Важнейшей функцией γδТ-клеток является контроль за реакциями врожденного и адаптивного иммунитета. Эти клетки также участвуют в противобактериальном, противовирусном, противоопухолевом иммунитете, регулируют воспаление, определяют гомеостаз барьерных тканей, регулируют взаимодействие клеток в зоне маточно-плацентарного контакта и осуществляют надзор за течением беременности, участвуют в патогенезе аутоиммунных заболеваний, участвуют в ранозаживлении, поддерживают целостность эпителия. За последние годы в литературе появилось большое количество данных о многообразии субпопуляций γδT-клеток, порой противоположных, или даже антагонистических, роли этих субпопуляций в физиологических и патологических процессах. Поэтому целью настоящего обзора явилась систематизация данных о биологии γδT-клеток, их происхождении, фенотипе, функциях и способах применения в клинике. В обзоре изложены современные представления о происхождении γδТ-клеток, стадиях их внутритимической дифференцировки, возможностях внетимической трансдифференцировки одних субпопуляций в другие. В обзоре приведена современная классификация субпопуляций γδТ-клеток человека, основанная на экспрессии γ- и δ-цепей Т-клеточного рецептора, описаны фенотип и свойства наиболее распространенных популяций Vδ1, Vδ2, Vδ3 Т-клеток. Приведена классификация γδТ-клеток человека, основанная на продукции ими цитокинов и экспрессии внутриклеточных мессенджеров, подробно описаны свойства и функции наиболее изученных субпопуляций: γδT1, γδT17, γδNKT, γδTreg, γδTAPC, γδTfh. В обзоре особое внимание уделяется фенотипу различных популяций, секреции ими цитокинов, приводятся данные об экспрессии поверхностных рецепторов γδТ-клеток человека и их функциях. В частности, рассмотрены особенности строения и лиганды γδТ-клеточного рецептора, а также рецепторы, контролирующие их активность (LIRB1/ILT2, KIR2DL1, KIR2DL2/3, KIR2DL4, KIR2DS1, KIR2DS2, KIR3DL2, KLRD1, NKG2A, NKG2C, NKG2D, NKG2F, NKp30, NKp44, NKp46, KLRC3, DNAM1, KLRG1/MAFA, FcγRIII, BTLA, PD1, TIGIT, VISTA, LAG3, TIM3, CTLA-4, 2B4, NK1 (NK28), KLRB1, TLR1, TLR2, TLR3, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8), цитотоксичность в отношении клеток-мишеней, хемокиновые CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR9, CCR10, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, цитокиновые и адгезионные рецепторы. В обзоре приведена информация об участии субпопуляций γδТ-клеток человека в различных физиологических и патологических процессах, отмечена их неоднозначная роль в надзоре за опухолевым ростом. На основании описанных данных приводятся сведения о возможных перспективах применения γδТ-клеток в терапии некоторых заболеваний.

Цель исследования – проанализировать современные достижения в области транскриптомных технологий, ориентированных на анализе единичных клеток с акцентом на их применение в исследовании опухолевого микроокружения и иммунного ландшафта при раке предстательной железы (РПЖ). Были проанализированы научные базы данных PubMed, Medline, Web of Science, Embase. РПЖ – злокачественное новообразование, зависящее от гормонов андрогенного происхождения, которое поражает мочеполовую систему мужчин. Данные показывают, что у мужчин младше 40 лет РПЖ встречается крайне редко, в то время как наибольшее количество случаев наблюдается в возрастной группе от 50 до 70 лет. На сегодняшний день РПЖ является одним из наиболее распространенных онкологических заболеваний среди мужчин и представляет собой одну из основных причин смертности от рака. Согласно данным Глобальной онкологической обсерватории (GCO), в 2022 году по всему миру было зарегистрировано 1467854 новых случая РПЖ, что привело к 397430 летальным исходам, связанным с этим заболеванием. РПЖ занимает четвертое место по заболеваемости и второе по смертности среди всех онкологических заболеваний у мужчин. В России РПЖ занимает вторую позицию по заболеваемости среди всех видов рака у мужчин, с зарегистрированными 52712 случаями на 2022 год, и четвертую по смертности, с 14635 случаями. Глубокое понимание механизмов патогенеза и прогрессирования РПЖ имеет ключевое значение для эффективной диагностики и разработки методов лечения. В обзоре представлен анализ транскриптомных техологий в разрешении единичных клеток в изучении клеточной гетерогенности при РПЖ. Также подробно представлена методология анализа, охарактеризована клеточная гетерогенность при РПЖ, описаны современные исследования в области транскриптомики единичных клеток при раке простаты, а также обозначены перспективные направления применения полученных результатов в клинической практике. Результаты исследований в этой области имеют значительный потенциал для использования в качестве как прогностических, так и диагностических маркеров опухолевых процессов. Таким образом, работа подчеркивает важность изучения клеточной гетерогенности для совершенствования методов диагностики и терапии рака простаты. Технологии исследования транскриптома единичных клеток предоставляют уникальные возможности для углубленного понимания молекулярных и клеточных механизмов, лежащих в основе иммунного ответа при онкологических заболеваниях. Полученные данные могут стать основой для развития новых направлений в фундаментальной иммунологии, разработки инновационных терапевтических стратегий и внедрения персонализированного подхода к лечению рака простаты, что открывает перспективы для повышения эффективности терапии.

Современные исследования в области иммунологии указывают на немаловажное значение механических факторов в формировании иммунного ответа. Механоиммунология, как новое междисциплинарное направление, изучает влияние механических стимулов на поведение иммунных клеток, в частности T-лимфоцитов. Доказано, что жесткость микросреды, механические взаимодействия с внеклеточным матриксом, а также изменение мембранного натяжения способны модулировать активацию, миграцию, пролиферацию и эффекторные функции T-клеток. Оптимальная механическая среда способствует повышению T-клеточной активности, в то время как увеличение жесткости микросреды, изменение свойств внеклеточного матрикса, могут снижать их функциональные возможности. Известные молекулы такие, как Piezo 1, интегрины, Yesассоциированный белок, являются ключевыми регуляторами механотрансдукции в иммунных клетках. Постепенное развитие представлений об их участии в иммунном ответе свидетельствует о значительной сопряженности их модулирующих влияний, формирующих систему, обеспечивающую комплексное реагирование на механические стимулы. Механомодуляция приводит к изменению внутриклеточной среды, выступая в качестве фактора, определяющего метаболический профиль T-клеток. Кроме того, исследования показывают, что механочувствительные сигнальные пути могут участвовать в регуляции межклеточных взаимодействий и адаптивного иммунного ответа, что предоставляет широкие возможности для модификации иммунных реакций. Понимание механизмов механотрансдукции открывает перспективы для разработки новых терапевтических стратегий. Механические сигналы могут быть использованы для повышения эффективности CAR-Tклеток за счет оптимизации их активации, пролиферации и инфильтрации в опухолевую ткань, что особенно важно в лечении злокачественных новообразований, в частности солидных опухолей, где CAR-T-клеточная терапия сталкивается с серьезными ограничениями. Механоиммунологические подходы рассматриваются также в контексте лечения аутоиммунных заболеваний. Предполагается, что механочувствительные пути могут регулировать избыточную активацию T-клеток, препятствуя развитию аутоиммунных процессов и патологической гиперактивации иммунной системы. Не исключено создание эффективных методик предотвращения реакций трансплантат-против-хозяина и отторжения трансплантата, а также методов лечения хронических инфекций. Спектр возможных фармакологических методик включает в себя применение активаторов и ингибиторов Piezo 1, интегринов и Yes-ассоциированного белка. Разрабатываются и биоинженерные подходы. Одним из перспективных направлений является использование наномоторов для ex vivo активации T-клеток, что может повысить эффективность клеточных иммунных технологий в лечении различных заболеваний. Кроме того, настройка иммунных реакций с использованием механических свойств может позволить направленно регулировать иммунный ответ в зависимости от специфики патологического процесса.

Современные исследования роли кишечной микробиоты у животных и человека показывают, что микроорганизмы являются важным фактором, определяющим здоровье хозяина, и участвуют в патогенезе различных инфекционных и неинфекционных заболеваний. В настоящее время активно исследуются механизмы формирования функциональной оси «кишечник – легкие» при новой коронавирусной инфекции COVID-19, где желудочно-кишечный тракт может являться входными воротами инфекции, указывая на вовлечение кишечной микробиоты в инфекционный процесс. С одной стороны, изменение микробиоты пациентов (дисбиоз), инфицированных вирусом SARS-CoV-2, является одним из факторов развития вторичной бактериальной инфекции, сепсиса, системного воспаления и полиорганной недостаточности. С другой стороны, нарушение микробиоты кишечника способствует развитию тяжелого течения и летального исхода у пациентов из-за двунаправленной связи кишечной микробиоты через систему иммунитета посредством цитокинов. Показана связь степени тяжести COVID-19 у пациентов с уровнем цитокинов и выявлением в кишечном биотопе определенных видов «провоспалительных» или «противовоспалительных» бактерий. Иммунологические нарушения у пациентов с COVID-19 также опосредованы изменением профиля метаболома на фоне дисбиотических нарушений микробиоты. Связь между составом микробиоты кишечника, уровнями цитокинов и воспалительными маркерами позволяет предположить, что микробиом кишечника влияет на развитие и течение коронавирусной инфекции, а «симбиотический потенциал» нормобиоты может быть использован для разработки мер профилактики и реабилитации пациентов. Этому может способствовать развитие исследований в направлении проблемы симбиоза человека и микробиоты. Ряд ключевых механизмов изучения интеграции бифидобактерий и лактобацилл с хозяином, опосредованные системой иммунитета, гормонов и нейромедиаторов, открывают новые перспективы для медицины, включая получение новых пробиотических штаммов различной целевой установки для лечебно-профилактической коррекции нарушенных функций организма. Изучение микросимбиоценоза, как одного из векторов ассоциативного симбиоза, позволило разработать метод межмикробного распознавания «свой-чужой», где в качестве тестовой распознающей культуры используются бифидобактерии, т. к. для «своих» штаммов характерен синергизм (поддержка), тогда как при встрече с «чужой клеткой» – антагонизм. Именно этот фундаментальный механизм можно использовать при отборе «своих» для хозяина штаммов, пригодных для создания пробиотической композиции.

В статье обобщены экспериментальные и клинические данные о фармакологических свойствах окисленного декстрана. Основной акцент сделан на иммунологическом механизме действия окисленного декстрана, в частности на его способности селективно активировать тканевые макрофаги, в том числе тестикулярные макрофаги, которые непосредственно участвуют в сперматогенезе. В экспериментальной части работы на модели нарушения сперматогенеза у крыс индуцированного введением эндотоксина Escherichia coli, показано, что окисленный декстран значительно снижает патоморфологические изменения в семенниках. При этом подобный эффект связан с активацией тканевых макрофагов и выделения ими соответствующих цитокинов, которые направлены на купирование воспалительного процесса и нормализацию микроциркуляторной гемодинамики. Представленные экспериментальные данные коррелируют с данными о высокой клинической эффективности окисленного декстрана при нарушениях сперматогенеза и мужском бесплодии. В клинической части работы по влиянию ректального введения окисленного декстрана у пациентов с тяжелыми нарушениями сперматогенеза показано, что окисленный декстран существенно увеличивает объем эякулята, концентрацию сперматозоидов в эякуляте и общее количество сперматозоидов. При этом окисленный декстран также способствует снижению количества лейкоцитов при анализе спермограмм и существенно снижает агглютинацию сперматозоидов, что свидетельствует о купировании хрониеского инфекционно-воспалительного процесса у андрологических больных с бесплодием. Авторы связывают данные экспериментальных и клинических исследований в рамках единой концепции активации тканевых макрофагов и возможностью макрофагов менять свой фенотип в зависимости от микроокружения и особенностей течения инфекционно-воспалительного процесса. Такой подход подтверждается также клиническими данными о влиянии фенотипов макрофагов на лекарственную резистентность и тяжесть течения внутриклеточных инфекций, в частности туберкулеза. Анализ экспериментальных и клинических данных позволяет авторам предложить теоретическую модель механизма терапевтической эффективности окисленного декстрана при внутриклеточных инфекциях, которые наиболее часто встречаются в андрологической практике и являются тригерным фактором фатальных нарушений сперматогенеза, приводящих к мужскому бесплодию. Представленные авторами экспериментальные и клинические данные позволяют рассматривать окисленный декстран как весьма эффективное средство для лечения внутриклеточных инфекций, в том числе урогенитальных инфекций, вызывающих мужское бесплодие.

Цель – разработка вакцины против стрептококков группы А (S. pyogenes, СГА) – возбудителя широкого спектра инфекций различной степени тяжести. Для клонирования генов рекомбинантных белков использовали экспрессионные вектора pET27 и pQE30. Для иммунизации использовали аффинно-очищенные полипептиды. Самок мышей иммунизировали дважды подкожно полипептидами в дозе 20 мкг/мышь с адъювантом Alum (2:1) с интервалом в 3 недели. Образцы иммунных сывороток исследовали методом ИФА. Для оценки специфической защитной эффективности иммунного ответа через 3 недели после последней инъекции мышей внутрибрюшинно заражали СГА M1 серотипа в дозе 5 × 10⁷ КОЕ/мышь. Защитную эффективность вакцинации оценивали путем сравнения скорости бактериального клиренса у вакцинированных и контрольных животных, о чем судили по бактериальной нагрузке в селезенке через 3 и 15 часов после заражения. Конструкция вакцины представляет собой гибридную молекулу, состоящую из фрагментов, полученных из двух ключевых белков СГА: пептидазы C5a (ScpA) и экзотоксина SpeA. Используя биоинформатический анализ, мы идентифицировали и выбрали для включения в состав рекомбинантного белка Т- и В-клеточные эпитопы в консервативных регионах, общих для разных серотипов СГА. Посредством стратегии интеграции этих фрагментов предполагается усилить защиту от штаммов СГА, несущих экзотоксин, особенно тех, которые связаны с инвазивными инфекциями. Оценка иммуногенности на моделях мышей продемонстрировала сильный гуморальный иммунный ответ после парентеральной вакцинации, направленный на оба компонента гибридной молекулы. Последующая оценка защитной эффективности против внутрибрюшинного введения СГА выявила ускорение бактериального клиренса у вакцинированных животных, при этом фрагмент SpeA проявлял значительный защитный эффект. Представленные результаты демонстрируют потенциал полученной рекомбинантной химерной вакцины как многообещающего кандидата для разработки вакцины против стрептококков группы А, удовлетворяющей острую потребность в эффективных профилактических стратегиях против патологий, вызванных СГА.

Нейробластома (НБ) – самая распространенная экстракраниальная солидная опухоль у детей, 8-10% всех детских опухолей и частотой около 1-1,3 случая на 100 тыс. детей до 15 лет. Несмотря на использование интенсивного лечения с хирургическим вмешательством, высокодозной химиотерапией и радиотерапией, 5-летняя бессобытийная выживаемость составляет 25-50%, после рецидива – 10-40%. За последнее десятилетие стремительно развивается новый вид клеточной терапии с модификацией лимфоцитов химерным антигенным рецептором (CAR). Одним из основных известных антигенов для создания CAR-T-терапии против НБ является дисиалоганглиозид GD2, экспрессия которого характерна в 100% случаев этого заболевания. Большинство клинических вариантов анти-GD2 CAR основаны на scFv 14.G2, происходящим из химерного антитела 14.18 (денутуксимаб). В 2020 FDA утвердило новое анти-GD2 гуманизированное антитело, 3F8 (накситамаб) с лучшим профилем безопасности. Несмотря на частичный успех, результаты анти-GD2 CAR-Tтерапии остаются скромными. Одним из вариантов увеличения специфичности рецептора является таргетирование O-ацетил-GD2, производное дисиалоганглиозида, в котором внешний остаток сиаловой кислоты модифицирован O-ацетиловым эфиром. Ацетилирование GD2 происходит только в опухолевых клетках и не встречается в периферических нервах. Известно антитело 8B6, таргетирующее O-ацетил-GD2. Таким образом, как минимум 3 терапевтических антитела, 14G2a, hu3F8 и 8B6, конкурируют друг с другом за таргетирование GD2 с помощью CAR-T-клеток. И во всех случаях анти-GD2 CAR содержит вставочные домены во внеклеточной части молекулы. Результаты отдельных клинических испытаний опубликованы для CAR-T на основе 14G2a и hu3F8, но пока нет данных по использованию антитела 8B6 в составе CAR. Цель настоящего исследования – получить химерные антигенные рецепторы 2-го поколения на основе трех антител, с различной длинной внеклеточного домена и оценить их функциональную активность в отношении ряда клеточных линий для обоснования дальнейших клинических испытаний.

По данным Всемирной организации здравоохранения, за 2021 год основной причиной инвалидности и смертности людей во всем мире была ишемическая болезнь сердца, на третьем месте по числу смертей – инсульт. Данные сердечно-сосудистые заболевания, в том числе инфаркт миокарда и аневризмы стенки аорты, обусловлены системным хроническим воспалительным процессом под названием атеросклероз. Это заболевание развивается на протяжении десятилетий и характеризуется нарушением целостности эндотелиального слоя сосудов, избыточным накоплением липидов в стенках сосудов, дисфункцией макрофагов и гладкомышечных клеток и развитием воспаления артериальных стенок. Одним из путей регрессии атеросклероза может служить эмиграция макрофагов, нагруженных эфирами холестерола, из атеросклеротической бляшки по лимфатическим сосудам в региональные лимфоузлы и, в дальнейшем, в печень для последующего метаболизма холестерола. Белок нетрин-1 является ингибитором миграции иммунных клеток. Представляет интерес изучение аутокринной/паракринной регуляции экспрессии гена нетрина-1 в макрофагах человека. Понимание этого процесса может являться основой для поиска новых подходов в терапии атеросклероза. Цель исследования – изучить влияние белка нетрина-1 на уровень экспрессии генов ntn1, его рецептора unc5b и хемокина ccl19. Работа выполнена на макрофагах, дифференцированных из линии острой моноцитарной лейкемии человека THP-1. Анализ экспрессии генов ntn1, unc5b, ccl19 на уровне матричной РНК проведен методами обратной транскрипции и количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, а на уровне белка анализ сделан методом проточной цитофлуориметрии. Нетрин-1 в концентрации 50 нг/мл индуцировал экспрессию генов ntn1 и unc5b, но подавлял экспрессию гена ccl19 в макрофагах человека. Однако в концентрации 250 нг/мл нетрин-1 приводил к значительному снижению экспрессии собственного гена ntn1. Нетрин-1 оказывает ауторегулирующее влияние на экспрессию своего гена и гена своего рецептора unc5b в макрофагах человека. Подавление нетрином-1 экспрессии хемокина ccl19 в макрофагах может являться одним из путей ингибирования эмиграции макрофагов данным эффектором. Полученные результаты расширяют представление о регуляции экспрессии белков, ответственных за миграцию макрофагов, и в перспективе могут быть использованы для поиска новых мишеней в терапии атеросклероза.

Привычное невынашивание беременности представляет собой существенную клиническую проблему, которая затрагивает 1-5% популяции, при этом в более чем половине случаев причина преждевременной потери беременности остается неизвестной. Изменения морфофункциональных свойств моноцитов могут являться факторами, приводящим к различным осложнениям беременности, в частности к невынашиванию. Однако роль моноцитов в патогенезе привычного невынашивания недостаточно изучена. Целью исследования было определение количественных изменений в содержании и фенотипических характеристиках свободных (не связанных с тромбоцитами) моноцитов на уровне всей популяции и отдельных субпопуляций моноцитов периферической крови при привычном невынашивании беременности в сравнении с неосложненной беременностью. Исследуемые группы составили женщины в возрасте 24-42 года с диагнозом привычный выкидыш с текущей беременностью сроком 6-12 недель и женщины с неосложненной (физиологической) беременностью (7-12 недель). В общей популяции и субпопуляциях моноцитов периферической крови пациенток методами проточной цитофлориметрии определяли содержание моноцитов и уровни экспрессии поверхностных антигенов: CD11b, CD86, CD162, HLA-DR, TREM-1. Установлено, что при привычном невынашивании беременности доля свободных моноцитов понижена (74,6%) в сравнении с беременностью, протекающей без осложнений (83,4%), и это изменение происходит во всех трех субпопуляциях моноцитов: классических, промежуточных и неклассических. При этом на уровне общей популяции моноцитов наблюдалось снижение уровня экспрессии HLA-DR и повышение уровня экспрессии CD11b, обусловленные фракцией классических моноцитов, тогда как экспрессия CD162, CD86 и TREM-1 существеннно не изменялась. Субпопуляции моноцитов вносили различный вклад в изменение уровней экспрессии активационных маркеров, связанное с привычным невынашиванием, и эти изменения не всегда проявлялись на уровне всей популяции моноцитов. Полученные результаты свидетельствуют о том, что привычное невынашивание беременности сопровождается уменьшением содержания свободных моноцитов в периферической крови и изменениями антигенного фенотипа моноцитов, характеризующими ослабление провоспалительных свойств и усиление адгезионных свойств этих клеток. Эти изменения могут лежать в основе патофизиологических процессов, приводящих к преждевременному прерыванию беременности ранних сроков. Определение паттернов экспрессии активационных маркеров, характерных для конкретной акушерской патологии способствует не только выявлению патофизиологических механизмов репродуктивных нарушений, но и совершенствованию методов их диагностики и выработке патогенетически обоснованных способов терапии.

Адъюванты являются важными компонентами вакцинных препаратов, в том числе аллерговакцин, позволяющими повысить их эффективность и безопасность. В настоящее время интерес мирового научного сообщества вызывает подход, основанный на включение адъюванта в состав молекулы иммуногена. Такие ковалентные адъюванты могут быть представлены веществами разных химических классов и, в частности, пептидами. Пептиды обладают такими преимуществами перед веществами других классов, как высокая эффективность и биодеградация, при этом дендримерные катионные пептиды зачастую способны к усиленной по сравнению с линейными пептидами транспортной способностью. В рамках данной работы была изучена способность усиливать индукцию IgG двух катионных дендримерных клеточно-проникающих пептидов с показанной ранее трансмембранной активностью: LTP и SA-40. Пептиды были получены твердофазным синтезом, охарактеризованы методами масс-спектрометрии и зонного капиллярного электрофореза. Для изучения адъювантной активности пептиды были конъюгированы с рекомбинантным протеином Bet v 1, представляющим собой мажорный аллерген пыльцы березы, полученным биотехнологически с использованием продуцента E. coli и очищенным хелатной хроматографией. Конъюгация проводилась по реакции Михаэля после модификации протеина малеимидной функцией. Очистка конъюгатов производилась гелевой хроматографией и диализом, эффективность конъюгации оценивалась электрофорезом в полиакриламидном геле. Конъюгаты и чистый rBet v 1 использовались для иммунизации лабораторных мышей BALB/c для сравнения уровней IgG к rBet v 1 после четырех инъекций без использования иных адъювантов. Сыворотки крови мышей изучались иммуноферментным анализом на уровне IgG против rBet v 1, что было целевым показателем, а также против самих конъюгатов и свободных пептидов LTP и SA-40. Установлено, что оба конъюгата ощутимо повышали уровень IgG к исходному протеину, при этом один из них, LTP-rBet v 1, также вызывал реактивность сыворотки как к самому себе, так и к свободному пептиду LTP. Повышение уровня IgG к rBet v 1 в случае LTP-rBet v 1 было приблизетльно четырехкратным, в случае SA-40-rBet v 1 – трехкратным. По результатам исследования сделаны выводы о наличии у исследуемых пептидов адъювантной активности, о возможных причинах наблюдаемых явлений и о перспективности дальнейших работ в данном направлении, при этом мы считаем, что структуры пептидов LTP и SA-40 могут быть впоследствии использованы в качестве референтных при разработке новых пептидных адъювантов, и в качестве ковалентного адъюванта может быть использован сам SA-40. В свою очередь, LTP, вероятно, может иметь перспективы использования также в качестве нековалентного адъюванта.

Рак предстательной железы (РПЖ) является второй по значимости причиной смертности от рака среди мужчин. Вирус папилломы человека (ВПЧ) является наиболее распространенной причиной рака шейки матки, тесно связанного с анальным и вагинальным раком. Кроме того, интерлейкин-12 (IL-12) индуцирует противоопухолевый иммунитет. Целью данного исследования было изучение роли ВПЧ в РПЖ и определение его влияния на сывороточный уровень IL-12. В период с 2018 по 2022 год в Ахвазе исследователи получили 55 парафинированных образцов злокачественных поражений предстательной железы и 55 контрольных образцов тканей доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Образцы крови были взяты у 24 диагностированных онкологических пациентов для оценки уровня IL-12 до начала лечения. Кроме того, в качестве контроля участвовали 24 пациента с доброкачественной гиперплазией предстательной железы. Мы провели экстракцию ДНК фенол-хлороформным методом и исследовали наличие ДНК папилломавируса в тканях с помощью ПЦР в гнездном варианте. Кроме того, в сыворотке крови измеряли уровень IL-12 с помощью ИФА. Результаты не выявили связи между ВПЧ и РПЖ; наличие ВПЧ-инфекции не коррелировало с наличием секреции IL-12. Однако по мере прогрессирования рака уровень IL-12 у пациентов значительно снижался по сравнению с контрольной группой (p < 0,05). ВПЧ может присутствовать в ткани предстательной железы, хотя это не означает, что данный вирус способствует развитию РПЖ. Наиболее значимыми штаммами, инфицирующими ткань предстательной железы, являются типы 16 и 18. По сравнению с контрольной группой и у пациентов с разной суммой баллов по шкале Глисона, уровень секреции интерлейкина-12 достоверно ниже у пациентов с РПЖ. Использование этого важнейшего цитокина позволяет принимать эффективные меры для оценки прогноза, регулирования заболевания или оказания помощи в лечении пациентов.

Основным методом оценки репродуктивной функции мужчин является спермиологический анализ, который не всегда является показательным для установления причины бесплодия. В литературных данных особая роль в нарушении мужской фертильности отводится оксидативному стрессу, в результате которого повреждаются мужские половые клетки. Повреждение мембран сперматозоидов сопровождается выходом их ДНК во внеклеточное пространство, что является индуктором развития местной воспалительной реакции. В таком случае, поддержание гомеостаза семенной жидкости будет зависеть от эффективности деградации внеклеточной ДНК. У человека данную функцию осуществляют ферменты ДНКазы, локализованные во всех тканях и биологических жидкостях организма. Также отмечена их роль в процессе оплодотворения и фрагментации генетического материала сперматозоидов. Избыток или недостаток ДНКаз может привести к развитию широкого спектра заболеваний. Целью настоящего исследования являлось установление референтных интервалов для ДНКазы 1L3 и ДНКазы II эякулята и поиск связей между концентрацией нуклеаз и показателями спермиологического анализа. В качестве материала для исследования использовали семенную жидкость 82 условно здоровых мужчин в возрасте 18-49 лет, обследованных на базе НИИ иммунологии ЮУГМУ. Критериями исключения являлось наличие воспалительных заболеваний урогенитального тракта и ИППП. Спермиологический анализ проводился согласно лабораторному руководству ВОЗ. Обследование на ИППП проводили методом ПЦР в режиме реального времени. Концентрацию ДНКаз в эякуляте определяли методом ИФА. Описательную статистику, построение гистограмм и референтных интервалов, проводили в программе R. Нами впервые были определены уровни ДНКазы 1L3 и ДНКазы II в семенной жидкости и установлены для них референтные интервалы. Сдвиги значений концентраций ДНКазы 1L3 и ДНКазы II, вероятнее всего, могут рассматриваться как индикаторы возможных патологических состояний. В частности, повышенная концентрация ДНКазы 1L3 – индикатор патологического процесса, связанного с низкой подвижностью сперматозоидов, а высокие уровни ДНКазы II можно рассматривать как индикатор местной воспалительной реакции.

Сегодня клинические проявления у больных COVID-19 варьируют от легкого до тяжелого течения, особенно в группах пациентов, подверженных хроническим заболеваниям. Выбор наиболее информативных показателей, обеспечивающих прогноз возможного исхода или тяжелого течения заболевания у пациентов с COVID-19, необходим уже на раннем этапе для определения эффективной тактики лечения. Наиболее ранними предикторами ухудшения состояния больных при COVID-19 являются повышенные значения интерлейкина-6, интерлейкина-10, С-реактивного белка, прокальцитонина и других показателей врожденной иммунной системы. Одной из задач настоящего исследования было определение наиболее информативных показателей общеклинического анализа крови и основных субпопуляций лимфоцитов у пациентов с COVID-19, позволяющих помочь в интерпретации степеней тяжести заболевания и развития цитокинового шторма наряду с клиническими проявлениями и функциональными методами диагностики. Нами проведено ретроспективное когортное исследование периферической крови у 65 больных, из которых было 57 мужчин и 8 женщин, возраст пациентов варьировал от 32 до 82 лет, средний возраст составил 48,6 года. После исследования общего анализа крови в 65 образцах выполнен цитометрический анализ с использованием системы проточной цитофлюориметрии серии Cytomics™ FC 500 фирмы Beckman Coulter (США), моноклональных антител СD45-ECD, CD3-FITC, CD4-PC7, CD8-PE, CD19-PC-5, CD16⁺56-PE фирмы Beckman Coulter (США). Статистическая обработка результатов исследования проведена в программе IBM SPSS Statistics 26.0 (IBM, США). У обследованных нами пациентов с COVID-19 при первичном обращении за медицинской помощью отмечается абсолютная лимфопения на фоне нейтрофилеза, что выражается в повышении значений нейтрофильно-лейкоцитарного и лейкоцитарноТ-лимфоцитарного индексов. Данные индексы с достаточно высокой информативностью могут использоваться при прогнозировании рисков заболевания. Определение наиболее достоверных показателей клеточного звена иммунитета, таких как CD3⁺, CD3⁺CD4⁺, CD3⁺CD8⁺, CD3^- CD16⁺CD56⁺ лимфоциты, дополнительно к клиническому анализу крови, может дать оценку особенностям иммунного реагирования организма на инфицирование SARS-СoV-2, помочь спрогнозировать тяжесть течения заболевания, а также принять решение для изменения тактики лечения при необходимости.

Пандемия COVID-19 сконцентрировала внимание исследователей всего мира на борьбе с этой инфекцией. Важнейшим подходом противодействия COVID-19 стала разработка профилактических вакцин на основе ряда платформ, включая ДНК- и РНК-вакцины, векторные и субъединичные вакцины. Одной из таких платформ стали субъединичные вакцины, которые привлекательны в первую очередь из-за непревзойденного профиля их безопасности. Однако безопасность данных вакцин часто сопряжена с невысокой эффективностью, поэтому зачастую необходимо применять адъюванты, а также использовать более сложные схемы иммунизации. В то же время важным достоинством субъединичных вакцин является масштабируемость и относительная простота производства, так как в процессе производства нет необходимости работать с живым вирусом или вирусными векторами. Целью работы была разработка кандидатной вакцины на основе рекомбинантного рецептор-связывающего домена (RBD) спайкового S-белка SARS-CoV-2 варианта Delta (B.1.617.2). В исследовании применялись иммунологические методы, методы генной инженерии и биотехнологии. В ходе работы на основе клеток млекопитающих CHO-K1 разработан продуцент рекомбинантного RBD. Для получения белка, отвечающего требованиям инъекционных препаратов, была разработана схема хроматографической очистки, включающая аффинную и ионообменную хроматографии. Предложен вариант субъединичной вакцины «Дельта-Вак» на основе полученного рекомбинантного белка. Иммуногенность кандидатной вакцины «Дельта-Вак» оценивали на модели лабораторных мышей BALB/c. Проводили двукратную иммунизацию животных дозой 50 мкг RBD в комплексе с Al(OH)3 с двухнедельным интервалом. Показана способность кандидатной вакцины индуцировать выработку специфических IgG и нейтрализующих антител у мышей линии BALB/c. Специфические титры антител иммунизированных животных лежали в диапазоне от 1/10⁵ до 1/10⁶ . При этом сыворотки крови обладали нейтрализующей активностью в отношении SARS-CoV-2 (вариант B.1.617.2 (Delta)) с титром до 1/2000. Разработанная вакцина «Дельта-Вак» обладает высокой иммуногенностью и индуцирует выработку нейтрализующих антител против гомологичного варианта Delta и гетерологичных вариантов Wuhan и Omicron SARS-CoV-2. Таким образом, «Дельта-Вак» может выступать в качестве кандидатной вакцины и служить прототипом для разработки субъединичных вакцин против COVID-19.

Пребывание в зоне боевых действий сопряжено с высоким риском развития психических нарушений. Накоплен значительный объем знаний о механизмах иммуноопосредованных реакций при развитии нейропсихической патологии, в частности посттравматического стрессового расстройства (ПТСР). Важная роль в развитии нейровоспаления при стрессе отводится активированным Т-регуляторным клеткам. Цель исследования – изучение показателей системы крови, цитометрических особенностей клеточного компартмента иммунной системы у участников современных военных конфликтов с наличием расстройств адаптации, ассоциированных со стрессом. Обследованы 97 ветеранов – участников современных военных конфликтов, мужского пола от 35 до 55 лет, из них 35 – ветераны специальной военной операции на Украине (СВО) – основная группа, 42 ветерана второй Чеченской военной кампании (группа сравнения), 20 человек – здоровые военнослужащие (контрольная группа). Всем проводилось патопсихологическое обследование в соответствии с клиническими рекомендациями. У 12% ветеранов СВО диагностирован ПТСР, 77% имели различные варианты невротических расстройств, связанных со стрессом и соматоформными расстройствами. В группе сравнения 2% комбатантов имели диагноз «хроническое изменение личности». Общий анализ крови проводили стандартизированным методом на гематологическом анализаторе. Иммунофенотипирование лимфоцитов с использованием проточного цитофлюориметра Navios (Beckman Coulter, США). В группе ветеранов СВО отмечены снижение степени разброса эритроцитов по объему, показателя гетерогенности и среднего объема тромбоцитов, лимфопения, моноцитоз, что отражает разнонаправленное действие регуляторов гемопоэтических клеток на отдельные линии дифференцировки мононуклеаров. Цитометрический анализ состава лимфоцитов показал снижение Т-хелперов и зрелых NK-клеток в группе ветеранов СВО, что объясняет наличие лимфопении и может свидетельствовать о дефиците адаптивного и врожденного компартментов иммунной защиты в условиях пролонгированной реакции на стресс. Установлено повышение численности ТNK и Т-регуляторных лимфоцитов, препятствующих возможности перехода иммунного ответа в аутоиммунную реакцию. При стрессе транскрипционный фактор FoxP3 участвует в повышающей регуляции индуцируемого глюкокортикоидами рецептора TNF в линии Т-регуляторных клеток, потенцируя пролиферативную активность последних. Показано снижение числа Т-хелперов и Т-регуляторных клеток с маркерами ранней и поздней позитивной активации, ограничивая развитие как аутоиммунных реакций, так и развитие стресс-индуцированного нейровоспаления. Между контрольной группой и показателями группы сравнения практически отсутствовали различия, что свидетельствует о нивелировании с течением времени остроты стресс-индуцированных нейроиммунных реакций. Индуцированное стресс-медиаторами кроветворение и опосредованное нейроиммунными влияниями изменение количественного спектра субпопуляций лимфоцитов является следствием сложного многоуровневого нейропсиходинамического процесса ЦНС, ассоциированного с клиническими формами расстройств адаптации.

Белки семейства VEGF участвуют в развитии многих клеточных популяций: эндотелиальных клеток, моноцитов и макрофагов, стволовых клеток, опухолевых клеток, мышечных клеток стенок сосудов, клеток трофобласта и в целом любых клеток, экспрессирующих рецепторы к VEGF. Нарушения, затрагивающие продукцию белков VEGF и проведение сигналов от них, приводят ко многим патологическим состояниям, в том числе к аномалиям развития плаценты. Клетки трофобласта являются основной популяцией клеток, формирующей плаценту. Они вовлечены в процессы секреции и рецепции VEGF, фактора, необходимого для обеспечения ангиогенеза. Несмотря на это, на данный момент в литературе недостаточно данных о влиянии проведения сигналов от VEGF в клетках трофобласта на их функциональные особенности. Среди клеток окружения трофобласта, которые могут воздействовать на их активность в ходе беременности, особой группой являются материнские иммунные клетки, в частности NK-клетки. Принимая во внимание высокую численность NK-клеток в децидуальной оболочке, необходимо учитывать их вклад в изменение фенотипа клеток трофобласта. В настоящем исследовании изучалась экспрессия NK-клетками и клетками трофобласта белков MICA и MICB, а также рецептора CD105. Молекулы MICA и MICB являются маркерами стресса и позволяют судить о жизнеспособности клеток. Рецептор CD105 экспрессирован на поверхности некоторых популяций клеток и участвует в передаче сигнала от белков семейства TGF-β. В частности, показано, что эндоглин регулирует сигналинг от TGF-β путем направления сигнала через пути SMAD2/3 или SMAD1/5/8. Эндоглин, согласно литературе, ингибирует сигналинг, задействующий белок SMAD3. Играет ли эндоглин ту же роль в случае NK-клеток и трофобласта, неизвестно. Изучение изменений в экспрессии эндоглина является актуальной проблемой, поскольку сигналы от TGF-β необходимы при дифференцировке популяций трофобласта, а нарушения в механизмах сигналинга могут приводить к невынашиванию. В результате исследования мы показали, что VEGF играет роль в регуляции активности трофобласта и естественных киллеров. В частности, депривация VEGF-A моноклональными антителами против этого цитокина при сокультивировании трофобласта и NK-клеток приводит к угнетению экспрессии CD105 обеими популяциями клеток. При этом суточная инкубация трофобласта с антителами к VEGF не вызывала изменений в их устойчивости к цитотоксической активности естественных киллеров. Вместе полученные результаты говорят о том, что депривация VEGF приводит к значимым изменениям в рецепции белков семейства TGF-β клетками трофобласта и естественными киллерами.

Привычное невынашивание беременности представляет собой существенную клиническую проблему, которая затрагивает 1-5% популяции, при этом в более чем половине случаев причина преждевременной потери беременности остается неизвестной. Одной из возможных причин является нарушение баланса в системе гемостаза матери, приводящее к тромбозу маточно-плацентарных сосудов, снижению перфузии плаценты и гипоксии. Изменения морфофункциональных свойств моноцитов и образуемых ими и активированными тромбоцитами агрегатов могут являться факторами, приводящими к различным осложнениям беременности. Однако роль тромбоцитарно-моноцитарных комплексов (ТМК) в патогенезе привычного невынашивания беременности практически не изучена. Целью настоящего исследования было определение количественных изменений в содержании и фенотипических характеристиках ТМК периферической крови при привычном невынашивании беременности, а также оценка влияния тромбоцитов на экспрессию поверхностных белков-моноцитов при физиологическом и патологическом развитии беременности. Исследуемые группы составили женщины с диагнозом «привычный выкидыш», имеющие беременность 6-12 недель, и женщины с неосложненной беременностью (7-12 недель). В общей популяции и субпопуляциях моноцитов периферической крови пациенток методами проточной цитофлуориметрии определяли содержание ТМК и уровни экспрессии поверхностных антигенов: CD62P, CD11b, CD86, CD162, HLA-DR, TREM-1. Установлено, что при привычном невынашивании уровень ТМК повышен (26,5%) в сравнении с беременностью, протекающей без осложнений (15,3%), и это повышение происходит с участием всех трех субпопуляций моноцитов: классических, промежуточных и неклассических. На уровне общей популяции моноцитов в ТМК отмечалось снижение экспрессии HLA-DR и повышение уровня экспрессии CD11b, тогда как экспрессия CD62P, CD162, CD86 и TREM-1 существенно не изменялась. Субпопуляции моноцитов вносили различный вклад в изменение уровней экспрессии активационных маркеров моноцитов, связанное с привычным невынашиванием, и эти изменения не всегда проявлялись на уровне всей популяции моноцитов. Сравнение ТМК и свободных моноцитов показало, что изменения поверхностного фенотипа моноцитов в составе ТМК обусловлены как влиянием тромбоцитов, так и другими факторами. При привычном невынашивании наблюдалось индуцированное тромбоцитами усиление адгезионных свойств моноцитов, что проявлялось в повышении уровня экспрессии CD11b. В то же время снижение уровня экспрессии HLA-DR в моноцитах не было вызвано взаимодействием с тромбоцитами. Полученные результаты свидетельствуют о том, что привычное невынашивание беременности сопровождается повышением содержания ТМК в периферической крови и изменениями антигенного фенотипа моноцитов в составе ТМК, демонстрируют иммуномодуляторное влияние тромбоцитов, а также дают обоснования значимости определения паттернов экспрессии поверхностных антигенных маркеров ТМК в диагностических и терапевтических целях.

Пандемия COVID-19 стала глобальным вызовом для общественного здравоохранения. Неблагоприятный прогноз при COVID-19 ассоциирован с триадой взаимосвязанных патогенетических механизмов: дисрегуляцией иммунного ответа, коагулопатией и вторичным иммунодефицитом, формирующими самоподдерживающийся цикл прогрессирующей полиорганной дисфункции. Причиной ослабления защитных функций иммунитета становится, в том числе, дефицит Т- и В-лимфоцитов, возникающий в результате истощения ресурсов иммунной системы во время острой стадии инфекции. Оценить глубину поражения иммунной системы возможно посредством определения концентрации маркеров, отражающих функциональную активность Т- и В-лимфоцитов: Т-клеточные рецепторные эксцизионные кольца (T cell receptor excision circles, TREC) и Каппа рекомбинационные эксцизионные кольца (κ-deleting recombination excision circles, KREC) соответственно. Целью настоящего исследования стала оценка представленности доли патологических значений TREC/KREC в периферической крови условно здоровых лиц в постпандемический период. Материалом служили образцы цельной периферической крови условно здоровых лиц от 18 лет и старше, проживающих на территории Санкт-Петербурга и Ленинградской области, полученные в рамках популяционных исследований в период с 15 по 21 июня 2020 г. (717 человек), а также с 04 по 29 сентября 2023 г. (3716 человек). Для определения концентрации TREC и KREC проводили количественную Real-time ПЦР c использованием коммерческого набора TREC/KREC-AmpPS (НИИ им. Пастера, Санкт-Петербург) в соответствии с инструкцией производителя. Частота встречаемости сниженных уровней TREC и KREC в допандемический период составила 14,2 и 5,7% соответственно. А в постпандемический период – 50,1 и 21,2% соответственно, что в 3,6 раза чаще. Достоверные различия в доле лиц с патологическими значениями аналитов обнаружены во всех возрастных группах. Выявлены характерные иммунологические нарушения, проявляющиеся изолированными изменениями Т-клеточного звена или сочетанными дисфункциями Т- и В-лимфоцитов. Примечательно, что изолированные дефекты В-клеточного иммунитета обнаружены не были, что указывает на ключевую роль Т-клеточного компонента в развитии изучаемых иммунопатологических изменений. В постпандемический период обнаружено снижение минимальных популяционных значений TREC в старших возрастных группах относительно допандемических показателей и парадоксальное увеличение нижнего популяционного уровня KREC на 50,5%. Проведенное исследование свидетельствует о значительном увеличении частоты патологических значений TREC и KREC в популяции, что, вероятно, отражает долгосрочные изменения иммунного статуса после перенесенного COVID-19. Выявленные изменения подчеркивают значимость постоянного мониторинга иммунологического статуса населения в постпандемический период. Перспективным направлением дальнейших исследований представляется изучение временной динамики обнаруженных нарушений и разработка превентивных стратегий для минимизации отдаленных последствий COVID-19.