатели Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-цитотоксических клеток, соотношение хелперы:цитотоксические лимфоциты, а также процент и абсолютные числа В-лимфоцитов и естественных киллеров.  Сформировано 14  возрастных групп  с числом наблюдений в каждой от 40 до 64. Методом Колмогорова-Смирнова подтверждено нормальное распределение полученных показателей как в общей группе, так и в отдельных возрастных группах. В статье приведены подробные результаты обработки полученных данных методами непараметрической (медиана, межквартильный интервал, диапазон от 10 до 90 центиля) и параметрической статистики  (средняя и стандартное отклонение). На основании оценки интервала 10-90 центилей рассчитаны границы нормы для процентных и абсолютных показателей перечисленных субпопуляций лимфоцитов. Подтверждена известная динамика постепенного снижения по мере взросления детей абсолютного числа лимфоцитов и абсолютных показателей для всех основных субпопуляций, а также относительно более высокие показатели соотношения хелперы:цитотоксические лимфоциты у детей раннего возраста. Подтвержден более высокий процентный уровень В-лимфоцитов у детей в возрастном диапазоне от  2 месяцев до 2 лет, что вместе с высоким общим числом лимфоцитов определило достаточно высокие  абсолютные показатели В-клеток в этих возрастных группах.  Предложенные нормы валидированы на независимой группе  75 детей возраста от 2 до 18 лет. Индивидуальные показатели детей группы валидации вышли за границы нормы в 4 случаях (5,3 % при допустимом уровне расхождений до 10%), что позволяет считать нормы валидированными.   Наиболее дискуссионные результаты  об относительно высоком  абсолютном уровне В-лимфоцитов у детей раннего возраста хорошо согласуются с пулированными данными мета-анализа мировой литературы. Предлагаемые нормы оформлены в виде, удобном для практического использования.   

Резюме

Несмотря на наличие специфической профилактики против вирусного гепатита В (ВГВ) проблема заболеваемости ВГВ среди медицинских работников не становится менее значимой. Определенное место в поддержании эпидемического процесса распространения ВГВ может занимать латентная форма гепатита (ЛГВ). 

Целью исследования являлось выявление зависимости частоты встречаемости anti-HBc у работников медицинских организаций от возрастных, гендерных и профессиональных категорий. Проведено исследование сыворотки крови на наличие анти-НВс методом ИФА среди 1 643 работников медицинских организаций (врачи, медицинские сестры, санитарки, прочий персонал). Образцы сывороток крови исследовали на наличие анти-НВс методом ИФА иммуноферментной тест-системой «ГепаБест анти-HBc-IgG» производства АО "Вектор-Бест-Европа", Россия. Полученные результаты подвергались статистическому анализу с использованы пакета Microsoft Office Excel 2010 и программы Prism9 (GraphPad, США). Для сравнения групп медицинских работников по частотам встречаемости Аnti-НВс использован критерий хи-квадрат.

Аnti-НВс был обнаружен у 601 человека, что составило 36,6% от общей исследуемой выборки, у 1042 человек или 63,4% аnti-НВс не выявлен. Почти половина среднего медицинского персонала из исследуемой выборки являлась серопозитивной по IgG к ядерному антигену вируса гепатита В (50,6%). Не выявлено особых различий по удельному весу обнаружения аnti-НВс у мужчин (31,5%) и женщин (37,0%). В структуре серопозитивных по показателю аnti-НВс в меньшем проценте аnti-НВс выявляется в возрастной категории «молодой возраст» (29,3%), наибольший удельный вес приходится на категорию «средний возраст» (45–59 лет)- 38,8%, что связано со стажем работы, т.е. с риском более длительного воздействия биологического фактора, коим является контакт с источниками ВГВ.

Частота выявления anti-HBc к ядерному антигену ВГВ на ряду с    антителом к поверхностному белку вируса (anti- HBs) может явиться показателем распространенности ВГВ. Считаем возможным рекомендовать проведение исследований на аnti-НВс у персонала медицинских организаций  перед повторной иммунизацией с проведением дополнительных исследований с целью исключения медицинских работников в качестве источника инфекции и дальнейшего наблюдения за ними для своевременного оказания им необходимой медицинской помощи, а также корректировки объема иммунизации против ВГВ в данной профессиональной среде.

Резюме

Клиническое течение туберкулеза и в конечном итоге его клинический исход обусловлены сложным взаимодействием между Mycobacterium tuberculosis (Mtb) и иммунными клетками хозяина.

Цель настоящего исследования – оценить состояние ферментов пуринергической системы и субпопуляционный состав лимфоцитов у больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких в зависимости от лекарственной устойчивости Mtb к противотуберкулезным препаратам.

Материалы и методы. У 109 больных с ИТЛ, вызванного лекарственно-устойчивыми и лекарственно-чувствительными штаммами Mtb, достигших значительного или менее выраженного улучшения после проведения интенсивной фазы химиотерапии, до начала лечения оценивали активность аденозиндезаминазы в сыворотке крови (eADA-1, 2), мононуклеарах и нейтрофилах, концентрацию экто-5'-нуклеотидазы (eNT5E) в сыворотке крови, CD26 (DPPIV) в сыворотке (s, растворимая форма) и мононуклеарах (m, мембраносвязанная форма), субпопуляционный состав лимфоцитов.

Результаты. У больных ИТЛ выделяющих лекарственно-чувствительные штаммы Mtb, достигших «менее выраженного улучшения», статистически значимыми были увеличение концентрации и активности эктоферментов, ответственных за образование внеклеточного аденозина (eNT5E) и его трансформацию (eADA-1 и eADA-2), а также увеличением доли цитотоксических Т-клеток по сравнению с больными, достигшими значительного улучшения. При этом у больных, выделяющих лекарственно-устойчивые штаммы Mtb, достигших «менее выраженного улучшения», отметили более низкие показатели абсолютного числа Т-лимфоцитов, Т-хелперов при увеличении доли цитотоксических Т-клеток, а также усилении активности eADA-2, по сравнению с лицами, достигшими значительного улучшения.

Заключение. До начала противотуберкулезной химиотерапии активность ферментов пуринового метаболизма и субпопуляционный состав лимфоцитов не были связаны с характеристиками лекарственной устойчивости Mtb. Хотя существенное число взаимосвязей между показателями ферментов пуринергической регуляции и количеством/долей лимфоцитов определено у больных, достигших значительного улучшения, при менее выраженном улучшении, независимо от лекарственной устойчивости Mtb, таких взаимосвязей не выявлено. Это свидетельствует о несбалансированности факторов воспаления (представленного ферментами пуринового метаболизма) и иммунного ответа на Mtb у лиц, показавших худшие результаты исходов интенсивной фазы химиотерапии. Учитывание вклада каждого компонента защитных реакций необходимо как для оценки их значимости при различных исходах лечения, так и для назначения адекватной химиотерапии, патогенетической терапии и иммунокоррекции, направленной на прекращение прогрессирования заболевания.

Резюме

Введение. Вопросы патогенетической и восстановительной терапии гестационного пиелонефрита при беременности являются актуальными и дискутабельными в современной доказательной медицине. Лечение данных больных сопряжено с определёнными тонкостями, так как во время беременности нужно не только предусмотреть купирование воспалительного процесса в мочевыводящей системе матери, но и, применяя фармакологические средства, не нанести вред здоровью во будущего ребенку.  Данная проблема характеризуется ежегодным ростом заболеваемости и ростом осложнений, которые зачастую крайне отрицательно сказываются на течении беременности и родов у 3-17% женщин детородного возраста в России ежегодно.

Цель исследования: определение эффективности использования Виферона в стабилизации иммунных нарушений при гестационном пиелонефрите.

Материал и методы. В исследование были включены 80 женщин (средний возраст 32,4±3,7 года) разделённых на группы: контрольную (состоявшую из здоровых небеременных женщин добровольцев), две группы с острым пиелонефритом на втором и третьем триместрах беременности, получавшие базисную терапию, и две группы беременных женщин с сочетанием базисное лечение и иммуномодулятор Виферон. В циркулирующей периферической крови был изучен цитокиновый спектр, состояние системы комплемента и функционально-метаболическая активность нейтрофилов. Взятие крови происходило до начала комплексного лечения, то есть непосредственно при поступлении и после проведенного лечения, то есть при выписке из стационара, с достигнутыми признаками клинического купирования болезни

Результаты. Выявлено более эффективное купирование иммунного воспаления острого пиелонефрита при применении Виферона на 2 и 3 триместре беременности по сравнению с традиционной терапией. Предложенная методика лечения позволяет более быстро нормализовать измененные параметры иммунного статуса и достичь максимально быстрого клинического выздоровления больных. Использование данного способа в медицинской практике с традиционной терапией является актуальным, безопасным и эффективным методом лечения острого гестационного пиелонефрита, что позволит сократить частоту акушерских и урологических осложнений, снизить количество койко-дней госпитализации в лечебном учреждении, уменьшить стоимость нахождения в больнице, поднять качество жизни беременных и воплотить здоровую среду для формирования плода.

Резюме

Нейробластома (НБ) — самая распространенная экстракраниальная солидная опухоль у детей, 8-10% всех детских опухолей и частотой около 1-1,3 случая на 100 тыс. детей до 15 лет. Несмотря на использование интенсивного лечения с хирургическим вмешательством, высокодозной химиотерапией и радиотерапией, 5-летней бессобытийная выживаемость составляет 25-50%, после рецидива 10-40%. За последнее десятилетие стремительно развивается новый вид клеточной терапии с модификацией лимфоцитов химерным антигенным рецептором (CAR). Одним из основных известных антигенов для создания CAR-T терапии против нейробластомы является дисиалоганглиозид GD2, экспрессия которого характерна в 100% случаев этого заболевания. Большинство клинических вариантов анти-GD2 CAR основаны на scFv 14.G2, происходящем из химерного антитела 14.18 (денутуксимаб). В 2020 FDA утвердило новое анти-GD2 гуманизированное антитело, 3F8 (накситамаб) с лучшим профилем безопасности. Несмотря на частичный успех, результаты анти-GD2 CAR-T терапии остаются скромными. Одним из вариантов увеличения специфичности рецептора является таргетирование O-ацетил-GD2, производное дисиалоганглиозида в котором внешний остаток сиаловой кислоты модифицирован O-ацетиловым эфиром. Ацетилирование GD2 происходит только в опухолевых клетках и не встречается в периферических нервах. Известно антитело 8B6, таргетирующее O-ацетил-GD2. Таким образом, как минимум 3 терапевтических антитела, 14G2a, hu3F8 и 8B6 конкурируют друг с другом за таргетирование GD2 с помощью CAR-T клеток. И во всех случаях анти-GD2 CAR содержит вставочные домены во внеклеточной части молекулы. Результаты отдельных клинических испытаний опубликованы для CAR-T на основе 14G2a и hu3F8, но пока нет данных по использованию антитела 8B6 в составе CAR. Цель настоящего исследования получить химерные антигенные рецепторы 2ого поколения на основе трех антител, с различной длинной внеклеточного домена и оценить их функциональную активность в отношении ряда клеточных линий для обоснования дальнейших клинических испытаний.

Резюме

Адъюванты являются важными компонентами вакцинных препаратов, в том числе аллерговакцин, позволяющими повысить их эффективность и безопасность. В настоящее время интерес мирового научного сообщества вызывает подход, основанный на включение адъюванта в состав молекулы иммуногена. Такие ковалентные адъюванты могут быть представлены веществами разных химических классов и, в частности, пептидами. Пептиды обладают такими преимуществами перед веществами других классов, как высокая эффективность и биодеградация, при этом дендримерные катионные пептиды зачастую способны к усиленной по сравнению с линейными пептидами транспортной способностью. В рамках данной работы была изучена способность усиливать индукцию IgG двух катионных дендримерных клеточно-проникающих пептидов с показанной ранее трансмембранной активностью: LTP и SA-40. Пептиды были получены твердофазным синтезом, охарактеризованы методами масс-спектрометрии и зонного капиллярного электрофореза. Для изучения адъювантной активности пептиды были конъюгированы с рекомбинантным протеином Bet v 1, представляющим собой мажорный аллерген пыльцы берёзы, полученным биотехнологически с использованием продуцента e. coli и очищенным хелатной хроматографией. Конъюгация проводилась по реакции Михаэля после модификации протеина малеимидной функцией. Очистка конъюгатов производилась гелевой хроматографией и диализом, эффективность конъюгации оценивалась электрофорезом в полиакриламидном геле. Конъюгаты и чистый rBet v 1 использовались для иммунизации лабораторных мышей BALB/c для сравнения уровней IgG к rBet v 1 после четырёх инъекций без использования иных адъювантов. Сыворотки крови мышей изучались иммуноферментным анализом на уровень IgG против rBet v 1, что было целевым показателем, а также против самих конъюгатов и свободных пептидов LTP и SA-40. Установлено, что оба конъюгата ощутимо повышали уровень IgG к исходному протеину, при этом один из них, LTP-rBet v 1, также вызывал реактивность сыворотки как к самому себе, так и к свободному пептиду LTP. Повышение уровня IgG к rBet v 1 в случае LTP-rBet v 1 было приблизетльно четырёхкратным, в случае SA-40-rBet v 1 – трёхкратным. По результатам исследования сделаны выводы о наличии у исследуемых пептидов адъювантной активности, о возможных причинах наблюдаемых явлений и о перспективности дальнейших работ в данном направлении, при этом мы считаем, что структуры пептидов LTP и SA-40 могут быть впоследствии использованы в качестве референтных при разработке новых пептидных адъювантов, и в качестве ковалентного адъюванта может быть использован сам SA-40. В свою очередь, LTP, вероятно, может иметь перспективы использования также в качестве нековалентного адъюванта.

Резюме

Злокачественные новообразования часто возникают на фоне иммунодефицита. Но и различные химиотерапевтические препараты, применяемые для лечения онкологических заболеваний, также могут вызывать развитие или усугублять иммунодефицитные состояния, чаще всего затрагивающие угнетение функции костного мозга. В предыдущих исследованиях показано, что биоорганокомплекс, полученный из Фабрициевой сумки цыплят-бройлеров, обладает антиоксидантным и иммунотропным действием. Целью данного исследования было изучение защитного механизма биоорганокомплекса «Бурсанатал», полученного из экстракта бурсы птицы против циклофосфамид-индуцированного подавления иммунитета в костном мозге, тимусе, селезенке мышей C57Bl/6. Иммунодефицит у мышей индуцировали однократной инъекцией циклофосфамида (200 мг/кг). Применяли гистологические, морфометрические, радиологические методы исследования, а также иммунногистохимическое окрашивание селезенки и тимуса с использованием антител к CD45, CD3. В ходе проведенных исследований показано, что введение циклофосфамида вызывает изменение гематологических показателей как периферической крови, так и красного костного мозга. При этом нейтрофильный, базофильный и эритроидный росток обладают меньшей чувствительностью к повреждающему действию циклофосфамида и к 8 суткам наблюдается их компенсаторная гиперплазия. Полученные результаты свидетельствуют, что после введения биоорганокомплекса в периферической крови мышей C57Bl/6 отмечается увеличение содержания лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина. Клеточность костного мозга возрастает на фоне активации продукции и созревания клеток эритроцитарного, нейтрофильного, базофильного и лимфоцитарного ростков. В селезенке у мышей с циклофосфамид -индуцированным иммунодефицитом после введения препарата «Бурсанатал» определяется достоверное снижение площади красной пульпы в единице площади. Также в селезенке обнаруживаются признаки активации экстрамедуллярного кроветворения в виде повышения числа колониеобразующих клеток. Также в белой пульпе мышей C57Bl/6 отмечается уменьшение площади реактивного центра по сравнению с контролем при значительном повышении количества CD3+ клеток в красной и в белой пульпе. При этом показано, что препарат «Бурсанатал» не вызывает значительных изменений морфологии тимуса.

Резюме

Сегодня клинические проявления у больных COVID-19 варьируют от легкого до тяжелого течения, особенно в группах пациентов, подверженных хроническим заболеваниям. Выбор наиболее информативных показателей, обеспечивающих прогноз возможного исхода или тяжелого течения заболевания у пациентов с COVID-19, необходим уже на раннем этапе для определения эффективной тактики лечения. Наиболее ранними предикторами ухудшения состояния больных при COVID-19 являются повышенные значения интерлейкина-6, интерлейкина-10, С-реактивного белка, прокальцитонина и других показателей врожденной иммунной системы. Одной из задач настоящего исследования было определение наиболее информативных показателей общеклинического анализа крови и основных субпопуляций лимфоцитов у пациентов с COVID-19, позволяющих помочь в интерпретации степеней тяжести заболевания и развития цитокинового шторма наряду с клиническими проявлениями и функциональными методами диагностики. Нами проведено ретроспективное когортное исследование периферической крови у 65 больных, из которых было 57 мужчин и 8 женщин, возраст пациентов варьировал от 32 до 82 лет, средний возраст составил 48,6 лет. После исследования общего анализа крови в 65 образцах выполнен цитометрический анализ с использованием системы проточной цитофлюориметрии серии Cytomics™ FC 500 фирмы "Beckman Coulter" (США), моноклональных антител СD45-ECD, CD3-FITC, CD4-PC7, CD8-PE, CD19-PC-5, CD16+56-PE фирмы "Beckman Coulter" (США). Статистическая обработка результатов исследования проведена в программе IBM SPSS Statistics 26.0 (IBM, США). У обследованных нами пациентов с COVID-19 при первичном обращении за медицинской помощью отмечается абсолютная лимфопения на фоне нейтрофилеза, что выражается в повышении значений нейтрофильно-лейкоцитарного и лейкоцитарно-Т-лимфоцитарного индексов. Данные индексы с достаточно высокой информативностью могут использоваться при прогнозировании рисков заболевания. Определение наиболее достоверных показателей клеточного звена иммунитета, таких как CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+,CD3-CD16+CD56+ – лимфоцитов, дополнительно к клиническому анализу крови может дать оценку особенностям иммунного реагирования организма на инфицирование SARS-СoV-2, помочь спрогнозировать тяжесть течения заболевания, а также принять решение для изменения тактики лечения при необходимости.

Резюме

Способность цитокин-индуцированных киллеров (ЦИК) распознавать и лизировать опухолевые клетки продемонстрирована в доклинических исследованиях in vitro. На портале ClinicalTrials.gov на данный момент зарегистрировано более 600 завершенных клинических исследований, посвященных методике клеточной иммунотерапии, из них более 30 применению ЦИК. Существует множество способов получения клеточных препаратов на основе лимфоцитов. Их общим недостатком, на наш взгляд, является необходимость дополнительных заборов крови для получения клеточного препарата в больших объемах, поэтому остается актуальным разрабатывать новые подходы с учетом решения данной проблемы. Была предложена идея извлечения лимфоцитов из лейкоцитарных фильтров с последующей активацией данных клеток в условиях in vitro.

Целью исследования являлась оценка возможности  применения лейкоцитарных фильтров в качестве источника лимфоцитов для получения больших доз клеток ЦИК.

Материалы и методы. В исследование включены данные 30 доноров. В статье подробно описана процедура извлечения лимфоцитов из лейкоцитарных фильтров. Выделенные лимфоциты культивировали в пластиковых флаконах в СО2-инкубаторе 10-14 суток в среде на основе RPMI-1640, в которую предварительно добавили IL-2 и IL-15. Оценку уровня активации клеток проводили методами иммуноферментного анализа (ИФА) и проточной цитометрии. Оценивали субпопуляционный состав Т-, NK-, TNK-, B-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, CD19, CD45, CD56) и маркеры активации на них (CD38 и HLA-DR) до и после активации клеток.

Результаты. Оценена возможность применения лейкоцитарных фильтров после сепарации плазмы с оставшимися на них лейкоцитами. Изучена функциональная активность извлеченных лимфоцитов и цитокиновый состав супернатантов после культивирования в полной питательной среде. Показано, что пептидный комплекс-супернатант содержал высокие дозы сигналинговых белков: IL-2, IL-6 IL-10, IFNγ, TNFα и сохранял свою функциональную активность после длительного хранения при низких температурах. Препарат является стерильным и состоит преимущественно из Т-, ТNK- и NK- клеток с высоким уровнем жизнеспособности и содержит маркеры активации: HLA-DR, CD38.

Заключение.  Таким образом, из одного фильтра получали до 350 млн активированных лимфоцитов и аликвоты с супернатантом. Препарат может применяться как для фундаментальных исследований, так и для проведения АИТ онкологическим больным с целью восстановления собственного потенциала противоопухолевого иммунитета пациентов. Данное количество клеточного и бесклеточного препарата является достаточным для проведения большего количества курсов АИТ без дополнительных заборов крови.

Резюме

По своему клеточному составу красный костный мозг состоит из чрезвычайно гетерогенной популяции клеток, включающей стволовые клетки, клетки ретикулярной стромы и клетки пяти кроветворных ростков. Для клеточной терапии и экспериментальных исследований актуальной задачей является получение клеточных фракций костного мозга, обогащенных определенным типом клеток. В данной работе мы исследовали уровень экспрессии мРНК генов цитокинов во фракциях клеток костного мозга, изолированных с помощью противоточного центрифугирования в элютриаторном роторе. Фракционирование клеток выполняли при скорости вращения ротора 2500 об/мин. Отбирали шесть клеточных фракций (Ф): Ф-1 при скорости потока буфера 12 мл/мин, Ф-2 – 15 мл/мин, Ф-3 – 19 мл/мин, Ф-4 – 23 мл/мин, Ф-5 – 50 мл/мин, Ф-6 – собирали после остановки вращения ротора. Цитоморфологический анализ полученных фракций показал, что из общей популяции клеток в «легкой» фракции Ф-1 концентрируется 80% эритроцитов и 40% лимфоцитов, в Ф-2 – 44% лимфоцитов, 50% полихроматофильных и 51% оксифильных нормоцитов, в Ф-3 и Ф-4 – 70% нейтрофилов и 40% эозинофильных гранулоцитов, в Ф-6 – 64% макрофагов, 95% мегакариоцитов, 35% ретикулярных и 62% тучных клеток. Бластные клетки разных ростков кроветворения обнаружены преимущественно в Ф-5. С помощью RT-PCR максимальная экспрессия генов фактора стволовых клеток (Scf) и гранулоцитарно-макрофагального  колониестимулирующего фактора (Gm-csf) выявлена в «тяжелой» фракции   Ф-6, фактора некроза опухолей (Tnf-α) и эритропоэтина (Epo) – в Ф-4, Ф-5 и Ф-6,  макрофагального колониестимулирующего фактора (M-csf) – в Ф-3 и Ф-4. Таким образом, данный метод позволяет эффективно отделить «легкие» фракции лимфоцитов и эритроцитов от основной массы клеток костного мозга, что может быть использовано при аллогенной трансплантации клеток костного мозга для снижения риска развития острой реакции «трансплантат против хозяина». Другим важным преимуществом метода является возможность получить фракции «тяжелых» клеток, обладающих регенеративным потенциалом, с целью их использования в клеточной терапии для стимуляции восстановительных процессов в органах и тканях.

Резюме

Основным методом оценки репродуктивной функции мужчин является спермиологический анализ, который не всегда является показательным для установления причины бесплодия. В литературных данных особая роль в нарушении мужской фертильности отводится оксидативному стрессу, в результате которого повреждаются мужские половые клетки. Повреждение мембран сперматозоидов сопровождается выходом их ДНК во внеклеточное пространство, что является индуктором развития местной воспалительной реакции. В таком случае, поддержание гомеостаза семенной жидкости будет зависеть от эффективности деградации внеклеточной ДНК. У человека данную функцию осуществляют ферменты ДНКазы, локализованные во всех тканях и биологических жидкостях организма. Также отмечена их роль в процессе оплодотворения и фрагментации генетического материала сперматозоидов. Избыток или недостаток ДНКаз может привести к развитию широкого спектра заболеваний. Целью настоящего исследования являлось установление референтных интервалов для ДНКазы 1L3 и ДНКазы II эякулята и поиск связей между концентрацией нуклеаз и показателями спермиологического анализа. В качестве материала для исследования использовали семенную жидкость 82 условно-здоровых мужчин в возрасте 18-49 лет, обследованных на базе НИИ иммунологии ЮУГМУ. Критериями исключения являлось наличие воспалительных заболеваний урогенитального тракта и ИППП. Спермиологический анализ проводился согласно лабораторному руководству ВОЗ. Обследование на ИППП проводили методом ПЦР в режиме реального времени. Концентрацию ДНКаз в эякуляте определяли методом ИФА. Описательную статистику, построение гистограмм и референтных интервалов проводили в программе «R». Нами впервые были определены уровни ДНКазы 1L3 и ДНКазы II в семенной жидкости и установлены для них референтные интервалы. Сдвиги значений концентраций ДНКазы 1L3 и ДНКазы II, вероятнее всего, могут рассматриваться как индикаторы возможных патологических состояний. В частности, повышенная концентрация ДНКазы 1L3 – индикатор патологического процесса, связанного с низкой подвижностью сперматозоидов, а высокие уровни ДНКазы II можно рассматривать как индикатор местной воспалительной реакции.

Резюме

Введение. Заболевание COVID-19 в 2020 году получило статус пандемии. За этот период было выявлено, что тяжесть течения заболевания патологии может зависеть не только от штамма вируса, но и от функционирования иммунной системы.  Цель. Изучение особенностей экспрессионных и генетических факторов врожденного иммунитета у пациентов, перенесших заболевание COVID-19. Материалы и методы. Был изучен материал от 148 пациентов (соскобы со слизистых оболочек и венозная кровь). Идентификация изучаемых маркеров проводилась методами обратной транскрипции и ПЦР-РВ. Статистическую обработку результатов проводили с использованием критерия Манна-Уитни, точного критерия Фишера, критерия χ2, отношения шансов и 95% доверительного интервала. Результаты. В ходе проведенного нами исследования была показана прогностическая роль полиморфных маркеров и гаплотипов в генах TLR9 (rs352140 и rs5743836) и TLR4 (rs11536889 и rs4986791) в отношении риска развития тяжелого течения инфекции SARS-CoV-2. При изучении отдаленных последствий COVID-19 было выявлено, что у пациентов, перенесших заболевание, сохраняется дисбаланс экспрессии рецепторных и эффекторных молекул на уровне мукозального иммунитета. Наблюдается снижение уровня экспрессии как рецепторных молекул (TLR3, TLR7) так и факторов противовирусного иммунного ответа (IL28) в слизистых ротоглотки на фоне общего увеличения этих маркеров в эпителиальных клетках слизистой оболочки носоглотки. Заключение. Были изучены экспрессионные и генетические факторы врожденного иммунитета, приводящие к тяжелому течению инфекции SARS-CoV-2 и, как следствие, к стойким изменениям в иммунной системе в течение длительного времени после выздоровления, что расширяет  наши знания о молекулярно-генетических механизмах, связанных с длительным течением COVID-19. Полученные в ходе исследования результаты могут помочь оценить риски развития тяжелого течения инфекции, вызванной SARS-CoV-2, и развивающихся впоследствии осложнений у госпитализированных пациентов.

Резюме

Цель: разработка вакцины против стрептококков группы А (S. pyogenes, СГА) – возбудителя широкого спектра инфекций различной степени тяжести.

Методы: Для клонирования генов рекомбинантных белков использовали экспрессионные вектора pET27 и pQE30. Для иммунизации использовали аффинно-очищенные полипептиды. Самок мышей иммунизировали дважды подкожно полипептидами в дозе 20 мкг/мышь с адъювантом Alum (2:1) с интервалом в 3 недели. Образцы иммунных сывороток исследовали методом ИФА. Для оценки специфической защитной эффективности иммунного ответа через 3 недели после последней инъекции мышей внутрибрюшинно заражали СГА M1 серотипа в дозе 5х10^7 КОЕ/мышь. Защитную эффективность вакцинации оценивали путем сравнения скорости бактериального клиренса у вакцинированных и контрольных животных, о чем судили по бактериальной нагрузке в селезенке через 3 и 15 часов после заражения.

Результаты: Конструкция вакцины представляет собой гибридную молекулу, состоящую из фрагментов, полученных из двух ключевых белков СГА: пептидазы C5a (ScpA) и экзотоксина SpeA. Используя биоинформатический анализ, мы идентифицировали и выбрали для включения в состав рекомбинантного белка Т- и В-клеточные эпитопы в консервативных регионах, общих для разных серотипов СГА.

Посредством стратегии интеграции этих фрагментов предполагается усилить защиту от штаммов СГА, несущих экзотоксин, особенно тех, которые связаны с инвазивными инфекциями.

Оценка иммуногенности на моделях мышей продемонстрировала сильный гуморальный иммунный ответ после парентеральной вакцинации, направленный на оба компонента гибридной молекулы. Последующая оценка защитной эффективности против внутрибрюшинного введения СГА выявила ускорение бактериального клиренса у вакцинированных животных, при этом фрагмент SpeA проявлял значительный защитный эффект.

Заключение: Представленные результаты демонстрируют потенциал полученной рекомбинантной химерной вакцины как многообещающего кандидата для разработки вакцины против стрептококков группы А, удовлетворяющей острую потребность в эффективных профилактических стратегиях против патологий, вызванных СГА.

Резюме

В статье обобщены экспериментальные и клинические данные о фармакологических свойствах окисленного декстрана. Основной акцент сделан на иммунологическом механизме действия окисленного декстрана, в частности на его способности селективно активировать тканевые макрофаги, в том числе тестикулярные макрофаги, которые непосредственно участвуют в сперматогенезе. В экспериментальной части работы на модели нарушения сперматогенеза у крыс индуцированного введением эндотоксина Escherichia coli, показано, что окисленный декстран значительно снижает патоморфологические изменения в семенниках. При этом подобный эффект связан с активацией тканевых макрофагов и выделения ими соответствующих цитокинов, которые направлены на купирование воспалительного процесса и нормализацию микроциркуляторной гемодинамики. Представленные экспериментальные данные коррелируют с данными о высокой клинической эффективности окисленного декстрана при нарушениях сперматогенеза и мужском бесплодии. В клинической части работы по влиянию ректального введения окисленного декстрана у пациентов с тяжелыми нарушениями сперматогенеза показано, что окисленный декстран существенно увеличивает объем эякулята, концентрацию сперматозоидов в эякуляте, и общее количество сперматозоидов. При этом окисленный декстран также способствует снижению количества лейкоцитов при анализе спермограмм и существенно снижает агглютинацию сперматозоидов, что свидетельствует о купировании хронического инфекционно-воспалительного процесса у андрологических больных с бесплодием. Авторы связывают данные экспериментальных и клинических исследований в рамках единой концепции активации тканевых макрофагов и возможностью макрофагов менять свой фенотип в зависимости от микроокружения и особенностей течения инфекционно-воспалительного процесса. Такой подход подтверждается также клиническими данными о влиянии фенотипов макрофагов на лекарственную резистентность и тяжесть течения внутриклеточных инфекций, в частности туберкулеза. Анализ экспериментальных и клинических данных позволяет авторам предложить теоретическую модель механизма терапевтической эффективности окисленного декстрана при внутриклеточных инфекциях, которые наиболее часто встречаются в андрологической практике и являются тригерным фактором фатальных нарушений сперматогенеза, приводящих к мужскому бесплодию. Представленные авторами экспериментальные и клинические данные позволяют рассматривать окисленный декстран как весьма эффективное средство для лечения внутриклеточных инфекций, в том числе урогенитальных инфекций, вызывающих мужское бесплодие.

Резюме

Синтетические пептиды являются хорошей основой для создания вакцины против ВИЧ/СПИД. Иммунизация ими фокусирует иммунный ответ только на определенный эпитоп, они способны активировать обе ветви иммунного ответа, и безопасны при введении в организм человека. Имея низкий молекулярный вес синтетические пептиды обладают низкой иммуногенностью, поэтому необходимо использовать различные иммуноадъюванты в составе иммуногенной композиции. V3-петля оболочечного белка gp120 ВИЧ1 является одним из основных протективных эпитопов, на него получено ряд моноклональных антител с широкой нейтрализующей активностью. Нами было проведено исследование иммуногенности пептидов, копирующих V3 петлю консенсусной последовательности вирусов группы M ВИЧ1 и российского изолята RUA022a2, в зависимости от способа введения (подкожно и внутрибрюшинно) и использования иммуноадъюванта. В качестве адъюванта применялся синтетический аналог двуцепочечной РНК  - poly (I:C), являющийся лигандом рецепторов врожденного иммунитетаTLR3. Исследования проводилось на мышах линии balb/c. Показано, что способ введения не влияет на формирование иммунного ответа на пептиды. Однако в группах, где использовался иммуноадъювант наблюдалось более ранняя продукция специфических IgG антител. При этом титр антител, после третьего, последнего, введения были незначительно выше в группах, где пептиды вводились с адъювантом. Также не было выявлено отличий в изотипе индуцированных антител. Во всех группах преимущественно образовывались IgG1 антитела. Специфические антитела класса IgM выявлялись только после третьего введения антигена. На их титр не влиял способ введения, а уровень антител был также незначительно выше в группе с poly (I:C).  Полученные антитела не обладали нейтрализующей активностью по отношению изолята QF495.23.M.EnvA1. При исследовании антиген-специфической клеточной активации, показано, что только в группах, где применялся poly(I:C) выявляется продукция   IFNγ – маркера Th1 ответа.  Кроме того,  группах, где в составе иммуногенной композиции присутствовал poly (I:C), определялся низкий уровень противоспалительного цитокина IL10, больше всего его выявлялось в группах с внутрибрюшинном введении. Проведенные исследования показали, что использование адъюванта poly (I:C) способствует формированию иммунного ответа на синтетические пептиды, вызывая более раннею индукцию специфических антител, а также переключению на Th1 путь.  Полученные данные могут применяться при дизайне вакцин против ВИЧ/СПИД и других вирусных инфекций, для повышения их иммуногенности и возможности индукции протективного иммунного ответа.

Резюме

Изучено влияние метаболитов палеобактерий Bacillus cereus штамм 875 TS многолетнемерзлых пород плейстоцен-голоценового периода на механизмы и направленность формирования иммунного ответа в культуре мононуклеарных клеток периферической крови человека in vitro. Установлено, что экзометаболиты палеобактерий значимо активируют дифференцировку моноцитов в субпопуляции промежуточных (CD14⁺CD16⁺) и неклассических (CD14^loCD16⁺) моноцитов, эффекторных CD4⁺- и CD8⁺-Т-лимфоцитов со сменой маркеров ранней (CD69), средней (CD25) и поздней (HLA-DR) активации, дифференцировку Treg (CD3⁺CD4⁺CD25^hiCD127^-), а также стимулируют синтез цитокинов IFNγ и IL-4 относительно контрольных уровней. К особенностям влияния экзометаболитов палеобактерий можно отнести зависимость иммуномодулирующей активности от способа их получения  – «холодовые» (получены от бактерий при их культивировании при 5ºС), «среднетемпературные» (22ºС) и «тепловые» (37ºС) метаболиты.  «Холодовые» метаболиты стимулируют преимущественно механизмы иммунного ответа с провоспалительной активностью, а именно – дифференцировку промежуточных CD14⁺CD16⁺-моноцитов, увеличение активности дифференцировки CD8⁺-Т-лимфоцитов и синтеза IFNγ. «Тепловые» метаболиты стимулируют преимущественно механизмы иммунного ответа с противовоспалительной активностью, а именно – дифференцировку неклассических CD14^loCD16⁺-моноцитов, увеличение активности дифференцировки CD4⁺-Т-лимфоцитов и секреции IL-4. Также к отличительной особенности можно отнести соотношение про- и противовоспалительных механизмов между собой, которые не зависят от вида экзометаболитов. Так, первые трое суток культивирования клеток активность дифференцировки CD8⁺-Т-лимфоцитов превалирует над дифференцировкой CD4⁺-Т-лимфоцитов, а уровень секреции IFNγ превышает уровень IL-4. На третьи сутки происходит значимое повышение уровня Treg, что сопровождается тенденцией к нормализации баланса между IFNγ(Th1) и IL-4(Th2) к седьмым суткам. Прослеживается четкое влияние Treg (CD3⁺CD4⁺CD25^hiCD127^-) на силу и продолжительность иммунного ответа. Повышение уровня Тreg происходит умеренно и кратковременно, что с одной стороны, препятствует чрезмерному развитию провоспалительных механизмов, с другой – не приводят к развитию длительной иммуносупрессии. Повышение на 1-3 сутки уровня Treg сопровождается снижением активности дифференцировки моноцитов в субпопуляции и синтеза провоспалительного цитокина IFNγ. Учитывая, что одной из главных функций индуцированных Тreg является подавление системных воспалительных, аутоиммунных и аллергических заболеваниях, повышение их активности под влиянием экзометаболитов палеобактерий Bacillus cereus штамма 875 TS может служить основой для разработки новых биопрепаратов для лечения широкого круга заболеваний.

Резюме

Пребывание в зоне боевых действий сопряжено с высоким риском развития психических нарушений. Накоплен значительный объем знаний о механизмах иммуноопосредованных реакций при развитии нейропсихической патологии, в частности, посттравматического стрессового расстройства (ПТСР). Важная роль в развитии нейровоспаления при стрессе отводится активированным Т-регуляторным клеткам.

Цель исследования:   изучение  показателей системы крови, цитометрических особенностей  клеточного  компартмента  иммунной системы у участников современных военных конфликтов с наличием расстройств адаптации, ассоциированных со стрессом.

Материалы и методы. Обследованы 97 ветеранов - участников современных военных конфликтов, мужского пола от 35 до 55 лет, из них 35 – ветеранов специальной военной операции на Украине (СВО) – основная группа, 42 ветерана второй Чеченской военной кампании (группа сравнения), 20 человек – здоровых военнослужащих (контрольная) группа. Всем проводилось патопсихологическое обследование в соответствии с клиническими рекомендациями.  У 12% ветеранов СВО диагностирован  ПТСР, 77% имели  различные варианты невротических, связанных со стрессом и соматоформными расстройствами.  В группе сравнения, 2% комбатантов имели диагноз хроническое изменение личности. Общий анализ крови проводили стандартизированным методом на гематологическом анализаторе. Иммунофенотипирование лимфоцитов с использованием проточного цитофлюориметра Navios (Beckman Coulter, США).

Результаты и обсуждение. В группе ветеранов СВО отмечено снижение степени разброса эритроцитов по объему,  показателя гетерогенности и среднего объема тромбоцитов, лимфопения, моноцитоз, что отражает разнонаправленное действие регуляторов гемопоэтических клеток на отдельные линии дифференцировки мононуклеаров. Цитометрический анализ состава лимфоцитов  показал снижение Т-хелперов и зрелых NK – клеток в группе ветеранов СВО, что объясняет наличие лимфопении и может свидетельствовать о дефиците адаптивного и врожденного компартментов иммунной защиты в условиях пролонгированной реакции на стресс. Установлено повышение численности ТNK и Т-регуляторных лимфоцитов, препятствующих возможности перехода  иммунного ответа в аутоиммунную реакцию.  При стрессе транскрипционный фактор Foxp3 участвует в повышающей регуляции индуцируемого глюкокортикоидами рецептора TNF в линии Т-регуляторных клеток, потенцируя пролиферативную активность последних. Показано снижение числа Т-хелперов и Т- регуляторных клеток с маркерами ранней и поздней позитивной активации, ограничивая развитие как аутоиммунных реакций, так и развитие стресс-индуцированного нейровоспаления. Между контрольной группой и показателями группы сравнения практически отсутствовали различия, что свидетельствует о нивелировании с течением времени остроты стресс-индуцированных нейроиммунных реакций.

Заключение.  Индуцированное стресс-медиаторами кроветворение и опосредованное нейроиммунными влияниями изменение количественного спектра субпопуляций лимфоцитов является следствием сложного многоуровневого нейропсиходинамического процесса ЦНС,  ассоциированного с клиническими формами расстройств адаптации.

Резюме

Введение: Пандемия COVID-19 сконцентрировала внимания исследователей всего мира на борьбе с этой инфекцией. Важнейшим подходом противодействия COVID-19 стала разработка профилактических вакцин на основе ряда платформ, включая ДНК- и РНК-вакцины, векторные и субъединичные вакцины. Одной из таких платформ стали субъединичные вакцины привлекательны в первую очередь из-за непревзойдённого профиля их безопасности. Однако безопасность данных вакцин часто сопряжена с невысокой эффективностью, поэтому зачастую необходимо применять адъюванты, а также использовать более сложные схемы иммунизации. В то же время важным достоинством субъединичных вакцин является масштабируемость и относительная простота производства, так как в процессе производства нет необходимости работать с живым вирусом или вирусными векторами. Цель: целью работы была разработка кандидатной вакцины на основе рекомбинантного рецептор-связывающего домена (RBD) спайкового S-белка SARS-CoV-2 варианта Дельта (B.1.617.2). Материалы и методы: в исследовании применялись иммунологические методы, методы генной инженерии и биотехнологии. Результаты: в ходе работы на основе клеток млекопитающих CHO-K1 разработан продуцент рекомбинантного RBD. Для получения белка, отвечающего требованиям инъекционных препаратов, была разработана схема хроматографической очистки, включающая аффинную и ионообменную хроматографии. Предложен вариант субъединичной вакцины «Дельта-Вак» на основе полученного рекомбинантного белка. Иммуногенность кандидатной вакцины «Дельта-Вак» оценивали на модели лабораторных мышей BALB/c. Проводили двукратную иммунизацию животных дозой 50 мкг RBD в комплексе с Al(OH)₃ с двухнедельным интервалом. Показана способность кандидатной вакцины индуцировать выработку специфических IgG и нейтрализующих антител у мышей линии BALB/c. Специфические титры антител иммунизированных животных лежали в диапазоне от 1/10⁵ до 1/10⁶. При этом сыворотки крови обладали нейтрализующей активностью в отношении SARS-CoV-2 (вариант B.1.617.2 (Delta)) с титром до 1/2000. Выводы: Разработанная вакцина «Дельта-Вак» обладает высокой иммуногенностью и индуцирует выработку нейтрализующих антител против гомологичного варианта Delta и гетерологичных вариантов Wuhan и Omicron SARS-CoV-2. Таким образом «Дельта-Вак» может выступать в качестве кандидатной вакцины и служить прототипом для разработки субъединичных вакцин против COVID-19.

Резюме

Актуальность. Одно из самых частых заболеваний в оториноларингологии является риносинусит, который проявляется заложенностью носа, головной болью, выделениями из носа и другими симптомами. Иногда риносинусит сопровождает сезонные ОРВИ, может быть проявлением сезонной и круглогодичной аллергии, развивается при дисфункциях иммунной системы. Если симптомы риносинусита длятся более 12 недель, диагностируется хронический риносинусит. Коморбидные состояния (искривление носовой перегородки, бронхиальная астма и др.) усиливают проявления хронического риносинусита 

Цель работы: изучение особенностей цитокиновой регуляции при хроническом риносинусите с коморбидными заболеваниями.

Материалы и методы. Обследовано 84 человек с риносинуситами и 100 здоровых человека. В исследование вошли пациенты с ХРС (n=29), ХРС и искривлением носовой перегородки (n=24), хронический риносинусит и бронхиальная астма (n=31) и группа контроля (n=100), состоящая из практически здоровых. Тип исследования – «случай-контроль» выполнено в лаборатории клинической патофизиологии НИИ МПС. Материалы для исследования – венозная кровь и назальное отделяемое. Содержание TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-4, IL-10 определяли метом ИФА, используя с реагенты «Вектор-Бест» (г. Новосибирск) и спектрофотометр Muitiskan FC. Статистическая обработка проведена с помощью программы Statistica 10.0. Для описания выборок, характеризующихся распределением, отличным от нормального, использованы медиана (Me) и интерквартильный размах (IQR), определяемый как разность между 75-м (Q3) и 25-м (Q1) перцентилями. Такой подход позволяет представить центральную тенденцию и меру рассеяния данных, минимизируя влияние выбросов (Wilcox, 2012).

Результаты и обсуждение.

У всех больных с ХРС и коморбидными состояниями системно и локально отмечаются однонаправленные изменения в виде увеличения провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, что свидетельствует о развитии иммунных реакций по Th1/Th2 механизмам, при этом наличие коморбидных состояний (искривление носовой перегородки, бронхиальная астма) усиливают иммунные реакции.

Выводы.

При коморбидных состояниях содержание цитокинов статистически значимо увеличено относительно не только контрольной группы, но и больных с ХРС. Максимальные концентрации цитокинов обнаруживаются при сочетании ХРС с бронхиальной астмой.

Резюме

Введение. Имеющиеся на сегодняшний день экспериментальные данные указывают на определяющую роль цитокинов в формировании проявлений бронхиальной астмы (БА), что привело к созданию так называемого анти-цитокинового подхода к терапии данного заболевания. [5]

Целью данного исследования было определить вклад полиморфизмов rs10455025 гена TSLP и rs11811856 гена TNFSF4 с риском развития бронхиальной астмы у детей в Курской популяции.

Материалы и методы. В исследование были включены 999 неродственных индивидуумов, включая 526 пациентов с БА и 473 контрольных лиц. Данные функциональные однонуклеотидные полиморфизмы (SNP) были генотипированы на геномном масс-сппектрометре MassArray-4.

Результаты. Установлено, что аллели rs11811856G TNFSF4 и rs10455025C TSLP, а также генотипы rs11811856-G/G и rs10455025-C/C ассоциированы с повышенным риском развития бронхиальной астмы у детей. Выявлена ассоциация rs11811856 TNFSF4 с повышенным риском развития БА как среди мальчиков, так и девочек, а полиморфизм rs10455025 TSLP при стратифицированном анализе по полу ассоциаций не показал. При анализе генно-средовых взаимодействий в общей группе установлена взаимосвязь с риском астмы в зависимости от воздействия табачного дыма и места проживания детей. Установлено влияние данных SNP на риск формирования сопутствующей аллергопатологии у детей с бронхиальной астмой, также установлено влияние исследуемых полиморфизмов на показатели риноцитограммы и спирометрии. В ходе исследования получены данные, что исследуемые полиморфизмы rs10455025 TSLP и rs11811856 TNFSF4 у детей с БА связаны с повышенным риском развития пищевой сенсибилизации к банану, рису, утки, ряду пыльцевым (лисохвост, ежа сборная, мятлик, райграс, костер, ясень, ячмень), и эпидермальных (волос человека) аллергенов. Также выявлено, что исследуемые SNP снижают риск сенсибилизации к домашней пыли, шерсти кошки, кролика, пыльце киноа.

Заключение. Настоящее исследование показало, что полиморфизмы rs10455025 TSLP и rs11811856 TNFSF4 в значительной степени связаны с риском развития астмы и связаны с его клиническими особенностями.

Резюме

       Введение: Гипоксия может выступать одновременно причиной и следствием патогенетических механизмов инфекционных, аутовоспалительных и аутоиммунных процессов. Учитывая, что популяции человека и животных генетически гетерогенны по резистентности организма к недостатку кислорода, современный подход к прогнозированию и терапии заболеваний, связанных с нарушением иммунной регуляции организма, требует учета роли гипоксии в реализации патогенетических механизмов воспаления. Цель исследования: дать оценку особенностям реализации эффекторных функций нейтрофилов в норме и на фоне индуцированного воспалительного процесса у животных с генетически предопределенной высокой и низкой устойчивостью к гипоксии. Материалом для исследования послужили 8 месячные самцы крыс с генетически обусловленной толерантностью к гипоксии (высокоустойчивая линия ВУ/SmY; низкоустойчивая линия НУ/SmY), весом 400-450г. Крысам опытных групп линий ВУ/SmY, НУ/SmY индуцировали развитие иммунных реакций в модели ревматоидного артрита (РА). Через 35 дней отобранную у животных кровь инкубировали с суспензией туши (1:10). Зафиксированные в парах формалина мазки окрашивали 0,5% раствором метиленового синего, анализировали при 400-кратном увеличении микроскопа. Рассчитывали фагоцитарный индекс (ФИ), фагоцитарное число (ФЧ), количество суицидального нетоза с частичной и полной деконденсацией хроматина. Достоверность различий в группах оценивали по критерию Манна-Уитни и t-критерию Стьюдента. Результаты. В контрольных группах животных НУ/SmY и ВУ/SmY ФИ и ФЧ нейтрофилов достоверно не различались (52,5%/49%; 1,68/1,80 соответственно). В опытных группах ФИ нейтрофилов линии НУ/SmY (66 %, p0,05) превышал таковой группы линии ВУ/SmY (56%). При системном воспалении ФИ нейтрофилов в группе низкоустойчивых крыс увеличивался в 1,26 (p0,05) раза, а количество нейтрофилов, захватывающих по 2-8 частиц - в 1,3 (p0,01) раза на фоне здоровых. В опытной группе ВУ/SmY, где зафиксирован 1,81% более эффективных нейтрофилов, способных поглощать от 9 до 12 частиц (p0,01), ФИ был в 1,2 раза ниже такового у линии НУ/SmY. В процесс суицидального нетоза у здоровых крыс ВУ/SmY вовлечено в 1,4 (p0,05) раза нейтрофилов больше, чем у аналогичной группы линии НУ/ SmY. Системное воспаление в группе НУ/SmY вызывало двукратный рост NETs (19,67%), что в 1,7 раза превышало показатели опытной группы ВУ/SmY.

Заключение: У организмов с генетически обусловленной низкой устойчивостью к гипоксии на фоне воспалительного процесса существует большее напряжение на клеточно-опосредованное звено иммунитета в процессе ликвидации флогогена по сравнению с высокоустойчивыми, что может являться причиной развития у них более тяжелых патогенетических форм воспалительных и аутоиммунных заболеваний.

Резюме

Регулирование воспаления при воспалительных/аутоиммунных ревматических заболеваниях, в частности, аксиальном спондилоартрите, критически важно для купирования симптомов заболевания. Недавними исследованиями продемонстрирована важная роль ингибиторных рецепторов PD-1 и Tim-3 в регуляции функционального фенотипа моноцитов при воспалительных/аутоиммунных заболеваниях. Целью данной работы явилось исследование экспрессии ингибиторных рецепторов PD-1 и Tim-3 в субпопуляциях моноцитов пациентов с аксиальным спондилоартритом (аксCпА) и оценка их связи с клиническими параметрами заболевания и толерогенным маркером тирозинкиназой Мер (MerTK). Экспрессию PD-1 и Tim-3 в классических, промежуточных и неклассических моноцитах оценивали методом многоцветной проточной цитофлюриметрии в мононуклеарных клетках периферической крови 60 пациентов с аксиальным спондилоартритом и 40 условно здоровых доноров. Анализ субпопуляционного состава циркулирующих моноцитов выявил повышенное содержание классических моноцитов, что положительно коррелировало с параметрами системного воспаления СОЭ и СРБ. Как и у доноров, у больных аксCпА наиболее высокая экспрессия PD-1 и Tim-3 регистрировалась в промежуточных и неклассических моноцитах. В то же время относительное содержание PD-1+ и PD-1+Tim-3+ клеток в популяциях пМо и нМо больных анкСпА было значимо снижено, в то время как уровень экспрессии Tim-3 у больных не отличался от показателей доноров. Примечательно, что содержание PD-1+клеток прямо коррелировало с экспрессией MerTK (молекулой, опосредующей противовоспалительную активность моноцитов/макрофагов) во всех субпопуляциях моноцитов. Статистически значимое снижение экспрессии PD-1 и коэкспрессии PD-1 и Tim-3 выявлялось у пациентов-носителей HLA-B27 антигена, у пациентов с развернутой и поздней стадиями заболевания, периферической формой аксCпА, в том числе с поражением тазобедренных суставов. Напротив, при отсутствии носительства HLA-B27 и у пациентов на ранней/ нерентгенологической стадии экспрессия PD-1 была сопоставима с донорскими показателями, в то время как содержание Tim-3+ было повышено в популяции классических моноцитов. Следует отметить, что у больных, получавших первую линию терапии, снижение экспрессии PD-1 и коэкспрессии PD-1 и Tim-3 прямо коррелировало с активностью заболевания. Полученные данные о снижении экспрессии PD-1 и коэкспрессии PD-1 и Tim-3 в субпопуляциях промежуточных и неклассических моноцитов у пациентов с наличием генетической предрасположенности, продвинутыми стадиями заболевания и вовлечением периферических суставов, а также данные о сопряженности количества PD-1+ клеток во всех субпопуляциях моноцитов с экспрессией MerTK указывают на нарушение регуляции экспрессии ингибиторных чекпойнт рецепторов в условиях воспаления и могут свидетельствовать о сниженном противовоспалительном потенциале моноцитов.

Резюме

Гуманизированные моноклональные антитела могут вызывать нежелательный гуморальный иммунный ответ у пациентов -  образование антител к терапевтическому белковому препарату. Нейтрализующие антилекарственные антитела являются одним из основных факторов, влияющих на безопасность и эффективность проводимой терапии. При невозможности использовать тесты для определения нейтрализующих антител на основе клеточных культур альтернативой могут служить методы конкурентного связывания лекарственного средства и его лиганда. Пембролизумаб относится к противоопухолевым препаратам широкого спектраи представляет собой гуманизированное IgG4 каппа антитело к рецептору запрограммированной клеточной смерти-1 (PD-1) которое блокирует взаимодействие рецептора с его лигандами PD-L1 и PD-L2. В связи со сложностью проведения анализа применение культурального клеточного теста для пембролизумаба невозможно, так как высок риск получения недостоверных результатов.

Цель. Разработка и валидация методики определения нейтрализующих антител к пембролизумабу в сыворотке крови человека на основе ингибирования связывания пембролизумаба с его мишенью PD-1.

Материал и методы. В исследование был использован экспериментальный препарат пембролизумаб RPH-075 (Р-Фарм). В качестве положительного контрольного образца на нейтрализующие антитела использовали Anti-Pembrolizumab антитела KRIBIOLISATM Anti-Pembrolizumab (KEYTRUDA®) ELISA, Индия)). Определение антител проводили методом ИФА с применением кислотной диссоциации иммунного комплекса и с использованием техники ACE (Affinity capture elution).

Результаты. Была разработана и валидирована методика выявления нейтрализующих антител к пембролизумабу, основанная на ингибировании пембролизумаба с его мишенью PD-1 в сочетании с техникой ACE. Разработанная методика была валидирована по показателям: селективность, чувствительность, специфичность, «хук»-эффект, толерантность к присутствию лекарственного препарата, прецизионность. Благодаря применению подходов предварительной обработки образцов (кислотная диссоциация, техника ACE) для анализа нейтрализующих антител, была достигнута чувствительность 100 нг/мл в присутствии циркулирующего пембролизумаба 40 мкг/мл. Так же в данной работе был обоснован метод расчета предела исключения, чувствительности и селективности на основании ROC-анализа и плавающего предела исключения (PSCP) через средние арифметические значения ОП NC и LPC в каждом индивидуальном аналитическом планшете.

Заключение. Разработанная методика определения нейтрализующих антител к пембролизумабу может быть использована для оценки нежелательной иммуногенности препарата пембролизумаба на стадии клинических испытаний.

Резюме

Феномен образования нейтрофильных внеклеточных ловушек (НВЛ), или нетоз, играет ключевую роль в патогенезе инфекционных и воспалительных заболеваний. Однако отсутствие стандартизированных методов оценки НВЛ затрудняет корректную интерпретацию результатов. Цель исследования – разработать применимую на практике методику исследования способности нейтрофилов к формированию НВЛ, позволяющую корректно идентифицировать сопряженные с нетозом феномены.

Нейтрофилы выделяли из периферической крови 15 здоровых доноров методом градиентного центрифугирования (фиколл-верографин, градиент плотности 1,077 – 1,105 г/мл). Для стимуляции нетоза использовали смесь бактерий (Lactobacillus reuteri, L. acidophilus, L. rhamnosus, Bifidobacterium longum). Для визуализации НВЛ и других люминесцентно-позитивных объектов использовали интеркалирующий краситель пропидия йодид и антитела моноклональные мышиные к человеческим CD15/FITC. Люминесцентную микроскопию проводили при длине волны возбуждения 450-480 нм, эмиссии – от 515 нм. В препарате регистрировали интактные нейтрофилы (объекты ярко-зелёного цвета, без прокрашенного ядра), активированные нейтрофилы (ярко-зелёные с красно-оранжевым, окрашенным пропидия йодидом ядром), клетки раннего нетоза (ярко-зелёные клетки с выходом ядерного материала в одной или более локации за пределы клеточной мембраны), НВЛ: облаковидные (в виде «облака», окружающего нейтрофил или его фрагменты со всех сторон и более чем 1,5 раза больше его размера) и нитевидные (в виде нитей в 2 и более раза больше размера нейтрофила). Определяли долю каждого из типов наблюдаемых объектов относительно всех люминесцентно-позитивных объектов. В ходе оптимизации методики определены ключевые параметры: температура инкубации лейкоцитов со стимулятором (37°C), его концентрация (2,5х10⁹ бактерий/мл), время стимуляции (30 мин).

Оценка воспроизводимости метода показала приемлемый межсерийный коэффициент вариации: 13,8% для нитевидных и 15,2% для облаковидных НВЛ. Метод исследования был применен в различных группах пациентов, имеющих определенную инфекционную (туберкулез легких) и неинфекционную патологию (язвенный колит, аневризмальные костные кисты). Результаты оценки способности нейтрофилов к образованию НВЛ у представителей обследуемых когорт позволяют сделать вывод о достаточном уровне чувствительности и манифестности регистрируемых с помощью данной методики показателей.

Цель настоящей работы - исследовать взаимосвязи содержания в сыворотке крови идиотипических и антиидиотипических антител, специфичных к эстрадиолу (IgA₁-E2 и IgG₂-E2), с генетическими полиморфизмами ферментов репарации ДНК (hOGG1 (rs1052133); XRCC1 (rs25489); ERCC2 (rs13181); APEX1 (rs1130409)) у больных раком молочной железы (РМЖ) с учётом содержания в опухоли Ki-67 экспрессирующих клеток.

Идиотипические и антиидиотипические антитела исследовали с помощью ELISA в сыворотке крови больных РМЖ: 360 с I стадией и 376 со II–IV стадиями. Полиморфизм локусов генов hOGG1:с.977C>G, p.Ser326Cys (rs1052133); XRCC1:c.839G>A, p.Arg280His (rs25489); APEX1:c.444 T>G, p.Asp148Glu (rs1130409); ERCC2:c.2251A>C, p.Lys751Gln (rs13181)  определяли методом аллель-специфической ПЦР с использованием наборов «SNP-экспресс» (НПФ «Литех», г. Москва). У больных РМЖ II–IV стадией с низкими и высокими уровнями IgA₁-E2   высокое содержание в опухоли Ki-67 положительных клеток (>30%) обнаруживали в 47,9% и 58,9% (р = 0,035); с низкими и высокими уровнями IgG₂-E2 в 61,2% и 46,9% (р = 0,001). Высокие уровни Ki-67 в опухоли выявлялись у 55,6% больных II–IV стадиями с одновременно низкими уровнями IgA₁-E2 и IgG₂-E2; у 67,6% – с высокими уровнями IgA₁-E2 и низкими IgG₂-E2; у 43,2% – с низкими уровнями IgA₁-E2 и высокими IgG₂-E2; у 52,2% больных – с одновременно высокими уровнями IgA₁-E2 и IgG₂-E2. Таким образом, IgG₂-E2 тормозили пролиферацию опухоли, а IgA₁-E2 угнетали этот эффект. Не обнаружили взаимосвязи генетических полиморфизмов hOGG1, XRCC1, ERCC2, APEX1 с содержанием в опухоли Ki-67 положительных клеток. Высокие уровни IgA₁-E2 обнаружили у 39,9% больных с CC генотипом hOGG1 и у 47,8% с CG генотипом (р = 0,049). Высокие уровни IgG₂-E2 обнаружили у 65,3% больных с CC генотипом hOGG1 и у 53,7% с CG генотипом (р = 0,003). Высокие уровни IgG₂-E2 в комбинации с низкими IgA₁-E2 встречались у 40,6% больных с CC генотипом hOGG1 и у 27,2% с CG генотипом. Остальные сочетания низких и высоких уровней IgA₁-E2 и IgG₂-E2 встречались чаще у больных с генотипом CG hOGG1. Различия между больными CC и CG генотипами hOGG1 по удельному весу анти-пролиферативного и про-пролиферативных иммунологических фенотипов были статистически значимыми (р = 0,003).

Впервые показано, что образование антител, модулирующих пролиферативную активность опухоли, может быть связано с активностью ферментов репарации ДНК. В частности, образование антител, специфичных к E2, у больных РМЖ ассоциировано с генетическим полиморфизмом hOGG1. Иммуноанализ IgA₁-E2 и IgG₂-E2 можно использовать у больных РМЖ I стадии для оценки пролиферативной активности опухоли при дальнейшем её росте.

Наличие FcᵧRIIIb (CD16) на поверхности нейтрофильных гранулоцитов (НГ) крови человека наделяет эти клетки через взаимодействие с IgG ключевым свойством адаптивного иммунитета: антигенспецифическим клеточным ответом. Целью работы явилось сравнение ex vivo реакции  FcᵧRIIIb НГ человека в ответ на добавление в кровь живых клеток условно-патогенных (Escherichia coli,  Staphylococcus aureus) и патогенных (Yersinia pestis, Brucella abortus) видов бактерий. Материалы и методы. Плотность экспрессии  СD16 на НГ определяли методом проточной цитометрии в условных единицах интенсивности флуоресценции (MFI) после окраски лейкоцитов реагентами CD45-FITC и CD16-PE (Backman Coulter, USA) при иммунофенотипировании их в крови согласно Lyse/No-Wash протоколу. Для моделирования бактериемии использовали аттенуированные (вакцинные) штаммы B. abortus 19BA и Y.pestis EV НИИЭГ, а также штаммы S. aureus ATCC 6538 (209-P) и E.coli ATCC 25922. Кровь получали от здоровых доноров (n=10), не прививавшихся от чумы и бруцеллеза. Бактерии 4-х видов добавляли в образцы крови каждого донора в дозе 10⁸ м.к./мл и результаты учитывали по исследуемому показателю через 30 мин,1,2 и 6 ч инкубации. Результаты. Условно-патогенные бактерии, в отличие от Y. pestis и B. abortus, вызывали, начиная с 2 ч инкубации, резкое снижение плотности экспрессии FcᵧRIIIb на НГ крови человека, что являлось маркером развития ex vivo IgG-обусловленной анафилаксии, связанной с присутствием в крови всех здоровых взрослых  людей IgG к специфическим антигенам E. coli и S.aureus. Изменения по маркеру CD16, индуцируемые в НГ условно-патогенными бактериями, предшествовали дегрануляции и лизисy этих клеток в условиях ex vivo, в то время как в присутствии  Y. pestis и B. abortus нейтрофилы в течение 6 ч не подвергались дегрануляции и цитолизу.  Заключение. Полученные в работе экспериментальные данные  отражают известный факт участия в обезвреживании E. coli и S.aureus феномена  внеклеточной антителозависимой цитотоксичности НГ, который реализуется в потоке крови с помощью механизма нетоза и играет решающую роль в предотвращении сепсиса. Отсутствие реакции молекулярного триггера нетоза CD16  на   Y. pestis и B. abortus свидетельствует о том, что в организме человека, не привитого против чумы или бруцеллёза, этот защитный антителозависимый механизм бактерицидности не работает. Оценка реактивности FcᵧRIIIb c использованием проточной цитометрии  на модели бактериемии ex vivo перспективна для  разработки информативного теста оценки специфического иммунитета.

Резюме

Экологически неблагополучный регион Приаралья характеризуется высокой распространённостью хронических респираторных аллергозов у детей, которые часто сочетаются с анемией. Эти патологии оказывают значительное влияние на состояние здоровья детского населения и требуют комплексного изучения иммунных и физиологических особенностей.

Цель исследования. Оценить особенности цитокинового профиля у детей с респираторными аллергозами на фоне анемии в зависимости от наличия сопутствующих дерматозов, возрастных групп и уровня физического развития.

Материал и методы исследования. В исследовании приняли участие 284 ребёнка в возрасте от 3 до 17 лет, распределённые на три группы: 121 ребёнок с респираторными аллергозами (РА), 126 детей с респираторными аллергозами и сопутствующими дерматозами (РА + Д), а также 37 практически здоровых детей (контроль). Концентрации ключевых цитокинов (IL-4, IL-6, IL-10, IL-18, TNF-α) и общего IgE в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА). Физическое развитие оценивали с использованием стандартизированной методики WHO AnthroPlus.

Результаты исследования. У детей с респираторными аллергозами, независимо от наличия дерматозов, достоверно повышались уровни IL-4 и IgE по сравнению с контрольной группой (p <0,01), что свидетельствует о формировании доминирующего Th2-ответа. Максимальное значение противовоспалительного цитокина IL-10 выявлено в группе с РА и дерматозами (p <0,01), что, вероятно, отражает компенсаторный механизм, направленный на ограничение воспаления. В то же время уровни провоспалительных цитокинов IL-6 и TNF-α были значительно снижены у больных по сравнению со здоровыми детьми (p = 0,001 и p <0,001 соответственно), что может указывать на гипореспонсивность провоспалительной звеньевой реакции при хроническом течении аллергозов.

При отставании в физическом развитии отмечалось снижение уровней IL-4 и IL-10 с одновременным относительным повышением IL-18, что коррелирует с литературными данными и указывает на возможные механизмы иммунной дисрегуляции, связанные с нарушением общего состояния организма.

Заключение. Полученные данные подтверждают, что у детей Приаралья с респираторными аллергозами преобладает Th2-иммунный ответ, выражающийся в повышении IL-4, IL-10 и IgE. Снижение уровней IL-6 и TNF-α требует дальнейших исследований для понимания особенностей воспалительного процесса при хронических аллергозах в условиях экологического стресса. Учет цитокинового профиля и физического развития детей важен для разработки персонализированных подходов к терапии и улучшения прогноза заболевания.

Резюме

Употребление психоактивных веществ может вызывать токсическую энцефалопатию, которая способствует модуляции как врожденных, так и адаптивных иммунных реакций.  Влияние употребления психоактивных веществ, в том числе запрещённых в РФ, на иммунный гомеостаз остается недостаточно изученным, особенно в условиях северных регионов с экстремальными климатическими факторами. В отношении медико-социальных последствий обращает на себя внимание стремительно нарастающая социальная дезадаптация пациентов молодого возраста, а также проявление органического поражения центральной нервной системы. Целью данной работы является оценка соотношения процессов лимфопролиферации и лимфоапоптоза у мужчин с токсической энцефалопатией, вызванной психоактивными веществами, в условиях северного региона. Материалы и методы: в работе проведен сравнительный анализ иммунологических параметров периферической крови двух групп людей-жителей северного региона РФ: 20 мужчин с токсической энцефалопатией (средний возраст 33,8±1,8 года) в первые сутки с момента тяжелого отравления психоактивных веществ и 22 здоровых добровольцев (34,5±2,0 года; (контроль)). Фенотипирование лимфоцитов периферической крови выполнено методом непрямой иммунопероксидазной реакции с моноклональными антителами. Статистическая обработка данных выполнена с помощью SPSS 25.0 Результаты выявили статистически значимое (р<0,01) повышение лимфоцитов с маркером CD10⁺ у мужчин, употребляющих психоактивные вещества (0,54 (0,40-0,75) ×10⁹ кл/л) по сравнению с контролем (0,27 (0,16-0,51) ×10⁹ кл/л), что свидетельствует о гиперпролиферации лимфоцитов за счет CD10⁺. При этом зафиксировано у мужчин, употребляющих психоактивные вещества низкое количество лимфоцитов с маркером CD95⁺ по сравнению с группой контроля, отражающее подавление апоптоза. Установлено двукратное увеличение соотношения CD10⁺/CD95⁺ у мужчин, употребляющих психоактивные вещества, демонстрирующее дисбаланс пролиферативно-апоптотических процессов. Отличительной особенностью для пострадавших c токсической энцефалопатией является повышенное содержание клеток CD10⁺, стимулирующих иммунные реакции по классическому пути на фоне низкой концентрации лимфоцитов с маркером CD95⁺, что свидетельствует о повышенном расходовании резервных возможностей иммунного гомеостаза и их сокращении.  Выявлено умеренное снижение уровня экспрессии рецептора (CD71⁺) на лимфоцитах у мужчин, употребляющих психоактивные вещества. Полученные данные свидетельствуют, что у лиц с токсической энцефалопатией в условиях Севера происходит нарушение как долгосрочного, так и краткосрочного механизма сохранения иммунного гомеостаза за счет дисбаланса соотношения процессов лимфопролиферации и апоптоза.

Резюме

Импланты в настоящее время широко используются в стоматологии и эффективно обеспечивают утраченные зубы. Однако при наличии сопутствующих факторов риска и низком оральном иммунитете у пациентов развиваются периимплантиты, сопровождающиеся воспалением и ответной иммунной реакцией организма, при которой недостаточно изученным остаётся цитокиновый профиль в слюне. Целью настоящего исследования являлось изучение цитокинового ответа и оценка диагностической информативности провоспалительных и противовоспалительных цитокинов у пациентов с периимплантитами. Обследовано 65 пациентов с переимплантитами в возрасте 50-65 лет и 48 пациентов 50-65 лет без переимплантитов. Диагностика переимплантитов осуществлялась по результатам клинического осмотра, наличия симптомов - кровотечение при зондировании, нагноение при зондировании, потеря костной ткани на рентгенограммах ≥ 3 мм и глубина зондированного кармана ≥ 6 мм. В слюне, собранной утром натощак, методом иммуноферментного анализа с применением наборов «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург) определялось содержание ряда провоспалительных и противовоспалительных цитокинов. Цитокиновый профиль пациентов с периимплантитами характеризуется экспрессией как провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов. Особенно увеличилось среди пациентов с периимплантитами содержание в слюне IL-1β до 205,9±4,2 пг/мл против 67,5±3,1 пг/мл у участников без периимплантитов, IL-6 до 29,4±1,3пг/мл против 11,7±1,2 пг/мл соответственно с достоверным различием во всех случаях. Кроме того, повысился уровень IL-19 до 54,9±2,3 пг/мл относительно группы сравнения – 30,5±1,4пг/мл, FNO-α – до 202,4±3,8 пг/мл относительно 115,6±2,4 пг/мл соответственно (р<0,001). Наряду с этим возросла значительно и концентрация в слюне пациентов с периимплантитами IL-4 и IL-10 до 18,2±1,4 пг/мл против 3,8±0,6 пг/мл в группе без периимплантитов и до 66,5±2,7 пг/мл против 15,3±0,9 пг/мл соответственно (р<0,001). Проведённый расчёт меры информативности Кульбака выявил наибольшую диагностическую информативность для IL-4 (8,5), IL-10 (8,1), IL-1β (5,7), IL-6 (4,2). Для объективизации диагностических критериев рекомендуется применять установленные в слюне уровни IL-4, IL-10, IL-1β и IL-6.

Резюме

Ревматоидный артрит (РА) — хроническое системное аутоиммунное заболевание, которое поражает преимущественно мелкие суставы, вызывая стойкую боль, утрату функции и снижение качества жизни пациентов. Патологический процесс характеризуется персистирующим синовиальным воспалением, разрушением хряща и субхондральной кости, а также экстраартикулярными проявлениями, затрагивающими сердечно-сосудистую, лёгочную и нервную системы. Ключевое звено патогенеза составляет дисбаланс провоспалительных и противовоспалительных медиаторов, среди которых особое место занимают фактор некроза опухоли альфа (TNFα), интерлейкины IL-17A и IL-17F, а также остеопротегерин (TNFRSF11B), регулирующий дифференцировку остеокластов.

Настоящее исследование было направлено на оценку вклада полиморфизмов генов TNFA, IL-17A, IL-17F и TNFRSF11B в индивидуальную восприимчивость к РА у представителей русского населения Челябинской области. Мы предположили, что не отдельные однонуклеотидные вариации, а их совокупные многолокусные комбинации вносят основной вклад в развитие заболевания. Поэтому особое внимание уделялось поиску межгенных взаимодействий, которые остаются недооценёнными в традиционных ассоциационных исследованиях.

Генотипирование проводилось методом ПЦР. Для анализа использован алгоритм сокращения многофакторной размерности (MDR), позволяющий формировать прогностические модели на базе классификации «случай–контроль» и оценивать устойчивость результатов посредством десятикратной перекрёстной проверки, а также тестирования перестановками.

Алгоритм выявил три наиболее информативные комбинации, включающие от четырёх до шести SNP, каждая из которых демонстрировала статистическую значимость и высоким коэффициентом точности предсказания. При этом значения согласованности в перекрёстной валидации превышали 9/10, что свидетельствует о высокой воспроизводимости моделей.

Полученные результаты подтверждают, что комплексный анализ многолокусных генотипов обладает более высокой информативностью, чем рассмотрение отдельных маркеров, и может использоваться для стратификации пациентов по риску, ранней диагностики и разработки персонализированных профилактических стратегий при помощи таргетных антицитокиновых терапий. Дальнейшие исследования подтвердят эти выводы на более крупных выборках.

Резюме

Глиобластома является наиболее частой и агрессивной опухолью головного мозга, характеризующейся низкой выживаемостью пациентов. Одной из сложностей в лечении глиобластомы является устойчивость клеток к темозоломиду - основному химиотерапевтическому агенту, применяемому для борьбы с данным заболеванием. Известно, что фактор транскрипции STAT3 играет важную роль в росте и метастазировании опухолевых клеток. Ингибирование STAT3 или подавление экспрессии гена STAT3 снижает устойчивость клеток глиобластомы к темозоломиду. Энхансерные РНК (эРНК) — это некодирующие РНК, которые транскрибируются с энхансерных областей генома. эРНК могут влиять на экспрессию ключевых генов, задействованных в различных биологических процессах, в том числе онкогенов. Ранее нами был произведен поиск эРНК, потенциально влияющих на устойчивость клеток глиобластомы к темозоломиду. Нокдаун энхансерной РНК TMZR1-eRNA (ENSG00000289579) в клеточной линии DBTRG-05MG приводил к снижению экспрессии гена STAT3 и увеличивал чувствительность клеток к темозоломиду. Было показано влияние нокдауна энхансерной РНК на активность промотора гена STAT3 как отдельно, так и в совместной системе с энхансером, с которого происходит транскрипция этой эРНК. В данной работе была исследована активность TMZR1-eRNA в клеточной линии глиобластомы U-251. По сравнению с ранее изученной клеточной линией DBTRG-05MG, линия U-251 является более агрессивной, имеет большую скорость пролиферации и была получена из ткани пациента на более поздней стадии заболевания. Нокдаун TMZR1-eRNA с помощью малых интерферирующих РНК привел к снижению экспрессии гена STAT3, при этом не было обнаружено влияния подавления эРНК на клеточный рост как при добавлении темозоломида, так и в контрольных условиях культуральной среды с ДМСО. Для изучения влияния конститутивного (длительного) подавления эРНК была создана клеточная культура U-251, экспрессирующая короткие шпилечные РНК (shRNA), нацеленные на TMZR1-eRNA. В полученной клеточной линии наблюдалось значимое повышение экспрессии мРНК гена STAT3 относительно контроля. При этом анализ жизнеспособности продемонстрировал значимое замедление скорости роста клеточной линии, экспрессирующей короткие шпилечные РНК к TMZR1-eRNA, по сравнению с контрольной. Значимый эффект наблюдался как при добавлении темозоломида, так и в культуральной среде с ДМСО. 

Резюме

Исследование клеточного метаболизма при формировании иммунологической памяти остаётся актуальным, поскольку может углубить знания о патогенезе иммуновоспалительных заболеваний и стать основой для повышения эффективности их профилактики и лечения.

Цель: изучить активность митохондрий тимоцитов и спленоцитов на фоне иммунизации крыс человеческим альбумином.

Материалы и методы. Самцов крыс линии Wistar массой тела 360-380 г иммунизировали в течение 4 дней путём внутрибрюшинного введения раствора человеческого альбумина (суммарное количество введенного белка составило 135 мг). Через 24 часа после последней инъекции оценивали гематологические параметры (общий анализ крови, «Abacus 5 Vet») и метаболическую активность митохондрий тимоцитов и спленоцитов - по флуоресценции накопленного клетками родамина 6 G на системе визуализации «Evos M7000» в режиме RFP. Массовые коэффициенты тимуса и селезенки рассчитывали относительно массы тела животных (г/кг). Статистический анализ включал расчет медианы, верхнего и нижнего квартилей; сравнение гипотез проводилось по U-критерию Манна-Уитни, а корреляционный анализ осуществляли по Пирсону.

Результаты. У животных опытной группы выявлена гипертрофия тимуса - на 56,9 %, р = 0,032; изменений массы селезенки выявлено не было. Снижение митохондриальной флуоресценции в тимоцитах (на 23,5 %, p=0,037) и в спленоцитах (на 13,7 %, p=0,548) может быть связано с иммуносупрессивным воздействием трансформирующего фактора роста бета в процессе неоднократного введения чужеродного белка. При этом у экспериментальных крыс был выявлен моноцитоз (превышение контроля на 59,4 %, p=0,030) и тромбоцитопения (на 20,8 %, p=0,045), что отражает реактивные изменения, протекающие при иммунизации.

Заключение. Иммунизация животных уже на ранних стадиях сопровождается ингибированием энергообмена в клетках тимуса и селезенки, что может раскрывать особенности воздействия медиаторов воспаления на митохондрии лимфоцитов, определяя перспективные мишени для терапии иммуновоспалительных патологий.

Резюме

Традиционные лабораторные критерии, указывающие на системное воспаление, такие как повышение С-реактивного белка, скорости оседания эритроцитов и лейкоцитоз, могут отсутствовать у ряда пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника, что затрудняет постановку диагноза. Целью данного исследования являлось определение дополнительных иммунологических и биохимических критериев риска наличия воспалительных заболеваний кишечника у пациентов с отсутствием неспецифических лабораторных критериев воспаления. В работе было обследовано 150 пациентов, из которых были сформированы 2 группы – группа наблюдения (100 пациентов с верифицированным диагнозом язвенного колита или болезни Крона) и группа контроля (50 клинически здоровых лиц). Всем обследуемым проводилось исследование общего анализа крови, биохимический анализ крови с определением концентрации общего белка, белковых фракций, мочевины, креатинина, глюкозы, С-реактивного белка, активности АЛАТ, АСАТ, определение иммунологических показателей - концентрации IL-1β, TNF-α и IL-4. На основании результатов общего и биохимического анализов крови пациенты из группы наблюдения были разделены на две подгруппы – с наличием и отсутствием классических лабораторных признаков воспаления. Оценивались три основных лабораторных показателя крови для диагностики воспалительного процесса: скорость оседания эритроцитов, количество лейкоцитов, концентрация С-реактивного белка. За наличие лабораторных признаков воспаления принимали повышение двух и более вышеперечисленных параметров крови выше референтных значений. Было отмечено, что у 40% пациентов с ВЗК отсутствовали неспецифические лабораторные критерии воспаления: при язвенном колите в 37% случаев, при болезни Крона в 46% случаев (р<0,001). Далее был проведен сравнительный анализ уровней цитокинов и биохимических маркеров в сыворотке крови пациентов из группы контроля и пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника с отсутствием лабораторных признаков воспаления. На основе полученных данных была разработана прогностическая модель вероятности наличия воспалительных заболеваний кишечника у пациентов с отсутствием неспецифических лабораторных критериев воспаления в зависимости от биохимических и иммунологических показателей крови. В модель были включены такие параметры сыворотки крови, как концентрация глюкозы, натрия и IL-4. Прогностическая способность модели оценена методом ROC-анализа (AUC 0,970±0,018 95% CI: 0,936–1,000; p<0,001). На основании полученных результатов предложен алгоритм прогнозирования риска наличия воспалительных заболеваний кишечника у пациентов с отсутствием неспецифических лабораторных критериев воспаления с учетом иммунологических и биохимических параметров сыворотки крови. Полученные данные позволили выявить дополнительные критерии риска наличия воспалительных заболеваний кишечника у пациентов с отсутствием неспецифических метаболических критериев воспаления.

Резюме

Введение. В последние годы во всем мире значительно повысилась заболеваемость корью. Вирус кори передается аэрозольным путем и имеет высокую контагиозность. Особую опасность представляют медицинские работники, инфицированные корью, так как они могут способствовать внутрибольничному распространению инфекции. В то же время медицинский персонал находится в группе риска по контакту с пациентами и биологическим материалом, который может быть заражен корью.

Цель – изучить динамику изменения содержания противокоревых антител у медицинских работников за пятилетний период.

Материалы и методы. Была проведена статистическая обработка результатов твердофазного иммуноферментного анализа сыворотки крови 272 медицинских сотрудников Клиник Самарского государственного медицинского университета в возрасте от 22 до 62 лет с помощью программы StatTech v. 4.1.2. Обследуемые были разделены на две возрастные группы: от 22 до 44 лет, от 45 до 62 лет (средний возраст – 43 года). На первом этапе исследования в 2018 году был оценен базовый уровень специфических противокоревых IgG. Лица, продемонстрировавшие отрицательный и сомнительный результат, подверглись подчищающей иммунизации. На втором этапе исследования в 2023 году повторно оценивался уровень специфических антител.

Результаты. В обеих возрастных группах за пятилетний период выросла средняя концентрация IgG в результате ревакцинации 2018 года (0,49 МЕ/мл в 2023 г. против 0,20 МЕ/мл в 2018 г.). В 2018 году не удалось выявить статистически значимых различий между возрастными группами. К 2023 году концентрация антител среди лиц старше 45 лет оказалась выше. В группе без подчищающей иммунизации за 5 лет наблюдалась тенденция к снижению средних значений антител. Группа с подчищающей иммунизацией продемонстрировала появление положительных результатов и снижение доли отрицательных и сомнительных результатов.

Выводы. Несмотря на двукратное введение противокоревой вакцины в детстве, иммунитет к достижению взрослого возраста сохраняется не у всех. Подчищающая иммунизация 2018 года в целом оказалась достаточно эффективной. Влияние на формирование противокоревого гуморального иммунитета могут оказывать индивидуальные особенности организма, а также новая коронавирусная инфекция. Для контроля над сохранением противокоревого гуморального иммунитета необходим регулярный серомониторинг, особенно для лиц из групп риска, в том числе медицинских сотрудников.

Резюме

Излишнее потребление алкоголя оказывает негативное влияние на гемопоэз, что выражается в значительной супрессии как продукции клеток крови, так и в структурных изменениях предшественников, а именно в подавлении их созревания, вплоть до панцитопении. Различают прямой эффект алкоголя (токсический эффект на костный мозг, гемопоэтические предшественники и зрелые клетки крови) и непрямой эффект, обусловленный дефицитом трофических факторов. У алкоголиков зачастую выявляется анемия, как следствие разрушение эритроидных клеток до их созревания. Тромбоцитопения – также один из важнейших показателей гематологических нарушений при алкоголизме – является причиной появления петехий и спонтанных кровотечений. Хроническое употребление алкоголя также оказывает супрессивное воздействие на продукцию и функции клеток белой крови, следствием чего является низкая способность противостоять бактериальной инфекции. Нами ранее выявлены иммуномодулирующие свойства инновационного антиконвульсанта, мета-хлорбензгидрилмочевины, что обуславливает его позитивный эффект при внутрижелудочном введении у длшительно алкоголизированных мышей. Показано также, что модулированные in vitro указанным антиконвульсантом селезеночные лимфоциты посредством относительно независимых механизмов оказывают позитивное психонейромодулирующее влияние при хронической интоксикации этанолом. В настоящей работе на модели хронического алкоголизма исследовалось влияние трансплантации лимфоцитов селезенки, прекультивированных с мета-хлорбензгидрилмочевиной, на костномозговой гемопоэз и показатели периферической крови. В костном мозге длительно алкоголизированных мышей наблюдалось снижение колониеобразующей активности гемопоэтических предшественников: значительно сократилась популяция эритроидных предшественников, на уровне тенденции также зарегистрировано снижение популяция гранулоцитарно-макрофагальных. Исключение составила популяция ранних предшественников, количество колоний в которой не менялось.  В периферической крови наблюдалось снижение количества лимфоцитов, тромбоцитов, эритроцитов, гематокрита (на уровне тенденции) и лейкоцитов при возрастании популяция сегментоядерных нейтрофилов, указывающей на периферическое воспаление. Лимфоциты, прекультивированные с мета-хлорбензгидрилмочевиной,  после внутривеннгого введения  сингенным  длительно алкоголизированным реципиентам, оказывали корректирующее воздействие на ряд показателей гемопоэза, что проявилось в восстановлении колониеобразующей активности костномозговых гемопоэтических предшественников до показателей, сравнимых с таковыми у интактных мышей соответствующего возраста, в снижении в  периферической крови количества сегментоядерных нейтрофилов, восстановлении популяций эритроцитов и лимфоцитов,  а также тенденции к повышению количества тромбоцитов. Полученные данные могут свидетельствовать об эффективности трансплантации модулированных мета-хлорбензгидрилмочевиной лимфоцитов в коррекции ряда изменений гемопоэза, спровоцированных длительной интоксикацией этанолом.

Резюме

Регенераторные механизмы в печени при повреждении сопряжены с активацией цитокинов. SCF представляет собой важную систему передачи сигналов, помимо регулирования пролиферации гемопоэтических стволовых клеток, SCF участвует в восстановлении печени и регенерации после его повреждения. В связи с этим, цель исследования - изучение уровня SCF в плазме крови и печени при физической нагрузке разной интенсивности и после приеме мельдония. Материал и методы исследования. Опыты проводились на самцах - крысах. Опыты проводились в два этапа. На первом этапе крысам давали нагрузку разной интенсивности: 1-я группа крыс выполняла легкую физическую нагрузку, 2-я группа - средней тяжести, 3-я группа выполняла тяжелую физическую нагрузку. Всего выполнено 10 сеансов водной нагрузки. Интактными животными были самцы - крыс половозрелого возраста, которым не проводили физическую нагрузку, количество животных соответствовало числу опытных. Концентрацию SCF (Rat Stem cell factor/mast cell growth factor) в плазме крови выявляли с помощью иммуноферментного анализа, уровень SCF в печени изучали методом иммуноферментного анализа.

В исследовании выявлено, что в интактной группе уровень SCF выше в ткани печени, чем в плазме крови. В первой группе животных отмечалось увеличение SCF в 1,5 раза в крови и снижение в печени по сравнению с интактной группой (p<0,05). Во второй группе показатель SCF в печени увеличился, а в крови произошло его снижение в 1,1 раза в сравнении с первой группой, но показатель оставался выше, чем у интактных животных в 1,4 раза (p<0,05). В третьей группе отмечалось снижение SCF как в крови, так и в печени в сравнении с интактными животными (p<0,05). После использовании мельдония при физической нагрузке легкой и умеренной степени отмечено увеличение SCF в печени в 1,1 раза, при тяжелой в 1,4 раза в сравнении с опытными животными, не получавшими мельдоний. Таким образом, прием мельдония во время физической нагрузки различной интенсивности привел к значимому повышению концентрации SCF в ткани печени.

Резюме

Почесуха является редким хроническим рецидивирующим полиэтиологичным заболеванием кожи, характеризующимся выраженным зудом, вследствие которого формируются кожные элементы, такие как папуло-везикулы, папулы, узлы и бляшки. Заболевание зачастую с трудом поддается стандартной терапии, больные годами страдают изнурительными симптомами.         В статье представлен клинический случай пациентки, которая страдала узловатой почесухой более 20 лет с ухудшением в последние 4 года после перенесенной нетяжелой инфекции ковид-19, когда заболевание приобрело непрерывно-рецидивирующий характер. Средства традиционной терапии были практически неэффективны. При поступлении в аллергологическое отделение клиники иммунопатологии ФГБНУ "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии" г. Новосибирска в апреле 2024 г высыпания были распространенными, выраженный кожный зуд нарушал сон, значительно снижали качество жизни больной. 16.04.2024 г инициирована ГИБТ препаратом дупилумаб в начальной дозе, согласно инструкции, 600 мг, далее по 300 мг каждые 2 недели. Уже после первого введения препарата отмечена значимая положительная динамика в виде уменьшения зуда, быстрой регрессии высыпаний, кожа больной практически полностью очистилась к 4 инъекции. К моменту написания статья кожа остается чистой, зуда нет, нормализовался сон. Пациентка продолжает пользоваться эмолентами, принимать антигистаминные препараты 2 поколения.

Эффективность терапии дупилумабом, блокирующим передачу сигналов IL-4 и IL-13 путем специфического связывания с IL-4Rα-субъединицей, общей для рецепторных комплексов IL-4 и IL-13, обусловлена тем, что ведущим в патогенезе хронического зуда при узловатой почесухе является нарушение нейроиммунной регуляции в коже.  Интерлейкины 4 и 13 считаются важными зудогенными цитокинами Тh2-клеток, которые увеличивают экспрессию IL-31R и других рецепторов, связанных с зудом, усиливают нейрональную активацию в воспаленной коже, передавая сигналы близлежащим эфферентным нейронам и центральной нервной системе, инициируя ощущение зуда, формируя порочный круг зуд-расчесывание, усиливают сенсибилизацию гистамин-независимых сенсорных нейронов к пруритогенам, стимулируют пролиферацию фибробластов, миграцию и выработку профиброзных факторов. Поскольку основной целью лечения узловатой почесухи является блокирование порочного круга зуд-расчесывание, способствующее заживлению узелков, терапия дупилумабом приводит к ремиссии заболевания, нормализуя взаимодействие иммунной и нервной систем в коже.

В лечении взрослых больных с узловатой почесухой дупилумаб в России одобрен не так давно - чуть более года и уже показал свою высокую эффективность.

Представленный случай демонстрирует возможности применения современных методов иммунотерапии в лечении дерматологических заболеваний с торпидным течением.