Процессы адаптации иммунной системы человека к негативным внутренним и внешним воздействиям, в том числе к стрессорным, инфекционным, факторам внешней среды, контролируются и осуществляются нейроиммуноэндокринным комплексом (НИЭК). При нормальном функционировании НИЭК существует взаимодействие нервной, иммунной и эндокринной систем, что позволяет иммунной системе функционировать нормально, оставаться устойчивой к различным негативным и индуцирующим влияниям, проявлять свои адаптационные возможности, сохраняя при этом способность отражать атаки различных патогенов, нивелировать аллергические и аутоиммунные реакции. При нарушениях нормального функционирования НИЭК страдают адаптационные процессы в иммунной системе, взаимодействие иммунной, нервной и эндокринной систем, что приводит     к возникновению стойких нарушений функционирования иммунной системы и может манифестировать формированием болезней иммунной системы, в том числе приобретенного иммунодефицита. Нами обоснована необходимость создания нового перспективного научного направления – адаптивная медицинская иммунология, в основе которого лежит изучение особенностей нарушений функционирования иммунной системы человека при остром или хроническом воздействии негативных внутренних и внешних, стрессорных, инфекционных и других, в том числе урбанистических факторов, в результате чего происходит «срыв адаптационных возможностей иммунной системы» и, как результат, возникают болезни иммунной системы, в том числе приобретенные иммунодефициты и связанные с ними различные иммунозависимые заболевания. Целью адаптивной медицинской иммунологии является разработка алгоритма комплексной диагностики и создание интеграционных междисциплинарных, в том числе иммунотерапевтических подходов, адаптивно воздействующих на приобретенные нарушения функционирования иммунной системы – интеграционной медикаментозной коррекции иммунной системы, проводимой при различных иммунозависимых заболеваниях. Основной задачей является таргетное восстановление адекватного ответа иммунной системы на имеющийся нетипично протекающий острый или хронический инфекционно-воспалительный процесс, а также нивелирование нарушений нервной и эндокринной систем, входящих в НИЭК, с дальнейшим восстановлением их сбалансированного взаимодействия. Подобный интеграционный подход способствует восстановлению нормального функционирования иммунной системы, формированию позитивной клинической эффективности и выходу пациентов в длительную клиническую ремиссию. Другой задачей адаптивной медицинской иммунологии является создание перспективных инновационных диагностических технологий и, на этой основе, разработка новых интеграционных программ для таргетного восстановления повреждений иммунной системы, а также нервной и эндокринной систем у иммунокомпрометированных пациентов, страдающих различными иммунозависимыми заболеваниями.

Синдром активации тучных клеток (САТК) является тяжелым рецидивирующим заболеванием, требующим стационарного лечения, в клинической картине которого присутствуют признаки анафилаксии. В статье представлены диагностические критерии, позволяющие дифференцировать САТК от других тяжелых, имеющих сходную симптоматику состояний, а также обсуждены локальные формы активации тучных клеток.

Консенсусной группой установлены четкие критерии для диагностики САТК. Эти согласованные критерии включают эпизодическое (рецидивирующее) появление типичных системных симптомов, которые вызываются медиаторами тучных клеток и затрагивают как минимум 2 системы органов; увеличение уровня триптазы в сыворотке крови, по крайней мере на 20% по сравнению с индивидуальным исходным уровнем триптазы плюс 2 нг/мл триптазы в течение 3-4 часов после реакции; положительный ответ на препараты, которые либо нацелены на медиаторы тучных клеток, либо на их эффекты.

Классификация САТК носит этиологический характер и подразделяется на первичный (клональный) САТК, вторичный САТК и идиопатический САТК. Первичный САТК определяется клональной экспансией тучных клеток и является системным мастоцитозом. При вторичном САТК нормальные тучные клетки активируются известными триггерами, например IgE. Если ни клональная экспансия, ни триггер активации тучных клеток не могут быть идентифицированы, состояние определяется как идиопатический САТК.

Особый интерес к САТК привлекла новая коронавирусная инфекция COVID-19, было высказано предположение, что тяжелый вариант течения COVID-19 обусловлен скрытым САТК, однако критерии САТК у этих пациентов не воспроизводились. При наличии локальных симптомов, например крапивницы, либо при поражении 1 органа, например изолированные желудочно-кишечные симптомы, и подозрении на активацию тучных клеток в основе патогенеза был введен термин «расстройство активации тучных клеток». Также в статье обсуждены несколько различных медиаторов, которые предлагаются для использования в диагностике САТК.

Однако гипердиагностика САТК влечет за собой риск пропустить основную патологию, не связанную с САТК, и требует дифференциальной диагностики с рядом заболеваний. При отсутствии тяжелых приступов (с гипотонией и шоком) вероятность САТК в целом очень низкая. Безусловно, пациенты с мастоцитозом и/или подтвержденной IgE-зависимой аллергией имеют более высокий риск развития САТК, но ключевым диагностическим маркером является связанное с событием повышение триптазы ТК по сравнению с исходным уровнем, измеренное в бессимптомном интервале. Когда повышение уровня триптазы достигает определенного порога (20% от исходного уровня плюс 2 нг/мл), весьма вероятен диагноз «САТК».

Обзор содержит в себе данные различных литературных источников, дающих представление о роли Toll-подобных рецепторов (TLR) – своего рода сенсоров, играющих ключевую роль в системном реагировании как на бактериальную, так и на вирусную инфекцию, в патогенезе новой коронавирусной инфекции (COVID-19, SARS-CoV-2). С появлением COVID-19, принявшей масштабы пандемии, интерес изучения «факторов-предикторов» тяжести инфекционного процесса приобрел новый виток. Эпидемии прошлых лет, вызванные вирусом тяжелого острого респираторного синдрома (TOPC, SARS-CoV), а также коронавирусом ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV), несколько помогли понять степень иммунного реагирования при данных инфекциях,    а также какую тактику по отношению к возбудителям данного семейства необходимо предпринять и с какими отдаленными прогнозами вспышки, вызванной SARS-CoV-2, возможно впоследствии столкнуться. Каждый из 10 свойственных человеку TLRs распознает определенную структуру в составе бактериального/вирусного или грибкового патогена. Воздействие на TLR активирует воспалительный сигнальный каскад через посредников – внутриклеточные TIR-домены с участием адаптерных белков. Каскад реакций приводит к продукции важнейших в формировании противовирусного ответа субстанций (интерфероны, провоспалительные цитокины, другие белковые структуры, прямо или опосредованно проявляющие противовирусные свойства). Изменения, влекущие сниженную/ повышенную экспрессию генов, кодирующих Toll-рецепторы, полиморфизмы данных генов и другие модификации наследственного аппарата, так или иначе контролирующего работу иммунной системы, будут обуславливать сниженный либо, наоборот, гипервоспалительный ответ на внедрившуюся в организм инфекцию. Вероятно, что с помощью генетической гетерогенности можно также частично объяснить широкий спектр среди клинических проявлений COVID-19 инфекции в популяции. Таким образом, существует повышенный интерес к изучению этих рецепторов, степени их экспрессии на протяжении всего инфекционного процесса, полиморфизма генов, кодирующих TLR, а следовательно, и возможности использования клинических и лабораторных тестов для качественной и количественной их оценки, а также тактик выбора и перспектив дальнейшего лечения в каждом конкретном случае.

Ключевым патогенетическим звеном COVID-19 являются нарушения иммунного гомеостаза, которые часто проявляются гипериммунным ответом на патоген, приводящим к тяжелому неконтролируемому воспалению в легких, осложнениям и летальному исходу. Соответственно, определенный терапевтический потенциал заложен в средствах разных фармакологических групп с различными механизмами действия, но имеющими некоторую общность по направленности подавления иммунного ответа, что не редко отражено в классификациях объединяющим понятием иммуносупрессоры. Наиболее перспективными из них являются иммунобиологические препараты, к которым относятся моноклональные антитела, а также средства пуринергической регуляции. Имеются единичные попытки использования путем применения определенного подхода «классических» иммуносупрессоров, цитостатиков и ингибиторов кальциневрина, нашедших место в трансплантологии и онкологии, но от применения, которых с целью лечения неконтролируемого воспаления дыхательных путей отказались еще в конце прошлого столетия. Аэрозольный путь введения лекарственных средств оптимизирует лечение как по эффективности их воздействия, так и по уменьшению побочных эффектов и находит соответствующее применение при использовании ИС с целью лечения неконтролируемого воспаления дыхательных путей. Однако анализ возможностей подобного спектра иммуносупрессоров и их аэрозольной доставки в легкие при лечении COVID-19 не осуществлялся, что и явилось целью настоящей работы.

Анализ в методологическом плане проводился с использованием различных баз данных биомедицинской научной информации, включая такие, как: Index Medicus, PubMed, Embase, Cohrane реестр клинических исследований Clinical Trials gov и патентные базы.

В результате дана оценка эффективности воздействия различных подгрупп ИС при COVID-19, в том числе при ингаляционном их введении в дыхательные пути. Проанализирована роль центрального регулятора иммунного ответа, регуляторных T-клеток в патогенезе COVID-19, охарактеризован их терапевтический потенциал в зависимости от фазы и тяжести заболевания, дозы препарата. Отражены методы и подходы использования иммуносупрессоров, преимущества и недостатки. Определены целесообразность и перспективы их применения.

В заключении отмечается, что эффективность цитостатиков и ингибиторов кальциневрина при лечении воспаления дыхательных путей при COVID-19 остается неподтвержденной и бесперспективной. Большие надежды в этом плане подают биологические препараты, включая моноклональные антитела и средства пуринергической регуляции.

Известно, что ишемия и гипоксия в опухолевом микроокружении способствует опухолевой прогрессии. Дефицит кислорода сдвигает метаболизм раковых клеток от окислительного фосфорилирования к аэробному (эффект Варбурга) и анаэробному гликолизу. Этот измененный углеводный обмен характеризуется низкой энергетической эффективностью и чрезмерным использованием глюкозы. В условиях гипоксии в злокачественных клетках ослабевает антиоксидантная защита и, соответственно, повышается их чувствительность к прямому токсическому действию активных форм кислорода (АФК). На практике насыщение опухолей кислородом обычно достигается применением водорастворимого озона или гипербарической оксигенацией. АФК и свободные радикалы вызывают повышенную текучесть мембран (липопероксидация фосфолипидов), повреждают энергетическую функцию митохондрий и вызывают окислительное повреждение ДНК и РНК. Показано, что АФК, генерируемые в результате оксидативного взрыва, способны усиливать противоопухолевый эффект химиолучевой терапии. Показано, что АФК, продуцируемые иммунными клетками, способны прямо ингибировать опухолевый рост. Кроме того, АФК обеспечивают дополнительную иммуностимуляцию посредством индукции мутагенеза в опухоли и появления иммуногенных неоантигенов. АФК способны также усиливать противоопухолевую иммунную защиту за счет стимуляции продукции иммунными клетками интерферона-γ, фактора некроза опухоли-α, IL-2 и IL-6. С другой стороны, АФК могут оказывать негативное влияние на противоопухолевый иммунитет. В частности, они могут: 1) способствовать накоплению регуляторных Т-клеток (Treg) и миелоидных супрессорных клеток в опухолевом микроокружении, 2) поддерживать функциональную активность альтернативно активированных (M2) макрофагов и (N2) нейтрофилов и 3) нарушать презентацию иммуногенных антигенов дендритными клетками. Так, было показано, что относительно низкие концентрации АФК способны поддерживать активацию, пролиферацию и дифференцировку Т-лимфоцитов, тогда как высокие концентрации АФК обладают обратным эффектом. Есть основания полагать, что максимально возможный клинический эффект оксигенотерапии может быть достигнут в случае ее одновременного или последовательного комбинирования с иммунотерапевтическими вмешательствами.

Таким образом, на основании представленных данных делается заключение, что:

–         активные формы кислорода, индуцированные окислительным стрессом, могут повреждать опухолевые клетки, не оказывая при этом существенного влияния на нормальные клетки;

–         кислородная терапия способна усиливать противоопухолевые эффекты химиолучевой терапии;

–         кислородную терапию целесообразно сочетать с иммунотерапией для достижения максимального противоопухолевого эффекта с минимальными побочными эффектами.

Гликоделины, белки репродуктивного тракта, отличающиеся гликозилированием и обладающие иммуномодулирующими функциями, представляют интерес в связи с их ролью в формировании иммунной толерантности. Интерлейкин-17-продуцирующие Т-хелперы (Th17), несущие поверхностный маркер CCR6, являются гетерогенной клеточной популяцией с повышенной пластичностью и функциональной дихотомией. С одной стороны, эти клетки поддерживают антимикробный и противогрибковый иммунитет, состав микробиоты, а с другой – участвуют в патогенезе аутоиммунных заболеваний, отторжении трансплантата и осложнениях беременности. Несмотря на достаточно высокий научный интерес к гликоделину как к иммуномодулятору, его прямые эффекты на провоспалительные Th17 не изучались. Поэтому целью нашей работы было исследовать влияние рекомбинантного гликоделина человека на Th17-поляризацию наивных Т-хелперов человека, оценивая экспрессию ими поверхностных молекул CCR6, CCR4 и CXCR3. Наивные Т-хелперы поляризовали в Th17 in vitro при помощи активатора TCR и цитокинов в течение 7 дней с добавлением гликоделина в концентрациях, характерных для первого-второго триместров беременности. После этого определяли процент популяции CD4⁺CCR6⁺ клеток (Th17), и ее CCR4⁺CXCR3^-(Th17/Th22) и CCR4^-CXC3⁺ (Th17.1) субпопуляций. Кроме того, при помощи мультиплексного анализа определяли концентрацию цитокинов и хемокинов в супернатантах культур Th17-поляризованных T-хелперов. Рекомбинантный гликоделин в концентрациях, соответствующих таковым при беременности (0,2, 2 и 10 мкг/мл), не изменял процент CD4⁺CCR6⁺ клеток в культуре и продукцию ими IL-17 и других исследуемых цитокинов. Однако в концентрации 10 мкг/мл он снижал долю Th17.1 (CCR6⁺CCR4^-CXCR3⁺) и увеличивал концентрацию IL-2 в культуре Т-хелперов. Помимо этого, установлено, что гликоделин в концентрации 2 мкг/мл проявляет избирательную апоптотическую активность в отношении Th17.1. В силу описанной вовлеченности этих клеток в патологические процессы, данный эффект гликоделина может представлять интерес с точки зрения биофармацевтики, но механизм обнаруженного избирательного действия этого белка беременности требует дальнейшего исследования.

Иммунологические факторы могут играть важную роль в качестве предикторов или прогностических биомаркеров при онкопатологических процессах. В последнее время в качестве перспективных эффекторных клеток для иммунотерапии злокачественных новообразований рассматривается популяция неклассических γδT-лимфоцитов, сочетающих свойства врожденного и приобретенного иммунитета. В данной работе представлена структурно-функциональная характеристика субпопуляций γδT-лимфоцитов, вовлекающихся в формирование противоопухолевого иммунитета у пациентов со злокачественными и доброкачественными опухолями полости носа и околоносовых пазух. Цель исследования – оценить субпопуляционный состав и функциональные особенности γδТ-клеток у пациентов с новообразованиями полости носа и околоносовых пазух для характеристики механизмов клеточного иммунитета при опухоль-ассоциированном патологическом процессе.

Материалом исследования явилась периферическая венозная кровь 21 пациента (13 мужчин и 8 женщин, средний возраст 63,0 (56,0-69,0) лет) с новообразованиями полости носа и околоносовых пазух и 10 условно здоровых доноров. Фенотип лимфоидных клеток и внутриклеточную продукцию цитокинов оценивали с использованием моноклональных антител и метода проточной цитометрии, внеклеточную продукцию цитокинов исследовали в супернатантах культур методом иммуноферментного анализа.

Установлено увеличение общего количества γδТ-клеток у пациентов с плоскоклеточным раком и изменение соотношения Vδ2⁺/Vδ1⁺Т-клеток в периферической крови как у пациентов со злокачественными, так и доброкачественными опухолями полости носа и околоносовых пазух по сравнению со здоровыми донорами. В обеих исследуемых группах пациентов выявлено повышение уровня фосфоантиген-индуцируемой активации γδТ-клеток в сочетании со снижением индексов стимуляции и различным цитокиновым профилем: у пациентов с плоскоклеточным раком отмечалось увеличение внутриклеточной продукции IFNγ в γδТ-клетках, в то время как у пациентов с инвертированной папилломой перераспределение субпопуляций γδT-лимфоцитов связано с преимущественной продукцией IL-17. При этом процент γδT-лимфоцитов, синтезирующих IFNγ, коррелировал с его концентрацией в супернатантах клеточных культур у пациентов со злокачественными новообразованиями полости носа и околоносовых пазух (R = 0,61; p < 0,05).

Полученные данные свидетельствуют о вовлечении γδT-лимфоцитов в патогенез злокачественных и доброкачественных опухолей и могут являться фундаментальной основой для дальнейшего определения возможных предикторов опухоль-ассоциированной воспалительной реакции и малигнизации.

Перестройка иммунной системы матери, направленная на ограничение иммунного ответа против фетальных антигенов, является условием успешной беременности и осуществляется с вовлечением различных механизмов (Th1/Th2-переключения, экспансии Treg, индукции анергии и апоптоза Т-лимфоцитов, развития Т-клеточного истощения), запуск которых осуществляется с участием ингибиторных рецепторов. Соответственно, экспрессия ингибиторных рецепторов на Т-клетках, включая молекулы PD-1, CTLA-4 и Tim-3, может отражать эффективность иммунной адаптации и ее нарушения при патологии беременности. Преэклампсия (ПЭ), патогенез которой связывают с ослаблением иммунологической толерантности, является грозным осложнение гестации. Соответственно, изменения в экспрессии ингибиторных рецепторов на Т-клетках могут являться биомаркерами патологической гестации и потенциальными терапевтическими мишенями. Целью работы явилось изучение экспрессии ингибиторных молекул на Т-клетках периферической крови при ПЭ. В исследование рекрутировали 29 беременных с ПЭ и 36 женщин с отсутствием гестационных осложнений во второй половине беременности. Беременные исследуемых групп были сопоставимы по срокам гестации, количеству беременностей и паритету родов. Контрольную группу составили 28 фертильных женщин, имеющих детей. Относительное содержание CD8⁺PD-1⁺, CD8⁺CTLA-4⁺, CD8⁺TIM-3⁺, CD8⁺PD-1⁺TIM-3⁺, CD4⁺PD-1⁺, CD4⁺CTLA-4⁺, CD4⁺TIM-3⁺, CD4⁺PD-1⁺TIM-3⁺T-клеток крови оценивали методом проточной цитометрии. Показано, что неосложненная беременность ассоциирована с усилением экспрессии Т-клетками PD-1 и Tim-3, что проявляется возрастанием относительного содержания CD4⁺Tim-3⁺, CD8⁺PD-1⁺ и PD-1⁺Tim-3⁺Т-лимфоцитов. При ПЭ, напротив, отмечается снижение экспрессии Т-клетками PD-1 и Tim-3, в частности уменьшение доли CD4+Tim-3+ и CD8+PD-1+ клеток; отсутствие возрастания PD-1⁺Tim-3⁺ клеток (при сравнении с неосложненной гестацией) и увеличение CTLA-4⁺ клеток в популяции CD4⁺ лимфоцитов. Изменения экспрессии ингибиторных рецепторов ассоциированы с тяжестью ПЭ. Снижение CD4⁺Tim-3⁺ и CD8⁺PD-1⁺Т-клеток наиболее характерно для пациенток с умеренной ПЭ, а возрастание CD4⁺CTLA-4 Т-клеток для беременных с тяжелой ПЭ. Также продемонстрирована сопряженность изменений в экспрессии ингибиторных молекул и сроками манифестации ПЭ. Отличительной особенностью ранней ПЭ является снижение доли CD8⁺CTLA-4⁺ клеток и более выраженное возрастание CD4⁺CTLA-4⁺ клеток, а поздней ПЭ – уменьшение CD4⁺PD-1⁺ клеток и более выраженное снижение CD4⁺Tim-3⁺ клеток. Полученные результаты свидетельствуют об изменении экспрессии молекул CTLA-4, PD-1 и Tim-3 на Т-клетках у беременных с ПЭ и сопряженности этих изменений с тяжестью и сроками манифестации ПЭ.

Вирус птичьего гриппа обладает большим пандемическим потенциалом не только среди животных, но и в человеческой популяции. Для успешной борьбы с данным вирусом важное значение приобретает изучение иммунного ответа против вируса гриппа птиц и, в частности, особенности Т-клеточного иммунитета. Известно, что в период раннего иммунного ответа, когда активации факторов адаптивного иммунитета еще не произошло, ключевую роль в борьбе с вирусом гриппа играют натуральные киллеры, которые обладают как цитотоксическими, так и иммунорегуляторными функциями. В данной работе изучается взаимодействие между натуральными киллерами и Т-хелперами в процессе борьбы с патогеном.

Цель исследования – изучение иммунорегуляторной функции натуральных киллеров у мышей линии BALB/c, инфицированных различными дозами вируса гриппа птиц.

В работе использовали штамм вируса птичьего гриппа серотипа H5N2 (A/duck/Pennsylvania/ 10218/1984), адаптированного к мышам. Определение титра вируса в легочной ткани мышей осуществлялось путем заражения 10-дневных куриных эмбрионов (SPF) легочными экстрактами в различных десятичных разведениях с последующей постановкой реакции агглютинации. Определение численности натуральных киллеров и Т-хелперов в селезеночной ткани мышей проводилось методом проточной цитометрии.

При низкой инфекционной дозе (2,5 ЭИД50) наблюдалось повышение количества Т-хелперов в селезенке мышей, что свидетельствовало о клональной экспансии данной субпопуляции. При этом инфекционнный процесс заканчивался полной элиминацией вируса в легких. При увеличении дозы вируса (25 ЭИД50) также отмечалось увеличение субпопуляции Т-хелперов, но в легких продолжалось размножение вируса. При инфицировании высокой дозой вируса (250 ЭИД50) наблюдалось снижение количества относительно контрольной группы мышей. В легочной ткани отмечалась репликация вируса гриппа птиц на протяжении всего периода наблюдений.

Можно предположить, что снижение численности Т-хелперов при инфицировании высокой дозой вируса обусловлено иммунорегуляторной активностью натуральных киллеров, которые элиминируют «истощенные» Т-хелперы, формирующиеся в условиях повышенной антигенной стимуляции. Этот факт свидетельствует о важности иммунорегуляторной функции натуральных киллеров в сохранении баланса между адекватным уничтожением патогена и избыточным воспалением в легочной ткани в процессе инфекции, вызванной вирусом птичьего гриппа.

В сохранении иммунного гомеостаза кишечника важнейшая роль принадлежит иммунорегуляторным свойствам микробиоты, которая, взаимодействуя с образраспознающими рецепторами, активирует внутриклеточные сигнальные системы, экспрессию цитокинов, продукцию протективных факторов и ограничивает воспалительные реакции в кишечнике. Итог взаимодействий микробиоты и клеток хозяина (развитие воспалительного процесса или поддержание кишечного гомеостаза) зависит от многих факторов, включая потенциальную способность кишечных комменсалов влиять на цитокиновую сеть организма человека. При нарушении количественных и качественных характеристик микробиоты (дисбиоз) цитокиновый баланс, формируемый за счет влияния кишечных микросимбионтов и их метаболитов на иммунные и эпителиальные клетки кишечника, может изменяться, способствуя развитию различной патологии человека. Целью данного исследования явилась оценка иммунорегуляторных свойств эубиотических и дисбиотических кишечных микросимбионтов человека по влиянию их бесклеточных супернатантов на продукцию цитокинов в системе in vitro. Исследование было проведено на 49 эубиотических и 77 дисбиотических штаммах микроорганизмов, выделенных от условно здоровых пациентов, обследуемых на дисбиоз толстого кишечника. Для оценки иммунорегуляторных свойств кишечных микросимбионтов изучено влияние бесклеточных супернатантов исследуемых культур бактерий и грибов на продукцию про- (IFNγ, TNFα, IL-17, IL-8, IL-6) и противовоспалительных (IL-10, IL-1ra) цитокинов, секретируемых мононуклеарными клетками периферической крови здоровых людей. Микробиоту кишечника исследовали бактериологичеким методом. Идентификацию выделенных микробных культур проводили с помощью MALDI TOF MS серии Microflex LT (Bruker Daltoniсs, Германия). Уровень цитокинов определяли иммуноферментным методом с использованием коммерческих тест-систем («Цитокин», Россия). Статистический анализ включал: дискриминантный анализ, классификационное дерево решений и метод картирования равнодействующих. Применение многомерного статистического анализа позволило определить круг наиболее информативных показателей (среди цитокинов и микробных культур, изменяющих их продукцию) для оценки состояния гомеостаза при эу- и дисбиозе кишечника. Установлено, что супернатанты эубиотических культур кишечных симбионтов характеризовались выраженной способностью ингибировать уровень провоспалительных цитокинов: IFNγ, IL-8 и стимулировать секрецию противовоспалительного цитокина (IL-10), а дисбиотические культуры – преимущественно индуцировали провоспалительные цитокины IL-17, IFNγ, TNFα. В сохранение равномерного баланса между про- и противовоспалительными цитокинами при эубиозе вносили значимый вклад как ассоциации микросимбионтов (по мере убывания уровня факторных нагрузок: Bacteroides spp. > E. coli > Lactobacillus spp.), так и монокультуры (Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp.), через индукцию IL-10. При дисбиозе кишечника увеличивалось количество ассоциаций микросимбионтов, индуцирующих секрецию провоспалительных цитокинов. Провоспалительный профиль дисбиотических культур формировался через влияние на продукцию IFNγ (по мере убывания уровня факторных нагрузок) ассоциаций Bifidobacterium spp. > Enterococcus spp. > E. coli > Lactobacillus spp., а также ассоциации S. aureus > Candida spp. На секрецию IL-17 влияли монокультура Clostridium spp. и ассоциация C. acnes > S. aureus > Klebsiella spp., на TNFα – монокультуры бифидобактерий и эшерихий. Таким образом, при эубиозе нормобиота поддерживает равномерный баланс про- и противовоспалительных цитокинов, а при дисбиозе кишечника может происходить смещение баланса цитокинов в сторону провоспалительных за счет усиления уровня их секреции, расширения спектра данной группы цитокинов и увеличения количества моно- и ассоциаций микробных культур, влияющих на их продукцию.

Helicobacter pylori (H. pylori) является частой инфекцией, которая может приводить к развитию гастрита, язвы желудка и злокачественнных опухолей в этой области. В данном исследовании мы изучали серопозитивность в отношении H. pylori по каждому классу иммуноглобулинов, а также их ассоциацию с полом и возрастом в выборке генеральной популяции Табриза (Иран).

В рамках этой работы обследованы 3733 участника, направленных в нашу лабораторию для тестирования в течение 2019-2022 гг. Иммуноферментная диагностика (ИФА) применялась для количественного выявления антител классов IgG, IgM и IgA к H. pylori. Статистический анализ проводили с помощью версии 20 пакета программ SPSS.

Из 3733 обследованных лиц 1235 (33,1%) были мужского пола и 2498 (66,9%) – женского. 57,9% участников имели позитивные тесты на антитела класса IgG. Для антител классов IgM и IgA к H. pylori этот показатель составил, соответственно, 0,3% и 11,6%. Средний возраст (± SD) составлял 40,72±16,91 года. Не выявлено достоверной связи между полом и позитивностью тестов по IgG и  IgA (p = 0,11 и 0,08 соответственно). При исследовании антител класса IgM показана более высокая частота позитивных тестов у женщин (0,4% среди женщин и 0,2% среди мужчин; p = 0,009). Частота встречаемости положительных тестов по IgG также достоверно возрастала (p-value < 0,001). При анализе частот антител классов IgM и IgA отмечено значительное повышение числа серопозитивных лиц с возрастом (p = 0,005 и < 0,001 соответственно).

Данное исследование показало, что частота выявления антител к H. pylori в Табризе составляет около 57%, что находится в пределах значений по Ирану в целом, но она выше, чем в развитых странах. Встречаемость всех классов антител против H. pylori достоверно увеличивается с возрастом.

Псориаз – хроническое аутоиммунное заболевание кожи, с вовлечением Т-клеточного звена иммунитета. Цитокиновая ось интерлейкин IL-23/IL-17/IL-22 является ключевой в иммунопатогенезе псориаза. Показана роль подсемейства IL-36, регулирующего воспаление в коже. Для лечения псориаза используют топические препараты. Цель работы: изучение изменений в цитокиновом профиле венозной и капиллярной крови, взятой вблизи очага псориатического воспаления в зависимости от лечения топическими препаратами. Обследованы 40 пациентов с диагнозом псориаз, средний возраст 43,7 лет, группа 1а (20 чел.) получала местное лечение мометазоном, группа 1б (20 чел.) получала местно гель, содержащий рецепторный антагонист IL-36. 20 здоровых, средний возраст 46,6 года, составили контрольную группу 2. Капиллярную кровь собирали из пальца кисти, у больных рядом с очагом поражения 200 мкл в микровету с ЭДТА. Венозную кровь отбирали из локтевой вены 3 мл в вакуумную пробирку с ЭДТА. Концентрацию 15 цитокинов в плазме крови тестировали мультиплексным методом (MagPix, BioRad, США). Эффективность терапии оценивали с помощью индексов PASI и DLQI. На момент окончания лечения (14-й день) в обеих группах индексы PASI и DLQI значимо снизились. На 28-й день индекс PASI в группе 1а вернулся к исходному уровню, в группе 1б остался стабильно сниженным. До лечения в капиллярной крови больных псориазом уровни всех цитокинов кроме IL-10 были значимо повышены по сравнению с группой 2, в венозной крови были повышены уровни 5 цитокинов. Через 14 дней в группе 1а в капиллярной крови значимо снизились уровни IL-1, IL-4, IL-6, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-33, а в венозной крови – только IL-17F, IL-21, IL-33 и TNF. На 28-й день концентрации практически всех цитокинов вернулись к исходному уровню. В группе 1б на 14-й день в капиллярной крови значимо снизились уровни IFNγ, IL-1, IL-4, IL-17F, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-33, а в венозной крови – IFNγ, IL-21, IL-22, IL-23, IL-33. На 28-й день продолжалось снижение концентрации либо сохранялся сниженный уровень указанных цитокинов, в вене значимо снизился IL-6. Таким образом, метод определения профиля цитокинов капиллярной крови из зоны псориатического поражения можно использовать для мониторинга эффекта лечения у больных псориазом.

Опухоли молочной железы имеют сложную структуру и отличаются высокой гетерогенностью. Исследование цитокинов, оказывающих большое влияние на опухолевые клетки и микроРНК, которые, помимо собственного влияния на пролиферацию и миграцию неопластических клеток, могут воздействовать на работу цитокинов, способствует углублению понимания патологических процессов, происходящих при раке молочной железы. Цель работы – анализ взаимосвязи продукции цитокинов с экспрессией miR-181a и miR-25 у пациентов с инвазивной карциномой молочной железы неспецифического типа (ИКНТ) при различных молекулярных подтипах.

Пациентов с ИКНТ разделили на пять подгрупп согласно молекулярно-генетическому подтипу опухоли, определенному с помощью иммуногистохимического анализа рецептора эстрогена (ER), прогестерона (PR), эпидермального фактора роста 2 (HER2) и маркера пролиферации Ki-67. С помощью иммуноферментного анализа определили концентрацию 14 цитокинов в супернатантах иммунокомпетентных клеток крови и опухоли. Экспрессию miR-181а и miR-25 микроРНК, выделенных    из сыворотки крови пациентов, оценивали с помощью цифровой капельной полимеразной цепной реакции (цкПЦР).

При люминальном А подтипе концентрации цитокинов и экспрессия miR-181а и miR-25 значительно ниже по сравнению с другими подтипами. Для пациентов с люминальным B HER2-отрицательным подтипом было характерно значительное повышение экспрессии обеих изучаемых микроРНК, особенно по сравнению с люминальным А подтипом. В то же время пациенты с тройным негативным молекулярным подтипом, наоборот, выделялись высокими концентрациями цитокинов в супернатанте образцов опухолей и клеток крови по сравнению с остальными подтипами. В общей группе пациентов с ИКНТ были выявлены прямые корреляционные связи между экспрессией обеих изучаемых микроРНК и концентрацией фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в супернатанте образцов опухоли, что, вероятно, свидетельствует о взаимном влиянии miR-181а и miR-25 и процессе ангиогенеза в опухоли.

Уровень цитокинов в супернатантах крови и опухолях при инвазивной карциноме молочной железы не только изменяется в зависимости от молекулярного подтипа опухоли, но также имеет непосредственные связи с уровнем miR-181а и miR-25 в сыворотке крови. Особо примечательны оказались результаты измерения концентраций цитокинов и микроРНК при люминальном А, люминальном B HER2-отрицательном и тройном негативном молекулярных подтипах.

Развитие COVID-19 сопровождается вовлечением в патологический процесс различных цитокинов, и их изменение зависит от возраста, сопутствующей патологии и некоторых других факторов, которые недостаточно изучены у пожилых пациентов с ишемической болезнью сердца. Неизвестным также остается содержание цитокинов в плазме крови больных 60-74 лет, перенесших COVID-19, в ранние сроки выздоровления. Цель исследования – определение содержания системных цитокинов у пожилых пациентов с ишемической болезнью сердца после COVID-19 в ранние сроки выздоровления. Пациенты 60-74 лет с ишемической болезнью сердца, переболевшие COVID-19 средней тяжести, в количестве 40 человек составили основную группу, у которых изучение цитокинов в плазме крови проведено через 3-4 недели после выздоровления. Контрольной группой служили 38 пациентов пожилого возраста с ишемической болезнью сердца и отрицательным тестом на COVID-19. Определение цитокинов в обеих группах проведено на аппарате Becton Dickinson FACS Canto 2 (США) методом проточной цитометрии с соответствующим набором реагентов. Установлено, что у пожилых пациентов с ишемической болезнью сердца через 3-4 недели выздоровления после перенесенного COVID-19 по сравнению с пожилыми пациентами с ишемической болезнью сердца без COVID-19 в анамнезе в плазме крови наиболее существенно и со статистически значимым различием было повышено содержание IL-6, составившее 32,9±2,3 пг/мл, против 6,5±0,7 пг/мл в контрольной группе (p < 0,001). Превышение содержания в плазме крови больных основной группы выявлено и для IL-17, концентрация которого составляла в раннем периоде выздоровления 25,4±1,9 пг/мл, тогда как у больных того же возраста только с ишемической болезнью сердца – 7,8±0,7 пг/мл (p < 0,001). Повышенными среди пациентов 60-74 лет с ишемической болезнью сердца и перенесенным COVID-19 через 3-4 недели после выздоровления оказались уровни TNFα и IFNγ, составлявшие соответственно 128,6±2,7 пг/мл и 57,6±2,8 пг/мл. В контрольной группе концентрация данных цитокинов была значительно ниже – 56,3±2,2 пг/мл и 25,9±1,7 пг/мл соответственно (p < 0,001). Изменения в содержании других изученных цитокинов оказались менее выраженными, а уровень IL-4 не имел сущетвенных различий в обеих группах. Следовательно, у пожилых пациентов с ишемической болезнью сердца и перенесенным COVID-19 через 3-4 недели выздоровления наиболее повышенными на системном уровне являются IL-6, IL-17, TNFα и IFNγ.

Своевременная диагностика и профилактика сердечно-сосудистых заболеваний основана на маркерах, выявляющих изменения в организме спортсмена на ранних этапах. Для реализации указанной задачи актуально применение новых лабораторных методов анализа. Проведено сравнительное определение иммунологических маркеров, специфических антител к ангиотензину, брадикинину, гистамину,  дофамину,  серотонину и функциональных показателей сердечно-сосудистой системы  у спортсменов различной квалификации. Объектом исследования были спортсмены сборных команд РФ, проходившие в рамках графика углубленное медицинское обследование (УМО). Участники эксперимента разделены на группы в зависимости от вида спорта и квалификации. Представители группы «Циклических видов спорта» включали спортсменов без разряда 30 человек и 29 спортсменов квалификации (Iвзр., КМС, МС, МСМК). Группу «Единоборства» составляли 32 человека без разряда и 31 спортсмена с квалификацией аналогично указанной выше. Спортсмены «Скоростно-силовых» видов спорта представлены группой из 31 человека без разряда и 29 спортсменов с квалификацией. Функциональные параметры сердечно-сосудистой системы включали анализ частоты сердечных сокращений, систолического артериального давления и диастолического артериального давления, которые сравнивали с контрольными величинами, установленными для спортсменов. Иммунологические показатели в сыворотке крови спортсменов и контрольной группы определяли методом твердофазного ИФА, используя для сорбции на планшет конъюгированные антигены ангиотензина, брадикинина, гистамина, дофамина, серотонина. Для сравнения показателей использовали группу контроля из 30 человек с отсутствием проявлений клиники сердечно-сосудистых заболеваний. Диастолическое артериальное давление для спортсменов циклических видов спорта и единоборств было ниже контрольных величин, а у спортсменов скоростно-силовых видов спорта выше значений контроля. Факт снижения диастолического артериального давления для указанных выше спортсменов свидетельствует о характерном физиологическом изменении миокарда сердца, которое носит адаптивный характер. Уровни иммунологических показателей к серотонину, дофамину для спортсменов всех групп соответствуют значениям контрольной группы. Исключение составили квалифицированные спортсмены циклических видов, достоверно отличающихся от нормы по сравнению со спортсменами без разряда. От квалификации спортсмена не зависели достоверно высокие иммунологические показатели для гистамина и ангиотензина. У спортсменов, занимающихся скоростно-силовыми видами, значение показателей для брадикинина не отличалось от нормы, а для спортсменов циклических видов и единоборства достоверно превышало норму. Показано, что разный уровень и вид спортивной деятельности по-своему действует на показатели сердечно-сосудистой системы. Изменение иммунологических показателей отражает состояние регуляторов сердечно-сосудистой системы. Соответственно, их одномоментное увеличение по отношению к контролю может свидетельствовать об участии в развитии сердечно-сосудистых заболеваний. А различия в повышении их уровня для спортсменов, занимающихся единоборствами циклическими и скоростно-силовыми видами, показывает более глубокие изменения регуляторных систем, связанные с длительностью и уровнем физической нагрузки.

Большинство методов оценки Т-клеточного иммунитета трудоемки и непригодны для рутинной лабораторной диагностики. Это стимулирует исследователей к созданию доступных и воспроизводимых тестов. Цель исследования – сопоставление трех методов оценки уровня клеточного иммунного ответа на антигены вируса SARS-CoV-2 у переболевших и привитых от новой коронавирусной инфекции. Обследованы: 26 человек, перенесших COVID-19 в легкой или среднетяжелой форме (группа 1), 19 человек, дважды привитых «Спутником V», не болевших COVID-19 (группа 2), 21 человек, перенесший COVID-19 и дважды вакцинированных «Спутником V» (группа 3) и 14 человек, дважды перенесших COVID-19 (группа 4). Мононуклеары периферической крови выделяли градиентным центрифугированием. При оценке первым методом мононуклеары инкубированы с S-белком вируса SARS-CoV-2, окрашивали флуоресцентно мечеными антителами, затем на проточном цитометре BD FACS Canto II подсчитывали процент CD8^highCD107a⁺. При оценке методом ELISpot на наборе Human IFN-γ ELISpot продукцию IFNγ стимулировали S-белком SARS-CoV-2, или смесью пептидов белков SARS-CoV-2 на наборе Corona-T-test. По уровню экспрессии CD107a на CD8^high в группах 1, 2, 3 и 4 и количеству продуцентов IFNγ на S-белок вируса SARS-CoV-2 на наборе Human IFN-γ ELISpot значимых различий не обнаружено. Продукция IFNγ группы 3 (гибридный иммунитет) значимо ниже (317,29±19,04 пг/мл) групп 1 и 2 (постинфекционный и поствакцинальный иммунитет) 454,95±20,32 и 470,77±26,24 пг/мл. Относительный уровень IFNγ-продуцирующих клеток в группе 2 был выше (22,34±3,77) против 16,83±2,35 в группе 1 и 15,46±1,83 в группе 3, относительный уровень продукции IFNγ в этих группах не различался. Стимуляция полноразмерным S-белком обнаружила значимое снижение количества пятен в группе 4 (прорывной иммунитет) 30,59±2,29 против 58,97±4,47 в группе 3, а стимуляция смесью пептидов SARS-CoV-2 в группе 4 по сравнению с группой 3 выявила значимое повышение количества IFNγ-продуцирующих клеток 86,72±7,20 против 69,38±5,53 и продукции IFNγ 991,25±65,18 пг/мл против 760,76±50,70 пг/мл и в относительном выражении, 10,30±2,77 против 8,61±2,66 и 68,10±9,41 против 48,35±8,15 соответственно. Результаты трех методов оценки клеточного иммунного ответа положительно, но с разной силой коррелируют между собой.

Использование сухих пятен крови (dried blood spots – DBS), полученных из пяток младенцев, имеет много преимуществ по сравнению со сбором образцов цельной крови. Экстрагированная из DBS ДНК может быть использована для выявления генетических заболеваний методом ПЦР, что способствовало развитию популяционного скрининга новорожденных во всем мире. C января 2023 г. в список выявляемых заболеваний входит группа первичных иммунодефицитов (ПИД), связанных с отсутствием или снижением уровней Т- и/или В-лимфоцитов, определяемых в рамках скрининга по уровням молекул TREC и KREC в периферической крови соответственно. Количественный анализ требует особого внимания к биологическому материалу. Цель – оценить влияние преаналитического этапа на количественный анализ уровней TREC/KREC в периферической крови.

Материалом служили 5219 образцов DBS, полученных от младенцев на 3-4-й день жизни, а также DBS, приготовленные из цельной крови 100 условно здоровых лиц в возрасте от 18 до 29 лет. Методом ПЦР-РВ, применяя тест-системы для оценки уровней TREC и KREC в периферической крови, проводили сравнительный анализ количества молекул TREC/KREC в корректно и не корректно взятых DBS от новорожденных и взрослых лиц, а также в зависимости от объема наносимого материала; качество DBS оценивали визуально.

В первые месяцы проекта выявлено значительное количество неправильно взятых образцов – свыше трети всех полученных за каждый соответствующий месяц ДНК-карт. В результате дополнительного обучения медперсонала количество некорректно взятого материала снизилось до уровня, не превышающего 1% от всех ежемесячно собираемых образцов. При использовании ДНК, выделенной из DBS с ошибками нанесения, у большей части образцов (для новорожденных 64%, для взрослых лиц 78%) не удавалось получить результат. В остальных случаях полученные результаты были значительно ниже нормальных уровней содержания TREC/KREC, определяемых в этих же образцах при корректном взятии DBS (во всех случаях p < 0,0001, 95% ДИ). Объем крови, используемый при корректном нанесении на карты Гатри, не влиял на получаемые результаты, уровни TREC и KREC были сопоставимы, при сравнении медиан, рассчитанных для каждой группы образцов, значимых различий не выявлено (p > 0,05).

При количественном анализе уровней TREC/KREC в периферической крови корректно взятый материал имеет принципиальное значение для получения достоверных показателей, в первую очередь для исключения ложноположительных результатов. Чтобы свести к минимуму погрешности преаналитического этапа, для контроля и/или корректировки ошибок, необходимо дополнительное обучение медицинского персонала.

Неонатальный скрининг – обязательная процедура обследования новорожденных, которая позволяет выявить наличие генетических заболеваний. Для массового обследования детей используют сухие пятна крови. Эта технология является наиболее доступной и удобной для транспортировки и хранения биологического материала. Выделение ДНК – один из важных этапов в молекулярной диагностике, точность которого особенно важна при генетическом анализе. Различные наборы для экстракции ДНК предлагают различные протоколы и реагенты, которые могут отличаться по эффективности и качеству выделения.

Целью нашей работы было проведение сравнительного анализа наборов реагентов для экстракции ДНК из сухих пятен крови.

Материалом служили образцы сухой капли крови на картах Гатри, полученные от здоровых доношенных младенцев на 3-4 день жизни в рамках программы скрининга новорожденных.

Методы исследования включали спектрофотометрический анализ для определения концентрации и чистоты ДНК, оценивали также простоту протоколов, продолжительность выделения, возможность автоматизации процесса. Контроль эффективности экстракции ДНК разными наборами реагентов дополнительно осуществляли по результатам ПЦР в режиме реального времени с применением тест-системы для оценки уровней TREC и KREC в периферической крови, так как количественный анализ требует большей внимательности к исследуемому материалу.

При оценке чистоты НК, экстрагированных с использованием всех четырех анализируемых наборов, можно было наблюдать успешную депротеинизацию образцов ДНК и относительную чистоту. Средняя чистота ДНК для набора «Экстра-ДНК-Био»  составила  2,2±0,23,  для  «ЭКСТРА-преп PS» – 1,89±0,23, для «МагноПрайм ЮНИ» при ручном и автоматическом выделении – 2,31±0,21 и 2,85±0,09 соответственно. Средняя концентрация ДНК для набора «Экстра-ДНК-Био» составила 15,28 мкг/мл, для «ЭКСТРА-преп PS» – 16,26 мкг/мл, для «МагноПрайм ЮНИ» при ручном и автоматическом выделении – 62,5 мкг/мл и 102,28 мкг/мл, соответственно. Согласно примененному критерию Краскела–Уоллиса и тесту Данна, значимые различия и по параметру TREC, и по параметру KREC присутствуют между группой образцов ДНК, экстрагированных с использованием набора реагентов «МагноПрайм ЮНИ» при ручном выделении, с группами образцов, экстрагированных другими способами («МагноПрайм ЮНИ» при автоматическом выделении) или наборами «Экстра-ДНК-Био» и «ЭКСТРА-преп PS».

В ходе настоящего исследования четыре сравниваемых набора реагентов продемонстрировали высокий уровень сходимости полученных данных, удовлетворяя всем необходимым параметрам для проведения дальнейшего молекулярно-генетического анализа, могут быть использованы для неонатального скрининга и в других областях исследований, требующих экстракции ДНК из сухой капли крови.