Накопленные данные о регуляторных Т-клетках при раке предстательной железы позволяют предположить, что эти клетки проникают в опухолевую ткань предстательной железы, подавляют противоопухолевый иммунный ответ вызывая агрессивное течение рака и низкую выживаемость. Детальная оценка субпопуляций Т-клеток в микроокружении опухоли показала, что количество CD4⁺ Treg ухудшает прогноз. В частности, показано, что каждая дополнительная CD4⁺ Treg-клетка вызывает статистически значимое увеличение смертности от рака простаты на 12%, независимо от других клинических факторов. Существует несколько возможных объяснений повышенной инфильтрации клеток Treg в ткани рака предстательной железы. Во-первых, опухолевые клетки или макрофаги в опухоли способны секретировать хемокин CCL22, который обладает сродством к рецептору CCR4, экспрессируемому на клетках Treg. Во-вторых, цитокины, секретируемые опухолями предстательной железы, такие как TGFβ, могут регулировать экспрессию FOXP3 и расширять популяцию Treg. TGFβ, в свою очередь, представляет собой многофункциональный цитокин, который увеличивает выживаемость и пролиферацию трансформированных клеток, в том числе эпителиальных клеток простаты, что было обнаружено в повышенных количествах у пациентов с метастазированием.

Популяции природных киллерных клеток человека (ППККЧ) против опухолей в присутствии вирусов оценены как сильно варьирующие и рано адаптированные к патологическим сигналам в организме мобильные и избирательно действующие способные к комбинированию агенты. ППККЧ осуществляют различные действия в результате кофункционирования рецепторных лектинов (РЛ), распознающих гликопаттерны (РЛ как триггеры, инициаторы и базисные агенты для надстроечных реакций), и Ig-подобных, цитотоксических и прочих вспомогательных коммуникативных и эффекторных рецепторов (роль РЛ как инструментов тонкой настройки мозаики поверхностноклеточных рецепторов в направлении необходимой функциональной ориентации ППККЧ), а также их лигандов (модуляторов созданных конечных рецепторных мозаик). Такие наученные и переобученные ППККЧ играют важную роль в перераспределении ППККЧ-индуцированных паротиворопухолевых и антивирусных цитокиновых наборов в организме. Межклеточный коммуникативный потенциал ППККЧ также учитывает другие клетки врожденного иммунитета и адаптированные для врожденного иммунитета клетки, что может служить перспективным и универсальным ресурсом защиты человека. ППККЧ должны учитываться при разработке товых маневренных и надежных сбалансированных профилактических и иммунотерапевтических противоопухолевых/ антивирусных систем и вакцинных стратегий. Открыты пути к алгоритмам тонкой настройки (РЛ—KIR/ NCR/ CD/ их комбинации)  РЛ-базисного конструирования веера противоопухолевых/ антивирусных ППККЧ с дальнейшим потенциалом инициирования. Ключевую важность приобретает скрининг спектра ППККЧ у индивидуума и потенциального пациента для дополнительной оценки защитного статуса и выработки персонизированных коммуникативных противоопухолевых/ антивирусных стратегий. Установленный статус NK(natural killers)-компартмента будет характеризовать резистентность индивидуума/ контингента индивидуумов против вирусных инфекаций эпидемиологической значимости, играть важную роль при оценке противоэпидемической защиты региона.

 

В обзоре представлены данные о роли гликоделина А (GdA, РР14, α2-PEG, EР15, PEP, AUP, PAEP) в регуляции функций иммунной системы в контексте формирования иммунной толерантности во время беременности.

Гликоделин был впервые выделен и идентифицирован в 1976 году Петруниным Д.Д. и Татариновым Ю.С. с коллегами как новый антиген плаценты, который был назван хорионическим α2-микроглобулином. С тех пор получено огромное количество научных данных о структуре, свойствах и биологических эффектах этого гликопротеина. Этот белок имеет четыре дифференциально гликозилированные изоформы, а именно, GdA, GdF, GdC и GdS, которые секретируются в различных частях репродуктивного тракта.

Наиболее изученная изоформа, гликоделин А (GdA), секретируется децидуальным железистым эпителием, и в процессе беременности накапливается в амниотической жидкости и материнской сыворотке. Уровень GdA служит признаком фертильной функции эндометрия. GdA обладает разнонапраленными биологическими эффектами, в частности, модулирует эндокринную функцию и дифференцировку клеток трофобласта.

Роль GdA в регуляции иммунной системы заключается в ингибировании пролиферации Т- и В-лимфоцитов, подавлении цитотоксичности NK-клеток, индукции апоптоза активированных CD4⁺ клеток, моноцитов и NK-клеток, угнетении активности цитотоксических Т-лимфоцитов и подавление функциональной активности макрофагов и дендритных клеток. Помимо этого, GdA повышает уровень регуляторных T-лимфоцитов, сдвигает баланс Th1/Th2 в сторону Th2 и индуцирует толерантный фенотип в дендритных клетках.

Иммуномодулирующая активность GdA зависит от степени его гликозилирования, которая, в свою очередь, связана со способом получения препарата. Поэтому в обзоре проанализированы особенности иммуномодулирующего действия нативного и рекомбинантного типов гликоделина на клетки иммунной системы.

Тем не менее, суммарные эффекты GdA на клетки иммунной системы позволяют рассматривать его как один из основных факторов, формирующих иммунную толерантность организма матери к развивающемуся эмбриону. Важно также отметить, что клинические исследования выявили корреляцию между низким уровнем циркулирующего GdA с повторяющимися спонтанными абортами, что подтверждает важность этого белка в фетопротекции.

В целом, очевидно, что GdA имеет перспективы применения в биомедицине в качестве фармакологического препарата для лечения аутоиммунных заболеваний, посттрансплантационных осложнений и «перепрограммирования» аутореактивных клонов Т-лимфоцитов in vitro для дальнейшей клеточной иммунотерапии.

Хемокины представляют особое семейство цитокинов, основная функция которых состоит в контроле  миграции клеток, они служат ключевыми игроками в реакциях врожденного и адаптивного иммунного ответа. Направленный хемотаксис специфических субпопуляций лейкоцитов необходим не только для поддержания гомеостаза, а также в развитии иммунопатологических состояний, таких как рак, воспаление, инфекция, аллергия и аутоиммунные расстройства. Хемокины являются плейотропными молекулами, которые участвуют в физиологических и патофизиологических процессах. Например, хемокиновый рецептор CXCR3 экспрессируется на различных типах клеткок: активированных Т- и  В-лимфоцитах, натуральных киллерных клетках, эозинофилах и нейтрофилах, дендритных клетках, фибробластах, эндотелиальных и эпителиальных клетках, что обуславливает широкий спектр его функциональной активности. Рецептор CXCR3 представляет собой серпентиновый трансмембранный белок, в настоящее время известно три варианта CXCR3: CXCR3А, CXCR3В и CXCR3-alt. Лиганды рецептора CXCR3 включают IFNγ-зависимые хемокины: CXCL9, CXCL10, CXCL11 и хемокины, секретируемые тромбоцитами: CXCL4, CXCL4L1. Лиганды рецептора CXCR3 представляют собой отдельную группу ангиостатических хемокинов, поскольку для них характерно отсутствие аминокислотной последовательности Glu-Leu-Arg (ELR-мотива). IFNγ-зависимые лиганды рецептора CXCR3 являются провоспалительными хемокинами, они осуществляют свой хемотаксический потенциал за счет направленной миграции лимфоцитов, экспрессирующих CXCR3, к участкам воспаления, в основном они опосредуют хемотаксис активированных Т-клеток и их поляризацию. Молекулы хемокинов могут подвергаться пострансляционным модификациям, что оказывает влияние на их функции. Благодаря своей полифункциональности, лиганды CXCR3 играют важную роль в патогенезе многих заболеваний. В настоящем обзоре представлены данные о роли лигандов CXCR3 в иммунопатогенезе ряда заболеваний, в том числе результаты наших исследований хронического вирусного гепатита С, ревматоидного артрита и туберкулеза легких. Дополнительно, в статье обсуждается значимость хемокинов  как информативных биомаркеров, которые могут быть полезны для лабораторной диагностики различных иммунопатологических состояний. Этот обзор иллюстрирует универсальность IFNγ-зависимых хемокинов, как медиаторов иммунных реакций при различных заболеваниях. Исследование лигандов CXCR3, их изоформ и рецепторов, взаимодействий между собой и с рецепторами может внести существенный вклад в наше понимание в области сети хемокинов. Понимание системы IFNγ-зависимых хемокинов может иметь клиническое значение, как с точки зрения диагностики, так и с терапевтической точки зрения.

Периваскулярная жировая ткань (ПВЖТ) окружает большинство крупных кровеносных сосудов и играет важную роль в сосудистом гомеостазе. Недавние исследования показали, что ПВЖТ влияет на вазодилатацию и вазоконстрикцию, что указывает на то, что ПВЖТ регулирует тонус и диаметр сосудов. Адипоцитокины и хемокины, секретируемые из ПВЖТ, по-видимому, имеют прямой доступ к соседней артериальной стенке путем диффузии или через vasa vasorum. Установленные данные свидетельствуют о том, что ПВЖТ играет важную роль в атеросклерозе, гипертонии, недавно появились исследования, в которых изучалась роль ПВЖТ в неатеросклеротических сосудистых заболеваниях, таких как неоинтимальные новообразование, аневризма аорты, артериальная ригидность и васкулит. В этой обзорной статье мы обобщим данные о роли ПВЖТ в патогенезе атеросклероза, гипертонии и неатеросклеротических сосудистых заболеваниях.

Гипоксия и иммунные реакции тесно взаимосвязаны между собой на молекулярном, клеточном и организменном уровнях, а особи отличаются по устойчивости к недостатку кислорода. Животные с высокой и низкой устойчивостью к гипоксии имеют различные адаптационные возможности и предрасположенность к развитию воспалительных заболеваний. Данные об индивидуальных особенностях устойчивости самок лабораторных животных и лиц женского пола к гипоксии и ее взаимосвязи с реакциями иммунной системы как в норме, так и при воспалительных заболеваниях в литературе отсутствуют. Однако известно, что по сравнению с мужчинами у женщин и самок лабораторных животных реже развиваются и легче протекают острые инфекционно-воспалительные заболевания, что может определяться более высокой устойчивостью самок к гипоксии. Цель – выявить особенности морфофункциональных изменений тимуса и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови при системном воспалительном ответе, индуцированном введением ЛПС, у самок крыс Вистар с разной устойчивостью к гипоксии.
Устойчивости к гипоксии половозрелых самок крыс Вистар определяли по времени жизни в вентилируемой барокамере «на высоте» 11 500 м. К высокоустойчивым к гипоксии относили крыс, время жизни которых составляло более 180 с, к низкоустойчивым – менее 20 с. Через месяц после определения устойчивости к гипоксии самкам в фазу диэструса внутрибрюшинно вводили липополисахарид E. coli О26:В6 в дозе 1,5 мг/кг. Животных выводили из эксперимента через сутки после введения ЛПС путем внутримышечного введения золетила в дозе 15 мг/кг. На препаратах тимуса оценивали объемную долю коркового и мозгового вещества, в печени определяли площадь некрозов, в легких подсчитывали число нейтрофилов в межальвеолярных перегородках. Определяли содержание в сыворотке крови кортикостерона, тестостерона, TGF-β. Проводили цитофлуориметрическую оценку относительного и абсолютного количества основных субпопуляций лимфоцитов в периферической крови. Оценивали число апоптотически гибнущих клеток тимуса. Для статистической обработкиполученных данных использовали программу Statistica 8.0, использовали критерии множественного сравнения Краскела–Уоллиса, Данна. Различия считали статистически значимыми при p < 0,05.
Как у высоко-, так и у низкоустойчивых к гипоксии самок развитие системного воспалительного ответа сопровождается умеренно выраженной акцидентальной инволюцией тимуса, апоптозом тимоцитов, увеличением абсолютного числа NK, повышением содержания тестостерона и кортикостерона. По сравнению с высокоустойчивыми у низкоустойчивых к гипоксии самок введение ЛПС приводит к более тяжелым проявлениям системного воспаления – выраженной воспалительной реакции в легких и высоким показателем площади некрозов в печени, что сопровождается увеличением числа регуляторных Т-лимфоцитов и Т-хелперов на фоне более выраженной акцидентальной инволюции тимуса и апоптотической гибели тимоцитов. У высокоустойчивых к гипоксии самок системные проявления воспаления менее выражены, что, по-видимому, связано с активацией миграции лимфоцитов из тимуса и крови в очаг воспаления и развитием более эффективного иммунного ответа. Вывод: иммунные реакции при системном воспалительном ответе, индуцированном ЛПС, у самок крыс Вистар зависят от устойчивости их к гипоксии, что необходимо использовать для разработки подходов к персонализированной терапии инфекционно-воспалительных заболеваний у лиц женского пола. 

Выявление иммуномодулирующей активности факторов роста эндотелия сосудов (VEGFs) раскрывает новую роль неоангиогенеза в опухолевой прогрессии. Большинство эффектов VEGF на Т-клетки опосредуется через рецепторы VEGF-R2. Фактор роста плаценты (PlGF) принадлежит к семейству VEGFs и является селективным лигандом VEGF-R1. С целью изучения роли VEGF-R1-сигналинга в регуляции Т-клеточных функций исследовали влияние  PlGF на пролиферацию Т-клеток доноров. Показано, что PlGF в широком диапазоне доз ингибирует пролиферацию Т-лимфоцитов в культурах анти-CD3-стимулированных мононуклеарных клеток, подавляя пролиферативный ответ как CD4+ так и CD8+ Т-клеток. При этом супрессорный эффект PlGF обусловлен прямым взаимодействием фактора с VEGFR-1 на Т-клетках, что подтверждается экспрессией VEGFR-1 Т-лимфоцитами (особенно после их активации) и блокированием супрессорного эффекта PlGF нейтрализующими анти-VEGFR-1 антителами. Учитывая повышенный уровень PlGF при многих опухолях, данный фактор может играть важную роль в иммуномодуляции при опухолевом росте, опосредуя свой эффект через VEGFR-1 сигнальный путь.

Количественная оценка пролиферативной активности лимфоцитов – важный и едва ли не единственный показатель уровня функциональной активности не только этих клеток, но и иммунной системы в целом.

Целью настоящего исследования явилось разработка адекватного, физиологического теста для определения степени функциональной активности лимфоидных клеток. Выбор IL-1 в качестве активатора пролиферации связан с наличием рецепторов к нему у лимфоидных клеток, ключевой ролью этого цитокина в инициации широкого спектра биологических эффектов иммунной системы на антиген, в том числе, участие в межклеточной кооперации при иммунном ответе и дистантным действием в отношении различных периферических клеточных систем. Установлено, что лиганд-рецепторное взаимодействие IL-1 рецептором 1 типа активирует нейтральную сфингомиелиназу, инициируя тем самым сфингомиелиновый путь сигнальной трансдукции в лимфоцитах. Степень активации этого фермента различается в зависимости от вида стрессорного воздействия и коррелирует с изменениями вектора гуморального иммунного ответа и пролиферативной активности лимфоцитов. При стрессах, вызывающих развитие иммуносупрессии как у мышей, так и у крыс, уровень rIL-1 повышается, но активность нейтральной сфингомиелиназы и пролиферации лимфоидных клеток существенно снижается. Изменение степени пролиферации лимфоцитов стало маркером тяжести патологического процесса в клинике. Установлена высокая степень корреляции низкой интенсивности пролиферации лимфоцитов периферической крови в ответ на действие IL-1 и неблагоприятного исхода заболевания у пациентов, перенесших тяжелую сочетанную травму и детей с гнойной формой менингита. Таким образом, степень пролиферации лимфоцитов в ответ на действие регуляторного сигнала IL-1 может быть использован как для анализа эффективности препаратов-иммуномодуляторов, так и в клинической и научной практике как показатель имеющий диагностическое и прогностическое значение.

Среди множества клеток-источников микровезикул (МВ) особый интерес представляют естественные киллеры (NK-клетки) - субпопуляция лимфоцитов, осуществляющая контактный цитолиз вирус-инфицированных и опухолевых клеток. Каждая из популяций NK-клеток обладает уникальным репертуаром рецепторов на своей поверхности, а, следовательно, и функциями. Функционирование NK-клеток регулируется широким диапазоном активирующих и ингибирующих рецепторов, которые экспрессируются на их поверхности. Экзоцитоз содержимого литических гранул при контакте с клеткой мишенью – самый распространённый механизм цитолиза мишени NK-клетками. В настоящее время имеются косвенные данные о способности NK-клеток продуцировать МВ, так как такие МВ с фенотипом CD56, а также МВ лейкоцитарного происхождения с различным фенотипом обнаружены в плазме периферической крови. Целью настоящего исследования явилось изучение фенотипа, состава и функциональной активности микровезикул, образуемых NK-клетками. Сравнительный анализ спонтанной экспрессии рецепторов при помощи проточной цитофлуориметрии показал, что МВ, как и клетки-источники (NK-клетки линии NK-92), обладают сходным профилем экспрессии молекул CD56 и CD16, но отличаются более выраженной экспрессией CD119 и CD11b и менее выраженной экспрессией CD18. Культивирование клеток линии NK-92 в присутствии индукторов (TNFα, IL-1β, IFNγ, PMA) приводило к изменению фенотипа как самих клеток, так и МВ, образуемых ими. По данным проведенного WesternBlot Analisis в присутствии указанных индукторов также изменялось содержание перфорина и гранзима B (GrB) в составе МВ. Анализ цитотоксической активности клеток линии NK-92 в отношении клеток линии K562 показал, что МВ, полученные от активированных TNFα клеток линии NK-92 повышают цитотоксичность активированных же TNFα клеток линии NK-92 по сравнению с уровнем их цитотоксичности в отношении клеток линии K562 без МВ, что совпадает с обнаруженным нами повышенным содержанием GrB в МВ, полученных от активированных TNFα клеток линии NK-92. Суммируя полученные данные следует отметить, что в зависимости от типа индуктора NK-клетки линии NK-92 продуцируют микрочастицы разные по фенотипу и составу. Изменение состава МВ может приводить к изменению их функциональной активности, в частности, к усилению цитотоксической активности NK-клеток.

Целью исследования явилось изучение зависимости фенотипа дендритных клеток (ДК), дифференцированных из моноцитов, от количества провоспалительных моноцитов в крови у больных раком почки (РП). Обследовано 28 больных РП (Т3N0М0, светлоклеточный тип) в возрасте 40-55 лет до хирургического лечения. Диагноз верифицирован гистологически. В качестве контрольной группы проведено обследование 31 практически здоровых людей аналогичного возрастного диапазона. Мононуклеарные клетки выделяли из гепаринизированной венозной крови центрифугированием в градиенте плотности Histopaque®-1077 с последующей адсорбцией на пластике в среде RPMI-1640 в присутствии 10% аутологичной сыворотки. Незрелые ДК (нДК) генерировали из моноцитов крови путем культивирования в течение 5 суток с GM-CSF и IFNα. Активацию ДК (аДК) индуцировали внесением в среду инкубации лизата опухолевых клеток и TNFa с последующей инкубацией в течение 48 часов. Для приготовления лизата аутологичных опухолевых клеток использовали фрагмент опухоли. Фенотипирование моноцитов крови и ДК различной степени зрелости проводили методом проточной цитометрии. У больных РП в периферической крови снижается количество CD14⁺CD16⁺-моноцитов (до 42% от уровня общих моноцитов) относительно контрольного диапазона. В связи с этим, анализ зависимости фенотипа ДК, дифференцированных из моноцитов, от количества провоспалительных моноцитов в крови был проведен путем сравнения показателей с высоким содержанием провоспалительных моноцитов в крови у больных РП (>42%, приближается к уровню контрольного диапазона) и низким (<42%). Установлено, что у больных РП с низким количеством в крови провоспалительных моноцитов (<42%) повышается содержание толерогенных нДК в клеточной культуре. Особенностью фенотипа нДК у пациентов с высоким содержанием провоспалительных моноцитов в крови (>42%) является относительное увеличение экспрессии молекул, осуществляющих антигенпрезентацию и костимуляцию. При созревании/активации фенотип дендритных клеток у больных РП с различным содержанием провоспалительных моноцитов различается сильнее. У больных с низким уровнем провоспалительных моноцитов в крови в клеточной культуре формируется пул зрелых ДК с низким уровнем экспрессии CD86- и HLA-DR-рецепторов, что, соответственно характеризует слабую костимулирующую и антигенпрезентирующую активность. У больных с высоким уровнем провоспалительных моноцитов в клеточной культуре формируется пул активированных ДК с высоким уровнем функциональной активности. Выявленные различия фенотипа ДК от субпопуляционного состава моноцитов крови у больных РП характеризуют механизмы программирования клеточной дифференцировки в зависимости от микроокружения, в том числе и патогенного характера (на фоне опухолевого роста).

Множественная миелома - это наиболее часто встречающаяся форма парапротеинемических гемобластозов, которая отличается вариабельностью клинических проявлений, форм и вариантов течения. В развитии данного заболевания существенную роль играет недостаточная эффективность противоопухолевой  иммунной защиты организма, а выживание миеломных клеток увеличивается при действии ростовых факторов, к которым относится, в том числе, целый ряд интерлейкинов. Цитокины и хемокины секретируются в ответ на межклеточные взаимодействия, стимулируя рост опухоли, ингибирование остеобластов и повышение активности остеокластов. Гены цитокинов обладают чрезвычайно высокой степенью аллельного полиморфизма. Количество вариабельных участков в одном гене может достигать нескольких десятков, и располагаться они могут в экзонах, интронах и промоторных регуляторных зонах. Известно, что одиночные нуклеотидные замены в промоторной области генов цитокинов в наибольшей степени влияют на скорость секреции и биологическую активность этих факторов. Поэтому изучение аллельных вариантов генов, определяющих базовый уровень продукции цитокинов, позволит установить новые иммуногенетические факторы, ассоциированные с высоким риском развития заболеваний, в патогенезе которых цитокины играют важную роль, в том числе и множественной миеломы. Проведено изучение взаимосвязи однонуклеотидного полиморфизма генов цитокинов (IL-1α -889 TT, IL-1β +3962 TT, IL-6 -174 GG и IL-6 nt565 GG) и клинико-лабораторных показателей (содержание сывороточного альбумина, β2-микроглобулина и гемоглобина), определяющих степень тяжести течения заболевания у 80 больных множественной миеломой, проживающих в Северо-Западном регионе России. На основании полученных результатов установлено, что наличие в генотипе провоспалительных цитокинов предрасполагающих иммуногенетических факторов: IL-1α - 889 TT, IL-1β + 3962 TT, IL-6 - 174 GG, IL-6 nt565 GG или IL-1α - 889 TT, IL-1β + 3962 TT или IL-6 - 174 GG, IL-6 nt565 GG ассоциировано с низким уровнем альбумина (<3,5 г/дл) и высоким уровнем β2-микроглобулина (>5,5 мг/л). Сочетание всех четырех «негативных» гомозигот (IL-1α -889 TT, IL-1β +3962 TT, IL-6 -174 GG и IL-6 nt565 GG) увеличивает шанс снижения уровня альбумина в 6 раз (p<0,05), сочетания гомозигот IL-1α -889 TT, IL-1β +3962 TT, IL-6174 GG и IL-6 nt565 GG увеличивает шанс повышения уровня β2-микроглобулина (>5,5 мг/л) более чем в 2 раза, что позволяет рассматривать генотипы IL-1α - 889 TT, IL-1β + 3962 TT, IL-6 - 174 GG и IL-6 nt565 GG как дополнительные негативные иммуногенетические факторы прогноза течения множественной миеломы.

Большинство пациентов страдает полипозным риносинуситом (ПРС) всю жизнь с рецидивом 50-60% в течение 18 месяцев после операции. Являясь хроническим персистирующим воспалительным заболеванием, ПРС влияет на состоянии всего организма, в том числе на системный иммунитет. Ранее методом проточной цитометрии нами было выявлено увеличение NK (CD3-CD16+CD56+), активированных NK (CD8+CD3-), NKT-клеток (CD16+CD56+CD3+), Т-регуляторных (CD4+CD25brightCD127low to neg) и активированных Т-лимфоцитов (CD3+CD25+) у всех пациентов с ПРС при отсутствии разницы между разными фенотипами. Был проведен анализ состояния клеточного системного иммунитета в зависимости от клинического течения и эффективности консервативной терапии. Пациенты были разделены на 3 группы. Срок наблюдения – 1 год. 1 группа – пациенты с положительной динамикой, при регрессе или уменьшении степени носовых полипов, 2 группа – степень выраженности полипов оставалась на том же уровне, 3 группа – степень распространенности полипов была выше, чем год назад.
В 3 группе с агрессивным ростом полипов и низким эффектом терапии наблюдалось снижение количества Treg, NKТ-клеток, NK и активированных NK, цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3+CD8+), активированных Т-клеток, что свидетельствовало об истощении клеточного системного иммунитета на фоне постоянного присутствия персистирующего продуктивного воспаления слизистой.
Во 2 группе наблюдалось увеличение общего количества лимфоцитов, общих, активированных Т-клеток, Т-хелперов (CD3+CD4+), цитотоксических Т-лимфоцитов, NK- и NKТ-клеток. Одновременно отмечается снижение абсолютного количества активированных NK, несмотря на рост NK, что предполагает нарушение механизма их активации и компенсацию этого состояния ростом NKТ-и цитотоксических Т-лимфоцитов. Одновременно наблюдается увеличение абсолютного числа Treg, что вызывает супрессию действием эффекторных клеток адаптивного иммунного ответа, способствует неполной элиминации инфекционных агентов и перманентному неполноценному течению воспалительного процесса. Хронический воспалительный процесс при ПРС влияет на системный клеточный иммунитет в зависимости от тяжести течения заболевания.

Максимальное напряжение системного клеточного иммунитета выявлено у пациентов, нуждающихся в постоянной медикаментозной терапии.
При агрессивном течении ПРС и отсутствии эффекта консервативного лечения уменьшается абсолютное число эффекторных клеток и количество Treg, что объясняет неэффективность иммунной регуляции воспалительного процесса и лечебных мероприятий у этих пациентов.

 

Ювенильный идиопатический артрит представляет собой гетерогенную группу заболеваний, преимущественно аутоиммунной или аутовоспалительной природы, основным проявлением которых является хроническое течение воспалительного процесса суставов у детей. В основе патогенеза разных форм ювенильного артрита, вероятно, лежат разные механизмы. Однако при всех вариантах ювенильного артрита развивается длительный дисбаланс между продукцией про- и противовоспалительных цитокинов в сторону преобладания первых.
Цель исследования – определение уровня спонтанной и стимулированной продукции противоспалительных цитокинов в супернатантах культур цельной крови у детей с ювенильным идиопатическим артритом.
Обследованы дети и подростки 2-17 лет с различными вариантами ювенильного идиопатического артрита (n = 99) и условно здоровые дети (контроль, n = 31). Спонтанную и фитогемагглютинин-стимулированную концентрацию IL-1rа, IL-4, IL-10, TGF-β в супернатантах клеточных культур исследовали методом ИФА.
Различий по спонтанной и митоген-стимулированной секреции исследованных цитокинов между пациентами с различными вариантами ювенильного артрита не выявлено. В объединенной группе больных с ювенильным идиопатическим артритом спонтанная выработка IL-1rа, IL-4 и IL-10 клетками крови оставалась на уровне контрольной. У пациентов медианное значение спонтанной концентрации TGF-β было нулевым, тогда как клетки крови здоровых детей обладали значимо более высоким потенциалом продукции TGF-β. После инкубации клеток периферической крови с фитогемагглютинином синтез IL-4 и IL-10 у больных не отличался от контрольного уровня, а интенсивность выработки IL-1rа и ТGF-β была достоверно ниже, чем у здоровых детей.
Более низкая по сравнению с контролем спонтанная и/или стимулированная продукция клетками крови IL-1rа и ТGF-β у детей с ювенильным идиопатическим артритом по сравнению с контрольной группой отражает патогенетическую значимость данных цитокинов при этом заболевании. Стимуляция клеток способна выявить скрытый дефицит синтеза цитокинов, не проявляющийся при определении его концентрации в сыворотке крови или супернатантах спонтанных клеточных культур. 

Изучение динамики экспрессии цитокинов, а также цитокинпродуцирующего потенциала иммунокомпетентных клеток позволяет расширить исследования их функциональных характеристик. Матричная РНК ряда генов цитокинов относительно стабильна, поэтому её уровень может быть использован в качестве маркёра для оценки степени активации и пролиферации иммунокомпетентных клеток, а также для оценки цитокинпродуцирующего потенциала иммунокомпетентных клеток.

 В нашей работе было проведено сравнение показателей экспрессии матричной РНК цитокинов IL-10, TNF-α, GM-CSF в дифференцированной в макрофаги клеточной культуре U937 с концентрацией белков этих же цитокинов в супернатанте культуры клеток U937, без воздействия и после воздействия поликлональных активаторов. Показатели экспрессии матричной РНК цитокинов IL-10, TNF-α, GM-CSF определяли методом количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Концентрацию белков этих же цитокинов IL-10, TNF-α, GM-CSF в супернатанте культуры клеток U937 измеряли методом иммуноферментного анализа. Использование в исследовании исходно однородной культуры клеток удобно, ввиду идентичности условий во всех вариантах исследования.

Наибольшее влияние поликлональные активаторы оказывают на экспрессию матричной РНК GM-CSF и на концентрацию этого цитокина в супернатанте клеточной культуры. Уровень матричной РНК TNF-α при воздействии поликлональных активаторов снижался, в то время как концентрация данного цитокина в супернатанте возрастала. Белок TNF-α в клеточной среде не отражает временных изменений в экспрессии клеточной мРНК TNF-α, так как уменьшение клеточной мРНК, возможно, из-за ингибирования по механизму обратной связи. В то время как цитокины могут накапливаться и оставаться в супернатанте, события на уровне матричной РНК, приводящие к их образованию, могут завершаться ранее. Поэтому пути передачи сигналов и кинетику выделения цитокинов следует изучать после описания временной зависимости с короткими интервалами, которая может быть индивидуальной для каждого цитокина.

Таким образом, полученные результаты исследования с использованием поликлональных активаторов позволяют сделать выводы о том, что поликлональные активаторы, являясь митогенами, оказывают существенное влияние на концентрацию секретируемых IL-10, TNFα и GM-CSF. При этом поликлональные активаторы оказывают влияние на уровни мРНК генов этих цитокинов, что указывает на транскрипционный механизм его действия. Но, в связи с тем, что данные неоднозначны, для достижения большего соответствия изменений изученных белков и мРНК необходимо подробное описание временной зависимости изменений содержания мРНК.

В основе заболеваний гастродуоденальной зоны лежит воспалительный процесс на фоне изменений мукозальной микробиоты. Хронизация воспаления слизистой оболочки желудка развивается и поддерживается путем индукции Helicobacter pylori и другими микроорганизмами секреции эпителиоцитами и иммуноцитами как провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов. В условиях дисбиоза и иммунной дисрегуляции желудочный эпителий может уподобляться тонкокишечному или толстокишечному. Целью работы стало определение диагностической и прогностической ценности цитокинов при кишечной метаплазии желудочного эпителия.
При информированном согласии 204 больных с обострением хронического гастрита, язвенной болезни желудка, полипозом желудка и 40 здоровых добровольцев проводили забор гастробиоптатов при эзофагогастродуоденоскопии (для гистологического и микробиологического исследования), 5 мл венозной крови с отделением сыворотки (для иммуноферментного анализа). Сывороточные уровни цитокинов исследовали твердофазным иммуноферментным методом. При статистической обработке результатов вычисляли чувствительность, специфичность показателей, уравнения логистической регрессии, строили характеристические кривые с определением индекса согласованности модели по площади под кривыми (AUC).
При гистологическом исследовании гастробиоптатов признаки тонкокишечной метаплазии были обнаружены у 61 (29,90%) больного, толстокишечной – у 40 (19,61%), отсутствовали у клинически здоровых добровольцев. Наибольшая чувствительность при тонкокишечной метаплазии отмечалась у интерлейкина (IL)-6, IL-4, эритропоэтина (EPO), туморнекротизирующего фактора (TNF)α, IL- 18, фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), интерферона (IFN)α, при толстокишечной метаплазии – у рецепторного антагониста IL-1β (IL-1ra), IL-8, EPO, IL-18, моноцитарного хемоаттрактантного протеина (МСР)-1, VEGF, IFNα, IL-1β, IL-6, IL-17. Общим признаком стало увеличение IL-6, EPO, IL- 18, VEGF, IFNα, косвенно с учетом функциональной активности цитокинов указывающее на микробную контаминацию желудка, тканевую гипоксию с активацией ангиогенеза, подтверждая этапность кишечной метаплазии в канцерогенезе желудка. Наибольшая специфичность при тонкокишечной метаплазии отмечалась у IL-1β, IL-1ra, IL-8, IL-17, IL-2, IL-10, при толстокишечной метаплазии – у IL-18, IFNα, IL-4, МСР-1, VEGF. При тонкокишечной метаплазии интервал AUC больше 0,7 определялся у IL-2, больше 0,65 – у VEGF, при толстокишечной метаплазии больше 0,91 – у IL- 18, VEGF, МСР-1, IFNα, и имел уровень значимости < 0,001.  Полученные прогностические модели развития кишечной метаплазии желудка, судя по AUC, имели очень хорошее (табл. 2, формула 1) и отличное качество (табл. 2, 3, формулы 2-11), что подтверждалось высоким процентом верно классифицированных признаков метаплазии.

Определение сывороточных цитокинов при кишечной метаплазии желудочного эпителия является диагностически и прогностически ценным, следует использовать для ранней диагностики предраковых состояний желудка как изолированно (IL-2, VEGF), так и в комбинации показателей согласно рассчитанным уравнениям логистической регрессии. 

В настоящее время известно, что иммунологические биомаркеры могут стать более чувствительными методами неинвазивной диагностики отторжения трансплантата, чем используемые на сегодняшний день. Растущий объем исследований на моделях животных показывает, что хемокины, как активные участники иммунного процесса, могут быть использованы в этом качестве. Ранее в наших исследованиях была показана достоверная прогностическая значимость повышения IL-6, IL-2, 17А и IL-1RA в предоперационном периоде, как маркеров острого отторжения аллотрансплантата почки, а так же среди исследуемых факторов роста периферической крови нами было сделано заключение, что резкое снижение содержания BDNF, является диагностически значимым ранним признаком отторжения аллотрансплантата почки. Целью данного исследования является выявление прогностической роли сывороточного содержания хемокинов на предоперационном этапе с учетом выработки HLA-антител в период после трансплантации в риске развития отторжения аллотрансплантата почки. Проведен сравнительный анализ сывороточной концентрации хемокинов у пациентов с хронической болезнью почек (ХБП) в терминальной стадии. Для этого у пациентов основных клинических групп за 6 часов до трансплантации оценивали содержание в крови Eotaxin (CCL11), GRO-α (CXCL1), IL-8 (CXCL8), IP-10 (CXCL10), MCP-1 (CCL2), MIP-1α (CCL3), MIP-1β (CCL4), SDF-1α (CXCL12), RANTES (CCL5), MIG (CXCL9) методом мультиплексного иммунологического анализа, с использованием соответствующих тест систем. Исследованиями показаны достоверные изменения ряда хемокинов у пациентов с ХБП относительно возрастного контроля, однако основными диагностически значимыми биомаркерами, ассоциированными с ранним отторжением трансплантируемой почки, следует считать повышение концентрации CCL2 и CCL4 хемокинов, а так же резкое снижение CCL11. Маркером благоприятного течения посттрансплантационного периода можно считать достоверное снижение в периферической крови концентрации CXCL12. Появление HLA-антител у реципиентов также ассоциировано с повышенным содержанием в сыворотке крови  CXCL8, CXCL10, CCL4 и CCL5.

Ишемический инсульт является наиболее частой формой инсульта и связан с изменением функции различных клеток крови, клеток костного мозга, высвобождения ими различных цитокинов, хемокинов и др. Существуют противоречивые данные об уровнях TNFα в сыворотке и плазме
крови при остром ишемическом инсульте.
Мы обследовали 21 пациента с диагнозом «ишемический инсульт», проходившего лечение в условиях стационара. Тяжесть ишемического инсульта оценивалась врачами невропатологами в соответствии с критериями шкалы Национального института здоровья при поступлении и при выписке. У пациентов с ишемическим инсультом выявлено достоверное (р < 0,001) повышение концентрации TNFα в сыворотке в сравнении со здоровыми лицами. Наиболее высокие значения концентрации указанного маркера регистрировались в 1-й и 3-й дни заболевания, достоверно снижаясь к 14-му дню, но не достигая при этом уровня контрольной группы. Следует указать, что у пациентов с ишемическим инсультом имело место достоверное (р < 0,001) увеличение удельного веса лиц с концентрациями исследуемого цитокина выше 10 пг/мл в сыворотке (76,2±9,3% в 1-й день заболевания).
С целью статистической характеристики различий индивидуальной динамики пациентов была проведена процедура оптимального разделения обследованных на подгруппы в зависимости от уровня TNFα в 1-й день госпитализации с помощью использования дискриминантного анализа с расчетом классификационной матрицы.
Проведение корреляционного анализа показало многочисленные достоверные сильные положительные корреляционные связи между уровнями TNFα в 1-й и 3-й дни после госпитализации, а также между аналогичными показателями в 1-й и 14-й дни. Корреляционная связь концентрации TNFα (τ = 0,711; p < 0,01) была обнаружена также между 3-м и 14-м днем. Также положительные корреляционные связи в различные периоды наблюдения, в основном значимые и сильные, установлены между абсолютными уровнями данного цитокина и разницами изменения его концентрации (дельта). Необходимо указать, что уровень TNFα в первый и третий день госпитализации положительно коррелировал (соответственно τ =0,503, p < 0,01; τ =0,411, p < 0,01) с объемом очага ишемии, выявленным с помощью нейровизуализационных методов исследования. Положительно коррелировал объем очага ишемии и с разницой концентрации TNFα в 1-3 и 1-14 дни (соответственно τ =0,425, p˂ < 0,01; τ = 0,507, p < 0,01).
Результаты наших исследований свидетельствуют о необходимости учета уровня TNFα при поступлении для планирования терапевтических мероприятий и интенсификации лечения в данных группах пациентов, особенно если на 3-й день терапии зарегистрировано повышение или недостаточное снижение TNFα.

Увеальная меланома – злокачественная опухоль нейроэктодермального происхождения. Несмотря на радикальное первичное лечение с применением энуклеации глаза или лучевой терапии, у почти 50% пациентов развивается метастатическая болезнь. Эффективность различных методов лечения злокачественных новообразований, прогноз заболевания в значительной степени зависят от состояния иммунной системы пациента. Данные о соотношении лимфоцитов разных популяций, их взаимосвязи со стадиями увеальной меланомы в настоящее время отсутствуют. Обследовано 84 пациента с увеальной меланомой (44 женщины и 40 мужчин; средний возраст 53,7 ± 12,2 года). В 1 группу (малые опухоли) вошли 36 больных, во 2-ю (опухоли среднего размера) - 26 пациентов, 22 пациента составили 3 группу (большие опухоли). В группу контроля вошли 33 практически здоровых донора. Материалом исследования служили пробы цельной крови, взятой из локтевой вены натощак в утренние часы при помощи вакуумных систем в пробирки Vaсuette® c антикоагулянтом К3EDTA. Иммунофенотипирование проводили методом проточной лазерной цитофлуориметрии с использованием системы моноклональных антител Multitest 6-Color TBNK Reagent в пробирках BD TruСount (Becton Dickinson, CША), цитометре BD FACSCanto II (Becton Dickinson, CША). Лизис эритроцитов и фиксацию лейкоцитов производили с помощью лизирующего раствора BD FACS TM Lysing Solution (Becton Dickinson, CША). Относительное и абсолютное содержание популяций и субпопуляций лимфоцитов определяли в программе Canto (Becton Dickinson, CША), с выделением анализируемого региона по общей популяции, экспрессирующей CD45+ антиген и по гранулярности клеток (CD45+PerCP-Cy5,5*/SSC); использовались меченые флуорохромами антитела к СD3+(FITC), CD4+(PE-Cy7*), CD8+ (APC-CY7*), CD16+/56+(PE), CD19+(APC*), позволяющие дифференцировать: Т-лимфоциты (CD3+), Т-хелперы (CD3+CD4+CD8-), T-цитотоксические (СD3+CD4-CD8+), T-дубль позитивные (СD3+CD4+CD8+), NK-клетки (CD16+СD56+), В-лимфоциты (CD19+), вычислить соотношение субпопуляцийСD3+CD4+/СD3+CD8+ - индекс, отражающий баланс T-хелперов и цитотоксических Т-клеток (СD4+/ СD8+). Проведенный нами индивидуальный анализ состава лимфоцитов позволяет заключить, что рост увеальной меланомы сопровождается системными разнонаправленными сдвигами в качественном и количественном составе иммунокомпетентных клеток, затрагивая как врожденное (NK клетки), так и адаптивное (Т-лимфоциты) звенья противоопухолевой иммунной защиты. Полученные результаты представляются важными для разработки персонифицированных подходов к прогнозу и лечению пациентов с увеальной меланомой. Динамика изменения количественного состава субпопуляций лимфоцитов при онкологических заболеваниях может представлять ценность для мониторинга иммунотерапевтических воздействий и дополнить клиническую оценку течения основного заболевания.

Известно, что уровень функциональной активности системы комплемента зависит не только от соотношений и концентраций компонентов, участвующих в образовании конечных продуктов системы, но и от уровня активности ингибиторов. Также многочисленные взаимосвязи с гемостазом вносят существенный вклад в общий уровень активности системы комплемента. При хронических заболеваниях, сопровождающихся дисрегуляцией иммунной системы, неизбежны изменения в функционировании системы комплемента. Все психические заболевания имеют хронический характер, а изменения в иммунной системе у таких больных усиливают их тяжесть. Расстройства аутистического спектра у детей являются психическими заболеваниями. Как правило, у таких детей выявляется дисрегуляция защитных механизмов, что проявляется в чрезмерной восприимчивости к вирусным и бактериальным инфекциям. Поэтому уровень функциональной активности всей системы комплемента, как ключевого элемента иммунной системы, имеет диагностическую и прогности-
ческую значимость для этой патологии.
Нами проведены исследования функциональной активности системы комплемента у больных расстройствами аутистического спектра с помощью ранее разработанного метода. Метод основан на реакции простейших Tetrahymena pyriformis, которые являются активаторами и мишенями для системы комплемента. В качестве основного параметра при оценке комплемента использовали потенциал комплемента – пСК. Для каждого образца сыворотки при 4-х ее концентрациях (титры 1/20, 1/40, 1/80, 1/160) определяли время гибели половины простейших – Т50, с помощью прибора «Биолат». Потенциал комплемента вычисляли как площадь, ограниченную кривой зависимости величины обратной Т50 от величины обратной титру сыворотки. В соответствии с U-критерием Манна–Уитни установлено различие между группой больных и группой здоровых по параметру Т50 при титре 1/160 – Z = 4,43, р < 0,001 и по параметру пСК – Z = 5,8, р < 0,001. Параметр пСК вычислен с учетом результатов при всех измеренных концентрациях сыворотки, и различие между двумя группами по U-критерию Манна–Уитни больше, чем различие между этими группами по параметру Т50.Поэтому параметр пСК принят нами в качестве основного показателя общей функциональной характеристики СК.
Оценку вклада плазменной составляющей гемостаза в уровень функциональной активности системы комплемента проводили с помощью определения потенциала комплемента в сыворотке и плазме  для каждого образца крови у 6 больных расстройствами аутистического спектра и 5 здоровых доноров. Для здоровых разница потенциалов комплемента в плазме и сыворотке небольшая и активность комплемента у всех выше в плазме, чем в сыворотке. Для больных уровни потенциала комплемента в сыворотке и плазме отличаются значительно – у 2-х больных уровень выше в сыворотке, чем в плазме, у 3-х больных уровень в плазме намного выше, чем в сыворотке. Разная вовлеченность коагуляции в активацию СК может свидетельствовать об особенностях дисфункции иммунной системы у больных расстройствами аутистического спектра, причины заболеваний которых различны.

Циркулирующие аутоантитела, распознающие раково-сетчаточный аутоантиген рековерин (RCVRN-АутоАТ), являются высокоспецифичными биомаркерами раково-ассоциированной ретинопатии; в то же время, они также могут выявляться у значительного числа пациентов с опухолями некоторых локализаций, не сопровождающимися возникновением ретинопатии. В настоящем исследовании при помощи дот-блот иммуноферментного анализа и Вестерн-блот анализа, циркулирующие RCVRN-АутоАТ были выявлены у 4/7 (57%) пациентов с опухолями щитовидной железы (ЩЖ), принадлежащими к недавно выделенным в отдельную диагностическую категорию фолликулярным опухолям с ядрами папиллярного типа (NIFTP); при этом в других исследованных группах опухолей ЩЖ частота встречаемости RCVRN-АутоАТ была низкой (фолликулярные аденомы – 0/15, классический и фолликулярный варианты папиллярного рака – 1/20 (5%) и 1/15 (7%), соответственно) и значимо не отличалась от таковой в группе здоровых индивидов (0/15). Полученные нами данные позволяют рассматривать циркулирующие RCVRN-АутоАТ как потенциальный биомаркер NIFTP, позволяющий дифференцировать эти опухоли от других опухолевых поражений ЩЖ.

Среди хронических воспалительных заболеваний респираторного тракта бронхиальная астма (БА) является одним из самых распространенных в мире. Поскольку БА индуцирует системный воспалительный процесс, необходимо всестороннее исследование влияния этого заболевания и его терапии на функциональное состояние организма и иммунной системы крови в частности. В фазе обострения БА клетки респираторного тракта пациентов могут усиливать секрецию не только провоспалительных, но и противовоспалительных медиаторов, последние из которых способны подавлять активность клеток иммунной системы крови. В настоящей работе была проведена оценка влияния терапии БА на выраженность воспаления и функциональное состояние клеток иммунитета периферической крови. Тестом функциональной активности иммунных клеток крови служила липополисахарид (ЛПС)-индуцированная секреция цитокинов ex vivo. ЛПС является классическим провоспалительным агентом бактериальной природы. Нами исследованы ответы клеток крови пациентов с верифицированным диагнозом БА до начала лечения и через две недели базисной противовоспалительной терапии. По клиническим показателям пациентам была назначена терапия комбинацией ингаляционных глюкокортикостероидов и агонистов β-адренорецепторов или антилейкотриеновый препарат (монтелукаст). Параллельно были исследованы ответы клеток крови условно здоровых добровольцев на ЛПС. Секрецию TNFα, IL-6, IL-8 клетками крови оценивали после экспозиции с ЛПС (100 нг/мл) в течение 6 ч, IFNγ, IL-17A, IL-1β – 24 ч. Параллельно оценивали секрецию цитокинов клетками крови, не стимулированными ЛПС. Проведен контроль уровней IL-4 в плазме крови пациентов и условно здоровых добровольцев. Концентрации цитокинов определяли методом ИФА. Показано, что через две недели терапии у пациентов уменьшалась фоновая секреция IL-6 клетками крови, что может указывать на снижение выраженности воспаления. Терапия не оказывала влияния на фоновую и ЛПС-индуцированную секрецию IL-1β, IL-1ra, IFNγ и IL-8 клетками пациентов с БА. В течение 2-недельной терапии концентрация IL-4 в плазме крови пациентов не изменялась. Клетки крови пациентов с БА секретировали значительно меньше TNFα и IL-8 в контроле и после стимуляции ЛПС, чем клетки условно здоровых добровольцев, что подтверждает предположение о частичном угнетении активности иммунных клеток крови при БА. Через две недели терапии наблюдалось увеличение ЛПС-индуцированной секреции TNFα клетками крови пациентов. С целью  определения механизма усиления ЛПС-индуцированной секреции TNFα была оценена фоновая секреция растворимой формы рецептора CD14 (sCD14) в крови пациентов с БА до терапии и через две недели после
терапии. Показано, что после терапии БА в крови пациентов не происходит увеличения концентрации sCD14. Полученные результаты указывают на sCD14-независимый механизм усиления ЛПС-индуцированной секреции TNFα. Базисная противовоспалительная терапия не только снижает концентрацию IL-6 в крови, но частично восстанавливает активность клеток врожденного иммунитета крови пациентов с БА.