ОБЗОРЫ
NK-клетки (от Natural killer), или естественные киллеры, представляют собой группу лимфоцитов врожденного иммунитета, образующихся в костном мозге. Выделение NK-клеток в отдельную популяцию лимфоцитов связано с открытием их способности индуцировать гибель опухолевых клеток без предварительной сенсибилизации. В настоящем обзоре предпринята попытка систематизации представленных в литературе многочисленных данных о биологии NK-клеток. Авторами рассмотрены этапы дифференцировки NK-клеток из общего лимфоидного предшественника (CLP) в костном мозге, описаны две функционально различные популяции зрелых NK-клеток – CD56brightCDl6- и CD56dimCD16+. Кроме того, обсуждается роль цитокинов и хемокинов в развитии NK-клеток. В обзоре собраны данные о спектре экспрессируемых NK-клетками адгезионных молекул (LFA-1, LFA-2, LFA-3; αMβ2, αXβ2, L-selectin, VLA-4, VLA-5; PECAM-1; CEACAM-1), цитокиновых рецепторов (IL-1R, IL-2ra, IL-2Rb/IL-2Rc, IL-6Rα, IL-7Ra, IL-8R, IL-10R, IL-12Rβ1, IL-15ra, IL-18R, IL-21ra, IFNGR2, TGFBR, c-Kit, CXCR1, CXCR3, CXCR4, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, IChemR23, CX3CR1), а также рецепторов, регулирующих активность NK-клеток (LILRB1, LILRB2, LILRB4; KIR2DL1-5; KIR2DS1-5; KIR3DL1-3; KIR3DS1; NKG2A, NKG2C, NKG2D; Siglec7, Siglec9; CD16; NKRP-1; TIGIT; TACTILE; NKp30, NKp44, NKp46, NKp80; LAIR-1; PD-1; TIM-3; 2B4; TLR1-9). Авторами также рассмотрены механизмы реализации NK-клетками цитотоксической активности, в том числе за счет экспрессии MHC-I-специфических рецепторов, Fc-рецепторов CD16, взаимодействия рецепторов и лигандов апоптоза (Fas-FasL и TRAIL-TRAILR), а также других рецепторов. В обзоре подробно описано строение иммунологического синапса между NK-клеткой и клеткой-мишенью, рецепторные взаимодействия и роль цитоскелета при его формировании. Помимо активирующего иммунологического синапса, в обзоре описывается ингибирующий вариант, а также приведен пример регуляции активности NK-клеток посредством ингибирующего синапса. Авторами суммированы данные о способах экзоцитоза литических гранул NK-клетками, включающих полное или частичное слияние везикул с плазматической мембраной, экзоцитоз везикул, содержащих перфорин и FasL, и образование микровезикул, содержащих гранзим B. В обзоре описаны данные о способности NK-клеток сохранять активированное состояние в течение продолжительного времени, а также поддерживать контакт одновременно с несколькими мишенями. Помимо функций, свойственных естественным киллерам как клеткам врожденного иммунитета, авторы указывают на их способность проявлять черты клеток адаптивного иммунитета. В целом, разнообразие механизмов, регулирующих активность NK-клеток, дополняет специфические функции лимфоцитов, что делает работу иммунной системы более эффективной.
Сведения, полученные в течение предыдущих эпидемий, вызванных коронавирусами, и текущей пандемии, свидетельствуют о том, что определение роли тех или иных иммунных реакций между этими вирусами и макроорганизмом является главным условием для разработки диагностических тест-систем, а также эффективных лекарственных и профилактических средств. В обзоре систематизированы результаты изучения пато- и иммуногенеза SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2. Доказано, что эти коронавирусы подавляют формирование адаптивного иммунного ответа еще на стадии его индукции, влияют на количество и функциональную активность эффекторов клеточного иммунитета – лимфоцитов, вызывая нарушение лимфопоэза, апоптоз и «истощение» этих клеток, что приводит к более длительному течению заболевания и увеличению вирусной нагрузки.
Отражены сведения о роли клеточного звена иммунитета в формировании иммунного ответа к коронавирусам. Доказано, что возбудители SARS, MERS и COVID-19 запускают в макроорганизме формирование адаптивного иммунитета по гуморальному и клеточному типу. Причем синтез специфических иммуноглобулинов еще не свидетельствует о наличии протективного иммунного ответа. Не менее важным является активация клеточного звена иммунитета. Описана высокая степень гомологии антигенных эпитопов у SARS-CoV, MERS-CoV и SARS-CoV-2, что обуславливает возможность формирования перекрестного иммунитета к коронавирусам.
В обзоре рассмотрены вопросы, касающиеся длительности сохранения специфических клеток памяти к SARS-CoV, MERS-CoV и SARS-CoV-2 и их роли в обеспечении длительной протективной защиты от этих инфекций. Учитывая, что специфические антитела к возбудителям SARS и MERS сохранялись в течение года, часто не выявлялись или регистрировались кратковременно у пациентов с легкой и бессимптомной формой инфекций, можно говорить о важной роли клеточного иммунного ответа в обеспечении иммунитета к данным коронавирусам.
Показано, что в отличие от антител, антигенспецифические Т-клетки памяти регистрировались у переболевших атипичной пневмонией от четырех до одиннадцати лет, ближневосточным острым
респираторным синдромом – до двух лет. Для определения наличия и количества Т-клеток памяти при COVID-19 требуются дальнейшие исследования. Проведение сравнительного анализа данных, полученных во время предыдущих эпидемий, касающихся формирования адаптивного иммунитета к коронавирусам, описание белков и эпитопов, распознаваемых Т-лимфоцитами человека, будет полезно при мониторинге иммунных реакций у пациентов с COVID-19, а также при создании информативных тестов для изучения Т-клеточного иммунного ответа на SARS-CoV-2 и новых профилактических препаратов.
Клеточный инфильтрат является морфологическим субстратом иммуновоспалительных ревматических заболеваний. Cистемная прогрессирующая дезорганизация рыхлой волокнистой соединительной ткани сопровождается утратой толерантности с собственными аутоантигенами, активацией клеток макрофагально-моноцитарного ряда и аутореактивных клонов Т- и В-лимфоцитов. Гиперпродукция провоспалительных хемо- и цитокинов, локальные адгезионные лиганд-рецепторные взаимодействия, эндотелиальная реакция и ангиогенез способствуют формированию клеточного инфильтрата, эктопических лимфоидных структур и ГЗТ-гранулем in situ. Аутоиммунный ответ является следствием последовательных системных и местных молекулярно-клеточных событий, в которых задействованы механизмы врожденного и адаптивного иммунитета. При интерпретации иммунопатогенеза ревматических заболеваний применяются все модели и схемы, принятые в области фундаментальной иммунологии. Это модель МНС-рестрикции, модель молекулярной мимикрии, или перекрестной (кросс) АГ-презентации, модель срыва центральной или периферической толерантности к ауто-АГ, модель кандидатных «триггеров» аутоиммунных и аутовоспалительных процессов, модель ассоциаций аллелей МНС I и II классов с конкретными, нозологически уникальными, ревматическими заболеваниями.
В настоящем обзоре рассматривается роль тучных клеток (ТК) и уровня триптазы при различных патологических состояниях у детей и взрослых. Приведены основные причины гипертриптаземии, а также перечень наиболее важных стимулов, которые могут вызвать активацию ТК. Основное внимание в своей клинической практике аллергологи должны уделять больным с анафилаксией и с подозрением на синдромы активации ТК. Кроме того, гипертриптаземия (> 20 нг/мл) считается дополнительным диагностическим критерием системного мастоцитоза согласно рекомендациям Всемирной организации здравоохранения. Как правило, уровень триптазы остается постоянно повышенным у большинства больных с системным мастоцитозом, тогда как при острых IgEопосредованных реакциях гиперчувствительности она изменяется. В случаях анафилаксии больному необходимо провести определение концентрации триптазы в первые часы от начала острой аллергической реакции и затем еще через 24-48 час. Даны рекомендации по определению уровня триптазы в сыворотке крови больных (базальная триптаза и пиковая триптаза) и алгоритмы применения этих показателей при различных заболеваниях. В статье дана также оценка пороговых значений триптазы в диагностике анафилаксии, синдромов активации ТК и нового заболевания – альфа-триптаземии. В диагностике наследственного заболевания альфа-триптаземии, а также синдромов активации ТК (первичных и вторичных) следует учитывать клинические проявления у больного и уровень триптазы в динамике. Накопленный опыт позволил экспертам рекомендовать учитывать прежде всего частоту тяжелых аллергических реакций (чаще всего в виде анафилаксий) у больных с подозрением на синдромы активации ТК. Синдром активации ТК характеризуется чрезмерным высвобождением содержимого гранул ТК без признаков клональной пролиферации, что во многих случаях может быть следствием удвоения аллельного гена, особенно гена α-триптазы TPSAB1. Для больных с наследственной альфа-триптаземией наиболее характерны проявления по типу вегето-сосудистой дистонии (ортостатистическая тахикардия), гипермобильность суставов и т.п. Таким образом, определению уровня триптазы (особенно в динамике) следует уделить больше внимания в практике клиницистов. Трудности в интерпретации результатов возникают в случаях, когда ее концентрация остается в пределах нормы (до 11,4 нг/мл), а клинически у пациента имеет место мастоцитоз или синдромы активации ТК. При наличии у пациента в анамнезе анафилаксии, особенно после укуса перепончатокрылых насекомых, следует исключить синдромы активации ТК.
Онкологические заболевания представляют серьезную социально-экономическую проблему. Основным подходом к терапии опухолей является их хирургическая резекция, часто дополняемая лучевой и химиотерапией. Эффективность такого комплексного лечения во многих случаях остается невысокой. В связи с этим возникает острая необходимость поиска новых соединений, обладающих селективной цитотоксической активностью в отношении опухолевых клеток и не повреждающих нормальные ткани организма. В обзоре рассматриваются механизмы противоопухолевого действия катионных антимикробных пептидов (АМП) семейства кателицидинов – α-спирального кателицидина человека (LL-37) и пептида с конформацией β-шпильки – протегрина-1 (PG-1) на клетки рака легкого, молочной, поджелудочной, предстательной желез, меланомы, плоскоклеточного рака кожи, полости рта, желудка, яичников, колоректального рака, лейкозов, лимфом, глиом и нейробластом. Обсуждается возможность противоопухолевого и противоположного – проонкогенного действия пептидов и взаимосвязь этих эффектов c иммуномодулирующей активностью АМП на опухоль-ассоциированные макрофаги, естественные киллерные клетки и T-лимфоциты. Приводятся возможные механизмы селективного действия LL-37 и PG-1 на опухолевые клетки, включающее взаимодействие LL-37 с G-белок-связанными рецепторами: N-формилпептида-2 (FPR2), CXC хемокина-2 (CXCR2), Mas-ассоциированным с геном X (MrgX2), пуринергическим (P2Y11), эпидермального (EGFR/ErbB1, ERBb2), инсулино-подобного (IGF1R) факторов роста, лиганд-управляемых ионных каналов (LGIC) и Toll-подобными (TLR) рецепторами, экспрессия которых значительно изменяется в разных типах опухолей по сравнению с нормой. Однако при этом особенно важно учитывать, что терапевтические эффекты LL-37 и его производных могут использоваться только для конкретных типов опухолей. Механизмы действия PG-1 на опухолевые клетки остаются еще плохо изученными, хотя имеющиеся данные свидетельствуют, что протегрин проявляет более однонаправленное действие – повреждает мембраны. Протегрин-1 и LL-37 могут синергически усиливать противоопухолевые эффекты химиопрепаратов и оказывают более выраженное действие на опухолевые, чем на нормальные клетки. Природные АМП представляются перспективными кандидатами на роль новых противоопухолевых средств, которые проявляют активность и в отношении злокачественных метастазирующих, рецидивирующих опухолей с множественной лекарственной устойчивостью. С другой стороны, такие пептиды, как LL-37, проявляют в некоторых случаях свойства, которые могут рас- сматриваться как проонкогенные, что указывает на необходимость дальнейшего детального изучения молекулярных механизмов их действия на опухолевые клетки.
Переливания компонентов крови являются неотъемлемой частью лечебных мероприятий при ряде патологических состояний. Однако при проведении гемокомпонентной терапии важно учитывать вероятность посттрансфузионных осложнений, основную часть которых составляют иммунообусловленные побочные явления. Неблагоприятные последствия гемотрансфузий могут проявляться спустя длительный период времени, а патогенез данных явлений может быть ассоциирован не только с наличием аллоантител. Причинами могут быть аллоиммунизация к антигенам HLA, факторы лейкоцитарного происхождения, включая цитокины, продукты дегрануляции лейкоцитов, а также феномен повреждения эритроцитов при хранении (“storage lesion”), иммуномодулирующие свойства внеклеточных везикул или микрочастиц, содержащихся в компонентах крови, и другие факторы. Несмотря на значительное количество публикаций по данной проблеме, остается ряд нерешенных вопросов, связанных с воздействием трансфузий компонентов крови на иммунную систему реципиентов. В обзоре литературы приводятся результаты современных исследований, посвященных изучению данного феномена. Рассматриваются выявленные в последние годы особенности трансфузионно-обусловленной иммуномодуляции (ТОИМ), при переливании различных компонентов крови. Приводятся результаты современных исследований, посвященных изучению данного феномена. Освещена роль плазменных факторов, микрочастиц, тромбоцитов и эритроцитов, HLA-сенсибилизации и микрохимеризма в развитии ТОИМ, приводятся данные об особенностях возникновения ТОИМ в периоперационном периоде. Отдельный раздел обзора содержит сведения о клинических исследованиях, проводившихся за последние годы и посвященных проблеме ТОИМ, в том числе в группах новорожденных, пациентов со злокачественными новообразованиями, у иммунокомпрометированных пациентов после операций на сердце и сосудах. Освещаются данные по частоте наличия феномена ТОИМ у пациентов с ослабленной предыдущим заболеванием или проводимым лечением иммунной системой, наличием выраженной коморбидности, обширным хирургическим торакальным/абдоминальным вмешательством и искусственным кровообращением. На основании проведенных исследований обсуждается роль в снижении частоты развития ТОИМ таких мероприятий при заготовке компонентов крови, как отмывание концентратов эритроцитов, лейкодеплеция, гамма-облучение. Данные опубликованных научных исследований не позволяют окончательно сделать определенные выводы о воздействии трансфузий компонентов крови на иммунную систему реципиентов в связи с различием изучаемых групп больных, особенностей исследуемых нозологий и клинических ситуаций, разноплановостью гемокомпонентов, а также различных стандартов трансфузионной терапии, принятых в разных странах. Тем не менее систематизированный обзор литературы может помочь ориентироваться в вопросах трансфузионно-обусловленной иммуномодуляции.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Целью исследования явилось сравнительное изучение субпопуляционного состава Т-лимфоцитов у больных анкилозирующим спондилитом (АС), получающих различные виды генно-инженерной биологической терапии (ГИБТ). Обследовано 58 пациентов в возрасте 20-58 лет с диагнозом АС на фоне лечения анти-TNFα и анти-IL-17 препаратами, а также получавших традиционную противовоспалительную терапию. Диагноз «АС» устанавливался на основании модифицированных Нью-Йоркских критериев. Активность заболевания оценивалась с помощью индексов BASDAI и ASDAS с использованием СОЭ и СРБ согласно текущей номенклатуре, утвержденной Assessment of SpondyloArthritis International Society и Outcome Measures in Rheumatology. В качестве контроля обследовано 45 здоровых людей в возрасте 18-57 лет. Исследование фенотипического состава T-лимфоцитов проводили методом проточной цитометрии с использованием прямой иммунофлуоресценции цельной периферической крови. Установлено, что субпопуляционный состав Т-лимфоцитов у больных АС значительно различается в зависимости от типа проводимой терапии. У больных АС на фоне традиционной противовоспалительной терапии в крови снижается содержание Т-лимфоцитов, но при повышении относительного количества Т-клеток с высоким уровнем эффекторного потенциала и секреции цитокинов. Отрицательные взаимосвязи уровней цитотоксических Т-клеток эффекторной памяти и пре-эффекторов с лабораторными и клиническими показателями активности воспаления при АС характеризуют недостаточную эффективность традиционной терапии. Субпопуляционный состав Т-лимфоцитов у больных АС на фоне анти-IL-17 терапии полностью соответствует контрольным значениям. Однако, исходя из многочисленных взаимосвязей между иммунологическими и клинико-лабораторными показателями, сделано заключение об ингибирующем влиянии анти-IL-17 терапии на активность суставного воспаления, тогда как состояние субпопуляционного состава Т-клеток будет зависеть от стандартных средств противовоспалительной терапии. Наиболее выраженные изменения в субпопуляционном составе Т-лимфоцитов обнаружены у больных АС при анти-TNFα терапии, что проявляется в снижении эффекторного потенциала Th-клеток и цитотоксических Т-лимфоцитов. При этом, у больных АС именно на фоне анти-TNFα терапии обнаружена минимальная частота внескелетных проявлений. Соответственно, более высокая эффективность ГИБТ (по сравнению с традиционными методами терапии) определяется механизмами воздействия на иммунные мишени патогенеза АС, что проявляется, в том числе, изменением субпопуляционного состава Т-лимфоцитов. Причем, исходя из полученных результатов, применение анти-TNFα в сравнении с ингибиторами анти-IL-17 в большей степени оказывает влияние на фенотипический состав Т-клеток.
Псориаз считается аутоиммунным заболеванием с преимущественно клеточным механизмом реализации патологии. Исследования иммунопатогенеза псориаза сделаны либо на модельных животных, а это не совсем то же самое, что и у человека, либо данные получены методом кожного окна у пациентов, что травматично, или исследуя венозную кровь, но в венозной крови трудно вычленить параметры местного иммунного ответа. Нами была предпринята попытка найти удобный, как для пациента, так и для исследователя, и адекватный способ оценки местных иммунных процессов, происходящих в пораженной псориазом коже. Были обследованы 20 пациентов с верифицированным диагнозом псориаз, средний возраст составил 44,3 года. В контрольную группу вошли 15 практически здоровых взрослых, средний возраст 46,6 года. Капиллярную кровь брали из пальца руки, а у псориатических больных вблизи очага с клиническими проявлениями в конечном объеме 400 мкл в две микроветы. Венозную кровь забирали из локтевой вены в вакуумную пробирку с ЭДТА в объеме 3 мл. Клинический анализ венозной и капиллярной крови производили на гематологическом автоматизированном анализаторе. Иммунофенотипирование проводили путем четырехцветного окрашивания цельной капиллярной и венозной крови с последующим лизированием эритроцитов. Цитофлюорометрию проводили с использованием технологии и реактивов BD Biosciences (США). Цитокины в плазме крови определяли мультиплексным методом (MagPix, BioRad, США). В клиническом анализе крови разницы между капиллярной и венозной кровью ни в группе здоровых, ни в группе больных псориазом выявлено не было. У здоровых людей субпопуляционный состав мононуклеаров, как в венозной, так и в капиллярной крови не различался. У больных псориазом выявлены значимые повышения как в капиллярной, так и в венозной крови, уровней дважды положительных лимфоцитов (CD45RA+/CD45R0+), В-лимфоцитов и NKT-лимфоцитов как в процентном, так и в абсолютном выражении. В капиллярной крови больных псориазом отмечается значимое повышение процента наивных Т-лимфоцитов, активированных хелперов (Thact) и Treg, а также В1-клеток и Breg и значимое снижение В2-лимфоцитов. В венозной крови псориатических больных выявлено только значимое повышение Thact, Treg и Breg. В капиллярной крови больных псориазом обнаружено значимое повышение уровней не классических М2-моноцитов и воспалительных Minfl моноцитов и снижение уровня классических М1-моноцитов, в венозной крови псориатических больных выявлено только повышение воспалительных Minfl моноцитов. В капиллярной крови уровни всех исследованных цитокинов больных псориазом значимо превышают уровни соответствующих цитокинов в группе здоровых, за исключением IL-10, уровень которого не отличался от группы здоровых. В венозной крови уровни большинства исследованных цитокинов в группе больных псориазом не отличались от группы здоровых. Исключение составили повышение примерно в 2 раза цитокинов: IL-4, IL-21, IL-23 и TNF. Cубпопуляционный состав мононуклеаров и цитокиновый профиль капиллярной и венозной крови здоровых людей значимо не различаются. Предложенный нами метод определения субпопуляционного состава мононуклеаров и профиля цитокинов капиллярной крови из зоны псориатического поражения можно использовать для мониторинга местного иммунитета у больных псориазом. Он существенно менее травматичный, чем метод кожного окна, и более информативный, чем исследование венозной крови.
Крапивница представляет собой серьезную медико-социальную проблему в связи с высокой распространенностью, отсутствием унифицированных подходов к диагностике и лечению, с большими финансовыми затратами на терапию и реабилитацию. Длительное рецидивирующее течение болезни, резистентность к традиционным методам терапии приводят к существенному снижению качества жизни больных хронической крапивницей: зуд, сопровождающий данное заболевание, приводит к ухудшению общего самочувствия пациента, часто нарушению сна и, как следствие, значительному снижению работоспособности. Этиопатогенез крапивницы является до настоящего времени сложной задачей в связи с многовекторностью цитокинового ответа, участия белков системы комплемента, особенностей кинин-брадикининового участия, особой экспрессии генов иммунного ответа. Проблемой современной популяции является ожирение – хроническое, гетерогенное, цитокин-опосредованное, прогрессирующее воспалительное заболевание, характеризующееся избыточным накоплением жировой ткани. Жировая ткань, как отдельный орган эндокринной системы, продуцирует множество гормоноподобных веществ, медиаторов, цитокинов и хемокинов, они получили общее наименование адипокины или адипоцитокины. В проведенном исследовании установлены достоверные признаки деструктивных изменений паренхимы печени в виде увеличения билирубина и АСТ, снижение уровня витамина D у пациентов с ХРК на фоне ожирения. Действие цитокинов, как медиаторов межклеточного взаимодействия, тесно связано с физиологическими и патофизиологическими реакциями организма с модуляцией как локальных, так и системных механизмов защиты. Предполагается, что в цитокиновом статусе пациентов с хронической крапивницей преобладают цитокины, усиливающие аллергическое воспаление кожи. Анализ концентрации 12 Т-регуляторных биомаркеров выявил повышенные концентрации IL-10, IL-19, IL-20, IL-27, IL-35, IFNλ2 и IFNλ1 в сыворотках крови пациентов с хронической крапивницей. Установлено, что в группе пациентов с хронической крапивницей и с повышенным индексом массы тела (ИМТ) уровень всех исследованных Т-регуляторных цитокинов ниже по сравнению с группой пациентов, у которых ИМТ в норме, за исключением IL-10. Выявлены сниженные уровни содержания биологически активных IFN I (α/β) и особенно IFN II (γ) типов лейкоцитами крови пациентов с хронической крапивницей. Получены данные об уровнях 12 Treg-цитокинов в сыворотке крови пациентов с ХК с выявленной тенденцией к дисбалансу Тreg-цитокинов: IL-10, IL-19, IL-20, IL-27, IL-35, IFNλ2 и IFNλ1.
Хромосомная патология – одна из самых частых причин возникновения врожденных пороков развития. Симптомокомплекс CATCH-22 чаще всего ассоциируется с микроделецией 22 хромосомы, при выявлении которой принято устанавливать диагноз синдром Ди Джорджи – известный первичный иммунодефицит или синдром врожденных ошибок иммунитета. По нашим данным по частоте встречаемости среди всех хромосомных аномалий синдром Ди Джорджи в Свердловской области на втором месте после синдрома Дауна, однако его диагностика не настолько проста в силу различной выраженности клинических проявлений, а также разнообразных форм дефектов 22 хромосомы. Кроме того, что существует несколько типичных вариантов микроделеций 22q11, также встречаются и дупликации критически важных регионов, сопровождающиеся иммунодефицитом и другими симптомами CATCH-22. Эффективность диагностики хромосомных аномалий как в пре-, так и в постнатальном периоде во многом зависит от критериев формирования группы пациентов с подозрением на хромосомные аномалии и от примененных методов выявления наследственной патологии. В нашем исследовании мы провели анализ и сравнение результатов исследований 23 пациентов с различными перестройками региона 22q11.2, которые наблюдались у генетика и клинического иммунолога. В работе приведены данные о полиморфизме фенотипов при перестройках региона 22q11.2 с анализом патоморфологических проявлений в зависимости от типа структурной аномалии – del22q11.2 и dup22q11.2. Результаты анализа демонстрируют важность обладания спектром диагностических возможностей для лабораторного исследования микроделеционных и микродупликационных синдромов, ассоциированных с иммунозависимой патологией. Также было проведено сопоставление результатов молекулярно-генетической диагностики и фенотипичских проявлений при делециях и дупликациях региона q11.2 хромосомы 22. Для выявления перестроек региона 22q11.2 были использованы два различных метода – Prenatal BoBs и мультиплексная лигазозависимая амплификация проб (MLPA). В частности, оба этих метода были использованы у одного и того же пациента для верификации диагноза, что позволило выявить отличия в их эффективности. Сделано заключение, что синдром делеции 22q11.2 обладает широкой гетерогенностью в фенотипических проявлениях: неврологические и иммунологические проявления, аномалии развития опорно-двигательного аппарата и внутренних органов, деформации черепа и лицевой дисморфизм. Каждый клинический случай является уникальным, требующим тщательного разбора клинических проявлений. Необходимо иметь широкий спектр диагностических возможностей для молекулярно-генетической верификации диагноза.
Черепно-мозговая травма является наиболее частой причиной смерти и инвалидности среди молодых людей, включая спортсменов и солдат, людей в возрасте до 45 лет в промышленно развитых странах, и представляет растущую проблему со здоровьем как в развивающихся странах, так и среди стареющих людей, лечение которых является серьезной проблемой современной медицины. Этот вид травм приводит ко многим видам расстройств и очень часто к инвалидности, что обуславливает необходимость разработки новых методов лечения травм головного мозга. В экспериментах на мышах изучали новый метод лечения травм головного мозга, в частности использовали натриевую соль дезоксирибонуклеиновой кислоты. Этот препарат известен как смесь пептидов с иммуномодулирующим действием, который широко используется для лечения воспалительных, аллергических и аутоаллергических процессов. Натриевая соль дезоксирибонуклеиновой кислоты (DNA) (Деринат), выделенная из икры русского осетра, является препаратом, эффективность применения которого показана при лечении различных заболеваний. В настоящей работе показаны нейропротекторные, антиоксидантные и противовоспалительные эффекты «Дерината» на модели черепно-мозговой травмы (ЧМТ) у крыс. Внутрибрюшинная инъекция «Дерината» в течение 3 дней после ЧМТ снижает объем повреждения ткани мозга. Иммуногистохимический анализ позволил констатировать морфологические изменения клеток микроглии в коре головного мозга и гиппокампе через 7 дней после ЧМТ, которые значительно снижались при введении препарата, как и индуцированное ЧМТ накопление 8-оксогуанина (8-oxoG) – маркера окислительного повреждения. Для изучения клеточного механизма противовоспалительных эффектов использовали первичную культивированную мышиную микроглию с АТФ (50 мкм и 1 мм) в качестве вещества, высвобождающегося в месте повреждения, для имитации воспалительной реакции in vitro. Введение «Дерината» обуславливало повышение количества мРНК нейротрофического фактора глиальных клеток (GDNF) и фактора роста нервов (NGF) в присутствии АТФ, а уровень мРНК активатора тканевого плазминогена (tPA) снижался при действии АТФ в сочетании с «Деринатом» или без него. Хотя экспрессия мРНК интерлейкина-6 (IL6) не изменялась при действии АТФ, она возрастала при аппликации «Дерината». Те же показатели фактора-α некроза опухоли (TNFα) были значительно ингибированы. Комплекс полученных данных раскрывает механизмы иммуномодулирующего действия дезоксирибонуклеиновых кислот при ЧМТ.
КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
Естественные киллеры (NK-клетки) являются лимфоцитами врожденного иммунитета. Дифференцировка NK-клеток находится под контролем клеток микроокружения и продуцируемых ими цитокинов, в том числе IL-2, IL-15 и IL-18. NK-клетки представлены в различных тканях, где они формируют пулы тканерезидентных естественных киллеров, одним из таких пулов являются NK-клетки децидуальной оболочки. Предполагаемым источником клеток для дифференцировки NK-клеток децидуальной оболочки являются NK-клетки периферической крови (pNK). В матке NK-клетки контактируют с клетками трофобласта, что может влиять на их фенотип. Вклад клеток трофобласта и цитокинов IL-2, IL-15 и IL-18 в регуляцию фенотипа pNK-клеток недостаточно изучен. В связи с этим целью работы была оценка влияния клеток трофобласта на фенотип pNK-клеток в условиях культивирования в среде с IL-2, IL-15, IL-18. В работе использовали мононуклеары, полученные из периферической крови здоровых небеременных женщин репродуктивного возраста, с регулярным менструальным циклом (n = 21). Мононуклеары культивировали в присутствии IL-2 и одного из цитокинов, регулирующих дифференцировку NK-клеток – IL-15 или IL-18. В качестве клеток трофобласта использовали клетки линии JEG-3. Оценивали экспрессию pNK-клетками рецепторов CD45, CD3, CD56, CD14, KIR3DL1, KIR2DL3, KIR2DL4, KIR2DS4, NKp44, CD215, CD122, CD127, NKG2D, KIR2DL1, NKG2C. Установлено, для pNK-клеток, прокультивированных в присутствии клеток трофобласта линии Jeg-3, характерна более низкая интенсивность экспрессии рецептора CD56 по сравнению с pNK-клетками, прокультивированными без клеток трофобласта. Эти изменения выявлены в случае культивирования как в среде с IL-15, так и в среде с IL-18. Выявлено сниженное количество NKG2C+ pNK-клеток в присутствии клеток трофобласта линии Jeg-3 по сравнению с NK-клетками, прокультивированными без клеток трофобласта, при культивировании в среде c IL-15. Выявленные изменения экспрессии CD56 и NKG2C pNK-клетками в присутствии клеток трофобласта противоположны ранее установленным для NK-клеток линии NK-92. Вероятно, помимо клеток трофобласта, моноциты, присутствующие в составе мононуклеаров, под действием цитокинов, могут влиять на фенотип pNK-клеток в использованной модельной системе. Так как моноциты/макрофаги присутствуют в децидуальной оболочке, требуются дальнейшие исследования влияния цитокинов и клеток микроокружения, в том числе моноцитов, на pNK-клетки.
Микрофлора ротовой полости формирует биопленку, индуцирующую хроническое воспаление, при котором последствия инфекции играют решающую роль в патогенезе пародонтита. При заболеваниях пародонта выявляются Th1, Th2, Th17, Treg. Имеются данные о том, что Т-регуляторные клетки (Treg) являются ключевыми противовоспалительными клетками. Th17-клетки и Treg-клетки играют важную роль в дифференцировке остеокластов. Секретируемый клетками Th17 IL-17 влияет на остеокластогенез и может индуцировать макрофаги к усилению местного воспалительного ответа. В связи с этим, целью работы стало определение клеток местной иммунной системы ротовой полости, связанных со степенью тяжести хронического генерализованного пародонтита. Обследована ротовая полость 58 человек в возрасте 38-65 лет обоего пола зрелого возраста с диагнозом «хронический пародонтит» методом проточной цитофлуориметрии. Исследование уровня нейтрофилов CD64+CD16+CD14 - при различных степенях тяжести пародонтита выявило статистически значимое увеличение количества клеток при развитии заболевания. При легкой степени тяжести ХГП выявилось существенное повышение уровня CD64+CD16+CD14- Me = 36,16% (p < 0,05) по сравнению с контрольной группой (Me = 7,7%; Q0,25 = 2,4%; Q0,75 = 12%). Исследование относительного количества моноцитов CD14+ при различных степенях тяжести пародонтита выявило статистически значимое снижение количества клеток тяжелой степени пародонтита. Исследование уровня регуляторных T-лимфоцитов CD4+CD25+CD127low при различных степенях тяжести пародонтита выявило статистически значимое снижение количества клеток при развитии заболевания: при легкой степени тяжести ХГП (Me = 5,6%; Q0,25 = 1,8%; Q0,75 = 8%) по сравнению с контрольной группой (Me = 22,7%; Q0,25 = 12%; Q0,75 = 32%). Полученные результаты подтверждают противовоспалительную регулирующую функцию Treg. Понимание остеоиммунных механизмов контроля ремоделирования костной ткани позволит понять патофизиологию ускоренной потери костной массы, наблюдаемой при хроническом пародонтите тяжелой степени.
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Новый коронавирус SARS-CoV-2 явился глобальным вызовом медицине и, в частности, лабораторной диагностике. Исследование уровня антител к SARS-CoV-2 можно использовать как подтверждающий тест при диагностике заболевания, но оно приобретает первостепенное значение при оценке популяционного иммунитета, возникшего в результате заболевания или вакцинации, а также при выборе доноров плазмы реконвалесцентов. Разработанные в нашей стране и зарубежом тест-системы для выявления антител к вирусу SARS-CoV-2 различаются как по способам проведения тестирования, так и по использованным антигенам коронавируса, к которым направлены антитела. Целью настоящего исследования было сравнение диагностической чувствительности и специфичности пяти тест-систем для обнаружения антител класса IgG к вирусу SARS-CoV-2, основанных на разных методах диагностики. Исследованы образцы сыворотки крови от 137 реконвалесцентов COVID-19 и 166 доноров крови и ее компонентов. Контрольную группу составили 50 сывороток крови, собранные в начале 2019 года, и 19 сывороток, собранные в 2018 году (до появления вируса SARSCoV-2) и хранившиеся при -70 °С. Тестирование проводили в аналитических системах: экспресс-тест COVID-19 IgM/IgG Rapid Test (Colloidal Gold) (КНР), на автоматическом иммунохимическом анализаторе Abbott Architect™ i2000 и реагентах SARS-CoV-2-IgG (Abbot, Chicago, IL США), методом хемилюминисценции с использованием автоматического анализатора серии CL и реагентов фирмы Mindray (КНР) SARS-CoV-2 IgM и SARS-CoV-2 IgG и иммуноферментным методом на наборах компаний ООО «Диагностические системы» (г. Нижний Новгород) ДС-ИФА-АНТИ-SARS-CoV-2-G, ООО «Хема» (ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России) SARS-СоV-2-IgG-ИФА и ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск) SARS-CoV-2-IgМ-ИФА-БЕСТ и SARS-CoV-2-IgG-ИФА-БЕСТ. При сопоставлении результатов тестирования 137 образцов плазмы на тест-системах «Вектор-Бест» и Mindray для IgG-антител 127 образцов были положительными, 7 образцов – отрицательными на обеих тест-системах, несовпадение – 2,2%. При исследовании IgM-антител 32,1% были положитель-
ными, а 52,6% – отрицательными в обеих тест-системах. Процент несовпадений составил 15,3%. Из 166 образцов отрицательной в 5 тест-системах оказалась 1 сыворотка (0,6%). На тест-системе Mindray IgG-антитела к антигенам вируса SARS-CoV-2 выявлены в 165 образцах (99,4%), на «Вектор-Бест» – в 164 сыворотках (98,8%), на «Диагностических системах» – в 151 (90,96%), на Хема – в 154 (92,8%), а на Abbott – в 155 образцах (93,4%). При этом 135 (81,33%) образцов были положительными во всех тест-системах, тогда как 30 образцов имели дискордантные результаты (18,07%), а в 9 сыворотках специфических IgG не обнаруживалось в 2 и более тест-системах. ROC-анализ выявил высокую диагностическую ценность всех исследованных тест-систем (AUC от 0,908 до 0,998), что свидетельствует о высоком качестве разделительной модели положительных и отрицательных образцов (p < 0,001). При заданных производителями тест-систем cut-off чувствительность и специфичность находилась в диапазоне от 82,8% и 93,3% для набора «Диагностические системы» до 99,4% и 95,8% для набора «Вектор-Бест». Рассчитанные коэффициенты корреляции были выше между тест-системами со сходным составом использованного в тест-системе антигена, поэтому наблюдение за динамикой антител лучше проводить в тест-системах одной и той же фирмы-производителя.
ТОЧКА ЗРЕНИЯ
Первичные иммунодефицитные состояния являются группой заболеваний, являющихся следствием разнообразных генетических дефектов. В настоящий момент известно более 300 иммунодефицитов, большая часть которых негативно влияет на качество и продолжительность жизни, приводит к летальным исходам в первый год жизни ребенка. Наиболее тяжелыми и при этом достаточно частыми являются дефекты клеточного иммунитета. В настоящий момент считается, что частота встречаемости клинических значимых Т-лимфопений составляет 1:4000 живых новорожденных, а частота встречаемости клинически значимых клеточных первичных иммунодефицитов составляет 1:10000 живых новорожденных. Несмотря на широкие возможности лечения этих заболеваний, выживаемость пациентов низка. Это является следствием запоздалого выставления правильного диагноза и, соответственно, начала адекватной терапии. Раннее выявление первичных иммунодефицитных состояний является ключевым фактором успешности лечения пациентов с этими заболеваниями. Несмотря на то, что клинические настораживающие признаки были сформулированы более 25 лет назад, а их пропаганда является невероятно успешной, выставление правильного диагноза большинству пациентов с иммунодефицитами запаздывает на годы. Эта ситуация является следствием чрезвычайно широкого спектра клинических проявлений иммунодефицитов. В настоящий момент, существует несколько списков настораживающих признаков. Также существует подход, при котором настораживающие клинические признаки формулируются отдельно для разных узких специалистов. Все эти списки являются следствием неоднократных попыток повысить чувствительность и специфичность этого инструмента. Попытки эти каждый раз оказывались неудачными, так как незначительно повышали его эффективность. Работы иммунологов из Великобритании, Германии, Египта, США показали, что сформулировать список настораживающих признаков из только клинических и анамнестических показателей практически невозможно. По всей видимости, необходимо добавить скрининговые лабораторные методики.
РЕЦЕНЗИЯ
Учебник «Иммунология», 4-е издание (сентябрь 2021 г.), подготовил известный советский и российский ученый с мировым именем, иммунолог, доктор медицинских наук, профессор, академик РАН Рахим Мусаевич Хаитов.
ISSN 2313-741X (Online)