Preview

Медицинская иммунология

Расширенный поиск

НОВЫЙ МЕТОД, БАЗИРУЮЩИЙСЯ НА ИСПОЛЬЗОВАНИИ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ ОДНОДОМЕННЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ УДАЛЕНИЯ ОПРЕДЕЛЕННЫХ МАЖОРНЫХ БЕЛКОВ ИЗ ПЛАЗМЫ КРОВИ, СПОСОБСТВУЕТ УМЕНЬШЕНИЮ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО СИГНАЛА В ИММУНОАНАЛИЗЕ

https://doi.org/10.15789/1563-0625-2019-3-567-575

Полный текст:

Аннотация

Ахиллесовой пятой иммуноанализа является порой недооцениваемая проблема его восприимчивости к различным интерференциям (помехам, вмешательствам в анализ). Присутствие в пробе пациента мешающих веществ может привести к ошибочному результату теста, следствием чего может стать неправильная диагностика и катастрофические последствия для пациента, поэтому следует уделять особое внимание выявлению возможных интерференций в используемых тест-системах и при возможности разрабатывать и применять методы их преодоления. Особенно остро вопрос борьбы с интерференциями стоит в случае иммуноанализа биомаркеров в плазме или сыворотке крови человека. Для уменьшения возможных интерференций желательно было бы иметь возможность специфичной и адаптируемой предобработки препаратов крови для конкретного анализируемого маркерного белка, для конкретной тест-системы. Мы предполагаем, что такую предобработку можно сделать с помощью комбинирования иммуносорбентов, базирующихся на использовании особых однодоменных антител (нанотел). Нанотела – рекомбинантные белки, производные однодоменных антиген-узнающих вариабельных фрагменов особых антител, состоящих из димера укороченных тяжелых цепей при полном отсутствии легких цепей. Такие особые антитела присутствуют в норме, наряду с обычными антителами, у представителей семейства Camelidae (Верблюдовые) и у некоторых видов хрящевых рыб. Особые свойства нанотел могут обеспечить определенные преимущества при их использовании по сравнению с антителами традиционной структуры и их производными. В данной работе впервые показано, что иммуносорбенты на основе определенной комбинации используемых в качестве лигандов однодоменных антител, способных специфически связывать (и удалять) конкретные мажорные белки крови человека, могут быть подобраны для заданного маркерного антигена крови таким образом, что будут эффективным инструментом предобработки крови с целью уменьшения возможных эффектов интерференции и повышения чувствительности при диагностическом иммуноферментном анализе «сэндвич»-типа. Новый метод предобработки плазмы крови продемонстрирован на примере препаратов плазмы крови (в разведении 1:40) двух пациентов. Ранее разработанная модельная система детекции белка лактоферрина была использована для анализа образцов плазмы крови. Показано, что можно существенно повысить соотношение суммарного детектируемого сигнала к неспецифическому фону, связанному с интерференциями, за счет сильного уменьшения этого фона путем аффинного удаления (с помощью соответствующих иммобилизованных однодоменных антител) из препаратов плазмы крови фракции трех мажорных белков: фибриногена, иммуноглобулинов класса G, альфа-2-макроглобулина.

Об авторах

О. С. Горяйнова
ФГБУН «Институт биологии гена» Российской академии наук
Россия

младший научный сотрудник

Москва



Е. О. Хан
ФГБУН «Институт биологии гена» Российской академии наук
Россия

к.б.н., младший научный сотрудник

Москва



Т. И. Иванова
ФГБУН «Институт биологии гена» Российской академии наук
Россия

к.б.н., научный сотрудник

Москва



С. В. Тиллиб
ФГБУН «Институт биологии гена» Российской академии наук
Россия

д.б.н., заведующий лабораторией молекулярных биотехнологий

119334, Москва, ул. Вавилова, 34/5.
Тел.: 8 (499) 135-22-01.



Список литературы

1. Горяйнова О.С., Иванова Т.И., Рутовская М.В., Тиллиб С.В. Метод параллельного и последовательного генерирования однодоменных антител для протеомного анализа плазмы крови человека // Молекулярная биология, 2017. Т. 51. № 6. С. 985-996.

2. Тиллиб С.В., Вятчанин А.С., Муилдерманс С. Молекулярный анализ структуры особых антител Сamelus bactrianus, состоящих только из тяжелых цепей // Биохимия, 2014. Т. 79. № 12. С. 1687-1697.

3. Boehm Т.К., Sojar Н., DeNardin E. Concentration-dependent effect of fibrinogen on IgG-specific antigen binding and phagocytosis. Cell. Immunol., 2010, Vol. 263, no. 1, pp. 41-48.

4. Bolstad N., Warren D.J., Nustad K. Heterophilic antibody interference in immunometric assays. Best Pract. Res. Clin. Endocrinol. Metab., 2013, Vol. 27, pp. 647-661.

5. Hamers-Casterman C., Atarhouch T., Muyldermans S., Naturally occurring antibodies devoid of light chains. Nature, 1993, Vol. 363, pp. 446-448.

6. Harmsen M.M., de Haard H.J. Properties, production, and applications of camelid single-domain antibody fragments. Appl. Microbiol. Biotechnol., 2007, Vol. 77, pp. 13-22.

7. Moreno-Expósito L., Illescas-Montes R., Melguizo-Rodrígueza L. Multifunctional capacity and therapeutic potential of lactoferrin. Life Sciences, 2018, Vol. 195, pp. 61-64.

8. Muyldermans S., Baral T.N., Retamozzo V.C. Camelid immunoglobulins and nanobody technology. Vet . Immunol. Immunopathol., 2009, Vol. 128, pp. 178-183.

9. Muyldermans S. Nanobodies: natural single-domain antibodies. Annu. Rev. Biochem., 2013, Vol. 82, pp. 775-797.

10. Steeland S., Vandenbroucke R.E., Libert C. Nanobodies as therapeutics: big opportunities for small antibodies. Drug Discovery Today., 2016, Vol. 21, pp. 1077-1113.

11. Tillib S.V., Privezentseva M.E., Ivanova T.I. Single-domain antibody-based ligands for immunoaffinity separation of recombinant human lactoferrin from the goat lactoferrin of trasgenic goat milk. J. Chromatogr. B: Anal. Technol. Biomed. Life Sci. 2014, pp. 48-57, 949-950.

12. Ward G., Simpson A., Boscato L., Hickman P. E. The investigation of interferences in immunoassay. Clin. Biochem., 2017, Vol. 50, pp. 1306-1311.

13. Wyatt A.R., Kumita J.R., Farrawell N/. Alpha-2-macroglobulin is acutely sensitive to freezing and lyophilization: Implications for structural and functional studies. PLoS ONE, 2015, Vol. 10, no. 6, e0130036. doi: 10.7868/S0026898417060106.


Для цитирования:


Горяйнова О.С., Хан Е.О., Иванова Т.И., Тиллиб С.В. НОВЫЙ МЕТОД, БАЗИРУЮЩИЙСЯ НА ИСПОЛЬЗОВАНИИ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ ОДНОДОМЕННЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ УДАЛЕНИЯ ОПРЕДЕЛЕННЫХ МАЖОРНЫХ БЕЛКОВ ИЗ ПЛАЗМЫ КРОВИ, СПОСОБСТВУЕТ УМЕНЬШЕНИЮ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО СИГНАЛА В ИММУНОАНАЛИЗЕ. Медицинская иммунология. 2019;21(3):567-575. https://doi.org/10.15789/1563-0625-2019-3-567-575

For citation:


Goryainova O.S., Khan E.O., Ivanova T.I., Tillib S.V. A NEW METHOD BASED ON THE USE OF IMMOBILIZED SINGLE-DOMAIN ANTIBODIES TO REMOVE CERTAIN MAJOR PROTEINS FROM BLOOD PLASMA HELPS TO REDUCE NONSPECIFIC SIGNAL IN AN IMMUNOASSAY. Medical Immunology (Russia). 2019;21(3):567-575. (In Russ.) https://doi.org/10.15789/1563-0625-2019-3-567-575

Просмотров: 20


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 1563-0625 (Print)
ISSN 2313-741X (Online)