В обзоре обобщены последние мировые научные данные о роли рецепторов к иммуномедиаторам в регуляции биологических эффектов, оказываемых на клетки. Для основных классов регуляторов иммунной системы (интерлейкинов, интерферонов, факторов роста и факторов некроза опухоли) представлены варианты участия рецепторов как компонентов взаимодействия цитокин/ клетка на примере in vitro и in vivo исследований. Показана способность показателей экспрессии рецепторов менять характер и тип данного взаимодействия. Проанализированы данные об участии рецепторов к регуляторным молекулам в развитии иммуноопосредованных заболеваний различного генеза. Продемонстрировано, что изменение уровня экспрессии рецепторов имеет большое значение в оценке функционального ответа клетки на медиатор и в развитии патологических состояний. В исследованиях подтверждены данные о влиянии плотности рецепторов на процессы пролиферации и апоптоза, а также обменные процессы, что является триггером в развитии аутоиммунных, онкологических и дистрофических заболеваний. Для всех рассмотренных классов регуляторных молекул характерным является изменение плотности экспрессии рецепторов как одного из ключевых моментов регулирования функциональной активности клеток. Таким образом, изучение уровня экспрессии рецепторов на мембране клеток является важным в понимании патогенеза, а изменение уровня экспрессии может рассматриваться как терапевтическая мишень в лечении различных заболеваний.

Разработчики антивирусных препаратов обычно фокусируются непосредственно на вирусах как основных объектах для исследований. Однако клеточные компоненты, участвующие в жизненном цикле вирусов или иммунном ответе на вирусные инфекции, становятся все более привлекательными мишенями, что открывает новые возможности для противовирусной терапии. Toll-подобные рецепторы (TLR) играют важную роль в активации как врожденного, так и адаптивного иммунного ответа, в том числе на вирусные инфекции респираторного тракта. В данном обзоре мы рассмотрим TLR как мишень для разработки новых противовирусных препаратов, рассмотрим механизм запуска противовирусного ответа, посредством индукции интерферонов I типа, а также механизмы ухода вирусов от иммунного ответа. Также рассмотрим существующие соединения – агонисты и антагонисты TLR – и обсудим вопросы безопасности их применения.

Согласно современным представлениям об этиопатогенезе эссенциальной гипертензии, важная роль в ее развитии принадлежит клеткам иммунной системы. Медиаторы, продуцируемые иммунокомпетентными клетками, принимают участие в возникновении и поддержании состояния хронического системного воспаления и способствуют развитию сосудистого ремоделирования, являющегося важным звеном патогенеза заболевания и поражения органов-мишеней. Иммунные механизмы, лежащие в основе повышения артериального давления, включают в себя активацию клеток врожденного и приобретенного иммунитета. Нарушение целостности эндотелия сосудов, запускающее каскад воспалительных реакций, вызывает миграцию в очаг повреждения клеток иммунной системы, привлеченных хемокинами и молекулами адгезии. Инфильтрация макрофагами периваскулярной ткани способствует нарушению вазодилатации и повреждению органов-мишеней благодаря выработке активных форм кислорода. Ангиотензин II вызывает также инфильтацию периваскулярной жировой ткани и адвентиции Т-лимфоцитами и повышенную выработку фактора некроза опухолей альфа и интерферона гамма. Кроме того, Т-лимфоциты экспрессируют минералокортикоидный рецептор, участвующий в развитии системной гипертензии. Важная роль в прогрессировании гипертензии принадлежит интерлейкину-17, участвующему в развитии повышенного артериального давления и ремоделирования сосудов. В обзоре также представлены данные о влиянии кишечной микрофлоры на регуляцию артериального давления и развитие гипертензии.

Исследовали прямые эффекты гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) человека на поверхностные свойства и цитокин-продуцирующую активность моноцитов/макрофагов (Mц/Мф) человека. CD14⁺ клетки были выделены из крови здоровых доноров методом позитивной магнитной сепарации. Выделенные Mц/Мф культивировали с липополисахаридом (ЛПС, 1 мкг/мл) или без ЛПС в течение 24 ч. Мембранную экспрессию молекул СD14 CD16, CD119, CD124, CD197 оценивали методом проточной цитофлуориметрии. Содержание фактора некроза опухоли-α (TNFα), интерлейкина-1β (IL-1β), IL-6 и IL-10 в культуральных супернатантах определяли иммуноферментным методом. Установлено, что GM-CSF в диапазоне концентраций 0,01–10 нг/мл заметно снижал среди неактивированных Мц/ Мф количество клеток, экспрессирующих CD197 (C-C рецептор хемокина 7), существенно не влияя на процентное содержание CD14⁺ (корецептор ЛПС), CD16⁺ (низкоаффинный Fc-рецептор), CD119⁺ (рецептор IFNγ) и CD124⁺ (рецептор IL-4) клеток. В то же время среди активированных Мц/ Мф GM-CSF снижал содержание не только CD197⁺ клеток, но также CD14⁺ , CD16⁺ , и CD119⁺ клеток, существенно не изменяя количество CD124⁺ клеток. Также показано, что GM-CSF в концентрации 10 нг/ мл обладал способностью усиливать продукцию активированными Мц/Мф TNFα и IL- 6, но не IL-1β и IL-10. Полученные данные указывают на способность GM-CSF оказывать на макрофагальные клетки как антивоспалительное, так и провоспалительное влияние. В целом такое влияние может способствовать развитию адаптивного иммуногенеза на периферии.

Регуляция ангиогенеза в зоне маточно-плацентарного контакта определяет адекватную инвазию трофобласта, формирование и развитие плаценты, успешное протекание беременности. Наиболее значительное влияние на ангиогенез оказывают NK-клетки, макрофаги, трофобласт. На сегодняшний день довольно подробно описаны функции клеток-участников формирования плаценты как по отдельности (in vitrо), так и в составе тканей (in situ). Однако до сих пор не создано моделей, отражающих взаимодействие NK-клеток, трофобласта и эндотелия в ходе ангиогенеза. До настоящего времени остается неразрешенным вопрос о вкладе каждой клеточной популяции в регуляцию не только ангиогенеза в плаценте, но и о перекрестной регуляции функций клеток-участников. Поэтому целью настоящего исследования явилось изучение контактного и дистантного влияния NK-клеток на образование капилляроподобных структур сокультурой эндотелиальных клеток и клеток трофобласта под влиянием различных цитокинов (bFGF, VЕGF, PlGF, TGF-β, IL-8, IFNγ, IL-1β). Введение в сокультуру ЭК и трофобласта NK-клеток в условиях дистантного и контактного культивирования не изменяло длину капилляроподобных структур, образованных ЭК. При контактном культивировании NK-клеток с сокультурой ЭК и трофобласта в присутствии IL-1β длина капилляроподобных структур не изменялась по сравнению с культивированием в тех же условиях, но в отсутствие цитокина. При дистантном культивировании NK-клеток с сокультурой ЭК и трофобласта в присутствии IL-1β произошло увеличение длины капилляроподобных структур по сравнению с культивированием в тех же условиях, но в отсутствие цитокина. При контактном, но не дистантном, культивировании NK-клеток с сокультурой ЭК и трофобласта в присутствии VЕGF длина капилляроподобных структур была больше по сравнению с культивированием в тех же условиях, но в отсутствие цитокина. В трех- компонентной клеточной системе провоспалительный цитокин IFNγ не оказывал эффекта в отношении ангиогенеза. При дистантном, но не контактном, культивировании NK-клеток с сокультурой ЭК и трофобласта в присутствии TGF-β длина капилляроподобных структур была меньше по сравнению с культивированием в тех же условиях, но в отсутствие цитокина. В условиях дистантного культивирования TGF-β запускает ингибирующий ангиогенез сигнал от NK- клеток. Установлено снижение длины капилляроподобных структур в условиях трехкомпонентной клеточной сокультуры в присутствии проангиогенных факторов: IL-8, PlGF (только при контактном культивировании) и bFGF (при контактном и дистантном культивировании). Таким образом, эффекты цитокинов в отношении ангиогенеза в трехкомпонентной сокультуре (NK-клетки, трофобласт, эндотелий) отличаются от установленных ранее в однокомпонентных (только эндотелий) и двухкомпонентных (сокультура эндотелия и трофобласта) клеточных моделях. Данные, полученные в настоящем исследовании, свидетельствуют о наличии в плаценте цитокиново-контактной регуляции межклеточных взаимодействий.

Целью исследования являлся анализ ассоциированности полиморфизма генов MMP2, MMP3, MMP9, VEGF с развитием непролиферативной диабетической ретинопатии (ДР) у пациентов с сахарным диабетом 2 типа (СД2).

В исследование включен 201 пациент с СД2. Среди них 90 человек с ДР и 111 человек без признаков ДР. Исследовали полиморфизм генов MMP2 (rs2438650), MMP3 (rs3025058), MMP9 (rs3918242) и VEGF (rs699947 и rs3025039). Генотипирование осуществляли методом анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов и методом TaqMan-зондов.

При анализе комплексных генотипов пяти полиморфных позиций выявлена определенная закономерность в позитивно и негативно объединенных комплексах. Показано увеличение частоты CC генотипа в полиморфной позиции - 1306 гена MMP2 в группе пациентов с «ранним» развитием осложнения и повышение у пациентов с наличием ДР комбинации высокого уровня HbA1 c генотипами MMP2-1306CC и MMP9-1562CT. Компьютерное моделирование с визуальной реконструкцией сетевых взаимодействий генотипов, вовлеченных в регуляцию деструкции и ангиогенеза, и уровней HbA1с-продукции – интегрального показателя гликемии – выявило наличие различий в структурно-функциональной организации ген-генных и ген-белковых взаимодействий в группах больных с наличием и отсутствием ДР.

Построение интерактомных биологических сетей транскрипционной регуляции и метаболических путей и их топологический анализ позволяют строить и изучать генные и белковые взаимодействия применительно к исследованию патогенеза осложнений СД 2 типа для разработки в последующем подходов к персонифицированной профилактике и терапии.

Плазматические клетки часто принято считать одним из значимых критериев гистологической диагностики хронического эндометрита (ХЭ). Низкое их количество в строме эндометрия, неравномерность распределения и сходство с клетками цитогенной стромы эндометрия определяют трудности их идентификации при рутинном гистологическом методе исследования, а их отсутствие ставит под сомнение диагноз ХЭ.

В работе представлены данные сравнительного ROC-анализа двух иммуногистохимических показателей хронического эндометрита: CD20⁺В-лимфоцитов и CD138⁺ плазматических клеток (ПК). В группу исследования включены 937 женщин с ХЭ, обследованные по поводу бесплодия и неудачных попыток ЭКО. Контрольную группу составили 103 женщины без признаков ХЭ, проходившие обследование по поводу мужского фактора бесплодия. Чувствительность показателя CD20⁺В-лимфоцитов для установления диагноза ХЭ составила 98% (Se = 0,98), что в 1,44 раза выше в сравнении с чувствительностью CD138⁺ ПК, соответственно, 68% (Se = 0,68). Специфичность обоих показателей для диагностики отсутствия ХЭ была высокой – 98% (Sp = 0,98) и 99% (Sp = 0,99) соответственно. Определены пороговые диагностические количественные значения двух показателей в эндометрии (точки отсечения-COP) для установления диагноза ХЭ: при использовании CD138⁺ПК – 1 кл/5 мм² и CD20⁺В-лимфоцитов – 5 кл/5 мм². Анализ линейной регрессии показал высоко значимую (р = 0,00053) связь CD138⁺ПК от CD20⁺В-лимфоцитов: при увеличении количества CD20⁺В-лимфоцитов имеет место тенденция возрастания числа CD138⁺ПК, что подтверждает прямую их патогенетическую связь. Установленные при иммуногистохимическом исследовании топографические и количественные особенности CD20 В-лимфоцитов в эндометрии позволяют его рекомендовать как высокочувствительный и значимый ранний диагностический показатель хронического эндометрита.

Гнойно-воспалительные заболевания различной нозологии и этиологии у ВИЧ-инфицированных являются одной из главных причин их гибели. Целью данной работы явилось определение спектра возбудителей внебольничной пневмонии и профиля их резистентности, зависимости от уровня CD4-лимфоцитов, а также выявление роли метициллинрезистентных Staphylococcus aureus и их молекулярно-генетических особенностей у ВИЧ-инфицированных пациентов г. Красноярска. В период 2012-2016 гг. было обследовано 152 ВИЧ-инфицированных пациента пульмонологического отделения с клиническим диагнозом «внебольничная пневмония». От больных забирались мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, плевральная жидкость, промывные воды, гной из плевры, а также мазок из носа и зева на выявление микрофлоры, кровь на стерильность. Использован бактериологический метод. Антибиотикочувствительность определяли диско-диффузионным методом; чувствительность стафилококков проводили методом скрининга, ПЦР, методом серийных разведений в плотной среде в соответствии с международными рекомендациями СLSI, EUCAST. Для генотипирования и определения молекулярно-генетических особенностей – ПЦР, М-ПЦР, секвенирование. Обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы WHONET (ВОЗ). Уровень значимости p < 0,05. На протяжении всего периода исследования от ВИЧ-инфицированных пациентов неизменно выделялись дрожжеподобные грибы рода Candida (30,4 и 35,6%). Данные микроорганизмы выделялись в монокультуре в этиологически значимом количестве от каждого третьего ВИЧ-инфицированного пациента. При этом они являлись активными ассоциантами, наиболее часто образуя ассоциации с представителями семейства Enterobacteriaceae. При этом установили, что наиболее часто грибы рода Candida в нижних отделах дыхательных путей выявлялись у ВИЧ-инфицированных с тяжелым иммунодефицитом с уровнем CD4 < 200 клеток/мкл. Также были выделены неферментирующие грамотрицательные бактерии (12,9%), стафилококки (8,9%), представители семейства Enterobacteriaceae (4,4%). Микроорганизмы характеризовались полирезистентностью к антимикробным препаратам. Клоном MRSA среди ВИЧ-инфицированных являлся ST239/spa3(t037)/ agr1/SCCmecIII.1.1.2(IIIA)/coaIV/tst⁺; характеризуюшийся высоким уровнем вирулентности и мультирезистентностью. Таким образом, установлено, что в развитии внебольничной пневмонии у ВИЧ-инфицированных пациентов играют роль полирезистентные микроорганизмы, в том числе грибы рода Candida, грамотрицательные микроорганизмы, MRSA, зачастую в составе микробных ассоциаций. Наиболее часто грибы рода Candida выявлялись у ВИЧ-инфицированных с тяжелым иммунодефицитом с уровнем CD4 < 200 клеток/мкл. Высокая частота выделения таких штаммов требует коррекции антимикробной терапии внебольничной пневмонии у ВИЧ-инфицированных.

Саркоидоз – заболевание неустановленной этиологии, характеризующееся развитием эпителиоидно-клеточных гранулем без некроза в различных органах. В настоящее время выделяют два основных клинических варианта дебюта саркоидоза: вариант острого/подострого течения саркоидоза (ОС, или синдром Лёфгрена) c более благоприятным прогнозом, а также хроническая форма течения саркоидоза (ХС, или «не Лёфгрен-синдром») с высоким (около 20%) риском развития фиброза легких. Целью данного исследования было изучение фенотипических характеристик регуляторных Т-лимфоцитов (Treg) периферической крови больных с острым (n = 11) и хроническим (n = 46) дебютом саркоидоза, контролем служили образцы периферической крови, полученные от 26 условно здоровых добровольцем. С использованием многоцветной проточной цитометрии было показано, что при ОС уровень Т-клеток снижается относительного группы контроля, а при ХС уменьшается уровень CD3⁺CD4⁺ клеток при сравнении с контролем. Более того, при ХС как относительное, так абсолютное содержание Treg в периферической крови достоверно ниже значений контрольной группы (2,83% (2,47; 3,36) против 3,33% (2,79; 3,84) при p = 0,021 и 37 кл/мкл (29; 52) против 50 кл/мкл (42; 65) при p = 0,004 соответственно). Относительное содержание CD39-позитивных клеток в рамках общей популяции Treg возрастает с 39,52% (11,55; 46,34) как при хроническом (до 51,02% (38,20; 61,62), p < 0.001), так и при остром (до 48,64% (41,46; 63,72), p = 0,007) дебюте саркоидоза. Анализ экспрессии CD39 и CD73 основными субпопуляциям Treg не выявил достоверных различий по относительному содержанию позитивных клеток между всеми группами в рамках «наивных» CD45R0^-CD62L⁺) клеток. Вместе с тем уровень CD39⁺ клеток среди CD45R0⁺CD62L⁺ Treg у больных как ОС, так и ХС достоверно (p < 0,001 и p = 0,004 соответственно) превышал контрольные значения (69,66% (61,92; 79,34) и 67,62% (61,92; 79,34), соответственно, против 47,55% (15,74; 65,32)). В случае CD45R0⁺CD62LTreg, способных покидать кровоток и мигрировать в очаги воспаления, увеличение относительного содержания CD39-позитивных Treg было отмечено лишь при сравнении ХС и группы контроля (61,79% (55,12; 73,09) и 57,27% (16,03; 66,98) соответственно, при p = 0,006). Полученные нами результаты указывают, что при саркоидозе в циркуляции увеличивается уровень CD39⁺Treg, способных эффективно подавлять иммунные реакции за счет утилизации провоспалительного АТФ и инициации каскада реакций, приводящих к формированию противоспалительного аденозина.

Этиология саркоидоза достоверно неизвестна. В настоящее время существует гипотеза о связи саркоидоза с комплексом патологических аутоиммунных реакций, которые возникают под влиянием триггерных факторов. В настоящем исследовании проведено определение специфических иммунных комплексов в плазме крови пациентов, что может косвенно определять природу возникновения заболевания.

В исследование было включено 33 пациента с саркоидозом легких (I группа), группу контроля составили 24 здоровых донора (II группа). Пациентам был выполнен стандартный комплекс обследования и установлен диагноз. Плазма крови исследовалась методом динамического светорассеяния с добавлением in vitro туберкулезных антигенов (ESAT-6/SFP-10) и «экстракта здоровой легочной ткани». Статистическая обработка проводилась с помощью программы Statistica 7.0. Различия считались значимыми при р < 0,05.

Согласно полученным данным, у больных саркоидозом не определялось иммунных комплексов (ИК) после их стимуляции антигенами аллергена туберкулезного рекомбинантного (ESAT-6/SFP- 10). Достоверно часто определялись ИК после стимуляции антигенами «экстракта легочной ткани» у всех больных саркоидозом. В группе контроля при стимуляции двумя видами антигенов (p < 0,01) иммунные комплексы не определялись ни у одного донора.

Полученные данные могут быть косвенным свидетельством возникновения аутоиммунной реакции на собственную легочную ткань у больных саркоидозом под влиянием каких-либо факторов. Отсутствие формирования ИК при добавлении туберкулезных антигенов (ESAT-6/SFP-10) исключает влияние микобактерий туберкулеза на развитие саркоидоза.

Исследованы силовые индикаторы дыхательных мышц (ДМ) у 85 мужчин в возрасте 39 - 78 лет, находившихся на стационарном лечении по поводу обострения хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) различной степени тяжести. На аппарате MicroRPM (CareFusion, Великобритания) определяли уровни максимального экспираторного (MEP) и инспираторного (MIP) давлений в ротовой полости, а также уровень интраназального давления при выполнении SNIP-теста. Измеренные величины MEP, MIP и SNIP соотносили с должными. В сыворотке крови определяли концентрацию цитокинов: IL-4, IL-6, IL-10, IL-17А, IL-21, TNFα, IFNγ и TGF-β. Для обработки результатов исследования использовали методы канонического анализа и кластеризации. У больных ХОБЛ легкой степени регистрировался экспираторный тип дисфункции ДМ, при среднетяжелой и тяжелой – экспираторно-инспираторный, а при крайне тяжелой преобладала дисфункция диафрагмы. Кластерный анализ позволил выделить 3 группы больных с характерными комбинациями индикаторов силы ДМ и иммунных показателей. Цитокиновый профиль первого кластера отличался максимальной концентрацией IL-17А, IL-21, TNFα и TGF-β, а силовые индикаторы ДМ имели минимальные значения. Во втором кластере снижение силовых индикаторов на 25-40% по отношению к контролю сочеталось с резким подъемом IL-6 на фоне умеренного повышения IL-21 и TGF-β. У больных третьего кластера регистрировался максимальный уровень IL-6, IL-10 и IFNγ при относительно низких значениях IL-17А, IL-21 и TGF-β, а показатели MEP, MIP и SNIP достоверно не различались от их уровня во втором кластере. Результаты канонического и корреляционного анализа указывали на наличие взаимосвязей как отдельных цитокинов, так и их пула с показателями силы ДМ, выраженностью одышки и функциональным статусом больных ХОБЛ, что подтверждало участие цитокин-опосредованных механизмов в развитии респираторной мышечной дисфункции.

Несмотря на значительный объем исследований, посвященных выявлению иммунных механизмов развития бронхиальной астмы (БА), вопросы формирования различных фенотипов при данной патологии нуждаются в дальнейшем изучении. Цель – проанализировать функциональную активность субпопуляций Th1-, Th2- и Th17-лимфоцитов и установить особенности воспалительного процесса при контролируемой и частично контролируемой БА.

Обследовано 84 пациента, разделенных на 2 группы в зависимости от контроля симптомов и течения БА. В I группу вошло 45 человек с контролируемым течением БА, во II группу – 39 человек с частично контролируемым течением БА. Субпопуляции Th1-, Th2- и Th17-лимфоцитов оценивали по уровню цитокинов в сыворотке крови (TNFα, IFNγ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17А) методом проточной цитометрии.

Исследование показало наличие мультитипности T-хелперного (Th) иммунного ответа у больных БА, характер которого зависит от степени контроля заболевания. У больных БА контролируемого течения были выявлены Th2 (62%), Th1/Th2 (20%) и Th1 (18%) типы иммунного ответа. В группе больных частично контролируемой БА были установлены Th2/Th17 (49%), Th1/Th17 (13%) и Th17 (37%) типы иммунного ответа. Показано, что развитие Th1-иммунного ответа у пациентов с контролируемым течением БА индуцируется внутриклеточными инфекциями. Формирование Th1/Th2-фенотипа связано с наличием хронических очагов бактериальной инфекции и персистированием вирусной инфекции в организме. Данный фенотип может служить индикатором утяжеления течения БА. Изучение роли превалирующего типа иммунного ответа в развитии частично контролируемой БА показало, что активация Th17-лимфоцитов способствует затяжному течению болезни. Какой бы ни был первоначальный фенотип, развитие Th17-зависимого иммунного ответа – это результат длительного системного персистирующего воспаления.

Представления о ключевой роли Th1/Th2-баланса в развитии БА сменяются пониманием того, что в этот процесс также вовлечены Th17-лимфоциты, и Th1/Th17-, Th2/Th17-фенотипы являются полярными крайностями этого заболевания. Выявление интенсивности и характера воспаления при БА позволит провести более объективную оценку применяемой терапии и выбрать дальнейшую тактику лечения.

Бронхиальная астма – хроническое воспалительное заболевание дыхательных путей, в патогенезе которого ключевая роль отводится Т-лимфоцитам. Считается, что сокращение числа наивных Т-клеток и накопление Т-лимфоцитов памяти при бронхиальной астме сопровождаются функциональными изменениями Т-лимфоцитов. В данном исследовании был изучен субпопуляционный состав Т-лимфоцитов в периферической крови, в нестимулированной и PHA-стимулированной культурах, а также пролиферативная активность Т-клеточных субпопуляций у пациентов с бронхиальной астмой и здоровых доноров. В исследование было включено 10 пациентов с бронхиальной астмой (возраст 45,4±11,8 лет). Одна половина пациентов находилась в стадии ремиссии, вторая половина – в стадии обострения основного заболевания. Доноры подбирались по полу и возрасту. Методом проточной цитофлуориметрии по экспрессии маркеров CD45R0, CD62L и CD197(CCR7)CD4⁺ и CD8⁺Т-лимфоциты были разделены на центральные (Tcm) и эффекторные клетки памяти (Tem), наивные Т-лимфоциты (Tnaïve) и терминально-дифференцированные эффекторы (Temra). В качестве функционального показателя была исследована пролиферативная активность Тcm, Tem и Tnaïve в ответ на PHA. В ходе исследования было установлено, что содержание CD4⁺ТemCD62L⁺ и CD8⁺ТemCD62L⁺ в периферической крови у пациентов в стадии обострения астмы было значимо снижено по сравнению с донорами. При стимуляции PHA данные различия в субпопуляционном составе между группами пациентов и доноров нивелировались. Также было обнаружено наличие положительной корреляции относительного количества CD4⁺ и CD8⁺ клеток памяти с возрастом у пациентов с бронхиальной астмой, которая отсутствовала у доноров. Анализ митогениндуцированной пролиферации показал, что наиболее активно делились Tcm и Tnaïve клетки как у пациентов, так и у доноров. При этом пролиферативная активность CD4⁺Т-лимфоцитов и субпопуляций CD8⁺Tcm, CD4⁺Tcm и CD4⁺Tem62L^- была выше в группе пациентов с ремиссией астмы, чем в группах пациентов, находящихся в обострении, и здоровых доноров. Выявленное увеличение относительного количества Т-клеток памяти с возрастом позволяет предполагать их участие в процессе развития бронхиальной астмы. Сопоставимая с донорскими значениями пролиферативная реакция изученных субпопуляций говорит о сохранности функциональных свойств Т-клеток памяти и наивных Т-лимфоцитов при бронхиальной астме. Усиление пролиферации отдельных супопуляций у пациентов, находящихся в ремиссии бронхиальной астмы свидетельствует об активированном статусе Т-клеток памяти. Обнаруженное снижение количества CD4⁺ТemCD62L⁺ и CD8⁺ТemCD62L⁺ у пациентов в обострении, на наш взгляд, может быть связано с активным воспалительным процессом в бронхиальном дереве.

С целью оценки показателей иммунитета детей, рожденных в сроке сверхранних преждевременных родов (22-27 недель), с бронхолегочной дисплазией (БЛД) различной степени тяжести, проведено динамическое обследование 35 новорожденных: 17 детей с БЛД тяжелой степе-ни, 18 – БЛД легкой и среднетяжелой степени тяжести. Группу сравнения составили 7 детей 22-27 недель гестационного возраста без БЛД. Методом проточной цитометрии определяли количество лимфоцитов (CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD19⁺, CD16⁺CD56⁺, CD4⁺CD25⁺) и моноцитов (CD14⁺CD64⁺, CD14⁺HLA-DR⁺), методом иммуноферментного анализа определяли уровень цитокинов (IL-6, IL -8, IL-4). Выявлены особенности иммунного статуса детей с БЛД тяжелой, легкой и среднетяжелой степени тяжести. Установлено, что предикторами формирования БЛД тяжелой степени у детей, рожденных от сверхранних преждевременных родов, являются повышенное содержания IL-8 при рождении и в возрасте 1 месяца жизни, сниженный уровень экспрессии на моноцитах (CD64, HLA-DR) по достижению 1 месяца жизни и CD14⁺CD64⁺ клеток в 38-40 недель постконцептуального возраста. Выявленные особенности иммунного статуса у новорожденных с БЛД могут быть использованы для оценки эффективности проводимой терапии, что диктует необходимость проведения дальнейших исследований.

В настоящей работе мы использовали популяционную выборку сухих пятен крови новорожденных на картах Гатри размером 2739 индивидуальных образцов для определения референсного интервала значений молекул ДНК TREC и KREC с целью диагностики первичных иммунодефицитных состояний в неонатальном скрининге. Медиана полученных абсолютных значений TREC и KREC составила 195 (CI95%: 185-206) и 185 (CI95%: 176-197) копий на мкл, соответственно, нормированных значений для TREC – 2780 (CI95%: 2690-2840) и для KREC – 2790 (CI95%: 2700-2900) копий на 2 × 10⁵ копий гена альбумина или 10⁵ ядросодержащих клеток. Референсный интервал рассчитывался для 99 и 99,9 перцентилей всех величин TREC и KREC. Для фильтрации «выпадающих» значений (outliers) был применен критерий Тьюки после логарифмической трансформации данных, ввиду их несимметричного распределения. При анализе абсолютных значений (TREC/KREC на мкл крови) не было идентифицировано «выпадающих» значений TREC, для KREC из дальнейшего анализа было исключено 18 значений (от 9,8 до 13,5). В нормированных значениях TREC/KREC «выбросов» не выявлено. Полученные референсные значения TREC и KREC (на уровне 0,1 перцентиля) составили 458 и 32 на 10⁵ ядросодержащих клеток, 23 и 17 на мкл крови новорожденных соответственно.

Раково-тестикулярные антигены (РТА) могут использоваться в качестве мишени при иммунотерапии злокачественных опухолей различных локализаций, в том числе рака шейки матки. Однако иммунотерапия часто применяется в комплексе с химиотерапией антрациклиновыми антибиотиками, в частности доксорубицином (DXR), эффекты которого на экспрессию генов РТА не изучены. Поэтому целью исследования стало изучение влияния разных концентраций доксорубицина и времени экспозиции на транскрипционный профиль 16 раково-тестикулярных (РТ) генов клеток HeLa ССL-2. В работе использовали культуру клеток человека – рак шейки матки линии HeLa CCL- 2. Культивирование клеток HeLa CCL-2 проводилось в стерильных культуральных флаконах с адгезионной поверхностью и вентилируемыми крышками в условиях 5% CO₂ и 95% влажности при 37 °C в среде RPMI-1640 c 10% фетальной телячьей сывороткой при концентрации гентамицина 50 мкг/мл и различными концентрациями доксорубицина: 0 мкг/мл (контроль), 2 мкг/мл и 4 мкг/мл. Определение уровня экспрессии 16 РТ-генов проводили методом количественной RT-PCR на термоциклере Bio-Rad CFX96. Нормализацию проводили по референсному гену и экспрессии соответствующих генов в образцах контроля. Установлено, что существенное влияние на экспрессию генов MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, MAGEB1, MAGEB2, GAGE1, GAGE3, BAGE, XAGE3, NY-ESO1, PRAME1 и SYCP1 оказывает время культивирования и концентрация DXR, при этом на экспрессию SSX2, MAGEA2, GAGE4 и MAGEC1 эти факторы существенного влияния не оказывают, а концентрация DXR, отдельно взятая, не влияет на экспрессию MAGEB1 и MAGEB2. Полученные данные по скорости ответа на воздействие DXR позволили выделить ранние РТ-гены (повышающие экспрессию – MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, NY-ESO1, SYCP1, и снижающие экспрессию – GAGE1 и BAGE) и поздние РТ-гены (повышающие экспрессию – GAGE3 и XAGE3). Эти результаты необходимо учитывать при проведении иммунотерапии, основанной на технологии дендритно-клеточных вакцин.

Нормативно-методическая база, регламентирующая проведение оценки иммунологической эффективности вакцинации против бруцеллеза и выраженности иммунологической поствакцинальной перестройки не разработана. Учитывая ведущую роль клеточного иммунитета в формировании иммунологической защиты от бруцеллеза, оценку клеточной реакции в ответ на антигенную стимуляцию можно считать наиболее информативным и объективным подходом для анализа иммунологической перестройки организма при вакцинации. Для разработки наиболее диагностически информативных методик постановки антиген-стимулированных клеточных тестов in vitro необходим тщательный подбор стимулирующего агента (антигена), обладающего достаточным активирующим потенциалом и обеспечивающим специфичность реакции в условиях in vitro. Цель исследования – изучить в условиях in vitro специфическую активность белково-полисахаридного антигенного комплекса из штамма Brucella abortus 19 BA (БрАг) и возможность его применения для оценки формирования поствакцинального клеточного иммунитета против бруцеллеза.

Объект исследования – белые лабораторные мыши (n = 50), иммунизированные штаммом Brucella abortus 19 BA. Контрольную группу (n = 50) составили лабораторные мыши, которым введен стерильный физиологический раствор в объеме 0,5 мл. Взятие крови у иммунизированных и контрольных биомоделей осуществляли до вакцинации и на 7, 14, 21 и 30 сутки после иммунизации. При цитометрическом исследовании определяли активационные молекулы CD25, CD69, MHC II и CD95, экспрессированные на Т-лимфоцитах (CD3⁺CD69⁺, CD3⁺CD25⁺, CD3⁺CD95⁺, CD3⁺MHC⁺). Для оценки формирования иммунитета уровень интенсивности экспрессии маркеров активации Т-лимфоцитов рассчитывали с использованием коэффициента стимуляции. Для специфической стимуляции Т-лимфоцитов in vitro применяли БрАг. В качестве антигена для сравнения при изучении возможности применения БрАг для оценки формирования поствакцинального иммунитета использовали аллерген бруцеллезный жидкий – бруцеллин.

Анализ результатов исследования показал, что БрАг обладает выраженной специфической активностью, не вызывает неспецифических реакций (активации) Т-лимфоцитов в условиях in vitro, что дает возможность использования его в качестве тест-антигена при постановке реакции антигенспецифической активации Т-лимфоцитов для оценки формирования адаптивного вакцинального иммунитета против бруцелл.

Анализ применения экспериментального бруцеллезного антигена, для постановки антигенстимулированных клеточных реакций in vitro, с целью оценки формирования поствакцинального иммунитета против бруцеллеза показал, что использование БрАг способствует повышению диагностической чувствительности (в эксперименте) клеточных реакций in vitro. Полученный экспериментальный антиген имеет реальную перспективу применения при разработке алгоритмов лабораторной диагностики бруцеллеза и оценки фактической привитости контингентов риска после вакцинации против бруцеллеза.

С 1924 года вакцина БЦЖ защищает детей от наиболее тяжелых форм туберкулеза. В то же время защитный эффект BCG у взрослого населения не прослеживается. Возможности применения живой вакцины для ревакцинации дополнительно ограничены быстрым распространением инфекции ВИЧ. Рано секретируемые белки микобактерии туберкулеза широко применялись для конструирования новых противотуберкулезных вакцин, поскольку характеризуются высокой иммуногенностью и способностью защищать от ТБ в экспериментальных моделях. Целью настоящего исследования было изучение эффективности применения нового субъединичного вакцинного препарата для повышения устойчивости экспериментальных животных к ТБ путем ревакцинации после первичной иммунизации BCG. Тестируемая вакцина представляла собой сочетание химерного белка на основе Ag85B-TB10.4-FliC и плазмидной ДНК, кодирующей антиген Ag85A. Оценку эффективности буст-вакцинации проводили на модели аэрозольного заражения вакцинированных только BCG или BCG с последующей ревакцинацией тестируемой вакциной, а также интактных лабораторных мышей линии С57BL/6 вирулентным лабораторным штаммом M. tuberculosis H37Rv по результатам определения высеваемости микобактерий из органов и продолжительности жизни животных после заражения. Было показано, что дополнительная буст-вакцинация исследуемой вакциной, по сравнению с обычной вакцинацией BCG, приводит к усилению торможения диссеминации микобактерий из очага инфицирования и существенному продлению жизни зараженных животных.

Целью работы явилась оценка роли иммунологических нарушений, гипоксии и липопероксидации в развитии и прогрессировании эрозивно-язвенных поражений двенадцатиперстной кишки на фоне хронического нарушения мозгового кровообращения. Проведены исследования 125 пациентов с эрозивно-язвенными поражениями двенадцатиперстной кишки, ассоциированными с хроническим нарушением мозгового кровообращения, в возрасте от 48 до 74 лет, находившихся на амбулаторном лечении в ГБУЗ РМ «РКБ № 5» г. Саранска в 2015-2018 гг. Группу сравнения составили 39 пациентов с хроническим нарушением мозгового кровообращения, не имеющих на момент исследования эрозивно-язвенных поражений желудка и двенадцатиперстной кишки. Пациентам проводилась классическая противоязвенная терапия в течение 14 дней. Оценивали цитокиновый профиль, показатели гипоксии и перекисного окисления липидов в сыворотке крови. Проведенные исследования показали, что при эрозивно-язвенных поражениях двенадцатиперстной кишки, в ассоциации с хроническим нарушением мозгового кровообращения на протяжении всего срока наблюдения имело место повышение уровня про- и противовоспалительных цитокинов, что указывает на формирование дисбаланса в иммунорегуляторной системе. Наблюдалось развитие гипоксических изменений в плазме крови, что подтверждалось ростом содержания молочной и пировиноградной кислот, а также коэффициента гипоксии на всех этапах наблюдения. В условиях формирования данной патологии происходит также активация процессов перекисного окисления липидов, что подтверждается ростом содержания диеновых конъюгатов, триеновых конъюгатов и уровня малонового диальдегида при поступлении, на 7-е и 14-е сутки наблюдения и снижением антиоксидантного потенциала плазмы крови, оцененного показателем супероксиддисмутазы. Только к 30-м суткам наблюдения имела место тенденция к снижению показателей диеновых конъюгатов, триеновых конъюгатов, малонового диальдегида и повышению уровня супероксиддисмутазы. Гипоксия и перекисное окисление липидов выступают в качестве предикторов хронического воспаления. В пaтогенезе эрозивно-язвенных поражений двенадцатиперстной кишки, ассоциациированных с хроническим нарушением мозгового кровообращения, существeнное знaчение имeет формирование дисбаланса про- воспалительных и противовоспалительных цитокинов и хроничeская гипoксия. При таких услoвиях наблюдается окислительный стресс со смeщением рaвновесия в сторону проoксидантов, истoщaются возможности антиoксидaнтной системы зaщиты. В совокупности эти нарушения определяют патогенетические механизмы повреждения, возникающие при эрозивно-язвенных поражениях двенадцатиперстной кишки, ассоциированных с хроническим нарушением мозгового кровообращения, которые оказывают взаимоотягощающее влияние при прогрессировании заболевания.

Ахиллесовой пятой иммуноанализа является порой недооцениваемая проблема его восприимчивости к различным интерференциям (помехам, вмешательствам в анализ). Присутствие в пробе пациента мешающих веществ может привести к ошибочному результату теста, следствием чего может стать неправильная диагностика и катастрофические последствия для пациента, поэтому следует уделять особое внимание выявлению возможных интерференций в используемых тест-системах и при возможности разрабатывать и применять методы их преодоления. Особенно остро вопрос борьбы с интерференциями стоит в случае иммуноанализа биомаркеров в плазме или сыворотке крови человека. Для уменьшения возможных интерференций желательно было бы иметь возможность специфичной и адаптируемой предобработки препаратов крови для конкретного анализируемого маркерного белка, для конкретной тест-системы. Мы предполагаем, что такую предобработку можно сделать с помощью комбинирования иммуносорбентов, базирующихся на использовании особых однодоменных антител (нанотел). Нанотела – рекомбинантные белки, производные однодоменных антиген-узнающих вариабельных фрагменов особых антител, состоящих из димера укороченных тяжелых цепей при полном отсутствии легких цепей. Такие особые антитела присутствуют в норме, наряду с обычными антителами, у представителей семейства Camelidae (Верблюдовые) и у некоторых видов хрящевых рыб. Особые свойства нанотел могут обеспечить определенные преимущества при их использовании по сравнению с антителами традиционной структуры и их производными. В данной работе впервые показано, что иммуносорбенты на основе определенной комбинации используемых в качестве лигандов однодоменных антител, способных специфически связывать (и удалять) конкретные мажорные белки крови человека, могут быть подобраны для заданного маркерного антигена крови таким образом, что будут эффективным инструментом предобработки крови с целью уменьшения возможных эффектов интерференции и повышения чувствительности при диагностическом иммуноферментном анализе «сэндвич»-типа. Новый метод предобработки плазмы крови продемонстрирован на примере препаратов плазмы крови (в разведении 1:40) двух пациентов. Ранее разработанная модельная система детекции белка лактоферрина была использована для анализа образцов плазмы крови. Показано, что можно существенно повысить соотношение суммарного детектируемого сигнала к неспецифическому фону, связанному с интерференциями, за счет сильного уменьшения этого фона путем аффинного удаления (с помощью соответствующих иммобилизованных однодоменных антител) из препаратов плазмы крови фракции трех мажорных белков: фибриногена, иммуноглобулинов класса G, альфа-2-макроглобулина.