Проблемы оценки нормативных диапазонов показателей основных субпопуляций лимфоцитов крови у детей разного возраста

Возрастная динамика состава основных субпопуляций лимфоцитов крови у детей изучена достаточно хорошо, но вопрос о границах нормы, особенно в раннем возрасте, остается актуальным. В работе проанализированы данные прямой выборки из 624 образцов крови здоровых детей возраста от 1 недели жизни до 17 лет 11 мес., жителей Москвы и центральных регионов России, которым при проведении профилактических осмотров выполнялся общий клинический анализ крови. Основным критерием включения ребенка в исследование была достоверная информации об отсутствии у него острых и хронических заболеваний. Абсолютное число лимфоцитов определялось в комплексе показателей автоматизированного анализа крови, применялась 5 Diff-технология проточной гемоцитометрии с флюоресцентным окрашиванием нуклеиновых кислот. Из остаточного объема крови методом проточной цитофлюорометрии с 3-4-цветным окрашиванием определены процентные и абсолютные показатели Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-цитотоксических клеток, соотношение хелперы:цитотоксические лимфоциты, а также процент и абсолютные числа В-лимфоцитов и естественных киллеров. Сформировано 14 возрастных групп с числом наблюдений в каждой от 40 до 64. Методом Колмогорова–Смирнова подтверждено нормальное распределение полученных показателей как в общей группе, так и в отдельных возрастных группах. В статье приведены подробные результаты обработки полученных данных методами непараметрической (медиана, межквартильный интервал, диапазон от 10 до 90 центиля) и параметрической статистики (средняя и стандартное отклонение). На основании оценки интервала 10-90 центилей рассчитаны границы нормы для процентных и абсолютных показателей перечисленных субпопуляций лимфоцитов. Подтверждена известная динамика постепенного снижения по мере взросления детей абсолютного числа лимфоцитов и абсолютных показателей для всех основных субпопуляций, а также относительно более высокие показатели соотношения хелперы : цитотоксические лимфоциты у детей раннего возраста. Подтвержден более высокий процентный уровень В-лимфоцитов у детей в возрастном диапазоне от 2 мес. до 2 лет, что вместе с высоким общим числом лимфоцитов определило достаточно высокие абсолютные показатели В-клеток в этих возрастных группах. Предложенные нормы валидированы на независимой группе 75 детей возраста от 2 до 18 лет. Индивидуальные показатели детей группы валидации вышли за границы нормы в 4 случаях (5,3% при допустимом уровне расхождений до 10%), что позволяет считать нормы валидированными. Наиболее дискуссионные результаты об относительно высоком абсолютном уровне В-лимфоцитов у детей раннего возраста хорошо согласуются с пулированными данными мета-анализа мировой литературы. Предлагаемые нормы оформлены в виде, удобном для практического использования.

1. Маянский Н.А., Балабанов А.С., Копыльцова Е.А., Лукоянова О.Л., Мельничук О.С., Блинова Т.А., Семикина Е.Л. Референсные интервалы лейкоцитов и тромбоцитов у детей, полученные с помощью автоматического гематологического анализатора // Вопросы диагностики в педиатрии, 2011. Т. 3, № 6. С. 5-10.

2. Семикина Е.Л., Копыльцова Е.А., Алешкин В.А., Топтыгина А.П. Возрастные особенности формирования гуморального звена иммунного ответа у детей // Медицинская иммунология, 2012. Т. 14, № 4-5. С. 289-294. doi: 10.15789/1563-0625-2012-4-5-289-294.

3. Сенникова С.В., Топтыгина А.П., Семикина Е.Л., Закиров Р.Ш., Акулова С.С. Субпопуляционный состав мононуклеаров и цитокиновый профиль венозной и капиллярной крови больных псориазом и здоровых людей // Медицинская иммунология, 2021. Т. 23, № 6. С. 1333-1346. doi: 10.15789/1563-0625-MSA-2391.

4. Топтыгина А.П., Семикина Е.Л., Копыльцова Е.А., Алешкин В.А. Возрастная динамика экспрессии изоформ CD45 Т-хелперами и Т-цитотоксическими лимфоцитами крови здоровых людей // Иммунология, 2014. Т. 35, № 4. С. 229-232.

5. Топтыгина А.П., Семикина Е.Л., Петричук С.В., Закиров Р.Ш., Курбатова О.В., Копыльцова Е.А., Комах Ю.А. Изменение уровня субпопуляций Т-регуляторных клеток и Т-хелперов 17 в периферической крови здоровых людей в зависимости от возраста // Медицинская иммунология, 2017. Т. 19, № 4. С. 409-420. doi: 10.15789/1563-0625-2017-4-409-420.

6. Хайдуков С.В., Байдун Л.В., Зурочка А.В., Тотолян Арег А. Стандартизованная технология «исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов» // Российский иммунологический журнал, 2014. Т. 8 (17), № 4. С. 974-992.

7. Хайдуков С.В., Зурочка А.В., Тотолян Арег А., Черешнев В.А. Основные и малые популяции лимфоцитов переферической крови человека и их нормативные значения (методом многоцветного цитометрического анализа) // Медицинская иммунология, 2009. Т. 11, № 2-3. С. 227-238.

8. Щербина А.Ю., Пашанов Е.Д. Подходы к оценке иммунитета. В: Колоколина В.Ф., Румянцев А.Г. (ред.). Практическое руководство по детским болезням. Т. 8. Иммунология детского возраста. М.: Медпрактика-М, 2006. 432 с.

9. Amatuni G.S, Sciortino S., Currier R.J., Naides S.J., Church J.A., Puck J.M. Reference Intervals for Lymphocyte Subsets in Preterm and Term Neonates Without Immune Defects. J. Allergy Clin. Immunol., 2019, Vol. 144, no. 6, pp. 1674-1683.

10. Azarsiz E., Karaca N.E., Aksu G., Kutukculer N. Reference values for B-cell surface markers and co-receptors associated with primary immune deficiencies in healthy Turkish children. Int. J. Immunopathol. Pharmacol., 2017, Vol. 30, no. 2, pp. 194-200.

11. Besci Ö., Başer D., Öğülür İ., Berberoğlu A.C., Kıykım A., Besci T., Leblebici A., Ellidokuz H., Boran P., Özek E., Haklar G., Özen A., Barış S., Aydıner E. Reference values for T and B lymphocyte subpopulations in Turkish children and adults. Turk. J. Med. Sci., 2021, Vol. 51, pp. 1814-1824.

12. Borriello F., Pasquarelli N., Law L., Rand K., Raposo C., Wei W., Craveiro L., Derfuss T. Normal B-cell ranges in infants: A systematic review and meta-analysis. J. Allergy Clin. Immunol., 2022, Vol. 150, no. 5, pp. 1216-1224.

13. Christensen R.D., Baer V.L., Gordon P.V., Henry E., Whitaker C., Andres R.L., Bennett S.T. Reference ranges for lymphocyte counts of neonates: associations between abnormal counts and outcomes. Pediatrics, 2012, Vol. 129, no. 5, pp. e1165-e1172.

14. Doyle K., Bunch D.R. Reference intervals: past, present, and future. Crit. Rev. Clin. Lab. Sci., 2023, Vol. 60, no. 6, pp. 466-482.

15. Duchamp M., Sterlin D., Diabate A., Uring-Lambert B., Guerin-El Khourouj V., Le Mauff B., Monnier D., Malcus C., Labalette M., Picard C. B-cell subpopulations in children: National reference values. Immun. Inflamm. Dis., 2014, Vol. 2, no. 3, pp. 131-140.

16. Garcia-Prat M., Alvarez-Sierra D., Aguiló-Cucurull A., Salgado-Perandrés S., Briongos-Sebastian S., Franco-Jarava C., Martin-Nalda A., Colobran R., Montserrat I., Hernández-González M., Pujol-Borrell R., Soler-Palacin P., Martínez-Gallo M. Extended Immunophenotyping Reference Values in a Healthy Pediatric Population. Cytometry B Clin. Cytom., 2019, Vol. 96, no. 3, pp. 223-233.

17. Heldrup J., Kalm О., Prellner K. Blood T and B lymphocyte subpopulations in healthy infants and children. Acta Paediatr., 1992, Vol. 81, pp. 125-132.

18. Jia L., Li J., Zhang Y., Shi Y., Yuan E., Liu J., Wang P., Rong S., Xing J., Tian Y., Li J. Age- and Sex-Related Reference Intervals of Lymphocyte Subsets in Healthy Ethnic Han Chinese Children. Cytometry A, 2015, Vol. 87, no. 12, pp. 1116-1126.

19. Jodhawat N., Bargir U.A., Setia P., Taur P., Bala N., Madkaikar A., Yadav R.M., Dalvi A., Shinde S., Gupta M., Shelar S., Kambli P., Gowri V., Lokeshwar M., Satoskar P., Desai M., Madkaikar M. Normative data for paediatric lymphocyte subsets: A pilot study from western India. Indian. J. Med. Res., 2023, Vol. 158, no. 2, pp. 161-174.

20. Jones G.R.D., Haeckel R., Loh T.P., Sikaris K., Streichert T., Katayev A., Barth J.H., Ozarda Y.. Indirect methods for reference interval determination – review and recommendations. Clin. Chem. Lab. Med., 2018, Vol. 57, no. 1, pp. 20-29.

21. Katayev A., Fleming J.K., Luo D., Fisher A.H., Sharp T.M. Reference intervals data mining: no longer a probability paper method. Am. J. Clin. Pathol., 2015, Vol. 143, no. 1, pp.134-142.

22. Kverneland A.H., Streitz M., Geissler E., Hutchinson J., Vogt K., Boës D., Niemann N., Pedersen A.E., Schlickeiser S., Sawitzki B. Age and gender leucocytes variances and references values generated using the standardized ONE-Study Protocol. Cytometry A, 2016, Vol. 89, no. 6, pp. 543-564.

23. Lerkvaleekul B., Apiwattanakul N., Klinmalai C., Hongeng S., Vilaiyuk S. Age-related changes in lymphocyte subpopulations in healthy Thai children. J. Clin. Lab. Anal., 2020, Vol. 34, no. 5, e23156. doi: 10.1002/jcla.23156.

24. Mandala W.L., Ananworanich J., Apornpong T., Kerr S.J., MacLennan J.M., Hanson C., Jaimulwong T., Gondwe E.N., Rosenblatt H.M., Bunupuradah T., Molyneux M.E., Spector S.A., Pancharoen C., Gelman R.S., MacLennan C.A., Shearer W.T.J. Control Lymphocyte Subsets: Can one country’s values serve for another’s? J. Allergy Clin. Immunol., 2014, Vol. 134, no. 3, pp. 759-761.e8.

25. Morbach H., Eichhorn E.M., Liese J.G., Girschick H.J. Reference Values for B cell subpopulations from infancy to adulthood. Clin. Exp. Immunol., 2010, Vol. 162, no. 2, pp. 271-279.

26. Nikulshin S., Kundzina L., Tolstikova I., Gravele D., Prokofjeva T., Gardovska D. Significant age- and gender-related variability of main lymphocyte subsets in paediatric patients: Latvian data. Scand. J. Immunol., 2018, Vol. 88, no. 2, e12696.

27. Narula G., Khodaiji S., Bableshwar A., Bindra M.S. Age-related reference intervals for immunoglobulin levels and lymphocyte subsets in Indian children. Indian J. Pathol. Microbiol., 2017, Vol. 60, no 3, pp. 360-364.

28. Niu H.Q., Zhao X.C., Li W., Xie J.F., Liu X.Q., Luo J., Zhao W.P., Li X.F. Characteristics and reference ranges of CD4+ T cell subpopulations among healthy adult Han Chinese in Shanxi Province, North China. BMC Immunol., 2020, Vol. 21, no. 1, 44. doi: 10.1186/s12865-020-00374-9.

29. Osugi Y., Hara J., Kurahashi H., Sakata N., Inoue M., Yumura-Yagi K., Kawa-Ha K., Okada S., Tawa A. Age-related changes in surface antigens on peripheral lymphocytes of healthy children. Clin. Exp. Immunol., 1995, Vol. 100, no. 3, pp. 543-548.

30. Ozarda Y., Ichihara K., Jones G., Streichert T., Ahmadian R. IFCC Committee on Reference Intervals and Decision Limits (C-RIDL). Comparison of reference intervals derived by direct and indirect methods based on compatible datasets obtained in Turkey. Clin. Chim. Acta, 2021, Vol. 520, pp. 186-195.

31. Ozarda Y. Reference intervals: current status, recent developments and future considerations. Biochem. Med., 2016, Vol. 26, no. 1, pp. 5-16.

32. Perazzio S.F., Palmeira P., Moraes-Vasconcelos D., Rangel-Santos A., de Oliveira J.B., Andrade L.E.C., Carneiro-Sampaio M. A critical review on the standardization and quality assessment of nonfunctional laboratory tests frequently used to identify inborn errors of immunity. Front. Immunol., 2021, Vol. 12, 721289. doi: 10.3389/fimmu.2021.721289.

33. Piątosa B., Wolska-Kuśnierz B., Pac M., Siewiera K., Gałkowska E., Bernatowska E. B cell subsets in healthy children: reference values for evaluation of B cell maturation process in peripheral blood. Cytometry B Clin. Cytom., 2010, Vol. 78, no. 6, pp. 372-381.

34. Shahal-Zimra Y., Rotem Z., Chezar J., Shochat T., Ross L., Pickholtz I., Rabizadeh E. Lymphocyte subset reference ranges in healthy Israeli adults. Isr. Med. Assoc. J., 2016, Vol. 18, no. 12, pp. 739-743.

35. Siest G., Henny J., Gräsbeck R., Wilding P., Petitclerc C., Queraltó J.M., Hyltoft Petersen P. The theory of reference values: an unfinished symphony. Clin. Chem. Lab. Med., 2013, Vol. 51, no. 1, pp. 47-64.

36. Thakar M., Saxena V., Janakiram N., Ravi V., Desai A., Singh S., Shivanna N., Minz R.Y., Singh A., Chatterjee M., Madkaikar M., Bembalkar S., Mukherjee A., Mahesh V. Reference ranges of different lymphocyte subsets in indian children: a multi-centric study. Indian Pediatr., 2021, Vol. 58, no. 5, pp. 424-429.

37. Tosato F., Buccio G., Pantano G., Putti M.C, Sanzari M.C., Basso G., Plebani M. Lymphocytes subsets reference values in childhood. Cytometry A, 2015, Vol. 87, no. 1, pp. 81-85.

38. Wei B., Guo Y., Zhang L., Zhong H., Miao Q., Yan L., Bai Y., Feng W., Liu W., Niu Q., Yi Li. Reference ranges of T lymphocyte subsets by single-platform among healthy population in southwest China. BMC Immunol., 2021, Vol. 20, Vol. 22, no. 1, 80. doi: 10.1186/s12865-021-00474-0.

39. Zhang K., Wang F., Zhang M., Cao X., Yang S., Jia S., Wang L., Luo J., Deng S., Chen M. Reference ranges of lymphocyte subsets balanced for age and gender from a population of healthy adults in chongqing district of China. Cytometry B Clin. Cytom., 2016, Vol. 90, no. 6, pp. 538-542.