ПРОБЛЕМЫ ОЦЕНКИ НОРМАТИВНЫХ ДИАПАЗОНОВ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ОСНОВНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ У ДЕТЕЙ РАЗНОГО ВОЗРАСТА

Резюме

Возрастная динамика состава основных субпопуляций лимфоцитов крови у детей изучена достаточно хорошо, но вопрос о границах нормы, особенно в раннем возрасте, остается актуальным. В работе проанализированы данные прямой выборки из 624 образцов крови здоровых детей возраста от 1 недели жизни до 17 лет 11 мес., жителей Москвы и центральных регионов России, которым при проведении профилактических осмотров выполнялся общий клинический анализ крови. Основным критерием включения ребенка в исследование была достоверная информации об отсутствии у него острых и хронических заболеваний. Абсолютное число лимфоцитов определялось в комплексе показателей автоматизированного анализа крови, применялась  5 Diff- технология проточной гемоцитометрии с флюоресцентным окрашиванием нуклеиновых кислот. Из остаточного объема крови методом проточной цитофлюорометрии с 3-4 цветным окрашиванием определены процентные и абсолютные показатели Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-цитотоксических клеток, соотношение хелперы:цитотоксические лимфоциты, а также процент и абсолютные числа В-лимфоцитов и естественных киллеров.  Сформировано 14  возрастных групп  с числом наблюдений в каждой от 40 до 64. Методом Колмогорова-Смирнова подтверждено нормальное распределение полученных показателей как в общей группе, так и в отдельных возрастных группах. В статье приведены подробные результаты обработки полученных данных методами непараметрической (медиана, межквартильный интервал, диапазон от 10 до 90 центиля) и параметрической статистики  (средняя и стандартное отклонение). На основании оценки интервала 10-90 центилей рассчитаны границы нормы для процентных и абсолютных показателей перечисленных субпопуляций лимфоцитов. Подтверждена известная динамика постепенного снижения по мере взросления детей абсолютного числа лимфоцитов и абсолютных показателей для всех основных субпопуляций, а также относительно более высокие показатели соотношения хелперы:цитотоксические лимфоциты у детей раннего возраста. Подтвержден более высокий процентный уровень В-лимфоцитов у детей в возрастном диапазоне от  2 месяцев до 2 лет, что вместе с высоким общим числом лимфоцитов определило достаточно высокие  абсолютные показатели В-клеток в этих возрастных группах.  Предложенные нормы валидированы на независимой группе  75 детей возраста от 2 до 18 лет. Индивидуальные показатели детей группы валидации вышли за границы нормы в 4 случаях (5,3 % при допустимом уровне расхождений до 10%), что позволяет считать нормы валидированными.   Наиболее дискуссионные результаты  об относительно высоком  абсолютном уровне В-лимфоцитов у детей раннего возраста хорошо согласуются с пулированными данными мета-анализа мировой литературы. Предлагаемые нормы оформлены в виде, удобном для практического использования.   

1. Маянский Н.А., Балабанов А.С., Копыльцова Е.А., Лукоянова О.Л., Мельничук О.С., Блинова Т.А., Семикина Е.Л. Референсные интервалы лейкоцитов и тромбоцитов у детей, полученные с помощью автоматического гематологического анализатора // Вопросы диагностики в педиатрии. — 2011. - Т. 3, № 6. – С. 5–10. Mayansky N.A., Balabanov A.S., Kopyltsova E.A., Lukoyanova O.L., Melnichuk O.S., Blinova T.A., Semikina E.L. Reference intervals of leukocytes and platelets in children obtained using an automatic hematology analyzer. Voprosy diagnostici v pediatrii = Diagnostic issues in pediatric, 2011, vol. 3, No. 6, pp. 5-10. (In Russ.) https://www.elibrary.ru/item.asp?id=17536048

2. Семикина Е.Л., Копыльцова Е.А., Алешкин В.А., Топтыгина А.П. Возрастные особенности формирования гуморального звена иммунного ответа у детей // Медицинская иммунология. - 2012. – Т.14, №4-5. – С. 289-294.

3. Semikina E.L., Kopyltsova E.A., Alyoshkin V.A., Toptygina A.P. Age-related features of the formation of the humoral component of the immune response in children. Medical immunology (Russia), 2012, Vol.14, No.4-5. – pp. 289-294. (In Russ.) https://www.elibrary.ru/item.asp?id=17918231

4. Сенникова С.В., Топтыгина А.П., Семикина Е.Л., Закиров Р.Ш., Акулова С.С. Субпопуляционный состав мононуклеаров и цитокиновый профиль венозной и капиллярной крови больных псориазом и здоровых людей // Медицинская иммунология. - 2021. - Т. 23, № 6. - С. 1333-1346.

5. S.V. Sennikova, A.P. Toptygina, E.L. Semikina, R.Sh. Zakirov, S.S. Akulova Mononuclear subsets and cytokine profile of venous and capillary blood in patients with psoriasis and healthy people. Medical Immunology (Russia), 2021, Vol. 23, no. 6, pp. 1333-1346. (In Russ.) doi: 10.15789/1563-0625-MSA-2391

6. Топтыгина А.П., Семикина Е.Л., Копыльцова Е.А., Алешкин В.А. Возрастная динамика экспрессии изоформ CD45 Т-хелперами и Т-цитотоксическими лимфоцитами крови здоровых людей // Иммунология. – 2014 - Т. 35, № 4 - С. 229-232. Toptygina A.P., Semikina E.L., Kopyltsova E.A., Alyoshkin V.A. Age-related dynamics of CD45 isoform expression by T helper cells and T cytotoxic lymphocytes in healthy human blood. Immunology. 2014, vol. 35, No. 4, pp. 229-232. (In Russ.) https://www.elibrary.ru/item.asp?id=21842747

7. Топтыгина А.П., Семикина Е.Л., Петричук С.В., Закиров Р.Ш., Курбатова О.В., Копыльцова Е.А., Комах Ю.А. Изменение уровня субпопуляций Т-регуляторных клеток и Т-хелперов 17 в периферической крови здоровых людей в зависимости от возраста // Медицинская иммунология. – 2017 - Т.19, № 4 – С. 409-420

8. Toptygina A.P., Semikina E.L., Petrichuk S.V., Zakirov R.Sh., Kurbatova O.V., Kopyltsova E.A., Komakh Yu.A. Changes in the level of subpopulations of T-regulatory cells and T-helper 17 cells in the peripheral blood of healthy people depending on age. Medical Immunology (Russia), 2017, Vol. 19, No. 4, pp. 409-420. (In Russ.) doi: 10.15789/1563-0625-2017-4-409-420

9. Хайдуков С.В., Байдун Л.В., Зурочка А.В. , Тотолян Арег А. Стандартизованная технология «исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов»// Российский иммунологический журнал. – 2014. - Т. 8(17), № 4. - С. 974–992. Khaidukov S.V., Baidun L.V., Zurochka A.V., Totolyan Areg A. Standardized technology "study of the subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes using flow cytofluorimeter analyzers". Russian Journal of Immunology, 2014, vol. 8(17), No. 4, pp. 974-992. (In Russ.) https://www.elibrary.ru/item.asp?id=22801164

10. Хайдуков С.В., Зурочка А.В. , Тотолян Арег А., Черешнев В.А. Основные и малые популяции лимфоцитов переферической крови человека и их нормативные значения (методом многоцветного цитометрического анализа) // Медицинская Иммунология. – 2009. - Т. 11, № 2-3. - С. 227-238. Khaidukov S.V., Zurochka A.V., Totolyan Areg A., Chereshnev V.A. The main and small populations of human peripheral blood lymphocytes and their normative values (by multicolored cytometric analysis). Medical Immunology (Russia). 2009. Vol. 11, No. 2-3. pp. 227-238. (In Russ.) https://www.elibrary.ru/item.asp?id=12851261

11. Щербина А.Ю., Пашанов Е.Д. Подходы к оценке иммунитета. В кн. Практическое руководство по детским болезням. Иммунология детского возраста. «Медпрактика-М», 2006. – С.66 Shcherbina A.Y., Pashanov E.D., Approaches to the assessment of immunity. In the book. Childhood Immunology, vol. VIII of the Practical Guide to Childhood Diseases, Medpractika-M, 2006. – p.66. (In Russ.) https://www.elibrary.ru/item.asp?id=26450719

12. Amatuni GS, Sciortino S, Currier RJ, Naides SJ, Church JA, Puck JM. Reference Intervals for Lymphocyte Subsets in Preterm and Term Neonates Without Immune Defects. J Allergy Clin Immunol. , 2019, Vol.144, no. 6, pp. 1674-1683. doi: 10.1016/j.jaci.2019.05.038

13. Azarsiz E, Karaca NE, Aksu G, Kutukculer N. Reference values for B-cell surface markers and co-receptors associated with primary immune deficiencies in healthy Turkish children. Int J Immunopathol Pharmacol., 2017, Vol.30, no. 2, pp. 194-200. doi: 10.1177/0394632017707609

14. Besci Ö, Başer D, Öğülür İ, Berberoğlu AC, Kıykım A, Besci T, Leblebici A, Ellidokuz H, Boran P, Özek E, Haklar G, Özen A, Barış S, Aydıner E. Reference values for T and B lymphocyte subpopulations in Turkish children and adults. Turk J Med Sci, 2021, Vol. 51, pp. 1814-1824. doi:10.3906/sag-2010-176

15. Borriello F, Pasquarelli N, Law L, Rand K, Raposo C, Wei W, Craveiro L, Derfuss T. Normal B-cell ranges in infants: A systematic review and meta-analysis. J Allergy Clin Immunol., 2022, Vol.150, no.5, pp. 1216-1224. doi: 10.1016/j.jaci.2022.06.006

16. Christensen R.D., Baer V.L., Gordon P.V., Henry E., Whitaker C., Andres R.L., Bennett S.T. Reference ranges for lymphocyte counts of neonates: associations between abnormal counts and outcomes. Pediatrics, 2012, Vol.129, no. 5, e1165-e1172. doi: 10.1542/peds.2011-2661

17. Doyle K., Bunch D R. Reference intervals: past, present, and future. Crit Rev Clin Lab Sci., 2023, Vol.60, no. 6, pp. 466-482. doi: 10.1080/10408363.2023.2196746

18. Duchamp M., Sterlin D., Diabate A., Uring-Lambert B., Guerin-El Khourouj V., Le Mauff B., Monnier D., Malcus C., Labalette M., Picard C. B-cell subpopulations in children: National reference values. Immunity, Inflammation and Disease, 2014, Vol. 2, no. 3, pp. 131–140. doi: 10.1002/iid3.26

19. Garcia-Prat M, Alvarez-Sierra D, Aguiló-Cucurull A, Salgado-Perandrés S, Briongos- Sebastian S, Franco-Jarava C, Martin-Nalda A, Colobran R, Montserrat I, Hernández-González M, PujolBorrell R, Soler-Palacin P, Martínez-Gallo M. Extended Immunophenotyping Reference Values in a Healthy Pediatric Population. Cytometry Part B, 2019, Vol. 96B, pp. 223–233. doi: 10.1002/cyto.b.21728

20. Heldrup J, Kalm 0, Prellner K. Blood T and B lymphocyte subpopulations in healthy infants and children. Acta Paediatr., 1992, Vol. 81, pp. 125-132. doi: 10.1111/j.1651-2227.1992.tb12187.x

21. Jia L, Li J, Zhang Y, Shi Y, Yuan E, Liu J, Wang P, Rong S, Xing J, Tian Y, Li J. Age- and Sex-Related Reference Intervals of Lymphocyte Subsets in Healthy Ethnic Han Chinese Children. Cytometry A, 2015, Vol.87, no.12, pp.1116-1126. doi: 10.1002/cyto.a.22716

22. Jodhawat N, Bargir UA, Setia P, Taur P, Bala N, Madkaikar A, Yadav RM, Dalvi A, Shinde S, Gupta M, Shelar S, Kambli P, Gowri V, Lokeshwar M, Satoskar P, Desai M, Madkaikar M. Normative data for paediatric lymphocyte subsets: A pilot study from western India. Indian J Med Res., 2023, Vol.158, no. 2, pp. 161-174. doi: 10.4103/ijmr.ijmr_3282_21.

23. Jones GRD, Haeckel R, Loh TP, Sikaris K, Streichert T, Katayev A, Barth JH, Ozarda Y; IFCC Committee on Reference Intervals and Decision Limits. Indirect methods for reference interval determination - review and recommendations. Clin Chem Lab Med., 2018, Vol. 57, no. 1, pp.20-29. doi: 10.1515/cclm-2018-0073.

24. Katayev A, Fleming JK, Luo D, Fisher AH, Sharp TM. Reference intervals data mining: no longer a probability paper method. Am J Clin Pathol., 2015, Vol. 143, no.1, pp.134-142. doi: 10.1309/AJCPQPRNIB54WFKJ

25. Kverneland AH, Streitz M, Geissler E, Hutchinson J, Vogt K, Boës D, et al. Age and Gender Leucocytes Variances and References Values Generated Using the Standardized ONE-Study Protocol. Cytometry A, 2016, Vol.89, no.6, pp. 543–564. doi: 10.1002/cyto.a.22855

26. Lerkvaleekul B, Apiwattanakul N, Klinmalai C, Hongeng S, Vilaiyuk S. Age-related changes in lymphocyte subpopulations in healthy Thai children. J Clin Lab Anal., 2020, Vol.34, no. 5, e23156. doi: 10.1002/jcla.23156.

27. Mandala WL, Ananworanich J, Apornpong T, Kerr SJ, MacLennan JM, Hanson C, Jaimulwong T, Gondwe EN, Rosenblatt HM, Bunupuradah T, Molyneux ME, Spector SA, Pancharoen C, Gelman RS, MacLennan CA, Shearer WT.J Control Lymphocyte Subsets: Can one country's values serve for another's? Allergy Clin Immunol., 2014, Vol. 134, no. 3, pp. 759-761. e8. doi: 10.1016/j.jaci.2014.06.030.

28. Morbach H, Eichhorn EM, Liese JG, Girschick HJ. Reference Values for B Cell Subpopulations From Infancy to Adulthood. Clin Exp Immunol., 2010, Vol. 162, no. 2, pp. 271–279. doi: 10.1111/j.1365-2249.2010.04206.x

29. Nikulshin S, Kundzina L, Tolstikova I, Gravele D, Prokofjeva T, Gardovska D. Significant age‐ and gender‐related variability of main lymphocyte subsets in paediatric patients: Latvian data. Scand J Immunol., 2018, Vol. 88, no.2, e12696. doi: 10.1111/sji.12696.

30. Narula G, Khodaiji S, Bableshwar A, Bindra MS. Age-related reference intervals for immunoglobulin levels and lymphocyte subsets in Indian children .Indian J Pathol Microbiol. , 2017, Vol. 60, no 3, pp. 360-364. doi: 10.4103/IJPM.IJPM_542_16.

31. Niu HQ, Zhao XC, Li W, Xie JF, Liu XQ, Luo J, Zhao WP, Li XF. Characteristics and reference ranges of CD4+ T cell subpopulations among healthy adult Han Chinese in Shanxi Province, North China. BMC Immunol., 2020, Vol. 21:44. doi: 10.1186/s12865-020-00374-9.

32. Osugi Y, Hara J, Kurahashi H, Sakata N, Inoue M, Yumura-Yagi K, Kawa-Ha K, Okada S, Tawa A. Age-related changes in surface antigens on peripheral lymphocytes of healthy children. Clin Exp Immunol., 1995, Vol. 100, no. 3, pp. 543-548. doi: 10.1111/j.1365-2249.1995.tb03735.x.

33. Ozarda Y, Ichihara K, Jones G, Streichert T, Ahmadian R; IFCC Committee on Reference Intervals and Decision Limits (C-RIDL). Comparison of reference intervals derived by direct and indirect methods based on compatible datasets obtained in Turkey. Clin Chim Acta, 2021, Vol. 520, pp. 186-195. doi: 10.1016/j.cca.2021.05.030.

34. Ozarda Y. Reference intervals: current status, recent developments and future considerations. Biochem Med (Zagreb), 2016, Vol. 26, no. 1, pp. 5-16. doi: 10.11613/BM.2016.001.

35. Perazzio SF, Palmeira P, Moraes-Vasconcelos D, Rangel-Santos A, de Oliveira JB, Andrade LEC and Carneiro-Sampaio M (2021) A Critical Review on the Standardization and Quality Assessment of Nonfunctional Laboratory Tests Frequently Used to Identify Inborn Errors of Immunity. Front. Immunol., 2021, Vol. 12, article 721289. doi: 10.3389/fimmu.2021.721289

36. Piątosa B, Wolska-Kuśnierz B, Pac M, Siewiera K, Gałkowska E, Bernatowska E. B Cell Subsets in Healthy Children: Reference Values for Evaluation of B Cell Maturation Process in Peripheral Blood. Cytometry B, Clin Cytom., 2010, Vol. 78, no. 6, pp.372–81. doi: 10.1002/cyto.b.20536

37. Shahal-Zimra Y, Rotem Z, Chezar J, Shochat T, Ross L, Pickholtz I, Rabizadeh E. Lymphocyte Subset Reference Ranges in Healthy Israeli Adults. Isr Med Assoc J., 2016, Vol.18, no.12, pp. 739-743. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28457077; https://www.ima.org.il/MedicineIMAJ/viewarticle.aspx?year=2016&month=12&page=739

38. Siest G, Henny J, Gräsbeck R, Wilding P, Petitclerc C, Queraltó JM, Hyltoft Petersen P. The theory of reference values: an unfinished symphony. Clin Chem Lab Med., 2013, Vol.51, no. 1, pp. 47-64. doi: 10.1515/cclm-2012-0682.

39. Thakar M, Saxena V, Janakiram N, Ravi V, Desai A, Singh S, Shivanna N, Minz RY, Singh A, Chatterjee M, Madkaikar M, Bembalkar S, Mukherjee A, Mahesh V. Reference Ranges of Different Lymphocyte Subsets in Indian Children: A Multi-Centric Study. Indian Pediatr. 2021, Vol.58, no. 5, pp. 424-429. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33980728/; https://www.indianpediatrics.net/may2021/424.pdf

40. Tosato F., Buccio G., Pantano G., Putti M.C, Sanzari M.C., Basso G., Plebani M. Lymphocytes Subsets Reference Values in Childhood. Cytometry Part A, 2015, Vol. 87A, pp. 81-85. doi: 10.1002/cyto.a.22520

41. Wei B, Guo Y, Zhang L, Zhong H, Miao Q, Yan L, Bai Y, Feng W, Liu W, Niu Q, Yi Li. Reference ranges of T lymphocyte subsets by single-platform among healthy population in southwest China. BMC Immunol., 2021, Vol. 20;22(1):80 doi: 10.1186/s12865-021-00474-0

42. Zhang K, Wang F, Zhang M, Cao X, Yang S, Jia S, Wang L, Luo J, Deng S, Chen M. Reference Ranges of Lymphocyte Subsets Balanced for Age and Gender from a Population of Healthy Adults in Chongqing District of China. Cytometry B, Clin Cytom., 2016, Vol.90, no 6, pp. 538-542. doi: 10.1002/cyto.b.21323.