ОБЗОРЫ
Механизмы потери толерантности к аутоантигенам щитовидной железы до сих пор точно неизвестны, что не позволяет прояснить ключевые этапы патогенеза аутоиммунных заболеваний щитовидной железы и, следовательно, применить таргетные способы лечения этих заболеваний. Детальное изучение роли клеток врожденного и адаптивного иммунитета в нарушении толерантности к аутоантигенам щитовидной железы при болезни Грейвса и аутоиммунном тиреоидите прояснит и подготовит ряд теоретических основ для создания в перспективе клинико-иммунологического мониторинга и прогнозирования этих заболеваний.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Цель настоящего исследования состояла в создании экспериментальной кроличьей модели IgA-нефропатии. Для этого применили подходы, которые ранее с успехом использовались при моделировании постстрептококкового гломерулонефрита (PSGN), а также штаммы Streptococcus pyogenes серотипов М4 и М60, способные в разной степени связывать IgA посредством IgAFc-рецепторного белка микроба.Развитие патологического процесса в почках констатировали у большей части животных, получивших инъекции гемолитического стрептококка генотипа emm60, обладающего выраженной экспрессией IgAFcR-белка. При морфометрическом анализе у шести из 10-ти кроликов удалось обнаружить выраженные морфологические и иммунохимические изменения в почках: (i) массивные отложения IgA в мезангиальных клетках клубочков, атрофию их капиллярной сети и отек тканей; (ii) выраженное отложение С3-компонента комплемента в канальцах; (iii) значительную лимфоцитарную инфильтрацию в корковом и мозговом вещенствах почки на фоне слабой продукции цитокина TNFα. Примечательно, что во всех случаях отсутствовала депозиция IgG, что позволило исключить роль анти-IgA антител, как и других IgG, в патологическом процессе. Альтернативным источником депозиции IgA может быть отложение в ткани IgAв комплексе с IgA FcR микроба, как это было показано ранее шведской группой ученых. Описанные изменения отсутствовали в почках контрольных животных. Совокупность полученных результатов позволяет допустить, что нам удалось создать модель гломерулонефрита, близкую по проявлениям к IgA-нефропатии человека.Они также расширяют наши представления о патогенных функциях IgFc-связывающих белков в генезе патологии, вызываемой Streptococcus pyogenes.
Цель работы – исследовать некоторые механизмы изменения иммунного статуса и роль блокатора кальциевых каналов амлодипина в их коррекции при экспериментальной хронической почечной недостаточности (ХПН). ХПН у крыс моделировали путем двухэтапной оперативной резекции 5/6 почечной ткани. Амлодипин применяли per os ежедневно в дозе 0,25 мг/кг в сутки в течение 7 дней. Методом проточной цитофлуориметрии дифференцировали лимфоциты периферической крови: CD3+ (преимущественно Т- лимфоциты), CD45RA+ (преимущественно В-лимфоциты), Annexin 5-FITC+/7-AAD- (с ранними признаками апоптоза, Annexin 5-FITC+/7-AAD+ (с поздними признаками апоптоза и частично некротические клетки. В сыворотке определяли концентрацию мочевины, креатинина, фосфатов, общего кальция, паратиреоидного гормона (ПТГ), IL-1β, IL- 4, интерферона-γ, активность СОД и каталазы. Оценку Th1- и Th2-зависимого иммунного ответа проводили соответственно по реакции гиперчувствительности замедленного типа и по количеству антителообразующих клеток в селезенке крыс, иммунизированных аллогенными эритроцитами. В липидном экстракте лимфоцитов периферической крови исследовали содержание первичных, вторичных и конечных продуктов ПОЛ. Изменения иммунного статуса при ХПН включают депрессию Th1- и Th2-зависимого иммунного ответа, снижение количества лимфоцитов, несущих маркеры Т- и В-клеток, увеличение концентрации в крови IL-1b, снижение концентрации IFNγ и IL-4. Патогенез изменений иммунного статуса, в том числе, связан с увеличением количества лимфоцитов в периферической крови с ранними и поздними признаками апоптоза, некроза, увеличения концентрации в крови IL-1β, общего кальция, ПТГ, снижения концентрации IFNγ, увеличением количества первичных, вторичных и конечных продуктов ПОЛ в лимфоцитах периферической крови, угнетением активности СОД и каталазы в плазме. Применение амлодипина приводит к восстановлению Th1- и Th2- зависимого иммунного ответа, увеличению количества лимфоцитов, несущих маркеры Т- и В-клеток. Механизм иммунотропного действия амлодипина связан со снижением количества лимфоцитов в периферической крови с ранними и поздними признаками апоптоза, признаками некроза, ПОЛ-ограничивающим эффектом в лимфоцитах периферической крови, повышением активности СОД в плазме.
С применением восьмицветного цитометрического анализа проведено исследование экспрессии хемокиновых рецепторов (CCR4, CCR6, CXCR3 и CXCR5) на Т-хелперах (Th) различного уровня дифференцировки, выявленных на основании CD45RA и CD62L, в группе условно здоровых доноров (n = 52). Показано, что «наивные» Т-хелперы (N) с фенотипом CD45RA+CD62L+ экспрессируют CXCR3 (4,94±0,39%) и CXCR5 (3,63±0,25%). Около половины CD45RA–CD62L+Т-хелперов центральной памяти (CM) несут CXCR3, в среднем 43,72±1,27% клеток данной популяции экспрессировали CCR6, тогда как CXCR5 и CCR4 обнаруживались на 30% клеток данной популяции. На CD3+CD4+CD45RA–CD62L– (EM) лимфоцитах уровень экспрессии CXCR3 достигал 76,76±0,75%, сходные значения бил отмечены и для CCR6, относительное содержание CXCR5+ клеток снижалось до 13,68±0,50%, а уровень CCR4 не изменялся и составлял 33,26±1,13% позитивных клеток. Анализ коэкспрессии указанных выше хемокиновых рецепторов позволил выявить основные субпопуляции Т-хелперов. Среди CXCR5– Th обнаружены Th1 и Th1/Th17 с фенотипами CXCR3+CCR6–CCR4– (содержавшей также Th9) и CXCR3+CCR6+CCR4– соответственно. Th2 выявлялись на основании наличия CCR4 при отсутствие всех остальных хемокиновых рецепторов. Th17, помимо указанных выше Th1/Th17, были обнаружены в составе CXCR3–CCR6+CCR4– и CXCR3–CCR6+CCR4+, причем последняя популяция также содержала Th22. Фолликулярные Th (CXCR5+) состояли из как минимум шести клеточных субпопуляций: CXCR3–CCR6–CCR4– («Tfh/Tfh2»), CXCR3–CCR6–CCR4+(«Tfh2»), CXCR3–CCR6+CCR4– («Tfh17»), CXCR3–CCR6+CCR4+ («Tfh17»), CXCR3+CCR6–CCR4–(«Tfh1») и CXCR3+CCR6+CCR4– («Tfh1/Tfh17»). Среди СМ доминируют клетки с фенотипом «Th1 и Th9» и «Th1/Th17» (около 13%), тогда как в рамках ЕМ содержание этих субпопуляций достигает 22,37±1,69% и 31,69±1,52% соответственно. Th2 в рамках СМ составляют 8,15±0,46%, а в ЕМ – лишь 1,72±0,15%. Для клеток с фенотипом «Th17 и Th22» эти значения составляют 8,07±0,30% и 12,03±0,57% соответственно. Основные субпопуляции Tfh были представлены среди СМ Т-хелперов, где относительное содержание «Tfh/Tfh2» достигало 5,79±0,26%, «Tfh2» – 1,34±0,07%, «Tfh17» с фенотипами CXCR3–CCR6+CCR4– и CXCR3–CCR6+CCR4+ – 6,22±0,28% и 3,28±0,16% соответственно, а также «Tfh1» – 7,68±0,31% и «Tfh1/Tfh17» – 4,02±0,17%. Среди Тh эффекторной памяти относительное содержание клеток указанных выше субпопуляций Tfh снижалось в два раза и более. Полученные результаты могут найти свое применение при диагностике патологических состояний иммунной системы и использоваться в качестве группы сравнения.
Целью исследования явилось изучение взаимосвязи между цитокинпродуцирующим потенциалом иммунокомпетентных клеток крови (ИКК) и экспрессией гепараназы-1 при аденомах и аденокарциномах желудка. Исследовали спонтанный и стимулированный поликлональными активаторами цитокинпродуцирующий потенциал ИКК периферической крови 32 больных с аденомами и 36 больных с аденокарциномами желудка, значения которого выражали с помощью индекса влияния поликлональных активаторов (ИВПА) на продукцию цитокинов. У больных с аденомами желудка показатели ИВПА на продукцию IL-1ra, ТNFα, IL-18, IFNγ превышали величины аналогичных показателей больных с аденокарциномами. Пределы вариабельности экспрессии гепараназы-1 в эпителии аденом составили интервал величин 0,27-3,00; в строме аденом – 2,27-11,48. Пределы вариабельности экспрессии гепараназы-1 в аденокарциномах (по % суммарно окрашенной площади) в значительной степени варьировали от 1,79 до 14,26, что было обусловлено наличием больных с различными вариантами дифференцировки аденокарцином. Установлено, что величина показателя экспрессии гепараназы-1 находилась в прямой корреляционной связи с количеством регионарных лимфоузлов с метастазами. С помощью многомерного анализа была выявлена каноническая корреляция между величинами экспрессии гепараназы-1 в эпителии аденом и ИВПА на продукцию IL-2, IL-6 и IL-8, ИВПА на продукцию IL-18, IL-18BP, IL-8. Также выявлена каноническая корреляция между экспрессией гепараназы-1 в строме аденом и ИВПА на продукцию IL-1ra, TNFα, IL-18. Полученные данные свидетельствуют о существовании молекулярно-клеточных механизмов, опосредованных цитокинами и гепараназой-1, с общим вектором действия, обеспечивающим опухолевую прогрессию.
Целью исследования явилось изучение особенностей взаимосвязи между фенотипом и активностью «респираторного взрыва» нейтрофильных гранулоцитов у больных раком почки. Обследованы больные раком почки (Т3N0М0, светлоклеточный тип) в возрасте 40-55 лет до хирургического лечения (n = 73). Диагноз рака почки у всех больных верифицирован гистологически. В качестве контрольной группы было обследовано 50 практически здоровых людей аналогичного возрастного диапазона. Исследование фенотипа нейтрофильных гранулоцитов крови проводили методом проточной цитометрии. Уровень «респираторного взрыва» в нейтрофильных гранулоцитах определяли с помощью спонтанной и зимозан-индуцированной люцигенин- и люминол-зависимой хемилюминесценции. У больных раком почки обнаружены изменения во взаимосвязях между показателями «респираторного взрыва» и фенотипом нейтрофилов. При раке наблюдается полная потеря взаимосвязей показателей синтеза первичных и вторичных активных форм кислорода с количеством CD11b+, CD62L+ и CD64+ нейтрофилов, но, как и у лиц контрольной группы, корреляционные связи выявляются с уровнем содержания HLA-DR+ клеток. Только у больных выявляется взаимосвязь уровня синтеза супероксид-радикала нейтрофилами, находящимися в состоянии относительного покоя, и экспрессией CD62L. При антигенной индукции «респираторного взрыва» данные взаимосвязи исчезают. Взаимосвязи синтеза первичных и вторичных активных форм кислорода с количеством CD11b+, CD62L+ и CD64+ нейтрофилов, выявляемые у здоровых людей, характеризуют положительную зависимость между показателями «респираторного взрыва» и функциональной активацией клеток, которая выражается в экспрессии адгезионных и функциональных рецепторов. Можно предположить, что нарушение взаимосвязи между показателями «респираторного взрыва» и фенотипом нейтрофилов у больных раком почки определяется различными факторами. Во-первых, при раке меняется фенотип нейтрофилов крови (снижается содержание CD11b+, CD62L+, CD64+, HLA-DR+и HLA-DR+CD64+ нейтрофилов, повышается уровень экспрессии CD16- и HLA-DR-рецепторов), что, возможно, связано с миграцией клеток в опухоль. Во-вторых, у больных наблюдается увеличение интенсивности «респираторного взрыва» в нейтрофилах за счет повышения уровней синтеза первичных и вторичных активных форм кислорода, что может быть связано с действием различных опухолевых факторов (антигенов, регуляторных молекул). Выявленные особенности взаимосвязей между фенотипом и «респираторным взрывом» нейтрофилов характеризуют особенности иммунопатогенеза рака почки и могут быть использованы при разработке иммунотерапевтических методов, направленных на стимуляцию противоопухолевой активности фагоцитирующих клеток.
Механическая желтуха (МЖ) – это тяжелое патологическое состояние организма, вызванное обструкцией желчевыводящего протока и требующее немедленного оперативного пособия больному. Этиологически МЖ может быть доброкачественного (60-80%) и злокачественного генеза. Прогрессирование МЖ зависит не только от этиологии патологического состояния, но и от уровня билирубина. Одним из механизмов прогрессирования МЖ является воспаление в области препятствия. Нейтрофильные гранулоциты (НГ) первыми участвуют в иммунном ответе, направленном на уничтожение инфекционного агента, следовательно, прогрессирование МЖ напрямую зависит от их функциональной активности. В связи с этим целью нашей работы было изучить хемилюминесцентную активность нейтрофильных гранулоцитов в прогрессировании МЖ в зависимости от уровня билирубина и генеза желтухи. У всех больных МЖ изменялась хемилюминесцентная активность НГ. У больных МЖ, вызванной ЖКБ, интенсивность свечения была снижена и при спонтанной, и при индуцированной ХЛ. У больных МЖ, вызванной доброкачественным опухолевым процессом (ДОП), интенсивность ХЛ НГ не изменялась, увеличенный индекс активации свидетельствует о повышенной индуцированной активности фагоцитов. У больных МЖ злокачественного генеза было выявлено наибольшее количество изменений, при этом выявлялась увеличенная индуцированная интенсивность свечения и повышенный индекс активации. В прогрессировании МЖ большая роль отводится уровню билирубина в крови. У всех больных МЖ, вызванной ЖКБ, наблюдается снижение спонтанной и индуцированной хемилюминесцентной активности НГ. У больных МЖ, вызванной ДОП, с уровнем билирубина 60-200 мкмоль/л – показатели спонтанной и индуцированной хемилюминесцентной активности НГ снижены, повышенный индекс активации свидетельствует об увеличении индуцированной активности НГ над спонтанной. У больных МЖ с билирубином более 200 мкмоль/л отмечаются однонаправленные изменения в активности НГ, увеличивались и спонтанная, и индуцированная хемилюминесцентная активность НГ. У больных МЖ злокачественного генеза, с уровнем билирубина менее 60 мкмоль/л, снижались спонтанная и индуцированная хемилюминесцентная активность НГ, при 60-200 мкмоль/л, происходит восстановление активности НГ, более 200 мкмоль/л – активность НГ спонтанная и индуцированная увеличивается, что, вероятно, обусловлено в условиях развития полиорганной недостаточности при токсическом влиянии билирубина, НГ работают на своем пределе, вплоть до истощения своих резервных возможностей.
Хемокин CXCL-10 (IP-10) является одним из дополнительных гуморальных маркеров, применяемых наряду с определением антиген-индуцированного IFNγ для диагностики латентной туберкулезной инфекции человека. Динамика изменения IP-10 и его прогностическое значение в процессе лечения различных форм туберкулеза, особенно детско-подросткового возраста, является малоизученной проблемой. В настоящем исследовании выявлено увеличение спонтанной и антиген-индуцируемой продукции IP-10 у детей и подростков, больных туберкулезом, по сравнению с латентным формой туберкулеза с последующим ее значительным снижением в случаях успешной противотуберкулезной химиотерапии. При деструктивных формах туберкулеза, имеющих торпидное и прогрессирующее течение, подобная динамика отсутствовала.
КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
В исследовании 116 пациентов с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) легкой, средней и тяжелой степенью тяжести изучался цитокиновый профиль Th1- и Тh17-типов иммунного ответа. Субпопуляции Th1- и Th17-лимфоцитов оценивали по уровню цитокинов в сыворотке крови: TNFα, IL-6, IL-10, IL-17А, IL-21, IFNγ, TGF-β1. Установлено, что у пациентов с ХОБЛ разной степени тяжести изменения баланса про- и противовоспалительных цитокинов характерны как для Th1-, так и для Th17-типов иммунного ответа. Разнообразие форм иммунного ответа достигалось за счет активации различных клеток-эффекторов: ответ по Th1-типу связан с активацией макрофагов и выработкой IFNγ; при превалировании Тh17-типа иммунного ответа активируются нейтрофилы и синтез IL-17, IL-21. При этом выявлено преобладание иммунного ответа по Th17-типу у больных ХОБЛ с тяжелой степенью тяжести. Таким образом, определенный тип иммунных нарушений при ХОБЛ диктует необходимость назначения комплексной терапии с включением иммунокорригирующих препаратов, действие которых направлено на подавление воспаления и на коррекцию дисбаланса цитокинов.
С целью выявления особенностей фенотипического состава и функциональной активности иммунокомпетентных клеток пуповинной крови в зависимости от гестационного возраста (ГВ) проведено исследование 102 проб пуповинной крови детей, родившихся в 25-28 недель, 29-32 недели, 33-36 недель ГВ и 31 образец пуповинной крови группы сравнения – с ГВ 37-41 недель. Методом проточной цитометрии определяли количество CD3+, CD19+/CD3-, CD4+/CD3+, CD8+/CD3+, CD16/56+/CD3- клеток; уровень экспрессии рецепторов маркеров активации моноцитов и лимфоцитов (HLADR+/CD14+, CD71+/CD14+, CD25+/CD4+, CD95+/CD3+); рецептор адгезии (CD11b+), oпределение содержания цитокин-продуцирующих клеток (IL-4/CD4, IFNγ/CD4) и сывороточных цитокинов IFNγ и IL- 4. У всех детей основных групп на фоне лейкопении установлено повышение относительного числа лимфоцитов, а также снижение способности гранулоцитов поглощать опсонизированные бактерии. Выявлено сниженное процентное содержание HLA-DR+/CD14+ клеток, увеличение количества CD3+CD95+ популяций и IFNγ – цитокин-продуцирующих клеток у детей с гестационным возрастом (ГВ) 25-28 недель. Наблюдается снижение уровня натуральных киллеров у новорожденных до 32 недели гестационного возраста (ГВ). Определена повышенная концентрация сывороточного IFNγ при сниженном уровне IL-4 у детей с ГВ 25-28 и 33-36 недель. Сниженное процентное содержание CD3+CD11b+ клеток в 29-32 и 33-36 недель ГВ. В 33-36 недель ГВ уменьшение количества CD3+CD95+ лимфоцитов и повышение уровня экспрессии рецептора CD25+ на CD4+ лимфоцитах. В целом полученные данные свидетельствуют об особенностях состояния иммунной системы, характерных для определенного гестационного возраста недоношенных детей. Ряд исследованных параметров дает возможность говорить о частичном достижении иммунологической готовности к ответу на потенциальный антиген, что диктует необходимость проведения дальнейших исследований, направленных на изучение функциональной активности иммунокомпетентных клеток.
ISSN 2313-741X (Online)