Получение поликлональных и моноклональных антиидиотипических антител к морфин-специфическим иммуноглобулинам

А. В. Трофимов; В. А. Атанесян; А. М. Ищенко; Е. А. Карабанова; А. Я. Рак; А. С. Симбирцев; Н. Б. Гамалея; А. Г. Берзина; Н. В. Станкова; Г. Д. Капанадзе; Л. И. Ульянова; Т. А. Климова

doi:10.15789/1563-0625-POP-1658

Получение поликлональных и моноклональных антиидиотипических антител к морфин-специфическим иммуноглобулинам

А. В. Трофимов, В. А. Атанесян, А. М. Ищенко, Е. А. Карабанова, А. Я. Рак, А. С. Симбирцев, Н. Б. Гамалея, А. Г. Берзина, Н. В. Станкова, Г. Д. Капанадзе, Л. И. Ульянова, Т. А. Климова

https://doi.org/10.15789/1563-0625-POP-1658

Полный текст:

PDF (Rus)

Аннотация

Получение и изучение антиидиотипических (вторичных) антител (Ab2) к моноклональным первичным антителам (Ab1), специфичным к биологически активным молекулам с известной структурой, имеет большую научную и практическую значимость. В связи с частичным антигенным подобием структур Ab2 и исходного антигена эти антитела могут стать основой вакцины в том случае, если использование антигена невозможно или ограничено законодательством. В частности, на основе Ab2 могут быть созданы препараты, предназначенные для иммунизации с целью профилактики и лечения наркологической зависимости. Ценность свойств Ab2 еще более возрастает, если для их получения используют Ab1, распознающие разные участки молекулы антигена, что позволяет получить антитела второго поколения с широким спектром специфичности. В данной работе были получены морфиноподобные поликлональные и моноклональные Ab2. В каждом случае в качестве иммуноглобулинов первого поколения для иммунизации мы использовали два мышиных моноклональных антитела (мАт), специфичных к различным производным морфина: антитела 3K11 – к 3-0-карбоксиметильному (КММ) и 2-р-карбокси-фенилазометильному (ФAM) производным, а также антитела 6G1 – к 6-гемисукцинильному производному (ГСМ). После проведения иммунизации лошади данными Ab1 и развития иммунного ответа из сыворотки крови животного были выделены три пула специфических поликлональных антител – антивидовые антитела лошади к тотальным иммуноглобулинам мыши (HAM), антиидиотипические антитела лошади к антителам 3K11 (HAM-K11) и к антителам 6G1 (HAM-G1). Параллельно в результате иммунизации мышей антителами 3K11 и 6G1 и проведения слияния лимфоцитов животных с клетками миеломы мыши линии Sp2/0 по методу Мильштейна–Кёлера были получены три продуцента антиидиотипических антител: клон, продуцирующий мышиные моноклональные Ab2, специфичные к мАт-6G1 (АИ-G1), а также клоны, продуцирующие анти-мАт-3K11 антитела (АИ-K11А и АИ-K11В). В исследовании охарактеризованы физико-химические и антигенные свойства всех полученных Ab2. Показано, что антиидиотипические иммуноглобулины лошади не только относятся к различным классам, но и являются поливалентными по специфичности, в то время как все полученные моноклональные Ab2 представлены иммуноглобулинами класса IgM и строго специфичны к соответствующим антителам первого поколения. В дальнейшем на клеточной модели будут исследованы морфиноподобные свойства полученных в работе первых отечественных поликлональных и моноклональных Ab2, а также изучена возможность индукции ими появления антител третьего поколения, как и Ab1, специфичных к морфину.

Ключевые слова

антиидиотипические антитела, антитела, иммуноферментный анализ, конкурентный анализ, моноклональные антитела, поликлональные антитела, производные морфина

Об авторах

А. В. Трофимов

ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России
Россия

Трофимов А.В. – руководитель группы лаборатории биохимии белка