ИССЛЕДОВАНИЕ СУБПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ ПРИ ОЦЕНКЕ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ COVID-19 И В УСЛОВИЯХ ЦИТОКИНОВОГО ШТОРМА

Резюме

Сегодня клинические проявления у больных COVID-19 варьируют от легкого до тяжелого течения, особенно в группах пациентов, подверженных хроническим заболеваниям. Выбор наиболее информативных показателей, обеспечивающих прогноз возможного исхода или тяжелого течения заболевания у пациентов с COVID-19, необходим уже на раннем этапе для определения эффективной тактики лечения. Наиболее ранними предикторами ухудшения состояния больных при COVID-19 являются повышенные значения интерлейкина-6, интерлейкина-10, С-реактивного белка, прокальцитонина и других показателей врожденной иммунной системы. Одной из задач настоящего исследования было определение наиболее информативных показателей общеклинического анализа крови и основных субпопуляций лимфоцитов у пациентов с COVID-19, позволяющих помочь в интерпретации степеней тяжести заболевания и развития цитокинового шторма наряду с клиническими проявлениями и функциональными методами диагностики. Нами проведено ретроспективное когортное исследование периферической крови у 65 больных, из которых было 57 мужчин и 8 женщин, возраст пациентов варьировал от 32 до 82 лет, средний возраст составил 48,6 лет. После исследования общего анализа крови в 65 образцах выполнен цитометрический анализ с использованием системы проточной цитофлюориметрии серии Cytomics™ FC 500 фирмы "Beckman Coulter" (США), моноклональных антител СD45-ECD, CD3-FITC, CD4-PC7, CD8-PE, CD19-PC-5, CD16+56-PE фирмы "Beckman Coulter" (США). Статистическая обработка результатов исследования проведена в программе IBM SPSS Statistics 26.0 (IBM, США). У обследованных нами пациентов с COVID-19 при первичном обращении за медицинской помощью отмечается абсолютная лимфопения на фоне нейтрофилеза, что выражается в повышении значений нейтрофильно-лейкоцитарного и лейкоцитарно-Т-лимфоцитарного индексов. Данные индексы с достаточно высокой информативностью могут использоваться при прогнозировании рисков заболевания. Определение наиболее достоверных показателей клеточного звена иммунитета, таких как CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+,CD3-CD16+CD56+ – лимфоцитов, дополнительно к клиническому анализу крови может дать оценку особенностям иммунного реагирования организма на инфицирование SARS-СoV-2, помочь спрогнозировать тяжесть течения заболевания, а также принять решение для изменения тактики лечения при необходимости.

1. Давыдова Н.В., Путков С.Б., Решетняк Д.В., Казаков С.П. Исследование взаимосвязей и диагностической эффективности цитокинов в оценке степени тяжести больных COVID-19 // Медицинская иммунология. – 2025. – Т. 27, № 2. – С. 379-394. Davydova N.V., Putkov S.B., Reshetnyak D.V., Kazakov S.P. Studying interconnections of cytokines and their diagnostic effectiveness when assessing severity grade in COVID-19 patients. Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya, 2025, Vol. 27, no. 2, pp. 379-394. 10.15789/1563-0625-SIO-3067

2. Кудряшов С.К., Канищев Ю.Н., Путков С.Б., Эсауленко Н.Б., Карпов В.О., Овчаренко В.П., Изгородин А.С., Жукова Э.Э., Суслова Л.А., Паршакова Е.В. Инструкция по проведению преаналитического этапа (порядок взятия, хранения и транспортировки) с биоматериалом для лабораторных исследований в центре клинической лабораторной диагностики ГВКГ им. Н.Н. Бурденко. – М.: Эко-Пресс, 2016. – 220 с. ISBN 975-5-906519-48-1 Kudryashov S.K., Kanishchev Yu.N., Putkov S.B., Esaulenko N.B., Karpov V.O., Ovcharenko V.P., Izgorodin A.S., Zhukova E.E., Suslova L.A., Parshakova E.V. Instructions for conducting the preanalytical stage (procedure for taking, storing and transporting) biomaterial for laboratory research in the Center for Clinical Laboratory Diagnostics of the Main Military Clinical Hospital named after academician N.N. Burdenko Russian Defense Ministry. Moscow: Eko-Press, 2016, 220 p. https://elibrary.ru/item.asp?edn =YLFVVZ

3. Паценко М.Б., Зайцев А.А., Чернов С.А., Стец В.В., Кудряшов О.И., Давыдов Д.В., Чернецов В.А., Крюков Е.В. Практические подходы к лечению пациентов с новой коронавирусной инфекцией (COVID-19) // Военно-медицинский журнал. – 2022. – Т. 343, № 8. – С. 20-27. Patsenko M.B., Zaitsev A.A., Chernov S.A., Stets V.V., Kudryashov O.I., Davydov D.V., Chernetsov V.A., Kryukov E.V. Practical approaches to the treatment of patients with new coronavirus infection (COVID-19). Russian Military Medical Journal, 2022, Vol. 343, no. 8, pp. 20-27. 10.52424/00269050_2022_343_8_20

4. Путков С.Б., Давыдова Н.В., Троян В.Н., Казаков С.П. Исследование взаимосвязи маркеров воспаления с КТ-признаками патологических изменений легких у пациентов с COVID-19 // Медицинский вестник ГВКГ им. Н.Н. Бурденко. 2024. – Т. 5, № 2. – С. 22-31. Putkov S.B., Davydova N.V., Troyan V.N., Kazakov S.P. Investigation of the relationship of inflammatory markers with CT sings of pathological lung changes in patients with COVID-19. Medical Bulletin of the Main Military Clinical Hospital named after N.N. Burdenko, Vol. 5, no. 2, pp. 22-31. 10.53652/2782-1730-2024-5-2-22-31

5. Путков С.Б., Давыдова Н.В., Казаков С.П. Исследование маркеров воспаления и их диагностической эффективности у больных COVID-19 // Медицинский алфавит. – 2023. – № 23. – С. 11-17.

6. Putkov S.B., Davydova N.V., Kazakov S.P. Study of inflammatory markers and their diagnostic effectiveness in patients with COVID-19 patients. Medical Alphabet, no. 23, pp. 11-17. 10.33667/2078-5631-2023-23-11-27

7. Akbari H., Tabrizi R., Lankarani K.B., Aria H., Vakili S., Asadian F., Noroozi S., Keshavarz P., Faramarz S. The role of cytokine profile and lymphocyte subsets in the severity of coronavirus disease 2019 (COVID-19): A systematic review and meta-analysis. Life Sci., 2020, Vol. 258, p. 118167. – 10.1016/j.lfs.2020.118167

8. Assandri R., Buscarini E., Canetta C., Scartabellati A., Viganò G., Montanelli A. Laboratory Biomarkers Predicting COVID-19 Severity in the Emergency Room. Arch. Med. Res., 2020, Vol. 51, no. 6, pp. 598-599. – 10.1016/j.arcmed.2020.05.011

9. Chen J., Lau Y.F., Lamirande E.W., Paddock C.D., Bartlett J.H., Zaki S.R., Subbarao K. Cellular immune responses to severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) infection in senescent BALB/c mice: CD4+ T cells are important in control of SARS-CoV infection. J. Virol., 2010, Vol. 84, no. 3, pp. 1289–1301. – 10.1128/JVI.01281-09

10. Chen Z, Wherry EJ. T cell responses in patients with COVID-19. Nat. Rev. Immunol., 2020, Vol. 20, no. 9, pp. 529-536. – 10.1038/s41577-020-0402-6

11. COVID-19 epidemiological update – 6 November 2024. – http//www.who.int.COVID-19 epidemiological update-6 November 2024

12. Drosten C., Seilmaier M., Corman V.M., Hartmann W., Scheible G., Sack S., Guggemos W., Kallies R., Muth D., Junglen S., Müller M.A., Haas W., Guberina H., Röhnisch T., Schmid-Wendtner M., Aldabbagh S., Dittmer U., Gold H., Graf P., Bonin F., Rambaut A., Wendtner C.M. Clinical features and virological analysis of a case of Middle East respiratory syndrome coronavirus infection. Lancet Infect. Dis., 2013, Vol. 13, no. 9, pp. 745-751. – 10.1016/S1473-3099(13)70154-3

13. García L.F. Immune Response, Inflammation, and the Clinical Spectrum of Covid-19. Front. Immunol., 2020, Vol. 11, p. 1441. – 10.3389/fimmu.2020.01441

14. Giamarellos-Bourboulis E.J., Netea M.G., Rovina N., Akinosoglou K., Antoniadou A., Antonakos N., Damoraki G., Gkavogianni T., Adami M.E., Katsaounou P., Ntaganou M., Kyriakopoulou M., Dimopoulos G., Koutsodimitropoulos I., Velissaris D., Koufargyris P., Karageorgos A., Katrini K., Lekakis V., Lupse M., Kotsaki A., Renieris G., Theodoulou D., Panou V., Koukaki E., Koulouris N., Gogos C., Koutsoukou A. Complex Immune Dysregulation in COVID-19 Patients with Severe Respiratory Failure. Cell. Host. Microbe., 2020, Vol. 27, no. 6, pp. 992-1000.e3. – 10.1016/j.chom.2020.04.009

15. Golovkin A., Kalinina O., Bezrukikh V., Aquino A., Zaikova E., Karonova T., Melnik O., Vasilieva E., Kudryavtsev I. Imbalanced Immune Response of T-Cell and B-Cell Subsets in Patients with Moderate and Severe COVID-19. Viruses, 2021, Vol. 13, no. 10, p. 1966. – 10.3390/v13101966

16. Gu J., Gong E., Zhang B., Zheng J., Gao Z., Zhong Y., Zou W., Zhan J., Wang S., Xie Z., Zhuang H., Wu B., Zhong H., Shao H., Fang W., Gao D., Pei F., Li X., He Z., Xu D., Shi X., Anderson V.M., Leong A.S. Multiple organ infection and the pathogenesis of SARS. J. Exp. Med., 2005, Vol. 202, no. 3, pp. 415-24. – 10.1084/jem.20050828

17. Hsieh W.C., Lai E.Y., Liu Y.T., Wang Y.F., Tzeng Y.S., Cui L., Lai Y.J., Huang H.C., Huang J.H., Ni H.C., Tsai D.Y., Liang J.J., Liao C.C., Lu Y.T., Jiang L., Liu M.T., Wang J.T., Chang S.Y., Chen C.Y., Tsai H.C., Chang Y.M., Wernig G., Li C.W., Lin K.I., Lin Y.L., Tsai H.K., Huang Y.T., Chen S.Y. NK cell receptor and ligand composition influences the clearance of SARS-CoV-2. J. Clin. Invest., 2021, Vol. 131, no. 21, p. e146408. – 10.1172/JCI146408

18. Hu B., Guo H., Zhou P., Shi Z.-L. Characteristics of SARS-CoV-2 and COVID-19. Nat. Rev. Microbiol., 2021, Vol. 19, no. 3, pp. 141-154. – 10.1038/S41579-020-00459-7

19. Izcovich A., Ragusa M.A., Tortosa F., Marzio M.A.L., Agnoletti C., Bengolea A., Ceirano A., Espinosa F., Saavedra E., Sanguine V., Tassara A., Cid C., Catalano H.N., Agarwal A., Foroutan F., Rada G. Prognostic factors for severity and mortality in patients infected with COVID-19: A systematic review. PLoS One, 2020, Vol. 15, no. 11, p. e0241955. – 10.1371/journal.pone.024195526

20. Jiang Y., Xu J., Zhou C., Wu Z., Zhong S., Liu J., Luo W., Chen T., Qin Q., Deng P. Characterization of cytokine/chemokine profiles of severe acute respiratory syndrome. Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2005, Vol. 171, no. 8, pp. 850-857. – 10.1164/rccm.200407-857OC

21. Liao M., Liu Y., Yuan J., Wen Y., Xu G., Zhao J., Cheng L., Li J., Wang X., Wang F., Liu L., Amit I., Zhang S., Zhang Z. Single-Cell Landscape of Bronchoalveolar Immune Cells in Patients With COVID-19. Nat. Med., 2020, Vol. 26, no. 6, pp. 842-844. – 10.1038/s41591-020-0901-9

22. Liu J., Li S., Liu J., Liang B., Wang X., Wang H., Li W., Tong Q., Yi J., Zhao L., Xiong L., Guo C., Tian J., Luo J., Yao J., Pang R., Shen H., Peng C., Liu T., Zhang Q., Wu J., Xu L., Lu S., Wang B., Weng Z., Han C., Zhu H., Zhou R., Zhou H., Chen X., Ye P., Zhu B., Wang L., Zhou W., He S., He Y., Jie S., Wei P., Zhang J., Lu Y., Wang W., Zhang L., Li L., Zhou F., Wang J., Dittmer U., Lu M., Hu Y., Yang D., Zheng X. Longitudinal characteristics of lymphocyte responses and cytokine profiles in the peripheral blood of SARS-CoV-2 infected patients. EBioMedicine, 2020, Vol. 55, p. 102763. – 10.1016/j.ebiom.2020.102763

23. National Research Project for SARS, Beijing Group. The involvement of natural killer cells in the pathogenesis of severe acute respiratory syndrome. Am. J. Clin. Pathol., 2004, Vol. 121, no. 4, pp. 507-511. – 10.1309/WPK7-Y2XKNF4C-BF3R

24. Orange J.S. Human natural killer cell deficiencies and susceptibility to infection. Microbes Infect., 2002, Vol. 4, no. 15, pp. 1545–1558. – 10.1016/s1286-4579(02)00038-2

25. Osman M.S., van Eeden C., Cohen Tervaert J.W. Fatal COVID-19 infections: Is NK cell dysfunction a link with autoimmune HLH? Autoimmun. Rev., 2020, Vol. 19, no. 7, p. 102561. – 10.1016/j.autrev.2020.102561

26. Putkov S., Davydova N., Kazakov S. laboratory indicators of inflammation in the development of cytokine storm in patients with COVID-19. Clinica Chimica Acta, 2024, Vol. 558, p. 119179. – 10.1016/j.cca.2024.119179

27. Qin C., Zhou L., Hu Z., Zhang S., Yang S., Tao Y., Xie C., Ma K., Shang K., Wang W., Tian DS. Dysregulation of immune response in patients with COVID-19 in Wuhan, China. Clin. Infect. Dis., 2020, Vol. 71, no. 15, pp. 762-768. – 10.1093/cid/ciaa248

28. Radzikowska U., Ding M., Tan G., Zhakparov D., Peng Y., Wawrzyniak P., Wang M., Li S., Morita H., Altunbulakli C., Reiger M., Neumann A.U., Lunjani N., Traidl-Hoffmann C., Nadeau K.C., O'Mahony L., Akdis C., Sokolowska M. Distribution of ACE2, CD147, CD26, and other SARS-CoV-2 associated molecules in tissues and immune cells in health and in asthma, COPD, obesity, hypertension, and COVID-19 risk factors. Allergy, 2020, Vol. 75, no. 11, pp. 2829-2845. – 10.1111/all.14429

29. Shimizu M. Clinical Features of Cytokine Storm Syndrome. Adv. Exp. Med. Biol., 2024, Vol. 1448, pp. 33-42. – 10.1007/978-3-031-59815-9_4

30. Tay M.Z., Poh C.M., Rénia L., MacAry P.A., Ng L.F.P. The trinity of COVID-19: immunity, inflammation and intervention. Nat. Rev. Immunol., 2020, Vol. 20, no. 6, pp. 363-374. – 10.1038/s41577-020-0311-8

31. Vabret N., Britton G.J., Gruber C., Hegde S., Kim J., Kuksin M., Levantovsky R., Malle L., Moreira A., Park M.D., Pia L., Risson E., Saffern M., Salomé B., Esai Selvan M., Spindler M.P., Tan J., van der Heide V., Gregory J.K., Alexandropoulos K., Bhardwaj N., Brown B.D., Greenbaum B., Gümüş Z.H., Homann D., Horowitz A., Kamphorst A.O., Curotto de Lafaille M.A., Mehandru S., Merad M., Samstein R.M.; Sinai Immunology Review Project. Immunology of COVID-19: Current State of the Science. Immunity, 2020, Vol. 52, no. 6, pp. 910-941. – 10.1016/j.immuni.2020.05.002

32. Velavan T.P., Meyer C.G. Mild versus severe COVID-19: Laboratory markers. Int. J. Infect. Dis., 2020, Vol. 95, pp. 304-307. – 10.1016/j.ijid.2020.04.061

33. Wang F., Hou H., Luo Y., Tang G., Wu S., Huang M., Liu W., Zhu Y., Lin Q., Mao L., Fang M., Zhang H., Sun Z. The laboratory tests and host immunity of COVID-19 patients with different severity of illness. JCI Insight, 2020, Vol. 5, no. 10, p. e137799. – 10.1172/jci.insight.137799

34. Yang X., Yu Y., Xu J., Shu H., Xia J., Liu H., Wu Y., Zhang L., Yu Z., Fang M., Yu T., Wang Y., Pan S., Zou X., Yuan S., Shang Y. Clinical course and outcomes of critically ill patients with SARS-CoV-2 pneumonia in Wuhan, China: a single-centered, retrospective, observational study. Lancet Respir. Med., 2020, Vol. 8, no. 5, pp. 475-481. – 10.1016/S2213-2600(20)30079-5

35. Zhao S., Lin Q., Ran J., Musa S.S., Yang G., Wang W., Lou Y., Gao D., Yang L., He D., Wang M.H. Preliminary estimation of the basic reproduction number of novel coronavirus (2019-nCoV) in China, from 2019 to 2020: A data-driven analysis in the early phase of the outbreak. Int. J. Infect. Dis., 2020, Vol. 92, pp. 214-217. – 10.1016/j.ijid.2020.01.050

36. Zheng H.Y., Zhang M., Yang C.X., Zhang N., Wang X.C., Yang X.P., Dong X.Q., Zheng Y.T. Elevated exhaustion levels and reduced functional diversity of T cells in peripheral blood may predict severe progression in COVID-19 patients. Cell. Mol. Immunol., 2020, Vol. 17, no. 5, 541-543. – 10.1038/s41423-020-0401-3

37. Zheng M., Gao Y., Wang G., Song G., Liu S., Sun D., Xu Y., Tian Z. Functional exhaustion of antiviral lymphocytes in COVID-19 patients. Cell. Mol. Immunol., 2020, Vol. 17, no. 5, pp. 533–535. – 10.1038/s41423-020-0402-2