ВЛИЯНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ АНТИБИОТИКОВ АНТРАЦИКЛИНОВОГО РЯДА НА ТРАНСКРИПЦИОННУЮ АКТИВНОСТЬ РАКОВО-ТЕСТИКУЛЯРНЫХ АНТИГЕНОВ В МОДЕЛЬНОМ ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ HeLa

Раково-тестикулярные антигены (РТА) могут использоваться в качестве мишени при иммунотерапии злокачественных опухолей различных локализаций, в том числе рака шейки матки. Однако иммунотерапия часто применяется в комплексе с химиотерапией антрациклиновыми антибиотиками, в частности доксорубицином (DXR), эффекты которого на экспрессию генов РТА не изучены. Поэтому целью исследования стало изучение влияния разных концентраций доксорубицина и времени экспозиции на транскрипционный профиль 16 раково-тестикулярных (РТ) генов клеток HeLa ССL-2. В работе использовали культуру клеток человека – рак шейки матки линии HeLa CCL- 2. Культивирование клеток HeLa CCL-2 проводилось в стерильных культуральных флаконах с адгезионной поверхностью и вентилируемыми крышками в условиях 5% CO₂ и 95% влажности при 37 °C в среде RPMI-1640 c 10% фетальной телячьей сывороткой при концентрации гентамицина 50 мкг/мл и различными концентрациями доксорубицина: 0 мкг/мл (контроль), 2 мкг/мл и 4 мкг/мл. Определение уровня экспрессии 16 РТ-генов проводили методом количественной RT-PCR на термоциклере Bio-Rad CFX96. Нормализацию проводили по референсному гену и экспрессии соответствующих генов в образцах контроля. Установлено, что существенное влияние на экспрессию генов MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, MAGEB1, MAGEB2, GAGE1, GAGE3, BAGE, XAGE3, NY-ESO1, PRAME1 и SYCP1 оказывает время культивирования и концентрация DXR, при этом на экспрессию SSX2, MAGEA2, GAGE4 и MAGEC1 эти факторы существенного влияния не оказывают, а концентрация DXR, отдельно взятая, не влияет на экспрессию MAGEB1 и MAGEB2. Полученные данные по скорости ответа на воздействие DXR позволили выделить ранние РТ-гены (повышающие экспрессию – MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, NY-ESO1, SYCP1, и снижающие экспрессию – GAGE1 и BAGE) и поздние РТ-гены (повышающие экспрессию – GAGE3 и XAGE3). Эти результаты необходимо учитывать при проведении иммунотерапии, основанной на технологии дендритно-клеточных вакцин.

1. Водолажский Д.И., Кутилин Д.С., Могушкова Х.А., Ващенко Л.Н., Никитина В.П., Кит О.И. Транс-крипционная активность раково-тестикулярных антигенов у больных раком молочной железы люминаль-ных подтипов А и В // Современные проблемы науки и образования, 2017. № 4.

2. Водолажский Д.И., Кутилин Д.С., Могушкова Х.А., Кит О.И. Транскрипционный профиль раково-тестикулярных антигенов у больных раком молочной железы // Медицинская иммунология, 2018. Т. 20, № 3. С. 383-390. doi: 10.15789/1563-0625-2018-3-383-390.

3. Давыдов М.И., Ганцев Ш.Х. Онкология: учебник. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. 920 с.

4. Кит О.И., Солдатова К.И., Кутилин Д.С., Водолажский Д.И. Раково-тестикулярные антигены в диагностике опухолей толстой кишки // Современные проблемы науки и образования, 2018. № 2.

5. Кутилин Д.С., Бондаренко Т.И., Корниенко И.В., Михалева И.И. Влияние пептида дельта-сна на экспрессию генов антиоксидантных ферментов в мозге и крови крыс при физиологическом старении орга-низма // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2014. Т. 157, № 5. С. 634-637.

6. Кутилин Д.С., Димитриади С.Н., Водолажский Д.И., Франциянц Е.М., Кит О.И. Влияние тепловой ишемии-реперфузии на экспрессию апоптоз-регулирующих генов в почечной ткани больных с почечно-клеточным раком // Нефрология, 2017. № 21 (1). C. 80-86.

7. Calcagno A.M., Salcido C.D., Gillet J.P., Wu C.P., Fostel J.M., Mumau M.D., Gottesman M.M., Varticovski L., Ambudkar S.V. Prolonged drug selection of breast cancer cells and enrichment of cancer stem cell characteristics. J. Natl. Cancer Inst., 2010, no. 102, pp. 1637-1652.

8. Chomczynski P., Sacchi N. The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanatephenol-chloroform extraction: twenty-something years on. Nat. Protoc., 2006, Vol. 1, no. 2, pp. 581-585.

9. Hanada M. Amrubicin, Chapter 6 in case studies in modern drug discovery and development. Eds. Huang X., Aslanian R.G. John Wiley & Sons, 2012.

10. Pang B., de Jong J., Qiao X., Wessels L.F., Neefjes J. Chemical profiling of the genome with anti-cancer drugs defines target specificities. Nat. Chem. Biol., 2015, Vol. 11, no. 7, pp. 472-480.

11. Pommier Y., Leo E., Zhang H., Marchand C. DNA topoisomerases and their poisoning by anticancer and antibacterial drugs. Chem. Biol., 2010, Vol. 17, no. 5, pp. 421-433.

12. Rossi S. Australian Medicines Handbook. Adelaide: The Australian Medicines Handbook Unit Trust, 2013.

13. Soper J.T., Reisinger S.A., Ashbury R., Jones E., Clarke-Pearson D.L. Feasibility study of concurrent weekly cisplatin and whole abdominopelvic irradiation followed by doxorubicin/cisplatin chemotherapy for advanced stage endometrial carcinoma: a Gynecologic Oncology Group trial. Gynecol. Oncol., 2004, Vol. 95, no. 1, pp. 95-100.

14. Takimoto C.H., Calvo E. Principles of oncologic pharmacotherapy in cancer management: a multidisciplinary approach. Pazdur R., Wagman L.D., Camphausen K.A., Hoskins W.J. (Eds). 11 ed., London, UK: UBM Medica, 2008, pp. 42-58.

15. Tsou S.H., Chen T.M., Hsiao H.T., Chen Y.H. A critical dose of doxorubicin is required to alter the gene expression profiles in MCF-7 cells acquiring multidrug resistance. PLoS ONE, 2015, Vol. 10, no. 1, e0116747. doi: 10.1371/journal.pone.0116747.