Preview

Медицинская иммунология

Расширенный поиск
Том 20, № 6 (2018)
Скачать выпуск PDF
https://doi.org/10.15789/1563-0625-2018-6

ОБЗОРЫ

785-796 256
Аннотация

Тромбоциты – самые мелкие клетки крови, которые суммарно имеют объем и площадь поверхности больше, чем все типы лейкоцитов вместе. Источником тромбоцитов являются мегакариоциты костного мозга, мегакариоциты в микрососудах легких. В легких производится приблизительно 50% всех тромбоцитов, что позволяет характеризовать их как основной сайт образования тромбоцитов. В малом круге кровообращения тромбоцитов примерно на 30% больше, чем в большом. Этот «избыток» тромбоцитов необходим для стабилизации эндотелиального барьера сосудов легких, регулятором которого является тромбоцитарный медиатор сфингозин-1-фосфат, поддерживающий плотные соединения эндотелиальных клеток. Удивительной особенностью тромбоцитов в циркуляции является способность «отпочковывать» новые про- и пре- тромбоциты, давая начало новым тромбоцитам. Удаление тромбоцитов из циркуляции осуществляется при их фагоцитозе макрофагами селезенки (в случае если тромбоциты покрыты IgG или связаны с иммунными комплексами) или Купферовскими клетками печени и гепатоцитами (если тромбоциты имеют неполные гликаны или десиалированные белки). В гомеостатических состояниях большая часть тромбоцитов удаляется в печени. При бактериальных инфекциях и сепсисе клиренс тромбоцитов ускорен из-за активности бактериальных сиалидаз. Распознавание десиалированных структур тромбоцитов осуществляется клетками печени через рецептор Asgr. Несмотря на отсутствие ДНК, тромбоциты способны синтезировать белки на матрицах мРНК, которые присутствуют в тромбоцитах в большом количестве. Активация тромбоцитов приводит к агрегации и экзоцитозу содержимого гранул, продукции иммуномодулирующих молекул. Однако активация тромбоцитов может быть неполной и приводить только к некоторым из перечисленных событий. При неклассической форме активации тромбоциты могут выпускать микрочастицы, которые содержат около 600 различных белков. В крови здоровых доноров около 75% микрочастиц – производные тромбоцитов. Подобно клеткам иммунной системы, тромбоциты активируются многочисленными эндогенными лигандами (аларминами), в числе которых АДФ и АТФ, которые связываются с пуринэргическими рецепторами P2Y1, P2Y12 и P2X1. Тромбоциты накапливают и сохраняют 99% серотонина, имеющегося в организме. Индукции воспаления тромбоциты способствуют путем высвобождения провоспалительных цитокинов, хемокинов и липидных медиаторов. Кроме того, тромбоциты являются источником ферментов и субстратов, дополняющих возможности нейтрофилов и эндотелия при производстве противовоспалительных липидных медиаторов, позволяющих перейти к процессам восстановления ткани после острой фазы воспаления.

797-806 878
Аннотация

Фактор некроза опухоли-α (ранее известный как кахектин) был отмечен как феномен в момент его открытия и до сих пор сохраняет свои позиции в качестве одной из наиболее интенсивно исследуемых молекул в области биомедицины. TNFα рассматривается как прототип семейства молекул, с одной стороны, играющих важную роль в регуляции нормальной дифференцировки, роста и метаболизма различных клеток, а с другой – выступающих в роли медиаторов воспалительных процессов при различных заболеваниях человека. Интенсивные междисциплинарные исследования биологической роли и терапевтического применения TNFα привели к пониманию его полифункциональности и установлению его ведущей роли в иммунопатогенезе целого ряда заболеваний, что явилось основанием для разработки «антицитокиновой» терапии моноклональными антителами с высокой специфичностью.
Цель – осуществить поиск литературы в области изучения структуры и свойств TNFα, а также его роли в норме, патологии и терапии
Материалы и методы: поиск литературы через научные поисковые системы и базы данных. Рассмотрена роль фактора некроза опухолей-α (TNFα) в организме человека в норме и в условиях развития патологий. Описаны возможные TNF-индуцируемые сигнальные пути, а также существующие ингибиторы на основе моноклональных антител для лечения ревматоидного артрита и других аутоиммунных заболеваний. Несмотря на колоссальные знания, накопленные в области изучения биологических функций TNFα в норме и патологии, интенсивные междисциплинарные исследования этого феномена в организме человека являются актуальными и до сих пор. Несомненные успехи в понимании многозначности TNFα как участника в регуляции различных физиологических и патологических процессов в организме человека послужили причиной внедрения биологических препаратов-антагонистов фактора некроза опухолей на основе моноклональных антител, которые оказались высокоэффективными при ревматоидном артрите и являются действенными безопасными лекарственными средствами.

807-814 114
Аннотация

Трансмембранный иммунорегуляторный гликопротеин CD200 принадлежит к семейству иммуноглобулинов и широко представлен на множестве типов клеток, в то время как его сходный по структуре рецептор CD200R в основном экспрессируется на миелоидных и лимфоидных клетках. Иммуномодуляторная роль взаимодействия молекул CD200 и CD200R заключается в активации внутриклеточного ингибиторного каскада реакций, приводя к супрессии эффекторных иммунных клеток и подавляя воспалительный процесс. Так, активация CD200R стимулирует дифференцировку наивных Т-клеток в регуляторные, повышает активность фермента индоламин2,3-диоксигеназы и усиливает синтез цитокинов IL-10 и TGF-β, способствуя формированию Th2-зависимого противовоспалительного окружения. Данные процессы являются ключевыми в обеспечении иммунологической толерантности и необходимы для контроля развития аутоиммунных процессов, гиперчувствительности, приживления трансплантированных органов и тканей, а также при беременности для защиты полуаллогенного плода, несущего чужеродные антигены отца, от отторжения. Толерогенный потенциал взаимодействия молекул CD200 и CD200R может быть эффективно использован при лечении множества заболеваний (например, болезни Альцгеймера, ревматоидного артрита, аллергии). В данном обзоре большое внимание уделено роли CD200/CD200R-взаимодействия в стимуляции приживления аллотрансплантата и предотвращения спонтанного выкидыша. На основании многочисленных исследований можно утверждать, что в основе обоих процессов лежат сходные иммунологические механизмы, одним из ключевых участников которых является молекула CD200.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

815-824 163
Аннотация

Моноцитам принадлежит ключевая роль в развитии адекватного иммунного ответа при бактериальной инфекции благодаря выполнению ими фагоцитарной, антигенпрезентирующей и секреторной функции. Выделяют три субпопуляции моноцитов: классические CD14+CD16-, переходные CD14+CD16+ и неклассические CD14+dimCD16+, различающиеся фенотипически и функционально. Соотношение субпопуляций изменяется по мере развития противобактериального ответа.

Цель исследования: изучить особенности фенотипа субпопуляций моноцитов у пациентов с сепсисом и изменение их соотношения в зависимости от наличия в крови бактерий; оценить вклад субпопуляций моноцитов в продукцию цитокинов.
В динамике обследовано 16 пациентов с сепсисом (10 мужчин и 6 женщин, возраст 58±14 лет, SOFA 9,4±2,1 баллов, проанализировано 44 образца крови). Контрольная группа включала условно здоровых лиц (n = 23, 12 мужчин и 11 женщин, возраст 51±13 лет). Выполняли: бактериологический посев, определение абсолютного и относительного количества субпопуляций классических, переходных и неклассических моноцитов и экспрессию ими HLA-DR и CD64, определение концентрации IL-6, TNFα, IL-1β, IL-10 в сыворотке. При сепсисе увеличивается абсолютное количество моноцитов, снижается доля классических и увеличивается относительное и абсолютное количество переходных клеток, субпопуляция неклассических моноцитов меняется незначительно. Соотношение субпопуляций зависит от наличия бактерий в крови: увеличение доли переходных клеток наблюдается при положительных результатах бактериологических посевов. При элиминации бактерий соотношение субпопуляций восстанавливается. При сепсисе увеличивается плотность экспрессии LPS-рецептора CD14, IgG-рецепторов CD16 и CD64, особенно выраженно – в субпопуляциях переходных и неклассических моноцитов. Во всех субпопуляциях моноцитов снижается экспрессия HLA-DR, наиболее заметно среди классических моноцитов, наименее – на переходных клетках. Отмечается значительное повышение содержания в сыворотке цитокинов IL-6, IL-1β, TNFα и IL-10. Определена прямая взаимосвязь между абсолютным количеством классических моноцитов и концентрацией IL-6, а также выраженностью полиорганной дисфункции. По-видимому, повышение абсолютного количества классических моноцитов и IL-6 может быть косвенным критерием оценки степени активации эндотелия – активного продуцента ростовых факторов миелоидного ростка и IL-6. Прямая взаимосвязь между долей CD14+CD16+клеток и концентрацией IL-10 в сыворотке свидетельствует о роли переходных моноцитов в его продукции. IL-10 подавляет антигенпрезентирующую функцию переходных клеток – экспрессию молекул HLA- DR. О последнем свидетельствует обратная зависимость между концентрацией IL-10 и плотностью экспрессии HLA-DR на CD14+CD16+ клетках. Определена обратная корреляция между степенью полиорганной дисфункции и относительным количеством HLA-DR+ моноцитов. Чем выраженнее преобладание среди моноцитов субпопуляции классических, тем заметнее снижение этого показателя. Изучение соотношения субпопуляций моноцитов, особенностей их фенотипа при сепсисе помогает понять механизмы противобактериальной защиты. Мониторинг количества классических моноцитов и концентрации в сыворотке IL-6 необходим для комплексной оценки воспалительного ответа при сепсисе. Определение экспрессии HLA-DR на моноцитах позволяет оценить выраженность иммуносупрессии у тяжелобольных пациентов. 

825-832 103
Аннотация

Исследование выполнено с целью оценки перспективности сочетанного использования лейкоцитарных и цитокиновых индексов при обтурации желчевыводящих путей различного генеза. Проведено обследование больных с механической желтухой опухолевого (14 человек) и неопухолевого (16 человек) генеза, у которых перед операцией в сыворотке крови определяли концентрацию цитокинов (IL-1, IL-4, IL-8, TNFα). О суммарной активности эндогенных медиаторов воспаления судили по величине индекса воспалительной активности (ИВА), который рассчитывали по формуле ИВА = (IL-1 + TNFα)/IL-4. Дополнительно вычисляли ряд лейкоцитарных индексов. Клеточный компонент в индексной оценке дает возможность уточнить степень выраженности воспалительной реакции, предположить направленность функциональной активности иммунокомпетентных клеток. Показано, что ИВА при наличии злокачественных процессов существенно выше, чем при доброкачественных. Гиперактивация иммунного ответа при опухолях может быть обусловлена значительным преобладанием провоспалительных цитокинов. Более того, в случаях с опухолевым перерождением, как с холангитом, так и без него, индексная оценка гуморальной и клеточной составляющей позволяет предположить возникновение проблем с регенерацией вследствие провоспалительной направленности иммунного ответа, что не обеспечивает активации соответствующих реакций. Установлено, что у пациентов с комбинацией злокачественного процесса и холангита лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) увеличен, а индекс иммунореактивности (ИИР) снижен, а при отсутствии холангита наблюдается противоположная картина, когда ЛИИ несколько снижен, а ИИР повышен. При проведении корреляционного анализа для пациентов с холангитом показана высокая степень ассоциированности цитокинового дисбаланса и эндогенной интоксикации. Таким образом, очевидна привлекательность использования комплекса цитокинового и лейкоцитарных индексов, когда каждый из них отражает определенную часть процесса, а их совокупность дает целостную картину патологии и позволяет прогнозировать развитие заболевания. Такой подход, по мнению авторов, повышает диагностическую значимость определения иммунологических показателей, в первую очередь продукции цитокинов, и может быть использован в прогнозировании возникновения осложнений при хирургическом лечении заболевания.

833-846 122
Аннотация

Сахарный диабет 2-го типа относится к наиболее социально значимым неинфекционным заболеваниям современности и является важным фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. Изменения в диастолической функции миокарда левого желудочка отмечаются у пациентов с диабетом независимо от наличия других осложнений. Этиология сердечной недостаточности при сахарном диабете 2-го типа носит многофакторный характер и связана с клеточными, молекулярными и метаболическими причинами, однако патофизиологический механизм ее развития до конца не изучен. Целью настоящей работы стала оценка содержания провоспалительных субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперов 1-го типа [Th1] и Т-хелперов 17-го типа [Th17]) и FoxP3+Т-регуляторных лимфоцитов в зависимости от структурно-функционального состояния сердца по данным двухмерного эхокардиографического исследования у пациентов с сочетанием артериальной гипертензии и сахарного диабета 2-го типа. В ходе одномоментного сравнительного исследования было обследовано 25 пациентов с сочетанием артериальной гипертензии и сахарного диабета 2-го типа и 14 пациентов с артериальной гипертензией без нарушений обмена веществ. Всем пациентам проводили эхокардиографию из трансторакального доступа в М-режиме, B-режиме и доплеровских
режимах сканирования. Методом проточной цитометрии в периферической крови оценивали содержание Th1- и Th17- лимфоцитов по внутриклеточной продукции CD4+ лимфоцитами IL-17 и IFNγ, соответственно, и FoxP3+Т-регуляторных лимфоцитов по экспрессии CD25 и фактора транскрипции FoxP3. В сыворотке крови методом проточной цитометрии оценивали содержание IL-17, IL-10, IFNγ и TNFα. Установлено наличие корреляционных взаимосвязей между содержанием Th17-лимфоцитов, FoxP3+Т- регуляторных лимфоцитов и структурно-функциональными параметрами миокарда у пациентов с сахарным диабетом 2-го типа, в то время как у пациентов без нарушений углеводного обмена взаимосвязи между иммунологическими и эхокардиографическими параметрами отсутствовали. У пациентов с сахарным диабетом и диастолической дисфункцией содержание FoxP3+Т-регуляторных лимфоцитов, соотношение между Т-регуляторными и Th17-лимфоцитами и средняя интенсивность флуоресценции IL-17 в Th17 были ниже, чем у пациентов с диабетом, но без диастолической дисфункции. Ассоциация диастолической дисфункции с  сахарным диабетом 2-го типа сопровождалась повышением содержания IFNγ+Th1-лимфоцитов и концентрации IL-10, IFNγ и TNFα в сыворотке по сравнению с теми пациентами, у которых диастолическая дисфункция наблюдалась в отсутствие нарушений углеводного обмена. Для диабетических пациентов с диастолической дисфункцией было характерно наличие гиперинсулинемии, гипергликемии, более высокого индекса инсулинорезистентности, увеличение окружности талии и индекса висцерального ожирения по сравнению с пациентами с диастолической дисфункцией без диабета. Висцеральное ожирение и снижение чувствительности тканей к инсулину можно рассматривать в качестве патогенетически значимых факторов развития иммунорегуляторного дисбаланса и диастолической дисфункции у пациентов с сахарным диабетом 2-го типа.

847-854 241
Аннотация

Современными исследованиями доказана высокая пластичность и существование мно-
жества фенотипов нейтрофильных гранулоцитов (НГ) с разной рецепторной оснащенностью, являющейся для исследователей диагностическим маркером функциональной возможности клетки, реализуемой в ходе работы. Исследованы НГ периферической крови, полученные от здоровых лиц обоего пола в возрасте от 26 до 66 лет. Оценка экспрессии рецепторов на мембране НГ проводилась методом проточной цитометрии. Оценивали относительное количество нейтрофильных гранулоцитов, несущих мембранные CD62L, CD63, CD66d рецепторы, и интенсивность их экспрессии по значению средней интенсивности флуоресценции. Проведено изучение поверхностных мембранных рецепторов НГ – CD62L, CD63, CD66d – под влиянием бактериального пептида N-формил-метионил-лейцилфенилаланин (fMLP) (модель1), под воздействием глюкозаминилмурамилдипептида (ГМДП) (модель 2) и при одновременной инкубации НГ цельной крови с fMLP и ГМДП (модель 3) в созданных в системе in vitro экспериментальных моделях. Под влиянием бактериального пептида fMLP в созданной в системе in vitro экспериментальной модели получена трансформация фенотипа НГ условно здоровых субъектов, экспрессирующих CD62, CD63, CD66d молекулы: значительно уменьшилось как относительное количество нейтрофильных гранулоцитов, экспрессирующих CD62L, так и плотность экспрессии CD62L с параллельным повышением плотности экспрессии CD63. Воздействие ГМДП на нетрансформированный фенотип НГ условно здоровых субъектов не изменяло количества CD62L+НГ и CD63+НГ и плотность экспрессии CD62L и CD63 на поверхностной мембране НГ, однако при этом достоверно увеличилось количество CD66d+НГ, при неизменившейся плотности экспрессии молекул CD66d. ГМДП, введенный одномоментно с бактериальным пептидом fMLP, нивелировал некоторые трансформационные изменения фенотипа НГ, возникающие под влиянием fMLP: незначительно восстановилось количество CD62L+НГ и достоверно возросла плотность экспрессии CD62L; при этом ГМДП не корректировал негативное влияние fMLP на количество CD63+НГ и CD66d+НГ и плотность экспрессии молекул CD63 и CD66d. Одномоментное введение fMLP и ГМДП достоверно увеличило количество CD66d+НГ и плотность экспрессии молекул CD63 на мембране CD63+НГ по сравнению с интактными НГ условно здоровых субъектов. Полученные данные важны для разработки новых иммунотерапевтических стратегий, направленных на коррекцию негативно трансформированного фенотипа НГ при нетипично протекающих инфекционно-воспалительных заболеваниях бактериальной этиологии.

КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ

855-864 141
Аннотация

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) является глобальной проблемой здравоохранения. Актуальным является изучение иммунологических особенностей и их сопряженности с клиническим течением ХОБЛ. Цель исследования – установить клинико-иммунологические особенности ХОБЛ разной степени тяжести при Th1- и Тh17-зависимых типах иммунного ответа.
Обследовано 132 пациента с ХОБЛ и 32 практически здоровых лица. По клинико-функциональным вариантам пациенты с ХОБЛ разделены по группам: 36 человек (28%) с легкой степенью тяжести, 62 человека (48%) со средней степенью тяжести и 30 человек (23%) с тяжелой степенью тяжести. Проводилось клинико-функциональное и лабораторное исследование. Субпопуляции Th1- и Th17- лимфоцитов оценивали по уровню цитокинов в сыворотке крови (туморнекротизирующий фактор (TNFα), интерлейкинов (IL) IL-4, IL-10, IL-17А, IL-21, IFNγ), трансформирующего фактора роста β1 (TGF-β1)), определяли экспрессию рецептора IL-6R (CD126+) на зрелых Т-лимфоцитах (CD3+) и Т-хелперах (CD4+) периферической крови. Результаты исследования показали, что у больных ХОБЛ легкой степени тяжести определялись три разных фенотипа с превалированием Th1-зависимого иммунного ответа. Уровень экспрессии IL-6R представлен в большей степени на CD3+CD126+ клетках при Th1/Th17-фенотипе и CD4+CD126+ клетках при Th17-зависимом типе иммунного ответа. У больных ХОБЛ средней степени тяжести соотношение между Th1-, Th17- и Th1/Th17-типами иммунного ответа определялось в равных долях. Уровень экспрессии IL-6R на зрелых Т-лимфоцитах и Т-хелперах возрастает в наибольшей степени при Th17-зависимом иммунном ответе. У больных ХОБЛ тяжелой степени преобладал иммунный ответ по Th17- и Th1/Th17-типам. Уровень экспрессии IL-6R увеличивается при Th17- и Th1/Th17- зависимых типах иммунного ответа, при этом наиболее значимое возрастание отмечается для CD4+ клеток при Th17-фенотипе. Установлено, что с  фенотипами иммунного ответа у пациентов с ХОБЛ сопряжены особенности клинического течения заболевания. Полученные данные позволят определить фенотип воспаления, спрогнозировать течение хронического заболевания и подобрать адекватную терапию.

865-870 232
Аннотация

Цель исследования – изучение влияния циклоферона на чувствительность лейкоцитов периферической крови к интерферону-α2 in vitro у детей в острый период инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна–Барр (ВЭБ).
Обследовано 23 ребенка в острый период инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна–Барр, в возрасте 4-6 лет. Контрольную группу составили 15 здоровых детей аналогичного возраста. Чувствительность лейкоцитов периферической крови к интерферону-α2 in vitro определяли способом Л.М. Куртасовой и соавт. (2007).
Выявлено 4 типа реакций лейкоцитов периферической крови к интерферону-α2 in vitro на индукцию циклофероном у здоровых детей и больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна–Барр. Обнаружены различия в частоте встречаемости, выявленных типов реакций у больных ВЭБ-инфекцией по сравнению с группой здоровых детей. В группе детей с ВЭБ-инфекцией отсутствует выявляемая у здоровых детей закономерность изменений чувствительности лейкоцитов периферической крови к интерферону-α2 in vitro после индукции циклофероном в зависимости от дозы препарата.

871-876 84
Аннотация

Атипичный гемолитико-уремический синдром (аГУС) относится к редким тяжелым жизнеугрожающим формам тромботических микроангиопатий. Считается, что аГУС, прежде всего, обусловлен нарушением регуляции функциональной активности системы комплемента вследствие мутаций или реаранжировки генов различных компонентов комплемента или факторов-регуляторов комплемента, а также продукции аутоантител к этим факторам. В результате этого на поверхности эндотелиальных клеток происходит неконтролируемая активация комплемента по альтернативному пути, а затем развивается эндотелиальная дисфункция, микротромбоз и повреждение внутренних органов, особенно почек. Во многих исследованиях было показано, что биомаркеры эндотелиальной активации/дисфункции, в том числе молекула межклеточной адгезии 1 типа (ICAM-1) и молекула адгезии сосудистого эндотелия 1-го типа (VCAM-1), ассоциируются со степенью тяжести заболевания и могут являться прогностическими маркерами для осложнений и исходов при разных патологиях. При аГУС тоже отмечено повышение уровня этих биомаркеров. До последнего времени аГУС характеризовался неблагоприятными исходами: высокая смертность в острый период, а в дальнейшем у 2/3 больных развивалась терминальная стадия почечной недостаточности. Понимание роли дезрегуляции системы комплемента в его патогенезе кардинальнo изменило подходы к лечению. Экулизумаб (гуманизированные моноклональные антитела к С5-компоненту) ингибирует терминальные этапы активации комплемента, его появление привело к революционному перевороту в терапии и улучшило прогноз при аГУС. У больных, получавших экулизумаб, отмечалось выраженное снижение С3-компонента. Но вопрос о продолжительности таргетной терапии в фазу ремиссии до сих пор остается неясным. Цель исследования – оценить содержание С3-компонента комплемента, sICAM-1, sVCAM-1 в сыворотке крови у детей с атипичным ГУС в период ремиссии, получающих и не получающих поддерживающую терапию экулизумабом. Уровень С3, sICAM-1 и sVCAM -1 в сывортке крови определяли у 25 детей в ремиссии аГУС (14 из них получали экулизумаб, 15 не получали). Контрольную группу составили 17 детей с типичным ГУС в анамнезе. Во всех группах уровни sICAM-1 и sVCAM-1 соответствовали возрастным нормам. У детей, получавших экулизумаб, уровень С3 был ниже (99±20 мг/л против 112±15 мг/л и 123±40 мг/л соответственно), а sICAM-1 выше (483±103 нг/ мл против 343±50 нг/ мл и 401±91 нг/мл соответственно), чем в других группах (p < 0,05). Уровень sVCAM-1 между группами не различался. Таким образом, в группе детей, не получавших  экулизумаб, признаков субклинической активации комплемента или эндотелиальной дисфункции не выявлено. Нормальный уровень С3, sICAM-1, sVCAM-1 в сыворотке крови свидетельствует о возможности полного восстановления нормального состояния эндотелия при аГУС, которое сохраняется и после прекращения таргетной терапии. Наши результаты указывают, что мониторинг уровня С3-компонетна комплемента и молекул адгезии sICAM-1и sVCAM-1 целесообразен для  определения дальнейшей тактики ведения таких больных и прогнозирования обострений.

877-888 90
Аннотация

Цель – изучение влияния предоперационной подготовки углеводами на выраженность
метаболических, иммунных и воспалительных реакций при проведении обширных реконструктивных вмешательств на пищеводе. 

В 2014-2017 гг. в отделении хирургическом I проведено проспективное рандомизированное исследование роли преднагрузки углеводами в модуляции выраженности операционного стресс-ответа у пациентов после обширных торакоабдоминальных операций (торакоскопическая и открытая эзофагэктомия, загрудинная пластика пищевода) в сочетании с протоколом программы ускоренного выздоровления. 30 пациентов путем рандомизации были распределены на 2 группы: пациенты группы А (n = 16) получали преднагрузку углеводами в виде 12,5% раствора мальтодекстрина per os или энтерально. У пациентов с дисфагией преднагрузка проводилась внутривенным введением 12,5% раство-
ра глюкозы в эквивалентных объемах. Пациентам группы В (n = 14) преднагрузка углеводами не проводилась. Группы не отличались по полу, возрасту, типам операций и заболеваний. Уровень глюкозы, инсулина с расчетом индекса инсулинорезистентности (HOMA-IR) были измерены до и в 1-е сутки после операции, уровень интерлейкинов (IL-6, IL-10, IL-8) и индекса IL-8/IL-10 – до операции, в 1-е и 5-е сутки после операции. Показатели иммунного статуса были оценены до операции и в 5-е сутки после операции.
Стрессовая гипергликемия (> 7,8 ммоль/л) значимо чаще встречалась у пациентов группы В (50%), чем в группе А (6%), p = 0,012. Инсулинорезистентность, измеренная HOMA-IR, в группе В отмечалась у 71% пациентов и у только 25% в группе A, p = 0,027. При индивидуальном анализе иммунного статуса зарегистрирована более выраженная тенденция к восстановлению показателей к 5-м суткам после операции среди пациентов группе А. Послеоперационный уровень IL-6 и IL-10 в 1-е и 5-е послеоперационные сутки также был ниже у пациентов в группе А. Частота послеоперационных осложнений и длительность госпитализации были одинаковыми в обеих группах. При этом частота развития нагноения послеоперационной раны в группе А была ниже, чем в группе В (6 и 43% соответственно), p = 0,03.

Выводы: при комплексном изучении хирургического стресс-ответа, как совокупности метаболических, иммунных и воспалительных реакций при проведении обширных реконструктивных вмешательств на пищеводе, применение предоперационной подготовки углеводами способствует снижению частоты развития послеоперационной ИР и стрессовой гипергликемии, сопровождается меньшим выбросом провоспалительных цитокинов и оказывает положительное модулирующее влияние на функцию иммунной системы.

889-894 104
Аннотация

Цель исследования – изучение влияния полиморфизма гена IL4-589C>T на экспрессию IL-4 у пациентов с развитием хронического травматического остеомиелита при переломах длинных костей конечностей в Забайкальском крае.
В исследование включено 132 пациента с переломами длинных костей конечностей в возрасте от 20 до 40 лет. Первую группу составили 83 пациента с неосложненным течением переломов длинных костей конечностей. Вторую группу (n = 49) – больные с хроническим травматическим остеомиелитом (в данной группе отмечалось заживление ран первичным натяжением, однако в позднем послеоперационном периоде зарегистрировано развитие хронического травматического остеомиелита). Контрольную группу составили 100 практически здоровых мужчин и женщин аналогичной возрастной группы. Сформированные группы являлись однородными по возрасту, полу, характеру и локализации переломов. Критерием исключения из групп являлось наличие острых или хронических сопутствующих заболеваний. В работе использованы следующие методы исследования: клинические; лабораторные (микробиологический; иммунологический – определение интерлейкина-4; генетический [с помощью полимеразной цепной реакции; для исследования выбрана точечная мутация гена IL4 в позиции 589 (С>Т); материалом для молекулярно-генетического анализа служили образцы ДНК, выделенные из периферической крови больных]; инструментальные (рентгенография). Генетические исследования осуществляли при поступлении пациентов в стационар, тогда как содержание IL-4, клинические и инструментальные показатели выявляли в 1, 2, 10 и 90 сутки после перелома. Частота С-аллели и гомозиготного генотипа гена IL4-589C>T у пациентов группы осложненного течения снижалась в 1,7 и 3,6 раза по сравнению с группой клинического сравнения, соответственно, тогда как Т-аллель, напротив, увеличивалась в 3,7 раза, а гетерозиготный и мутантный генотипы – в 2,5 и 15 раз. В группе контроля при носительстве генотипа -589С/C гена IL4 отмечается увеличение концентрации IL-4 в 1,4 и 2,5 раза, в сравнении с носителями генотипов -589С/T и -589Т/T, соответственно, а генотипа -589С/T в 1,7 раза по сопоставлению с генотипом -589Т/T. Аналогичная тенденция экспрессии IL-4 в зависимости от носительства генотипа гена IL4 зафиксирована и в группе с неосложненным и осложненным течением переломов. У больных с развитием травматического остеомиелита частота аллели -589Т гена IL4 повышена в 3,7 раза по сравнению с группой неосложненного течения, одновременно с этим регистрируется более высокое носительство генотипа -589С/Т и генотипа -589Т/Т гена IL4. Наличие генотипа -589Т/T гена IL4 способствует более низкой экспрессии IL-4. 

895-898 102
Аннотация

Длительное воздействие производственной вибрации на рабочих приводит к развитию вибрационной болезни (ВБ), которая занимает лидирующие позиции в структуре профессиональной патологии. ВБ от воздействия локальной вибрации представляет собой хроническое профессиональное заболевание c преимущественным поражением нервной, сосудистой системы и опорно-двигательного аппарата верхних и нижних конечностей. Одним из реальных путей снижения заболеваемости является раннее выявление негативного воздействия вибрации на организм работников. В связи с этим цитокины и белки теплового шока (БТШ) могут быть ранними и чувствительными показателями, отражающими степень выраженности нарушений здоровья от воздействия вибрации. Целью исследования явилось изучение изменений в содержании про- и ротивовоспалительных цитокинов, внеклеточного БТШ70 и их взаимосвязь у пациентов с ВБ. В иммунологическое исследование включено 43 пациента мужского пола с диагнозом ВБ. Критериями включения в данную группу были: верифицированный диагноз, письменное информированное согласие на участие в исследовании, вредное воздействие локальной вибрации на производстве. По данным гигиенического контроля, условия труда рабочих виброопасных профессий относятся к 4 (опасному) классу за счет интенсивной локальной вибрации. Содержание цитокинов IL-1β, IL-8, IL-10, TNFα и БТШ70 в сыворотке крови пациентов определяли иммуноферментным анализом. Забор крови для исследования у пациентов брали однократно при поступлении в стационар до проведения лечения. Статистическая обработка данных проводилась с помощью пакетов прикладных программ Statistica for Windows 6.0 и Microsoft Excel. Установлено, что развитие заболевания ВБ сопровождается дисбалансом цитокинового профиля, характеризующимся снижением уровней IL-1β, IL-10 и повышением IL-8. Угнетение продукции IL-1β и IL-10 является следствием сформировавшегося хронического процесса в организме обследованных пациентов. А выявленное снижение внеклеточной концентрации БТШ70 по сравнению с практически здоровыми людьми может быть обусловлено накоплением его внутри клетки или на ее поверхности. Корреляционный анализ позволил выявить зависимость между снижением содержания БТШ70 и возрастанием уровня IL-1β, и снижением уровня IL-10. Синтез БТШ является внутриклеточным защитным механизмом, предотвращающим повреждение клеток, путем активации синтеза и секреции провоспалительных цитокинов. Полученные взаимоотношения между цитокинами и БТШ70 свидетельствуют о вовлеченности БТШ70 в иммуновоспалительные процессы при ВБ. Выявленные изменения способствуют хронизации воспалительного процесса и обосновывают прогредиентное течение ВБ.

899-904 134
Аннотация

Состояние иммунной системы может служить приоритетным индикаторным показателем адаптационных возможностей организма в условиях повышенной внешнесредовой химической нагрузки, в том числе и связанной с экспозицией металлами, которые в зависимости от условий воздействия способны оказывать как активирующее, так и угнетающее воздействие на параметры иммунной регуляции. Цель работы – анализ иммунорегуляторных маркеров у детского населения при употреблении питьевой воды с повышенным содержанием стронция (на примере Пермского края). Проведено иммунологическое обследование детей в возрасте от 7 до 12 лет, которые постоянно проживают на территории с повышенным содержанием стронция в воде хозяйственно-бытового водоснабжения. Группу сравнения составили дети из «условно чистого» района. Исследовали особенности изменения клеточного звена иммунитета (фагоцитоз), гуморальные факторы иммунной защиты (иммуноглобулины), формирование специфической сенсибилизации к стронцию, а также процессы запуска и регуляции апоптоза. Показано, что при повышенном в 3,68 раза уровне стронция в водопроводной воде на территории наблюдения среднее содержание стронция в крови детей группы наблюдения было в 1,55 раза выше, чем у детей в группе сравнения. При этом выявлено возрастание фагоцитарной активности по критериям фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса, в среднем в 1,2 раза относительно группы сравнения. У 80,0% обследованных отмечено снижение содержания сывороточных иммуноглобулинов по критерию IgG по сравнению с показателями физиологической нормы, а также достоверное снижение продукции IgG и повышение IgМ относительно уровней в группе сравнения. Показано возрастание общей сенсибилизации у 55,0% детей группы наблюдения по содержанию IgЕ общего по сравнению с возрастной нормой и превышение референтного уровня специфической сенсибилизации к стронцию по критерию IgG в среднем в 2,49 раза. Выявлено нарушение процесса запуска апоптоза, связанное с уменьшением количества CD95+ лимфоцитов и TNFRI+ клеток (кратность снижения в 2,78 раза относительно нормы), смещение баланса апоптогенных белков при снижении экспрессии Bcl-2 в среднем в 2,57 раза, а также уменьшение экспрессии транскрипционного фактора р53 в 2,83 раза относительно референтного интервала. Таким образом, показана способность стронция влиять на важнейшие показатели иммунной регуляции у детского населения при повышенном содержании металла в источниках питьевого водоснабжения. Указанные изменения могут служить в качестве индикаторных параметров состояния здоровья населения в условиях внешнесредовой экспозиции стронцием.

905-912 115
Аннотация

В рамках данного исследования проведено изучение ассоциации различных полиморфных вариантов генов металлопротеиназ с клиническими проявлениями бронхиальной астмы у детей.
Были обследованы 103 пациента, среди которых 42 ребенка с установленным диагнозом «бронхиальная астма» и 61 человек контрольной группы. Всем пациентам проведено генетическое исследование методом аллель-специфичной полимеразной цепной реакции. Анализировали полиморфные локусы генов ММР20 320A>C, MMР20 Val275Ala и -8202A>G гена MMР9. Установлено, что среди больных 30 (71,43%) человек имели бронхиальную астму легкой степени тяжести, 9 (21,43%) детей со среднетяжелым течением и 3 (7,14%) человека с тяжелым течение заболевания. Установлено, что среди детей, страдающих бронхиальной астмой, наиболее часто регистрируется гомозиготный вариант С/С полиморфизма гена ММР20 320A>C, гетерозиготный вариант полиморфизма Val275Ala гена MMР20 и гетерозиготный вариант полиморфного локуса -8202A>G гена MMР9. При этом в целом отмечено, что частоты исследуемых аллелей и генотипов среди больных детей не имеют статистически значимых отличий от контрольной группы (р > 0,05). Однако у пациентов с генотипом GG по полиморфизму -8202A>G гена MMР9 и являющихся гомозиготами по С-аллелю полиморфизма 320A>C гена ММР20 наблюдается более тяжелое течение заболевания, сопряженное с поливалентной сенсибилизацией и повышенным уровнем общего IgE в сыворотке крови.
Частоты аллелей и генотипов среди больных бронхиальной астмой не имеют статистически значимых отличий от группы здоровых пациентов. При этом к более тяжелому клиническому течению заболевания предрасположены пациенты, являющиеся гомозиготами по G-аллелю полиморфизма -8202A>G гена MMР9 и гомозиготами по С-аллелю гена ММР20 (320A>C).

913-920 128
Аннотация

Сочетание бронхиальной астмы (БА) и ожирения является трудно контролируемым фенотипом. В понимании механизмов влияния ожирения на БА актуально изучение характера воспалительного процесса с учетом тяжести заболевания. Цель исследования – установление особенностей цитокинового профиля у больных бронхиальной астмой (БА) легкой степени тяжести в сочетании с ожирением. В исследовании на условиях добровольного информированного согласия участвовали 53 пациента с БА легкой степени тяжести, частично контролируемого течения. 1-ю группу наблюдения составили 27 пациентов с БА, имеющих нормальную массу тела, 2-ю группу – 26 пациентов с БА в сочетании с ожирением. Группу контроля – 25 практически здоровых добровольцев. Всем пациентам проводилось клинико-лабораторное обследование в соответствии со стандартом обследования для БА и ожирения. В сыворотке крови методом проточной цитометрии определяли TNFα, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10. Рассчитывали индексы соотношения провоспалительных и противовоспалительных цитокинов – TNFα/IL-4, TNFα/IL-10, IL-6/IL-4, IL-6/IL-10. У больных БА с ожирением (2-я группа) выявлено повышение уровня IL-2 по сравнению с контролем и 1-ой группой, соответственно, на 38% и 44% (p < 0,05). У пациентов в обеих группах статистически значимо была увеличена концентрация провоспалительных цитокинов TNFα и IL-6. В 1-й группе по сравнению с контролем уровень TNFα был увеличен в 2,5 раза (p < 0,05), IL-6 – на 30 % (p < 0,05). Во 2-ой группе содержание TNFα и IL-6 превышало контрольные значения в 3 раза (p < 0,05). Уровень противовоспалительного цитокина IL-4 оказался повышенным у пациентов с БА независимо от массы тела. При этом у больных с ожирением концентрация этого цитокина на 29% превышала показатели пациентов, имеющих нормальную массу тела. Уровень цитокина IL-10 у пациентов 2-й группы был снижен относительно пациентов 1-ой группы более чем в 2 раза. У пациентов 1-ой группы выявлено снижение индекса IL-6/IL-10 в сравнении с контрольными показателями, что свидетельствует о дисбалансе за счет активации противовоспалительного цитокина IL-10. При БА с ожирением (2-я группа) индексы TNFα/
IL-10 и IL-6/IL-10 превышали показатели как группы контроля (в 2,3 и 5,5 раза соответственно), так и 1-ой группы (в 2,6 и 2,5 раза соответственно). Динамика этих индексов подтверждает системный характер воспаления и преобладание неатопического типа воспаления у больных БА с ожирением. Таким образом, особенностями цитокинового профиля при БА с ожирением явилось значительное увеличение провоспалительных цитокинов IL-2, IL-6, TNFα и относительное снижение противоспалительного цитокина IL-10. Формирование БА на фоне ожирения, даже при легкой степени тяжести БА, сопровождается развитием цитокинового дисбаланса, характерного для смешанного типа воспаления с преобладанием нейтрофильного.

921-926 120
Аннотация

В основе развития мультифакторных заболеваний (неспецифический язвенный колит и синдром раздраженного кишечника) лежат сложные межгенные взаимодействия, которые необходимо учитывать при прогнозировании риска развития неблагоприятного течения патологического процесса. Индивидуальные генетические полиморфизмы являются слабым фактором риска развития болезни и не могут быть использованы в качестве прогностической модели развития мультифакторных патологий, особенно в случаях редких аллелей. Но хорошо известно, что опасным является сочетание неблагоприятных аллелей нескольких генов с аддитивным эффектом, поэтому идентификации таких полиморфизмов придается большое значение. Ранее нами был проведен комплекс исследований по оценке ассоциации аллелей и генотипов генов цитокинов IL1β, TNFα, IL1rа, IL10, IL6 с предрасположенностью/устойчивостью к неспецифическому язвенному колиту и синдрому раздраженного кишечника у русских Челябинской области, в ходе которого установлены особенности распределения аллелей и генотипов данных генов при НЯК и СРК. В исследовании использовались следующие методы: выделение образцов ДНК из цельной крови, проведение генотипирования исследуемых полиморфизмов генов с помощью ПЦР, ПДРФ. В продолжение был проведен сравнительный анализ межгенных взаимодействий генов цитокинов IL1β, TNFα, IL1rа, IL10, IL6 с использованием метода сокращения многофакторной размерности у больных синдромом раздраженного кишечника и неспецифическим язвенным колитом. Анализ основан на использовании комбинации полиморфных локусов генов IL1β, TNFα, IL1rа, IL10, IL6, выбранных для анализа межгенных взаимодействий, в отношении риска развития предрасположенности к СРК и НЯК. В результате исследования для СРК была установлена четырехлокусная модель IL1β(+3953)*Т/TNFα(-308)*A/IL10(-1082)*G/IL6(-174)*G, которая характеризовалась 90% воспроизводимостью и точностью предсказания 74,53%. Данная модель генных взаимодействий между генами цитокинов IL1β, TNFα, IL1rа, IL10, IL6 при СРК имела наибольший потенциал предикции (p < 0,001), в то время как модель для НЯК не имела статистической значимости. Установлены следующие виды взаимодействий: синергичное взаимодействие между генами IL1β(+3953)*Т и TNFα(-308)*A, в то время как IL6(-174)*G и IL10(-1082)*G, TNFα(-308)*A находятся в антагонистических взаимоотношениях. Проведенное исследование позволило установить, что из полиморфных вариантов генов полиморфизм -174 G/C IL-6 может играть центральную роль и формировать межгенные взаимодействия с SNPs IL1β, TNFα, IL10 в реализации предрасположенности к синдрому раздраженного кишечника у русских Челябинской области.

927-934 115
Аннотация

Ранее были обнаружены ассоциации антител класса А, специфичных к бензо[а]пирену (IgA-Bp), эстрадиолу (IgA-Es) и прогестерону (IgA-Pg) c раком молочной железы (РМЖ) у женщин
и с раком легкого (РЛ) у мужчин. Предположили, что IgA-Bp и IgA-Es стимулируют процессы инициации и промоции, а IgA-Pg ингибируют канцерогенез у человека в естественных условиях.
Цель исследования – выявить предполагаемые ассоциации иммунологического дисбаланса
с РМЖ и РЛ у женщин в постменопаузе. Исследовали сывороточные антитела класса А, специфичные к бензо[а]пирену, эстрадиолу и прогестерону (IgA-Bp, IgA-Es и IgA-Pg) у 335 здоровых женщин, у 824 больных раком молочной железы (РМЖ) и 127 больных раком легкого (РЛ) с помощью неконкурентного иммуноферментного анализа. Превышение уровней IgA-Bp и IgA-Es над уровнями IgA-Pg ассоциировано с высоким риском РМЖ (OR = 2,8 и 2,4 соответственно, p < 0,0001) и высоким риском РЛ (OR = 2,9 и 2,8 соответственно, p < 0,0001). И наоборот, значения OR снижались до 0,3-0,4 для РМЖ и РЛ, если уровни IgA-Pg были больше, чем уровни IgA-Bp и IgA-Es (p < 0,0001). Это подтверждает предположение о том, что IgA-Bp и IgA-Es способны стимулировать, а IgA-Pg тормозить возникновение РМЖ и РЛ у женщин в постменопаузе. При этом баланс между IgA-Bp и IgA-Es с одной стороны и IgA-Pg с другой стороны имеет гораздо большее значение, чем содержание указанных антител каждого по отдельности. 

Выявлен феномен «иммунологической интерференции» – взаимного усиления эффектов IgA-Bp и IgA-Es, стимулирующих процессы инициации и промоции канцерогенеза, при слабом антипромоторном действии IgA-Pg и ослабление взаимного проканцерогенного эффекта IgA-Bp и IgA-Es при выраженном действии IgA-Pg.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

935-942 165
Аннотация

Серьезной проблемой терапии препаратами рекомбинантного человеческого эритропоэтина является выработка антител к эритропоэтинстимулирующим препаратам, приводящая к изменению фармакокинетического профиля и снижению эффективности терапии. При длительном лечении препаратами эритропоэтина в редких случаях может происходить выработка нейтрализующих антител, приводящих к полной аплазии красного костного мозга. Определение антител к терапевтическим препаратам эритропоэтина является важным этапом оценки их иммуногенности на этапах доклинических и клинических исследований, а также в ходе терапии препаратами эритропоэтина. Проведено сравнение методов выявления специфических IgG-антител к эритропоэтину человека твердофазным иммуноферментным методом с применением колориметрической и хемилюминесцентной детекции, в системах 3,3’,5,5’-тетраметилбензидин – пероксид водорода и люминол – пероксид водорода соответственно. Выявление антител проводили в сыворотках крови экспериментальных животных – кроликов и морских свинок – полученных после введения животным разных доз препаратов пегилированного человеческого рекомбинантного эритропоэтинабета подкожно или внутривенно. В качестве контроля использовали аффинно очищенные поликлональные антитела кролика к эритропоэтину человека. Исследовано влияние концентрации перекиси водорода и люминола на чувствительность хемилюминесцентного метода. Показано, что при использовании для усиления хемилюминесценции 4-йодофенола наблюдается повышение чувствительности в 1,5-2 раза. Сравнение интенсивности хемилюминесценции во времени показало большую стабильность во времени для субстратной смеси, приготовленной на боратном буфере. Снижение хемилюминесцентного сигнала во времени было пропорционально снижению фонового сигнала, что делало соотношение сигнал/фон стабильным в течение 3-30 мин. В результате оптимизации состава субстратной смеси и условий проведения регистрации интенсивности хемилюминесценции минимальное количество аффинно очищенных поликлональных антител кролика к эритропоэтину человека, выявленных в методе с хемилюминесцентной детекцией, составило 0,08 нг/мл, а с колориметрической детекцией – 0,6 нг/мл. Диапазон измерений при этом был расширен более чем в 20 раз. При выявлении специфических IgG антител к эритропоэтину человека в сыворотках крови экспериментальных животных методом с хемилюминесцентной детекцией показано увеличение чувствительности, определяемое путем сравнения индексов позитивности анализируемых образцов, в 1,9-2,6 раза в сыворотках кроликов и в 1,8-8,9 раза в сыворотках морских свинок. Выявлена корреляция при количественном определении антител в сыворотках кроликов двумя методами (R = 0,981). Таким образом, хемилюминесцентный метод детекции позволил повысить чувствительность выявления IgG-антител к эритропоэтину человека твердофазным иммуноферментным методом.



Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 1563-0625 (Print)
ISSN 2313-741X (Online)