Preview

Медицинская иммунология

Расширенный поиск

Получение поликлональных и моноклональных антиидиотипических антител к морфин-специфическим иммуноглобулинам

https://doi.org/10.15789/1563-0625-POP-1658

Полный текст:

Аннотация

Получение и изучение антиидиотипических (вторичных) антител (Ab2) к моноклональным первичным антителам (Ab1), специфичным к биологически активным молекулам с известной структурой, имеет большую научную и практическую значимость. В связи с частичным антигенным подобием структур Ab2 и исходного антигена эти антитела могут стать основой вакцины в том случае, если использование антигена невозможно или ограничено законодательством. В частности, на основе Ab2 могут быть созданы препараты, предназначенные для иммунизации с целью профилактики и лечения наркологической зависимости. Ценность свойств Ab2 еще более возрастает, если для их получения используют Ab1, распознающие разные участки молекулы антигена, что позволяет получить антитела второго поколения с широким спектром специфичности. В данной работе были получены морфиноподобные поликлональные и моноклональные Ab2. В каждом случае в качестве иммуноглобулинов первого поколения для иммунизации мы использовали два мышиных моноклональных антитела (мАт), специфичных к различным производным морфина: антитела 3K11 – к 3-0-карбоксиметильному (КММ) и 2-р-карбокси-фенилазометильному (ФAM) производным, а также антитела 6G1 – к 6-гемисукцинильному производному (ГСМ). После проведения иммунизации лошади данными Ab1 и развития иммунного ответа из сыворотки крови животного были выделены три пула специфических поликлональных антител – антивидовые антитела лошади к тотальным иммуноглобулинам мыши (HAM), антиидиотипические антитела лошади к антителам 3K11 (HAM-K11) и к антителам 6G1 (HAM-G1). Параллельно в результате иммунизации мышей антителами 3K11 и 6G1 и проведения слияния лимфоцитов животных с клетками миеломы мыши линии Sp2/0 по методу Мильштейна–Кёлера были получены три продуцента антиидиотипических антител: клон, продуцирующий мышиные моноклональные Ab2, специфичные к мАт-6G1 (АИ-G1), а также клоны, продуцирующие анти-мАт-3K11 антитела (АИ-K11А и АИ-K11В). В исследовании охарактеризованы физико-химические и антигенные свойства всех полученных Ab2. Показано, что антиидиотипические иммуноглобулины лошади не только относятся к различным классам, но и являются поливалентными по специфичности, в то время как все полученные моноклональные Ab2 представлены иммуноглобулинами класса IgM и строго специфичны к соответствующим антителам первого поколения. В дальнейшем на клеточной модели будут исследованы морфиноподобные свойства полученных в работе первых отечественных поликлональных и моноклональных Ab2, а также изучена возможность индукции ими появления антител третьего поколения, как и Ab1, специфичных к морфину.

Об авторах

А. В. Трофимов
ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России
Россия

Трофимов А.В. – руководитель группы лаборатории биохимии белка

197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7.



В. А. Атанесян
ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России
Россия

Атанесян В.А. – старший научный сотрудник лаборатории биохимии белка

197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7.



А. М. Ищенко
ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России
Россия

Ищенко А.М. – к.б.н., заведующий лабораторией биохимии белка

197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7.



Е. А. Карабанова
ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России
Россия

Карабанова Е.А. – инженер лаборатории биохимии белка

197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7.



А. Я. Рак
ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России; ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет»
Россия

Рак А.Я. – младший научный сотрудник лаборатории биохимии белка

197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7.



А. С. Симбирцев
ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России
Россия

Симбирцев А.С. – д.м.н., профессор, член-корр. РАН, научный руководитель

197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7.



Н. Б. Гамалея
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр психиатрии и наркологии имени В.П. Сербского» Министерства здравоохранения РФ
Россия

Гамалея Н.Б. – д.м.н., профессор, заведующая лабораторией иммунохимии

Москва



А. Г. Берзина
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр психиатрии и наркологии имени В.П. Сербского» Министерства здравоохранения РФ
Россия

Берзина А.Г. – к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории иммунохимии

Москва



Н. В. Станкова
ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий» ФМБА России
Россия

Станкова Н.В. – к.б.н., заведующая лабораторией спортивной медицины и экстремальных состояний

п. Светлые горы, Красногорский район, Московская обл.



Г. Д. Капанадзе
ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий» ФМБА России
Россия

Капанадзе Г.Д. – д.б.н., начальник научноорганизационного отдела

п. Светлые горы, Красногорский район, Московская обл.



Л. И. Ульянова
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр психиатрии и наркологии имени В.П. Сербского» Министерства здравоохранения РФ
Россия

Ульянова Л.И. – д.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории иммунохимии

Москва



Т. А. Климова
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр психиатрии и наркологии имени В.П. Сербского» Министерства здравоохранения РФ
Россия

Климова Т.А. – к.б.н., научный сотрудник лаборатории иммунохимии

Москва



Список литературы

1. Берзина А.Г., Гамалея Н.Б., Сергеева В.Е., Трофимов А.В., Кротов Г.И., Ульянова Л.И. Получение поликлональных и моноклональных антител к двум производным морфина // Вопросы наркологии, 2016. № 11-12. С. 39-54. [Berzina A.G., Gamaleya N.B., Sergeeva V.E., Trofimov A.V., Krotov G.I., Ulyanova L.I. Production of polyclonal and monoclonal antibodies against two morphine derivatives. Voprosy narkologii = Journal of Addiction Problems, 2016, no. 11-12, pp. 39-54. (In Russ.)]

2. Берзина А.Г., Гамалея Н.Б., Ульянова Л.И, Шестаков К.А., Ульянова М.А., Капанадзе К.Д., Станкова Н.В., Ревякин А.О., Фокин Ю.В., Кротов Г.И., Родченков Г.М. Методологические подходы к разработке вакцины для лечения зависимости от опиатов // Наркология, 2015. № 11. С. 25-31. [Berzina A.G., Gamaleya N.B., Ulyanova L.I., Shestakov K.A., Ulyanova M.A., Kapanadze G.D., Stankova N.V., Revyakin A.O., Fokin Yu.V., Krotov G.I., Rodchenkov G.M. Methodological approaches to development of a vaccine for the treatment of opiate dependence. Narkologiya = Narcology, 2015, no. 11, pp. 25-31. (In Russ.)]

3. Гамалея Н.Б., Берзина А.Г., Ульянова Л.И. Методологические основы создания вакцины для иммунотерапии зависимости от опиатов // Вопросы наркологии, 2017. № 4-5. С. 32-56. [Gamaleya N.B., Berzina A.G., Ulyanova L.I. Methological bases for creating a vaccine for immunotherapy of opioid use disorder. Voprosy narkologii = Journal of Addiction Problems, 2017, no. 4-5, pp. 32-56. (In Russ.)]

4. Кулаев Д.В., Насибов С.М., Маркин С.С., Бобков Ю.Г., Семенов М.П. Хроматографический способ выделения альфа-фетопротеина. Патент на изобретение RU № 2094078, 1997. [Kulaev D.V., Nasibov S.M., Markin S.S., Bobkov Yu.G., Semenov M.P. Chromatografic method of alfa-fetoprotein isolation. Patent RU 2094078, 1997].

5. Jerne N.K., Cocteau J. Idiotypic networks and other preconceived ideas. Immunol. Rev., 1984. Vol. 79, no. 1, pp. 5-24.

6. Ho M., Segre M. Inhibition of cocaine binding to the human dopamine transporter by a single chain antiidiotypic antibody: its cloning, expression, and function properties. BBA, 2003, Vol. 1638, no. 3, pp. 257-266.

7. Mahmood T., Yang P.C. Western blot: technique, theory, and troubleshooting. N. Am. J. Med. Sci., 2012, Vol. 4, no. 9, pp. 429-434.

8. Hermanson G.T. Bioconjugate techniques. Academic Press, 2008. 1323 p.

9. Pandey S. Hybridoma technology for production of monoclonal antibodies. Int. J. Pharm. Sci. Res., 2010, Vol. 1, no. 1, pp. 88-94.

10. Schabacker D.S., Kirschbaum K.S., Serge M. Exploring the feasibility of an anti-idiotypic cocaine vaccine: analysis of the specificity of anticocaine antibodies (Ab1) capable of inducing Ab2β anti-idiotypic antibodies. Immunology, 2000, Vol. 100, no. 1, pp. 48-56.

11. Walker J.M. Gradient SDS polyacrylamide gel electrophoresis. In: Methods in Molecular Biology, Vol. 1. Proteins. Ed. Clifton N.J. Humana Press, Inc., 1984, pp. 57-61.


Дополнительные файлы

1. Метаданные
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (14KB)    
Метаданные
2. Титульный лист
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (14KB)    
Метаданные
3. Резюме
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (13KB)    
Метаданные
4. Рисунок_1
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (33KB)    
Метаданные
5. Рисунок_2
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (14KB)    
Метаданные
6. Рисунок_3
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (31KB)    
Метаданные
7. Рисунок_4
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (20KB)    
Метаданные
8. Рисунок_5
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (30KB)    
Метаданные
9. Рисунок_6
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (219KB)    
Метаданные
10. Рисунок_7
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (291KB)    
Метаданные
11. Рисунок_8
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (424KB)    
Метаданные
12. Рисунок_9
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (290KB)    
Метаданные
13. Литература
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (21KB)    
Метаданные
14. Названия рисунков
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (12KB)    
Метаданные
15. Подписи авторов
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (967KB)    
Метаданные
16. Таблица_1
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (13KB)    
Метаданные
17. Таблица_2
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (12KB)    
Метаданные
18. Таблица_3
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (12KB)    
Метаданные
19. дополненное резюме
Тема
Тип Прочее
Скачать (16KB)    
Метаданные
20. Рисунок 1 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (46KB)    
Метаданные
21. Рисунок 2 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (20KB)    
Метаданные
22. Рисунок 3 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (54KB)    
Метаданные
23. Рисунок 4 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (24KB)    
Метаданные
24. Рисунок 5 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (37KB)    
Метаданные
25. Рисунок 6 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (358KB)    
Метаданные
26. Рисунок 7 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (502KB)    
Метаданные
27. Рисунок 8 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (644KB)    
Метаданные
28. Рисунок 9 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (388KB)    
Метаданные
29. таблица 1 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (13KB)    
Метаданные
30. таблица 2 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (12KB)    
Метаданные
31. таблица 3 с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (12KB)    
Метаданные
32. подписи к рисункам с переводом
Тема
Тип Прочее
Скачать (16KB)    
Метаданные

Для цитирования:


Трофимов А.В., Атанесян В.А., Ищенко А.М., Карабанова Е.А., Рак А.Я., Симбирцев А.С., Гамалея Н.Б., Берзина А.Г., Станкова Н.В., Капанадзе Г.Д., Ульянова Л.И., Климова Т.А. Получение поликлональных и моноклональных антиидиотипических антител к морфин-специфическим иммуноглобулинам. Медицинская иммунология. 2020;22(1):187-196. https://doi.org/10.15789/1563-0625-POP-1658

For citation:


Trofimov A.V., Atanesyan V.A., Ischenko A.M., Karabanova E.A., Rak A.Y., Simbirtsev A.S., Gamaleya N.B., Berzina A.G., Stankova N.V., Kapanadze G.D., Ulyanova L.I., Klimova T.A. Preparation of polyclonal and monoclonal anti-idiotypic antibodies against morphine-specific immunoglobulins. Medical Immunology (Russia). 2020;22(1):187-196. (In Russ.) https://doi.org/10.15789/1563-0625-POP-1658

Просмотров: 46


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 1563-0625 (Print)
ISSN 2313-741X (Online)