В обзоре анализируются данные литературы, посвященной характеристике полиморбидности, ее взаимосвязи со старением иммунной системы и низкоуровневым воспалением старения, механизмам их развития и путям поиска методов профилактики и лечения возраст-ассоциированных заболеваний. Прослежена эволюция понятий «коморбидность» и «полиморбидность», дано  современное определение полиморбидности, показано, что распространенность полиморбидности растет во всем мире и в настоящее время достигает 23-25% общего числа населения и до 98% – у людей в возрасте 65 лет и старше. Анализируются факторы риска развития полиморбидности, ее социальное бремя, которое определяется высокой нагрузкой на учреждения здравоохранения, повышенной частотой летальных исходов, избыточным лечением, обусловленным участием специалистов разного профиля. Приводятся доказательства того, что старение и полиморбидность связывают сходные молекулярные и клеточные механизмы, объединенные понятием “inflammaging” (инфламэйджинг – ИЭ), которое представляет собой  вялотекущее хроническое системное воспаление при  старении. Представлены данные, свидетельствующие о том,  что в развитии ИЭ  принимают участие  стареющие клетки врожденного и адаптивного иммунитета, различные про и противовоспалительные медиаторы, пожизненная антигенная нагрузка. Анализируются сведения о функциональных и структурных изменениях врожденной и адаптивной иммунной системы при  старении, роли  этих  изменений в персистенции ИЭ  и возникновении полиморбидных заболеваний. Показано, что существует сложная взаимосвязь между старением всего организма и старением иммунной системы, механизмы которых в ряде случаев почти идентичны, в других сильно отличаются, возникают совместно, взаимно влияя друг на друга. С течением возраста, при наличии факторов риска, измененный адптивный иммунитет большинства людей  не способен полноценно справляться с хронической антигенной нагрузкой, что увеличивает риск развития болезней. С другой стороны, у многих пожилых людей эти изменения компенсируются постоянной активацией клеток врожденного иммунитета. Подчеркивается, что процесс старения и возникновение болезни (полиморбидности) нельзя рассматривать как  отдельные явления, поскольку они, существенно отличаясь по своей  природе, могут  взаимодействовать. В перспективе следует сосредоточить усилия на выяснении молекулярных и клеточных механизмов этих  взаимодействий, решении задач,  направленных на разработку таких вмешательств, которые были бы способны уменьшать  вредные последствия старения и использовать полезные эффекты для сохранения здоровья и достижения максимальной продолжительности жизни.

Макрофаги (Мφ) играют ключевую роль в регуляции процессов фиброгенеза, включая пролиферацию фибробластов и миофибробластов, дифференцировку клеток-предшественников в миофибробробласты, а также синтез и секрецию компонентов внеклеточного матрикса, преимущественно, коллагена. Направленность эффектов Мφ (стимуляция или подавление) определяется рядом факторов, в том числе стадией фибротического процесса и функциональным фенотипом Мφ, который зависит от сигналов микроокружения. Один из возможных путей регуляции фиброгенеза заключается в секреции Мφ про- или антифиброгенных факторов, включая матриксные металлопротеиназы, ингибиторы металлопротеиназ и некоторые цитокины. Однако данные о способности различных субпопуляций Мφ человека секретировать эти факторы крайне немногочисленны и противоречивы. Целью настоящего исследования была характеристика способности М1, М2а и М2с Мφ человека, дифференцированных в присутствии гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора, продуцировать матриксные металлопротеиназы (ММР-9) и их тканевые ингибиторы (TIMP-1), а также некоторые цитокины и ростовые факторы. Показано, что по сравнению с М2 макрофагами, М1 Мφ, поляризованные липополисахаридом, продуцировали значимо больше TNF-α, IL-6 и IL-2, которые помимо провоспалительной активности обладают, как было показано, способностью инициировать фибротический процесс. В свою очередь, М2а Мφ, индуцированные IL-4, характеризовались высоким уровнем продукции VEGF и при этом низким уровнем TNF-α и IL-6, что может обусловливать важное участие этих клеток на пролиферативной стадии фиброза и стимулировать активное отложение внеклеточного матрикса. И наконец, М2с Мφ, поляризованные в присутствии дексаметазона, характеризовались схожим с М2а Мφ спектром исследуемых цитокинов, и активно продуцировали VEGF на фоне низкой продукции TNF-α и IL-6. При этом, все три исследуемые субпопуляции Мφ активно секретировали ММР-9 и TIMP-1, не различаясь значимо между собой по уровню продукции этих факторов. Однако М2с Мφ отличались значимо более высоким индексом соотношения MMP-9/TIMP-1 по сравнению с М1 и М2а Мφ, что играет решающее значение на стадии реорганизации фибротического процесса. Таким образом, продукция различными типами Мφ MMP-9 и TIMP-1, в совокупности с другими плейотропными цитокинами и ростовыми факторами, может отражать их роль в регуляции различных стадий фибротического процесса.

Отделяющиеся от плазматической мембраны клетки экстраклеточные везикулы служат транспортерами широкого спектра молекул, среди  которых важное функциональное значение придается  белкам, липидам, нуклеиновым кислотам и сахарам. Цитотоксические белки  естественных киллеров играют  ключевую роль  в осуществлении их цитолитических функций. Одним из важных этапов в понимании дистантной коммуникации клеток и механизмов ее регуляции является определение протеомного состава микровезикул. Целью данного исследования явилось изучение протеомного состава микровезикул, образуемых клетками естественных киллеров линии NK-92. В результате MALDI-TOF-масс-спектрометрического анализа белковых фракций лизата  микровезикул было идентифицировано 986 белков, выполняющих различные функции. С помощью автоматизированных  методов функционального анализа показано, что  наибольшие по  численности группы белков представляют гипотетические белки, белки  c неизвестными функциями, домены. Наиболее представительные группы также образуют регуляторы транскрипции, белки  внутриклеточной сигнализации, регуляторы трансляции,  транскрипции,  процессинга и  утилизации РНК,  рецепторы, регуляторы процессинга и протеолиза белков, ферменты обмена аминокислот, а также  транспортные белки  и регуляторы транспорта. Минорные функциональные группы представлены ферментами обмена витаминов и минерального обмена, мембранными и микродоменобразующими белками, гормонами, регуляторами гемостаза, сенсорных систем, специфическими митохондриальными белками и белками аппарата Гольджи, белками межклеточной сигнализации. Промежуточное положение занимают различные функциональные группы, в том числе  белки  цитоскелета, структурные и моторные белки, белки  центриолей, ионные каналы и их регуляторы, белки  убиквитин-протеасомной системы деградации белков, ферменты обмена липидов, стероидов и жирных кислот, нуклеиновых (азотистых) оснований, углеводов, а также  ферменты энергетического обмена и другие белки-участники промежуточного метаболизма, белки  иммунного ответа  и воспаления, антигены и белки  гистосовместимости, цитокины и факторы роста, регуляторы апоптоза, аутофагоцитоза, эндоцитоза и экзоцитоза, регуляторы клеточного цикла и деления, регуляторы пролиферации, клеточной дифференцировки и морфогенеза, регуляторы клеточной адгезии, метаболизма матрикса и адгезии к нему, ядерные транспортные белки, белки  транспозиции, белки  систем репликации и репарации ДНК, а также  неактивные белки. Полученные данные расширяют имеющиеся представления о дистантной коммуникации клеток и указывают на новые механизмы взаимодействия естественных киллеров и клеток-мишеней.

Экспериментальная  черепно-мозговая  травма   (ЧМТ)  вызывает  устойчивую стрессреакцию и изменяет экспрессию генов  различных цитокинов и нейротрофических факторов. Целью настоящего исследования было  определение изменений уровней гормонов кортикостерона, тестостерона и цитокина BDNF в сыворотке крови, а также  экспрессии гена  BDNF в гипоталамусе, для определения возможности коррекции развивающихся нарушений препаратом rIL-2. Использовали крысиную модель «падающего груза»: груз массой 115 г падал с высоты 80 см при моделировании легкой травмы и с высоты 120 см для нанесения травмы средней тяжести. После ЧМТ (непосредственно или через  72 часа)  крысам ежедневно вводили рекомбинантный человеческий интерлейкин-2 (Ронколейкин) в дозе 30 мкг/кг, на курс  3 инъекции. Контрольным животным (также с ЧМТ) по той же схеме  вводили 0,15  М  NaCl. Определение концентрации кортикостерона, тестостерона и BDNF в крови проводили с помощью ELISA.  Экспрессия гена  BDNF в гипоталамусе определялась методом ПЦР-РВ. Эксперименты показали связь  концентраций гормонов со  степенью тяжести ЧМТ. При ЧМТ легкой степени пик  кортикостерона в крови отмечали через  2 часа  после  травмы, а при  ЧМТ средней тяжести пик  концентрации кортикостерона был  меньшим и отсроченным (через  24 часа). Концентрации кортикостерона и тестостерона реципрокно изменялись в обеих  группах  травмированных животных. При  введении rIL-2 в обоих режимах отмечалось существенное повышение уровней  кортикостерона и тестостерона. На  7 сутки  после  ЧМТ уровень BDNF в сыворотке крови достоверно снижался, но после  введения rIL-2 в обоих  режимах уровень BDNF повышался, при  этом изменения были  более  выражены при  введении rIL-2 сразу  после  ЧМТ. Интересно, что экспрессия гена  BDNF в гипоталамусе на 7 сутки  после  ЧМТ повышалась только в случае  введения rIL-2 через 72 часа после  ЧМТ. Установленные в работе положительные ассоциации уровней BDNF и глюкокортикоидных гормонов при ЧМТ легкой степени, а также  возможности координации этих параметров при  введении rIL-2 при  экспериментальной ЧМТ средней степени тяжести, позволяют предположить,  что благоприятные эффекты rIL-2 на восстановительные процессы в ЦНС при ЧМТ частично опосредованы взаимным модулирующим воздействием BDNF и глюкокортикоидных гормонов.

         

Цель работы – выявить количественные соотношения, существующие между путями клеточной смерти в норме и при диффузной иммунокомплексной патологии.

Соотношение различных путей  клеточной смерти (аутофагия, апоптоз, некроз) при  аутоиммунных  системных заболеваниях соединительной ткани (СЗСТ) – ревматоидном артрите (РА),  системной красной волчанке (СКВ) и системной склеродермии (ССД) подвержено возрастным изменениям. С одной стороны, процесс старения можно рассматривать как генетически детерминированное общее снижение адаптивного потенциала организма и системную реакцию хронического возрастного воспаления, с выраженным цитокиновым провоспалительным сдвигом. С другой – в основе мультисистемности  и полиорганности функционально-метаболических нарушений при  системных заболеваниях соединительной ткани лежит полигенное снижение энергоинформационной емкости клеток.

Анализировали плазму крови у пациентов двух возрастных групп.  Первую группу  составили:  10 больных СКВ  (4 мужчин и 6 женщин, средний возраст 43,8 года),  13 больных РA (5 мужчин и 8 женщин, средний возраст 45,6 года), 7 ССД (женщины, средний возраст 35,8 года) и 10 здоровых доноров (6 мужчин и 4 женщины, средний возраст 40,7 года).  Вторую (возрастную) группу составили: 9 больных СКВ  (2 мужчины и 7 женщин, средний возраст 69,8 года),  10 больных РA (5 мужчин и 5 женщин, средний возраст 65,6 года),  5 больных ССД  (женщины, средний возраст 65,7 года) и 12 здоровых доноров (нормальное биологическое старение – 7 мужчин и 5 женщин, средний возраст 64,7 года).

Представленные в настоящей работе материалы получены при информированном согласии пациентов  на участие. При  проведении научных биомедицинских исследований пользовались международно  признанным этическим стандартом – Хельсинкской декларацией Международной медицинской  ассоциации 1996 года, пересмотренной в 2013 г.

Выявлено тесное взаимодействие между путями клеточной смерти при СЗСТ (наиболее ярко  выраженное при  СКВ), сопряженное с возрастными изменениями и клиническими проявлениями аутоиммунного процесса. При  СЗСТ проявляются все типы  клеточной смерти, однако степень их выраженности находится в зависимости от нозологической формы заболевания. Аутофагия в развитии системной диффузной патологии соединительной ткани (особенно в случае  СКВ, а также  РА) принимает непосредственное участие  в формировании иммунного ответа  и воспалительного процесса. При  нормальном биологическом старении, так  же как  и при  СЗСТ, наблюдается резкое возрастание  активности метаболического триггера – аденозинмонофосфат-активированной протеинкиназы (AMPK) (сенсора внутриклеточной энергии), а также:  смещается кислотно-щелочное равновесие, возрастает количество активных форм  кислородных радикалов, изменяется red-ox  потенциал клеток, идет активация компонентов клеточной деструкции, нарушается деятельность цитокиновой системы организма (цитокины – регуляторы апоптоза), снижается экспрессия шаперонов и смещается иммуно-оксигеназный  гомеостаз. Ингибирование генетически детерминированного процесса гибели клеток – апоптоза – лежит  в основе развития аутоиммунных заболеваний. Поздний апоптоз, перетекающий во вторичный некроз, сопровождается снижением антиоксидантной защиты, развитием аутоиммунной патологии. Шаперон-опосредованная  индукция иммунного ответа  как  сигнальный механизм аутофагии, закрепленный эволюционно только у млекопитающих, возможно, является общим  центральным звеном и «молекулярным переключателем», вызывающим развитие как  аутоиммунных заболеваний соединительной ткани, так и геронтологических процессов.

В патогенез ишемического инсульта активно вовлечена система врожденного иммунитета. В условиях церебральной ишемии высвобождается ряд биологически активных веществ, которые взаимодействуют с рецепторами врожденного иммунитета, в частности TLR2 и TLR4, что усугубляет воспаление в тканях головного мозга.  Выявление предикторов на уровне  системы врожденного иммунитета может  позволить прогнозировать клиническое течение ишемического инсульта и обеспечить  проведение своевременной терапии. Цель  работы – изучение экспрессии рецепторов TLR2  и TLR4 в лейкоцитах периферической крови у больных с ишемическим инсультом в динамике заболевания. В исследование включено 27 человек. Основная группа – пациенты с ишемическим инсультом различной степени тяжести (n = 19). Пациенты основной группы были разделены на две подгруппы: со значением индекса NIHSS менее  10 (n = 10) и более 10 (n = 9). Контрольная группа  включала здоровых доноров с отсутствием острых  и хронических воспалительных заболеваний в анамнезе (n = 8). В  качестве  исследуемого материала  были   использованы лейкоциты периферической  крови. Для определения экспрессии генов TLR2 и TLR4 применялся метод ОТ-ПЦР в реальном времени. Определение поверхностной экспрессии TLRs осуществлялось с помощью проточной цитофлуориметрии.

Изучение экспрессии генов  TLR2  и TLR4  показало, что на  1-е,  3-и  и 7-е  сутки  после  развития инсульта экспрессия гена  TLR4  у больных достоверно повышена по сравнению с группой контроля (р < 0,01),  в то время как  экспрессия гена  TLR2  на 3-и  сутки  болезни статистически не отличается от контрольной группы. Проведенное исследование поверхностной экспрессии рецепторов показало, что средняя интенсивность флуоресценции TLR2  на моноцитах периферической крови больных достоверно повышена на 1-е  и 3-и  сутки  развития заболевания по сравнению с группой контроля. Поверхностная экспрессия TLR4  на моноцитах имеет  статистически достоверное повышение лишь на 7-е сутки.  Оценка данных поверхностной экспрессии TLRs  в подгруппах с разными значениями тяжести по NIHSS показала, что пациенты с индексом NIHSS > 10 имели достоверно более высокий уровень поверхностной экспрессии TLR2  в течение всего  периода наблюдения, в то время как  наибольшая разница в экспрессии TLR4  в подгруппах наблюдалась в 1-е  сутки  заболевания (p < 0,05). У пациентов с ишемическим инсультом выявлено повышение экспрессии TLR2  и TLR4  на уровне генов  и молекул по сравнению со здоровыми донорами. Данные показатели могут рассматриваться в качестве возможных предикторов прогноза ишемического инсульта.

Раннее прогнозирование исходов ишемического инсульта (ИИ) является важной задачей, поскольку может  помочь в оптимизации лечебной программы и персонификации лечения. Учитывая, что при инсульте Т-лимфоциты с регуляторной активностью участвуют  в различных патофизиологических процессах, включая воспаление, иммунодепрессию, поражение и репарацию мозговой ткани, исследование Т-клеток в качестве потенциальных биомаркеров представляет особое значение.  Целью работы явилось исследование субпопуляций циркулирующих Т-клеток  с  фенотипом Т-хелперов 1 типа  (Тh1), регуляторных Т-клеток (Тreg)  и их соотношения у пациентов в остром периоде  ИИ в зависимости от тяжести, выраженности воспалительного ответа  и 3-месячного исхода (по  модифицированной шкале Рэнкина, mRs).  В исследование был  включен 61 пациент с впервые выявленным ИИ (тяжесть по шкале NIHSS ≥ 5 баллов) в остром периоде (24-48  ч после  инсульта) и 20 сопоставимых по полу  и возрасту доноров. Лабораторное обследование включало оценку лейкоцитоза, нейтрофильно-лимфоцитарного индекса (НЛИ) и СРБ. Исследование Т-клеток проводили в популяции мононуклеарных клеток периферической крови. Тh1 и Тreg оценивали, соответственно, по содержанию CD4⁺IFNγ⁺  и CD4⁺CD25^hiТ-клеток методом проточной цитофлюориметрии. В первые  24-48  ч с момента нарушения мозгового кровообращения пациенты характеризовались повышенными показателями лейкоцитоза, НЛИ и СРБ. Тяжесть инсульта ассоциировалась с большей выраженностью системной воспалительной реакции, что подтверждалось достоверно более  высокими показателями лейкоцитоза, НЛИ и СРБ при тяжелом инсульте, чем при инсульте легкой степени тяжести, а также  наличием прямой взаимосвязи NIHSS с уровнем НЛИ и СРБ. Также  у пациентов отмечалось достоверное снижение CD4⁺IFNγ⁺Тh1-клеток, возрастание CD4⁺CD25^hiТreg и выраженное снижение индекса Th1/Treg. При этом в группе с NIHSS ≥ 8 (среднетяжелый и тяжелый инсульт) доля CD4⁺IFNγ⁺Т-клеток  находилась в прямой, а содержание CD4⁺CD25^hiТ-клеток – в обратной корреляционной зависимости с уровнем СРБ и НЛИ. Изменения Т-клеточных субпопуляций были  более выражены у пациентов с благоприятным 3-месячным исходом (mRs  > 3). В результате пациенты с неблагоприятным исходом (mRs  ≤ 3) отличались от оппозитной группы более  высоким содержанием CD4⁺IFNγ⁺, меньшим уровнем CD4⁺CD25^hiТ-клеток и более (4-кратно) высоким индексом соотношения CD4⁺IFNγ⁺/CD4⁺CD25^hi. ROC-анализ выявил «хорошее»  качество прогноза, основанного на  оценке индекса CD4+IFNγ⁺/CD4⁺CD25^hi   в качестве монопредиктора  неблагоприятного исхода (AUC  = 0,75)  и «очень  хорошее» качество прогноза при  комбинации указанного индекса с баллом по  шкале NIHSS (AUC   = 0,82).  Полученные данные позволяют предположить, что  уменьшение Th1/Тreg индекса за счет снижения CD4⁺IFNγ⁺  и повышения CD4⁺CD25^hiТ-клеток в остром периоде ИИ является компенсаторной реакцией, направленной на  сдерживание воспалительного ответа,  и характеризуется прогностической значимостью при  использовании в качестве раннего предиктора 3-месячного исхода.

Хроническая боль в организме человека остается сложной задачей для диагностики. Она проявляется многокомпонентными симптомами и приводит к нарушению регуляции многих биохимических систем. Для  оценки боли  перспективными являются методы, основанные на  измерении  факторов нейрогуморальной регуляции, принимающих участие  в передаче болевого сигнала. К  ним  относятся иммунологические показатели, такие  как  естественные антитела (е-Ат), которые могут специфически взаимодействовать с эндогенными биорегуляторами болевого импульса (ЭБ), в частности с серотонином, дофамином, и модулировать процесс развития боли.  Метаболизм антител характеризуется более  длительной циркуляцией в кровотоке по  сравнению с самими ЭБ.  Поэтому содержание е-Ат к ЭБ отражает долговременные изменения в организме при  развитии хронической боли. Выявление взаимосвязи их уровня с динамикой процесса лечения позволит установить прогностическую роль иммунологических показателей в объективизации болевого статуса пациентов.

В работе  обследовано 136 больных (70 женщин и 66 мужчин) с хроническим болевым синдромом. Пациентам проводили определение е-Ат к дофамину, серотонину и опрос  по визуально-аналоговой шкале для оценки интенсивности боли. Измерение показателей выполняли в динамике на 1-й,10-й и 21-й день лечения.

В результате исследования установлено значимое снижение интенсивности боли на 63% у женщин и на 71% у мужчин. Уровни е-Ат для пациентов, поступивших на лечение, изначально были определены в основном как повышенные и высокие. Динамика изменения е-Ат имела разнонаправленный характер. На 21 день выявлено увеличение встречаемости нормальных уровней е-Ат к серотонину у 52% женщин и у 59% мужчин. Содержание е-Ат к дофамину в этот период регистрировали на нормальном уровне  у 56% женщин, а для 50% мужчин он оставался на повышенном уровне  и у 17% – высоком.

Таким образом, обследование пациентов с ХБС  показало, что на фоне  проводимой терапии происходит снижение интенсивности боли,  а антитела к регуляторам боли  продолжают циркулировать в  повышенных концентрациях. Вероятно, поддержание организмом патологически повышенных уровней е-Ат к ЭБ, отражающих содержание самих ЭБ, способствует пролонгации ХБС. Мониторинг индивидуального профиля иммунологических показателей е-Ат к ЭБ у пациентов может  иметь  прогностическое значение для выбора эффективной, персональной лечебной программы.

Повреждение суставов инициирует асептическое воспаление, которое, являясь самоподдерживающимся процессом, способствует прогрессирующей посттравматической деструкции тканей не только в патологическом очаге, но и за его пределами, значительно расширяя зону дегенеративных изменений за счет вторичной альтерации. Одному из ведущих  звеньев патогенеза воспаления – секретируемым межклеточным медиаторам-цитокинам – принадлежит ведущая роль  в поддержании воспалительного процесса и формировании провоспалительного потенциала клеток, что приводит к дезорганизации внеклеточного матрикса и прогрессирующей дезинтеграции хряща. В связи  с этим актуальны вопросы разработки и внедрения новых  патогенетических методов лечения посттравматического синовита, которые позволят в ранние сроки ограничить площадь вторичной альтерации и активировать репаративные механизмы в очаге  повреждения, что  улучшит  результаты восстановительного периода и повысит эффективность традиционных методов терапии. Многочисленными экспериментальными и  клиническими  исследованиями доказана эффективность  и  безопасность озонотерапии, в том числе  при  дегенеративных заболеваниях суставов. Несмотря на большой объем представленных сведений, освещающих эффективность озонотерапии при суставной патологии, изучению  особенностей цитокинового профиля при  данном методе  лечения посттравматического синовита посвящено недостаточное количество работ, что подчеркивает перспективность дальнейших исследований в этом направлении.

Цель  исследования – изучение и оценка влияния внутривенной и внутрисуставной озонотерапии в сочетании с внутрисуставным введением ксефокама на показатели цитокиновой сети у больных с посттравматическим синовитом.

Работа основывается на результатах исследования и лечения 69 больных с травматическими повреждениями коленного сустава, осложненными  развитием посттравматического синовита. Формировались 2 исследуемые группы, сопоставимые по объему  и характеру травмы сустава.  Больные I группы (35 человек) получали комплексное традиционное лечение. Среди  обязательных мероприятий выполнялось удаление пунктата синовиально-геморрагического характера из суставной полости поврежденного сустава.  Консервативная терапия включала НПВС, препараты, улучшающие микроциркуляцию, в стандартных дозировках, а также  физиотерапевтические методы  лечения. У пациентов  II  группы (34 больных) традиционная терапия дополнялась 10-дневным курсом внутривенной озонотерапии, включающей введение 200 мл 0,9%  озонированного раствора NaCl  в концентрации 2,0 мг/л ежедневно, наряду  с внутрисуставным введением озона концентрацией 5 мг/л в объеме 20 мл с интервалом через день,  в количестве 5 процедур. Во время выполнения артроскопии производился проточно-промывной лаваж сустава  озонированным раствором NaCI в концентрации 2,0 мг/л. Озонотерапия сочеталась с трехкратным внутрисуставным введением ксефокама в дозе 8 мг 1 раз в 4 дня. На  данную  технологию лечения получен патент на изобретение (№  2456988 от 27.07.12  г.). Цитокиновый статус пациентов оценивался по содержанию провоспалительных (TNFα, IL-1β, IL-17, IL-6), регуляторного (IL-2), противовоспалительных (IL-4, IL-10) цитокинов и рецепторного антагониста IL-1β методом твердофазного иммуноферментного анализа с индикаторной меткой в виде пероксидазы. Статистический анализ результатов проведен посредством критерия Стьюдента.

Комплексная терапия, включающая внутривенную и внутрисуставную озонотерапию в сочетании с внутрисуставным введением ксефокама способствовала ингибированию воспалительной реакции, что отразилось в динамике депрессии исследуемых цитокинов: синхронному снижению уровня провоспалительных цитокинов  одновременно с  ограничением роста  концентрации противовоспалительных медиаторов воспаления. Итоговые замеры показали снижение содержания провоспалительных цитокинов: TNFα на 24,6% (p₂  < 0,001),  IL-17  – на 17,3% (p₂  < 0,01),  IL-6  – на 20,1% (p₂  < 0,001), IL-1β – на 19,1% (p₂  < 0,001),  уменьшение уровня регуляторного IL-2  – на 25,7% (p₂  < 0,001) и противовоспалительных цитокинов IL-10  – на 21,3% (p₂   < 0,001),  IL-4  – на 25,7% (p₂   < 0,001),  IL-1ra – на 24,4% (p₂  < 0,001),  по отношению к данным, полученным при традиционном лечении.

Полученные  результаты позволяют оценивать  этот  метод  как  высокоэффективный в  лечении посттравматического синовита, который способствует подавлению интенсивности воспалительной реакции и уменьшению вторичной альтерации тканевых структур сустава, предупреждая прогрессирование посттравматического остеоартроза.

В соответствии с новыми взглядами на пути и принципы коммуникации основных регуляторных систем организма – иммунной и нейроэндокринной, существует вероятность, что дезинтеграция/дезорганизация путей  и структур этих систем могут лежать  в основе таких  нарушений, как расстройства аутистического спектра (РАС)  и расстройства шизофренического спектра (РШС). Обе патологии относят к нарушениям нейроразвития, с неясной этиологией, общими факторами риска, частично перекрывающимися патофизиологическими механизмами развития. Диагностика РАС  и РШС опирается на  характеристику клинических симптомов/синдромов,  демонстрирующих высокую гетерогенность и общность между  этими расстройствами. В результате поиск путей  сепарации РАС от РШС приобретает особую значимость при изучении расстройств нейроразвития у детей. Цель исследования – выделить показатели периферической активности иммунной и нейроэндокринной систем и их интеграции для использования в качестве информационных узлов конгруэнтности и фенотипической пластичности этих систем у детей  с РАС в сравнении с детьми  с РШС. Были определены  уровни 14 показателей иммунной и нейроэндокринной систем в циркуляции у 82 детей с РАС, 9 детей  с РШС и 45 детей  с типичным нейроразвитием (ТРД). Для оценки интеграции иммунной и нейроэндокринной систем на периферии применяли многомерный эксплораторный анализ методом нелинейных главных компонент по алгоритму CATPCA. Результаты оценки показателей иммунной и нейроэндокринной систем у детей продемонстрировали: 1) отсутствие различий по уровням провоспалительных цитокинов между детьми  с РАС и ТРД;  2) у детей с РШС – значимо высокие величины IL-6  и IFNγ и низкие – IL-1β, TNFα и IL-10  по сравнению с детьми  с РАС и ТРД;  3) уровень нейрогормонов в циркуляции у детей  с РАС  соответствовал таковому у ТРД  (физиологическая норма), а у детей  с РШС – низкие уровни адреналина и дофамина по сравнению с РАС и дофамина – с ТРД; 4) интеграция регуляторных систем была оценена с помощью анализа главных компонент: 4.1. ТРД – сильные связи  внутри  каждой из систем и между ними, показывают их коммуникативные способности и пластичность, характерные для физиологической нормы; 4.2. РШС – минимальное количество сильных связей внутри  цитокиновой системы; 4.3. дети с РАС – формирование двух кластеров: один (1) – по напряженности и ассортименту показателей иммунной и нейроэндокринной систем имеет полную общность с ТРД;  другой  (2) – презентует альтернативный характер: низкую связанность параметров регуляторных систем, аналогичную детям  с РШС; 4.4. сравнительная оценка значений показателей цитокиновой и нейроэндокринной систем на периферии у детей  с РАС кластеров 1 и 2 с детьми  с РШС и ТРД  позволила установить: у детей  с РАС кластера 1 показатели не отличались от ТРД,  за исключением адреналина, АКТГ, кинуренина и триптофана. У детей  с РАС  кластера 2 значения показателей равны показателям, характерным для детей с РШС, за исключением дофамина и триптофана.

Таким образом, нами был продемонстрирован феномен трансдиагностического кластрирования –выделения среди  детей  с РАС  двух кластеров, один  из которых имеет  аналогию по уровням показателей и связей между иммунной и нейроэндокринной системами с ТРД,  а другой – с детьми  с РШС, что может быть использовано в качестве диагностического критерия в сегрегации двух расстройств.

Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), такие как болезнь Крона (БК) и язвенный колит  (ЯК), характеризуются хронически рецидивирующим воспалением кишечной стенки и связаны со значительным снижением качества жизни. Описан спектр генетических вариантов, ассоциированных с болезнью Крона. Пусковым фактором начала заболевания может  быть дисбиоз кишечника (ДБ). Гликопротеин 2 (GP2), основной белок  гранул  зимогена поджелудочной железы, выделяется с пищеварительными ферментами в кишечник. Антитела против GP2  были обнаружены в крови пациентов  с БК.  Целью исследования было изучение уровня анти-GP2-антител в крови и фекалиях детей с ВЗК по сравнению с группой ДБ. Исследованы сыворотки крови и копрофильтраты от 110 детей (64 мальчика и 46 девочек) в возрасте 12,3 (2,6-17,9) года; 36 пациентов с БК, 30 пациентов с ЯК,  группу сравнения составили 44 пациента с ДБ.  Антитела IgG  и IgA против GP2  тестировали методом ИФА. Применены методы  непараметрической статистики, результаты представлены в процентах и медианах – Me (Q_0,25-Q_0,75). Уровни сывороточных IgA-антител против GP2 составили у пациентов с БК 9,97 (3,35-13,45) Ед/мл, для ЯК 6,08 (2,71-14,26) Ед/мл и для ДБ 2,94 (2,29-6,41) Ед/мл. Уровни анти-GP2 IgG-антител в сыворотках крови составили 6,16 (3,26-18,4) Ед/мл для БК, 5,26 (2,97-7,52) Ед/мл для ЯК  и для ДБ  5,23 (2,53-8,85) Ед/мл. Пороговая концентрация cut-off  для анти-GP2 антител класса IgG составила 13,8 Ед/мл, чувствительность – 63,2%,  специфичность – 100%, а для IgA – 5,63 Ед/мл при  чувствительности 60,5%  и специфичности – 78,8%,  что ниже  рассчитанного cut-off  взрослых –20 Ед/мл. Уровни анти-GP2 IgG  в копрофильтратах составили у детей  группы сравнения 1,99 (1,26-3,04)  Ед/мл, у пациентов с БК  – 23,5 (16,15-29,3) Ед/мл и у детей  с ЯК  – 20,45  (13,63-25,5) Ед/мл, (р < 0,001). Cut-off составил 8,0 Ед/мл со 100% чувствительностью и 100% специфичностью. Концентрации IgA против GP2  в копрофильтратах больных с ВЗК  значимо не отличались от ДБ.  При  этом концентрация sIgA в копрофильтратах больных с ВЗК  значимо превышала уровень группы с ДБ. Соотношение анти-GP2 IgA/sIgA  было  значительно ниже  у пациентов с БК  (0,326  (0,23-0,512)), и ЯК (0,327  (0,205-0,435)), чем у пациентов с ДБ (2,332  (1,575-3,523)) (р < 0,001);  cut-off  составил 0,784 с чувствительностью 97,7% и специфичностью 98,6%. Обсуждается, что анти-GP2 IgA антитела в фекалиях следует рассматривать как протективные, поддерживающие гомеостаз в кишечнике, а анти-GP2 IgG  антитела являются патогенетически значимыми для  развития ВЗК.  Таким образом, используя неинвазивный метод  определения анти-GP2 антител в стуле в случае  превышения cut-off  для IgG  и снижения соотношения IgA/sIgA  ниже  cut-off, можно со 100% чувствительностью и 100% специфичностью дифференцировать ВЗК  от ДБ, имеющего похожую клинику в начале заболевания.

Цель  исследования – изучение влияния дезоксирибонуклеата натрия на противоинфекционную резистентность и кроветворение у пострадавших с политравмой. Проведено одноцентровое исследование эффективности дезоксирибонуклеата натрия (низкомолекулярных фрагментов нативной  ДНК) у 54 пациентов с политравмой. Основная группа  – 27 чел.,  возраст 39 (29-51)  лет, тяжесть травмы ISS 26 (22-34)  баллов, тяжесть шока  ±Т  = +12,9 (8,7-15,9) часов.  Группа  сравнения – 27 чел., возраст 40 (26-53), ISS 25 (20-29), ±Т = +12,3 (9,3-13,8). Рандомизация: пациентам со случайным четным  числом вводили 5 мл содержимого флаконов одной серии  (четной), с нечетным числом – другой серии  (нечетной) внутримышечно ежедневно с первого по 10 день после  травмы. Перед  введением препарата, на 8-е,  15-е  дни после  травмы исследовали в крови: лейкоциты (× 109/л), эритроциты (× 1012/л), IL-6  (пг/мл), СРБ (мг/л), CD117+ и CD34+  мононуклеары, CD14⁺  моноциты, CD14⁺  гранулоциты, HLA-DR⁺   мононуклеары (× 109/л), дефенсин + гранулоциты (HNP1-3) (%);  гемоглобин (Hb) и общий белок (ОБ)  (г/л) крови – в течение госпитализации. На 7-е сутки у пациентов основной группы по сравнению с группой сравнения возрастало количество лимфоцитов (2,36±0,19/1,83±0,18; р = 0,048),  моноцитов (0,89±0,07/0,69±0,007; р = 0,049),  CD117⁺  (0,81±0,07/0,44±0,07; р = 0,001) и  CD34⁺   (0,83±0,07/0,65±0,05; р  = 0,042)  мононуклеаров. На  14-е  сутки  в основной группе  возрастало по  сравнению с  группой сравнения количество CD14⁺   моноцитов (0,38±0,03/0,24±0,02; р = 0,041),  HLA-DR+   мононуклеаров (1,34±0,12/1,04±0,08; р = 0,044),  дефенсин + гранулоцитов (42,0±2,4/34,3±3,7; р = 0,044).  У пациентов обеих  групп  наблюдали сходное снижение концентраций  IL-6  и СРБ. Применение препарата способствовало сокращению госпитализации с 39,6 до 32,8 дней, уменьшению количества осложнений с 39 до 21 в сравниваемых группах.  В основной группе среднее количество осложнений у одного  пациента было  в 1,8 раза меньше, чем в группе  сравнения (р = 0,014). При  развитии осложнений: продолжительность анемии (Hb < 90 г/л)  и гипопротеинемии (ОБ  < 60 г/л)  в основной группе  была  меньше, чем  в группе  сравнения в 2,5 (р = 0,044)  и 3,5 раза (р = 0,034) соответственно.

Применение дезоксирибонуклеата натрия при  политравме усиливало миграцию предшественников  кроветворения в кровоток, способствовало повышению противоинфекционных свойств лейкоцитов, уменьшению продолжительности анемии и гипопротеинемии, сокращению количества осложнений и срока  госпитализации.

Экссудативный средний отит  в детском возрасте чаще  всего  формируется на фоне  хронического воспаления в носоглотке, непосредственными участниками которого являются клетки фагоцитарного ряда.  В работе  представлены результаты оценки клинической и иммунологической эффективности интраназального использования препарата Имунофан в комплексной терапии экссудативного среднего отита.  Проводилось динамическое наблюдение (до лечения, через  1 и 3 месяца  после  лечения) за состоянием таких  параметров, как  количественное содержание нейтрофилов и моноцитов в периферической крови и на мазках-отпечатках со слизистой носа, активность миелопероксидазы в циркулирующих нейтрофилах и содержание интерлейкина IL-8  и IL-18  в назальном  смыве. Клинический статус  оценивался с помощью балльной системы, субъективно отражающей  состояние носоглотки и слуховой функции. Обследованы 43 ребенка в возрасте от 3 до 7 лет с экссудативным средним отитом, развившимся на фоне  хронического аденоидита. Пациенты первой группы (22 ребенка) были  пролечены с использованием только традиционных подходов (базисная терапия). Пациенты второй группы (21 ребенок) дополнительно к базисной терапии получали препарат  Имунофан. Группу  контроля составили 16 относительно здоровых детей.  До начала лечения у детей с экссудативным средним отитом отмечалось, в сравнении со здоровыми, повышение относительного содержания моноцитов в крови, снижение активности миелопероксидазы и концентрации IL-8 и IL-18 в назальном смыве. Различия по выраженности клинических симптомов между группами больных отсутствовали. Базисная терапия не сопровождалась положительной динамикой в клинической  картине заболевания. В крови сохранялся относительный моноцитоз и сниженная активность нейтрофильной миелопероксидазы; концентрация IL-8  и IL-18  в назальных смывах  оставалась низкой.  При  интраназальном использовании Имунофана к третьему месяцу от начала лечения происходило  восстановление численности циркулирующих моноцитов, отмечалось повышение активности миелопероксидазы в нейтрофилах и концентрации IL-8  и IL-18  в назальных смывах. Нормализация параметров, характеризующих систему фагоцитов, ассоциировалась, согласно балльной оценке, с клинической ремиссией заболевания. Наличие связи  клинических данных с результатами, полученными в ходе лабораторного исследования, позволяет говорить о положительном действии препарата Имунофан в качества средства, повышающего эффективность традиционной базисной терапии экссудативного среднего отита у детей.

Цель  – изучение влияния иммуноцитотерапии на содержание в периферической крови пациенток с идиопатическим привычным выкидышем CD4+CD25^highFoxP3⁺   клеток с естественной регуляторной активностью и активированных Th17-клеток с фенотипом CD4+CD25^highRORγt⁺, а также на продукцию in vitro цитокинов митоген-стимулированными клетками цельной периферической крови. Группу  исследования составили 33 пациентки с ИПВ, забеременевшие после  проведенной предгестационной аллоиммунизации. У 27 пациенток беременность пролонгирована до доношенного срока  и завершилась рождением жизнеспособного ребенка, у 6 прервалась до 12 недель  гестации. До  назначения ИЦТ обследовано 19 пациенток, 16 – после  аллоиммунизации вне  беременности, 17 – в 5-6  и 8-9  недель  наступившей беременности и 11 пациенток – в 12 недель. В контрольной группе  обследовано 12 фертильных женщин вне  беременности и 10 женщин в 12 недель  физиологической беременности. Проводили оценку в периферической крови доли  FoxP3⁺  и RORγt+  клеток среди  Т-лимфоцитов с фенотипом CD4⁺CD25^high  и определяли содержание цитокинов провоспалительной (IFNγ, TNFα, IL-1β, IL-2, IL-5, IL-6, IL-8, IL-12р70) и противовоспалительной (IL-4, IL-10) направленности, а также  содержание IL-17. Нами было  выявлено, что после  предгестационной аллоиммунизации у женщин, потерявших данную  беременность, был низкий уровень FoxP3⁺Тгeg, подавляющих провоспалительные Th17-зависимые реакции, без изменений в уровне  активированных Th17-клеток (СD4⁺CD25^highRORγt⁺  лимфоцитов). При  сроке  5-6 недель  уровень СD4⁺CD25^highRORγt⁺ лимфоцитов был резко  снижен по сравнению с уровнем вне беременности. Указанные факты в сочетании с данными о высокой продукции в сроке  5-6 недель  IL-17  клетками периферической крови в культуре  in vitro позволяют предположить, что после  предгестационной аллоиммунизации у женщин с выкидышем формируется тенденция к провоспалительному типу продукции цитокинов, но в сроке 5-6 недель  гестации она  реализуется не в направлении Th1,  а в направлении Th17-ответа, и низкий уровень в периферической крови клеток с фенотипом СD4⁺CD25^highRORγt⁺  может  отражать усиленную миграцию Th17-клеток из периферической крови в эндометрий матки. Таким образом, показано влияние иммуноцитотерапии на  субпопуляционный состав  лимфоцитов периферической крови и профиль цитокиновой продукции, а также  на течение I триместра и исходы  наступившей беременности  у женщин с идиопатическим привычным выкидышем.

Система цитокинов – большая группа факторов, продуцируемых клетками иммунной системы  и участвующих в патогенезе большинства заболеваний человека. Для оценки значимости изменений цитокинов/хемокинов при патологических состояниях необходимо знать физиологический диапазон этих молекул у здоровых людей.  В литературе подавляющее большинство исследований по оценке различных цитокинов/хемокинов в плазме крови практически здоровых лиц  проводили на популяции жителей Западной Европы и Северной Америки. Известны межпопуляционные различия в синтезе определенных цитокинов у разных расовых и национальных групп.  Представлены лишь единичные сведения о нормальном уровне  некоторых цитокинов в плазме крови здоровых жителей Африканского  континента.  Целью данной  работы было  определение особенностей цитокинового профиля плазмы крови практически здоровых жителей Гвинейской Республики и установление нормальных значений цитокинов. Было  обследовано 24 практически здоровых жителя Гвинейской Республики в возрасте от 25 до 64 лет и 23 жителя Санкт-Петербурга в возрасте от 25 до 61 года. Определяли концентрации 40 цитокинов/хемокинов. Исследование проводили с помощью мультиплексного  анализа с применением технологии xMAP  (Luminex, США) с использованием наборов с магнитными частицами Bio-Plex Pro Human Chemokine Assay (Bio-Rad, США). В плазме крови жителей Гвинейской Республики были достоверно повышены концентрации следующих цитокинов и хемокинов: IFNγ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNFα, CCL1/I-309, CCL3/MIP-1α, CCL7/MCP-3, CCL17/TARC, CCL19/MIP-3β,  CCL20/MIP-3α,  CCL21/6Ckine, CXCL2/Gro-β,  CXCL5/ENA-78, CXCL6/GCP-2, CXCL9/MIG, CX3CL1/Fractalkine (р < 0,001).  Для  хемокинов CCL8/MCP-2, CCL22/MDC, CXCL1/ Gro-α и CXCL12/SDF-1α+β наблюдалась тенденция к повышению их концентрации по сравнению с жителями Санкт-Петербурга (р < 0,05). В то же время уровни CCL23/MPIF-1 и MIF были достоверно ниже  (р < 0,0001)  в группе  жителей Гвинейской Республики. Для хемокинов CCL2/MCP-1 и CCL24/ Eotaxin-2 наблюдалась тенденция к снижению их уровня (р < 0,05) в плазме крови жителей Гвинейской Республики. В обследованных группах не обнаружено различий в содержании цитокинов/хемокинов: GM-CSF, IL-1β, IL-16, CCL11/Eotaxin, CCL13/MCP-4, CCL15/Leukotactin-1, CCL25/TECK, CCL26/Eotaxin-3, CCL27/CTACK, CXCL8/IL-8, CXCL10/IP-10, CXCL11/I-TAC, CXCL13/BCA и CXCL16/SCYB16.

В настоящем исследовании впервые определены границы нормы содержания широкого спектра цитокинов/хемокинов в плазме крови у жителей Африканского региона. Выявлены межпопуляционные различия, в том числе  среди  конститутивных хемокинов. Различные уровни конститутивных хемокинов  CCL19/MIP-3β­ и СCL21/6Ckine – лигандов рецептора CCR7 – в двух популяциях косвенно могут  свидетельствовать о физиологических особенностях созревания Т-клеток.  Повышенный уровень в плазме крови гвинейцев лигандов рецептора CXCR2 – CXCL2/Gro-β, CXCL5/ENA-78 и CXCL6/GCP-2 – может  быть связан с тем,  что эти хемокины также  являются  лигандами для атипичного хемокинового рецептора DARC (Duffy  Antigen  Receptor for Chemokines), обеспечивающего нейтрализацию хемокинов из кровообращения, а 95% жителей Западной Африки имеют  мутации в гене  DARC и не экспрессируют этот  рецептор. Повышенное содержание провоспалительных цитокинов IL-6, TNFα и хемокина CCL20/MIP-3α­в плазме жителей Гвинейской Республики, возможно, свидетельствует о воспалительных процессах в печени, так как среди обследованных нами гвинейцев у 100% людей  были  выявлены антитела против вируса  гепатита А, у 48% – антитела против вируса гепатита В (анти-HBs) и у 12% – антитела против вируса  гепатита С. В целом  различия в содержании цитокинов/хемокинов могут быть  связаны с разной средой  обитания, циркуляцией инфекционных заболеваний, содержанием микробиоты кишечника, кожи  и слизистых, а также  генетическими различиями.

Белки теплового шока  (HSPs, heatshock proteins) образуют одну из клеточных молекулярных систем, обладающую шаперонной активностью, направленную на стабилизацию структуры внутриклеточных протеинов, обеспечение устойчивости клеток к стрессу, на ренатурацию неправильно свернутых и  элиминацию  денатурированных цитоплазматических белков. Учитывая важную роль нарушений уровня экспрессии HSPs  в патогенезе целого  ряда заболеваний, в нашей работе  был проведен  поиск ассоциации наличия однонуклеотидных замен  (SNPs) в отобранных нами актуальных участках  генома с базальным уровнем транскрипционной активности генов  группы HSPA,  а именно HSPA1A/B, HSPA1A, HSPA1B, HSPA6 и HSPA8 в мононуклеарных лейкоцитах (PBMС) в группе добровольцев из популяции населения средней части  России. Исследование проводили с использованием ДНК и РНК, выделенных из лимфоцитов периферической крови 16 доноров. Генотипирование проводилось методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим секвенированием ПЦР продукта. Для  оценки уровня экспрессии генов  группы HSPA  проводили синтез кДНК на матрице РНК, выделенной из  образцов клеточных фракций PBMC с последующим проведением полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Было  проведено генотипирование участков, в которых находятся следующие полиморфизмы: rs400547  (A/G), rs1150793  (G/A), rs707936  (A/G), rs707915 (A/T), rs376510 (T/C), находящиеся в генах  CLIC1,  MSH5, C6orf26, MSH5, C6orf25 соответственно. Был  охарактеризован базальный уровень транскрипции генов  конститутивно экспрессирующихся и индуцируемых белков семейства HSP70 и проведен поиск ассоциации их экспрессии с полиморфизмами. Было  обнаружено, что в клетках PBMC генотип AG/AA (SNP rs400547), AG/GG (rs1150793), AG  (rs707936), TA (rs707915), TC  (rs376510)  по  изученным нами участкам ассоциирован  c понижением транскрипции гена  HSPA1B  (p = 0,02),  по сравнению с гомозиготами: GG (SNP rs400547), AA (rs1150793), GG (rs707936), TT  (rs707915), CC  (rs376510). Ассоциации указанных полиморфизмов с экспрессией генов  HSPA1A, HSPA6  и HSPA8  выявлено не было.  Гены  CLIC1,  MSH5, C6orf26, C6orf25, в которых присутствуют изученные нами полиморфизмы, находятся в одном  локусе вблизи гена HSPA1B  на 6-й хромосоме. Обнаруженное нами снижение экспрессии гена HSPA1B  при наличии однонуклеотидных полиморфизмов в близлежащих генах  может  свидетельствовать о пространственных взаимодействиях этого  локуса  и локуса  гена HSPA1B  и о том, что изменение генотипа CLIC1, MSH5, C6orf26, C6orf25 может повлечь за собой  изменение экспрессии близко расположенных генов, которые являются функционально значимыми для клетки.

Лактобактерии широко применяются в  клинической практике как  пробиотики, биологически активные добавки и  пробиотические продукты функционального питания.  Некоторые пробиотики можно рассматривать как  бактериальные вакцины, на  действие которых формируется иммунный ответ  с выработкой специфических антител. Целью исследования явилось изучение состояние клеточного и гуморального звеньев иммунитета у женщин при  использовании пробиотических  штаммов лактобактерий. В исследование включена 31 здоровая женщина в возрасте 25-45  лет. В качестве источника комплекса пробиотических лактобактерий использовался препарат «Проваг» (RU   77.99.11.003.E.003746.02.11 от  11.02.2011, в  1 капсуле содержится 109   Lactobacillus  gasseri 57C, Lactobacillus  fermentum  57A и Lactobacillus  plantarum 57B). Препарат применялся в течение 30 суток  из расчета  1 капсула в день. Исследование состояние иммунной системы проводилось дважды:  перед началом приема препарата и через 30 дней.  Исследование популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов крови проводили методом проточной цитометрии при  использовании прямой иммунофлуоресценции. Концентрацию иммуноглобулинов класса А, М, G в сыворотке крови определяли с помощью иммуноферментного метода.  Для определения специфических антител использовали реакцию пассивной гемагглютинации с эритроцитарным диагностикумом. В качестве источника антигена использовали комплекс пробиотических лактобактерий Lactobacillus  gasseri, Lactobacillus  fermentum  и Lactobacillus  plantarum  соответствующие препарату «Проваг». Установлено, что  через  30 суток  приема пробиотического препарата «Проваг» у здоровых женщин в периферической крови повышается количество Т и В-лимфоцитов. Увеличение содержания Т-клеток осуществляется за счет  фракции Т-хелперов. Повышение в уровнях Т-хелперов и В-лимфоцитов приводит к стимуляции гуморального звена  иммунной системы, что реализуется в увеличении концентрации IgA и IgG  в сыворотке крови. С помощью реакции пассивной гемагглютинации установлено, что у 90,0% здоровых женщин через 30 суток приема препарата «Проваг» в крови повышается содержание специфических IgA.

Цель исследования – изучение влияния иммуномодуляторов Бронхо-Ваксома®, вакцины иммуновак-ВП4 и полиоксидония на кинетику концентраций ингибиторов гидролаз и лактоферрина в сыворотке крови при лечении внебольничной пневмонии (ВП). В исследование включен 71 пациент с ВП в возрасте от 18 до 70 лет. Больные были распределены на 4 группы: I гр. (15 чел.) – контроля, пациентам  проводилась только базисная антибактериальная и симптоматическая терапия по стандартной схеме лечения без применения иммуномодуляторов; II гр. (19 чел.) – пациенты дополнительно получали Бронхо-Ваксом (препарат был назначен с момента поступления в стационар – 1 цикл 30 дней, а затем 2 цикла по 10 дней с интервалом в 20 дней); в III гр. (20 чел.) – полиоксидоний (препарат назначался с первого дня пребывания в стационаре в дозе 6 мг в/м, один раз в сутки ежедневно в течение 3 дней, далее через день курсом 10 инъекций); в IV гр. (17 чел.) – вакцина иммуновак-ВП4 (препарат назначался перорально 4 мл и интраназально 2 капли на 1, 4, 7, 10, 13, 19, 25, 31 день).  Вакцина  состоит из антигенов условно-патогенных микроорганизмов (поликомпонентная смесь  водорастворимых антигенов микробных клеток Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli). Содержание ингибиторов гидролаз α2-макроглобулина (МГ) и α1-антитрипсина (АТ) определяли методом количественного ракетного иммуноэлектрофореза с использованием исследовательских тест-систем, а уровень лактоферрина (ЛФ)  оценивался методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих тест-систем. Эти показатели изучали в сыворотке  крови до назначения лечения, на 2-й,  13-й  и 60-й  дни наблюдения. Показано, что назначение иммуномодуляторов в комплексе с антибактериальной терапией у больных с ВП  в разной степени может  оказывать действие на кинетику реактантов острой фазы  воспаления. Эффект Бронхо-Ваксома соответствует классическим канонам ответа на воспалительный процесс – активация блока  позитивных острофазовых реактантов (α1-антитрипсин и лактоферрин) на фоне  торможения (блокирования) панели негативных реактантов острой фазы воспаления (α2-макроглобулин). Полиоксидоний оказывает заметное влияние лишь  на нейтрофилы, секретирующие лактоферрин. Иммуновак-ВП4 способствует лишь  кратковременной секреции данного белка.  Можно предположить, что активация ингибиторов гидролаз и лактоферрина на фоне  назначения иммунотропных препаратов способствует усилению клинического эффекта терапии с уменьшением тяжести и продолжительности симптомов, а также  снижению вероятности обострения хронических заболеваний, уменьшению объема принимаемых  лекарственных средств.

Антибактериальная терапия не оказывает существенного влияния на кинетику реактантов острой фазы  воспаления при  пневмонии. Назначение иммуномодуляторов в комплексе со стандартной базисной терапией в разной степени оказывает влияние на воспалительный процесс, что впоследствии ведет к улучшению прогноза исхода заболевания.

Стандартом лечения ОВИН является регулярное пожизненное использование заместительной терапии иммуноглобулинами класса G, однако не во всех случаях ее применения достигается полный контроль в отношении стабилизации очагов хронической инфекции. Цель – анализ изменений в клеточном компоненте адаптивного и врожденного иммунного ответа в зависимости от эффективности заместительной терапии пациентов с инфекционным фенотипом ОВИН. Группу  наблюдения составили 15 человек с ОВИН, с раннего детства  имеющие острые  респираторные инфекции затяжного характера с последующим развитием осложнений и необходимостью продолжительного применения антибиотиков.

В среднем в возрасте после  15 лет интенсивность инфекционной манифестации недостаточности  антителопродукции составляла 6-8  раз  в течение года.  После верификации диагноза пациенты получали заместительную терапию вначале в дозе насыщения, а после  стабилизации IgG  на уровне 7-8 г/л  – ежемесячно в поддерживающей дозе.  Анализировали клиническое течение заболевания в течение полного года заместительной терапии и оценивали показатели клеточного звена иммунитета.

У всех пациентов через год терапии, соответствующей клиническими рекомендациями, отмечено улучшение показателей качества жизни, уменьшение случаев  рецидивов бактериальных инфекций. В то же время 40% из них продолжали болеть в среднем 5,4±1,1 раза в год и имели потребность в продолжительных курсах антибиотикотерапии. Анализ результатов оценки иммунного статуса не выявил статистически значимых различий в насыщении плазмы IgG  между  группами пациентов с различной эффективностью лечения: 8,7 (8-9)  г/л и 9,1 (8,5-10,5) г/л, при р = 0,5. Отличительные признаки связаны с характеристикой клеточных компонентов и проявляются тем,  что при  меньшем эффекте ВВИГ-терапии больше относительное количество Т-эффекторов,  содержащих литические гранулы гранзима В и число  CD14⁺CD284⁺  моноцитов, ниже  способность к спонтанной продукции активных форм  кислорода нейтрофилами, меньше циркулирующих в периферическом кровотоке CD16⁺  натуральных киллеров.

Полученные данные иллюстрируют информативность мониторинга не  только уровня сывороточных  иммуноглобулинов G  класса, но  и параметров клеточного звена  иммунного ответа.  Такой анализ может  иметь  существенное значения в качестве прогностического критерия эффективности ВВИГ-терапии. Снижение ряда параметров клеток врожденного иммунитета служит основанием для формулирования концепции комбинированного лечения и применения средств, воздействующих на свойства иммунокомпетентных клеток.

 

Гибридный рекомбинантный белок  OprF-aTox-OprI, содержащий в своeм  составе аминокислотные последовательности трех наиболее значимых антигенов P. aeruginosа (мембранных белков OprF, OprI  и анатоксина aTox),  был включен в состав  вакцины против синегнойной инфекции. Контроль качества гибридного рекомбинантного белка  и вакцины на его основе предполагает определение его подлинности и полноты сорбции препарата на гидроксиде алюминия.

Цель исследования – разработка иммуноферментного метода  контроля качества вакцинного препарата на основе гибридного рекомбинантного белка  P. aeruginosа.

Гибридомы, продуцирующие моноклональные антитела, специфичные к слитому рекомбинантному  белку, были  получены путем  слияния злокачественной линии миеломы мыши и  иммунных спленоцитов мышей, вакцинированных отдельными рекомбинантными белками синегнойной палочки. Для наработки антител в препаративных количествах гибридные клетки культивировали in vivo в мышах линии BALB/c. Супернатанты клеточных культур и асцитные жидкости хроматографически очищали на иммунном сорбенте. Конъюгирование антител с пероксидазой хрена проводили согласно методу Nakane P.K.  Гибридный рекомбинантный белок  OprF-aTox-OprI выявляли в твердофазном иммуноферментном анализе с использованием полученной панели моноклональных антител и конъюгатов  моноклональных антител с пероксидазой корня хрена,  специфичных к различным эпитопам белка.  В качестве калибровочных стандартов для построения калибровочного графика использовали разведения, содержащие от 78 нг/мл до 5000 нг/мл рекомбинантного белка  OprF-aTox-OprI.

Для детекции OprF-aTox-OprI апробированы 55 вариантов пар моноклональных антител, в 11 случаях показана способность выявлять рекомбинантный белок.  Критерием отбора  наиболее чувствительных и специфичных вариантов ИФА  служил  предел  количественного обнаружения. Для всех 11 вариантов теста  посчитан предел  количественного обнаружения. В результате проведенных исследований были  выбраны два варианта иммуноферментного анализа для контроля качества гибридного рекомбинантного белка, обладающие наибольшей чувствительностью. Первый вариант включал в себя  пару  моноклональных антител, специфичных к эпитопам OprF  и OprI, второй вариант – к эпитопам aTox и OprI.  Пределы количественного обнаружения составили 2,9 и 13,6 нг/мл (0,0058  и 0,027% от предполагаемого содержания антигена в вакцине) для первого и второго вариантов ИФА.

Отработаны два  варианта ИФА  для  выявления гибридного рекомбинантного белка  OprF-aToxOprI. Первый вариант позволяет определить количество белка и оценить полноту его сорбции на геле гидроокиси алюминия. Для подтверждения подлинности белка целесообразно применять оба метода, поскольку они позволяют доказать наличие всех трех антигенов (OprF, aTox и OprI), присутствующих в слитом белке.

Туберкулез –  широко  распространенное  инфекционное   заболевание,  вызываемое M. tuberculosis, которое является одной из основных причин смертности в мире.  Согласно многочисленным литературным данным, это  генетически детерминированное заболевание, и полиморфизм генов  является механизмом, который приводит к прогрессированию от инфицирования к клинической  манифестации. Восприимчивость к инфекции коррелирует с различными генами в нескольких локусах, и каждый отдельный ген играет  определенную уникальную роль.  Известно, что анализ отдельных полиморфных вариантов генов  не дает достаточно полного представления о механизмах формирования предрасположенности к мультифакторным патологиям, таким как туберкулез, так как в основе их развития лежат  сложные межгенные и ген-средовые взаимодействия, которые необходимо  учитывать при  прогнозировании риска развития активных форм  заболевания и его тяжести. Концепция функционирования цитокинов в качестве биомаркеров туберкулеза предполагает, что их продукция и взаимодействия играют важную роль в иммунопатогенезе заболевания, так как они формируют цитокиновую цепь  с уникальными функциями, где удаление любого  звена  цепи  приводит к разрыву всего  механизма формирования иммуновоспалительного процесса. IL-6  вместе  с TNFα и IL-1β инициируют ранние провоспалительные реакции при  туберкулезе, стимулируя местную и системную воспалительную реакцию с  участием всех  известных механизмов провоспалительного действия с дальнейшим переходом к активации приобретенного иммунитета. Ранее нами был  проведен комплекс исследований по оценке ассоциации аллелей и генотипов генов  данных цитокинов с предрасположенностью/устойчивостью к туберкулезу легких  у русских Челябинской области, в ходе которого установлены особенности распределения аллелей и генотипов генов  IL-1β, TNFα, IL-6  при туберкулезе легких  и различных его формах. Были использованы следующие методы: выделение образцов ДНК из цельной крови, проведение генотипирования исследуемых полиморфизмов генов  с помощью полимеразно-цепной реакции и полиморфизма длин  рестрикционных фрагментов. В настоящем исследовании был проведен анализ межгенных взаимодействий генов  провоспалительных цитокинов IL-1β, TNFα, IL-6  с использованием метода  сокращения многофакторной размерности у больных туберкулезом легких. Программа формирует оптимальные модели комбинаций исследуемых генов  и их взаимодействий при туберкулезе. В результате исследования была установлена трехлокусная модель  IL-6  (-174)*С – IL-1β (+3953)*Т – IL-1β (+3953)*С, которая характеризовалась 100% воспроизводимостью и точностью предсказания 72%. Среди  анализируемых полиморфизмов наибольшим предсказательным потенциалом обладал полиморфизм IL-6  (-174)*С – 15,27%.

18 мая 2020 года  ушла из жизни Валентина Борисовна Гервазиева, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки Российской Федерации, замечательный Ученый иУчитель, Человек с неукротимой жаждой познания нового, широким научным кругозороми неиссякаемой творческой активностью.