В настоящее время в качестве потенциальных биомаркеров заболеваний, а также «биологических конструкций» для таргетной доставки лекарств рассматривают внеклеточные везикулы. Внеклеточные везикулы представляют собой гетерогенную популяцию мембранных везикул, образуемых различными клетками организма, в том числе клетками иммунной системы, в процессе их жизнедеятельности. В настоящее время, в зависимости от размера и способа образования, везикулы подразделяют на экзосомы, микровезикулы и апоптотические тела. Внеклеточные везикулы обнаружены в различных биологических жидкостях человека, в связи с чем обсуждается возможность их использования в качестве диагностических биомаркеров. Везикулы обладают разнообразным внутренним составом и экспрессируют на своей поверхности широкий репертуар рецепторов, что позволяет им участвовать в межклеточных коммуникациях за счет передачи клеткам различных молекул, в том числе генетического материала. Одним из типов молекул, способных передаваться при помощи внеклеточных везикул, являются молекулы микроРНК, представляющие собой эволюционно консервативные некодирующие молекулы РНК длиной 18-25 нуклеотидов, основной функцией которых является регуляция экспрессии генов на постранскрипционном уровне. МикроРНК синтезируются во всех клетках организма, однако ряд микроРНК встречаются повсеместно, тогда как другие присутствуют только в определенных типах тканей. МикроРНК присутствуют не только внутри, но и вне клетки (внеклеточные или циркулирующие микроРНК. МикроРНК устойчивы к РНКазам и стабильны во внеклеточной среде, что обуславливается тем, что клетки продуцируют их совместно с белковыми комплексами или в составе внеклеточных везикул. Профиль микроРНК во внеклеточных везикулах меняется в зависимости от физиологического состояния и наличия различных заболеваний. В настоящее время появляется все больше данных о том, что микроРНК могут определять функциональную активность внеклеточных везикул, показана возможность использования микроРНК, переносимых во внеклеточных везикулах, в терапевтических целях, а также для диагностики различных патологий. В настоящем обзоре рассмотрены популяции внеклеточных везикул и их основные свойства, описаны характеристики внутриклеточных и внеклеточных (циркулирующих) микроРНК, механизмы их биосинтеза, методы детекции и оценки содержания микроРНК. В обзоре описаны микроРНК, входящие в состав экзосом и микровезикул, образованные различными клетками, в том числе клетками иммунной системы при физиологических и патологических процессах, рассмотрены функции данных микроРНК и их диагностический и терапевтический потенциал.

Хронический риносинусит (ХРС) – заболевание, обусловленное воспалением придаточных пазух носа и ее слизистой оболочки с длительностью симптомов заболевания более 4 недель непрерывно. Целью нашего исследования явилось изучение основных патофизиологических особенностей хронических IgЕ-опосредованных риносинуситов бактериальной этиологии по данным публикаций в Российской Федерации и в мире. Был произведен анализ англо- и русскоязычных публикаций с использованием следующих баз данных: PubMed, MedLine, Web of Science, Russian Science Citation Index, Springer, Scopus, Scientific Research, Google Scholar, Crossref, eLibrary. Были изучены эпидемиологические особенности ХРС в Российской Федерации, бактериальные возбудители и патофизиологическая характеристика ХРС. За последние 20 лет наблюдается увеличение распространенности ХРС в 2 раза. С ростом возрастного интервала повышается и распространенность заболевания. Хронический риносинусит занимает первое место среди всех хронических заболеваний в оториноларингологии Аллергический ринит, астма, бронхоэктатическая болезнь, иммунодефициты, муковисцидоз, первичная цилиарная дискинезия и аутоиммунные заболевания связаны с ХРС. Наиболее часто бактериальными возбудителями являются S. aureus, Staphylococcus epidermidis и Propionibacterium acnes, Prevotella, Streptococcus и Veillonella, а из грамотрицательных бактерий такие, как Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa), Proteus mirabilis и Klebsiella pneumoniae. Золотистый стафилококк (S. aureus) участвует в патогенезе носовых полипов. Колонизирующие бактерии могут способствовать патогенезу ХРС посредством образования биопленок. Изменение синоназального микробиома также может способствовать развитию ХРС. В патогенезе ХРС играет значимую роль ассоциация мутаций генов CRS и CFTR. Предложена «гипотеза иммунного барьера» как причины ХРС. Снижение экспрессии SPINK5, нарушение передачи сигналов STAT3, полиморфизм рецептора горького вкуса T2R38, были выявлены в патогенезе ХРС. Ген T2R38 стимулирует эпителиальные клетки к выработке закиси азота с бактерицидным действием, способствует мукоцилиарной элиминации патогенов и профилактике инфекций верхних дыхательных путей, полиморфизм данного гена предрасполагает больных к грамотрицательным инфекционным заболеваниям, поэтому является фактором риска развития ХРС. Кроме этого дефицит антител является наиболее распространенным первичным иммунодефицитом, связанным с ХРС.

Таким образом, патогенез хронических IgЕ-опосредованных риносинуситов бактериальной этиологии связан с дефектами врожденного иммунитета и мукоцилиарного клиренса, влиянием синоназального микробиома, аллергии и генетических факторов. Комплексная оценка перечисленных факторов необходима для разработки новых профилактических и терапевтических вариантов коррекции ХРС.

 Расширение в современных условиях фундаментальных знаний по вопросам физиологии лактации, биологии стволовых клеток и экзосом грудного молока, нюансам взаимодействия организма матери и ребёнка, начиная от внутриутробного периода, заканчивая постнатальным развитием,  требует от научного сообщества и практикующих врачей прогрессивного, динамичного взгляда при анализе известных, общепринятых клинических явлений и закономерностей (развитие иммунной системы младенцев и детей раннего возраста, естественное и искусственное вскармливание, особенности постнатального развития и роста органов и тканей детей, рождённых недоношенными). Компоненты триады «мать - грудное молоко - младенец» тесно связаны друг с другом и влияют на траекторию развития младенца. Грудное молоко кормящей женщины по современным представлениям является «живой, метаболической/эндокринной сигнальной системой», может рассматриваться как «иммунный орган», значимый для постнатального роста и программирования организма недоношенного ребёнка. Не меньшую ценность для постнатального развития в период новорождённости и раннего детства имеет активно обсуждаемое в специальной литературе явление - «микрохимеризм», вызванный грудным вскармливанием и играющий по современным представлениям ключевую роль в развитии иммунной системы и организма в целом Течение постнатального онтогенеза сердечно-сосудистой системы при отсутствии протективного (иммуномодулирующего и регенеративного) эффекта грудного молока кормящей женщины на спонтанное, некорректируемое воздействие неблагоприятных факторов недоношенности приводит, с высокой вероятностью, к ремоделированию и дисфункции сердца у рождённых недоношенными детей, а в отдалённой перспективе - и у взрослых. Поскольку молодые люди, родившиеся недоношенными, демонстрируют уникальный кардиальный фенотип, характеризующийся уменьшенным бивентрикулярным объемом, относительно более низкой систолической и диастолической функциями, непропорциональным увеличением мышечной массы, клинически проявляющийся повышенным риском сердечно-сосудистых заболеваний, гипертонией и снижением толерантности к физической нагрузке, то целесообразно считать преждевременные роды хроническим заболеванием. Следовательно, именно естественное вскармливание, реализующее эволюционно целесообразный защитный механизм для детского сердца, следует относить к фундаментальным факторам, выполняющим жизненно важную роль в профилактике сердечно-сосудистых заболеваний у рождённых недоношенными детей и взрослых

Цель исследования – оценить выраженность изменений значений маркеров-кандидатов дифференциальной диагностики анемии хронических заболеваний у пациентов с сахарным диабетом 1-го и 2-го типа. Оценивали: общее количество лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов, содержание С-реактивного белка, TNFα, ферритина и гепсидина. Проведено обследование 50 человек с сахарным диабетом 1-го типа и 81 человек с сахарным диабетом 2-го типа. Диагноз «анемия» устанавливался на основании данных об уровне гемоглобина, содержании эритроцитов в крови, ферритина и железа сыворотки. Далее определялся вид анемического синдрома. Пациенты были разделены на группы: 14 пациентов с сахарным диабетом и анемией хронических заболеваний, 15 человек с сахарным диабетом и железодефицитной анемией, 38 больных диабетом с латентным дефицитом железа и 64 пациента с сахарным диабетом без анемии. Группу сравнения составили 17 здоровых добровольцев. Показано, что в общей выборке пациентов с сахарным диабетом анемию хронических заболеваний отличала лишь скорость оседания эритроцитов, которая была выше, чем при железодефицитной анемии, латентном дефиците железа и у больных без анемии. Была проанализирована выраженность воспаления у больных сахарным диабетом в зависимости от его типа. Концентрация гепсидина в крови больных диабетом, независимо от типа, превышала его содержание в крови у здоровых лиц. Характерным для воспаления при сахарном диабете 1-го типа оказалась повышенная концентрация в сыворотке крови TNFα. Сахарный диабет 2-го типа характеризовался повышением: скорости оседания эритроцитов – относительно здоровых лиц; концентрации С-реактивного белка – в сравнении со здоровыми добровольцами и пациентами с сахарным диабетом 1-го типа; уровня ферритина – по сравнению с больными сахарным диабетом 1-го типа. Учитывая тип диабета и вид нарушения метаболизма железа установлено, что при сахарном диабете 1-го и 2-го типов только скорость оседания эритроцитов у больных с анемией хронических заболеваний была достоверно выше, чем у пациентов с железодефицитной анемией и без анемии. В статье обсуждаются причины сложностей применения маркеров воспаления (ферритина и гепсидина) в качестве параметров верификации анемии хронических заболеваний у больных сахарным диабетом. Указывается на необходимость учета различий в механизмах развития воспаления при сахарном диабете 1-го или 2-го типа при попытке применения на практике в качестве дополнительных диагностических маркеров цитокинов и С-реактивного белка. Дается обоснование перспективности определения скорости оседания эритроцитов, с рекомендацией определенного порогового значения, для выявления анемии хронических заболеваний у пациентов с сахарным диабетом 1-го и 2-го типа.

В мире отмечается стремительный рост распространенности аллергических и аутоиммунных заболеваний. Известно, что аллергическое воспаление чаще всего носит системный характер с вовлечением в патологический процесс различных органов и систем, таких как кожа, респираторный и желудочно-кишечный тракт с развитием дермато-респираторных, дермато-интестинальных и других проявлений. Особого внимания заслуживает изучение особенностей цитокинового профиля в слюне, поскольку данные характеристики отражают не только местные, но и системные нарушения. Особую актуальность представляет изучение местной цитокиновой регуляции межклеточных взаимодействий при пищевой аллергии.
Цель исследования – изучить концентрацию IL-4, IL-10, IFNγ, секреторного IgA в слюнной жидкости, концентрацию общего иммуноглобулина Е и эозинофильного катионного протеина в сыворотке крови у больных атопическим дерматитом и псориазом с сопутствующей пищевой аллергией.
В исследование включены больные атопическим дерматитом (АтД, 1-я группа, n = 20), псориазом с сопутствующей пищевой аллергией (ПС, 2-я группа, n = 27), псориазом без сопутствующей аллергии (ПС, 3-я группа сравнения, n = 23). Количественная оценка концентрации цитокинов (IL-4, IL-10, IFNγ, sIgA) в слюнной жидкости проводилась методом твердофазного иммуноферментного анализа Концентрации общего иммуноглобулина Е и эозинофильного катионного протеина в сыворотке крови определяли методом непрямого иммунофлуоресцентного анализа. Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью прикладных программ Statistica 8.0.
В группах больных атопическим дерматитом (1-я группа) и псориазом с сопутствующей пищевой аллергией (2-я группа) отмечено статистически значимое повышение концентрации IL-4 и IL-10 в слюне, а также общего иммуноглобулина Е в сыворотке крови в сравнении с группой больных псориазом без сопутствующей аллергии (3-я группа) и контрольной группой. При исследовании концентрации IFNγ в слюне статистически значимых межгрупповых различий выявлено не было.
Концентрация sIgA в слюне была статистически значимо выше в группах больных атопическим дерматитом и псориазом с сопутствующей пищевой аллергией в сравнении с контрольной группой и группой больных ПС без аллергии (3-я группа).
Таким образом, цитокиновый профиль слюны характеризуется однонаправленными изменениями при пищевой аллергии, шоковым органом которой является кожа, независимо от нозологической формы заболевания (атопический дерматит, псориаз). Слюнная жидкость является легко доступным материалом для оценки состояния мукозального иммунитета при пищевой аллергии.

В настоящее время отмечен рост заболеваемости алопецией у детей. Вклад в патогенез развития данного заболевания аутоиммунных (иммунопатологических) механизмов обусловливает необходимость дополнительного изучения иммунного статуса и особенностей коморбидной патологии. Цель исследования – выявить особенности иммунного статуса и коморбидной патологии у детей с гнездной алопецией. В группу наблюдения включены дети с различными типами гнездной алопеции (n = 57), в группу сравнения – дети с отсутствием клинических проявлений алопеции и указанием на нее в анамнезе (n = 157). Проведена сравнительная оценка содержания субпопуляций лимфоцитов (CD3⁺, CD3⁺CD4⁺, CD3⁺CD8⁺, CD3⁺CD19⁺), интерлейкинов (IL-4, IL-6), иммуноглобулинов (IgA, IgМ, IgG), параметров фагоцитарной активности (абсолютный фагоцитоз, процент фагоцитоза, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс) и IgЕ к домашней пыли и шерсти кошки. Выполнен анализ коморбидной патологии. Статистическая обработка осуществлена в приложении Jamovi. Установлено, что среди клинических форм доля очаговой преобладала над субтотальной и тотальной формами в 1,8 раза (р = 0,033), в группе наблюдения относительно группы сравнения, чаще регистрировали обычный вариабельный иммунодефицит – в 1,4 раза, хронический тонзиллит – в 3,9 раза, аллергический ринит – в 3,9 раза и аутоиммунный тиреоидит, отсутствующий в группе сравнения. У детей с алопецией выявлены нарушения Т-клеточного звена в виде большего значения медианы относительного и абсолютного числа CD3⁺CD4⁺ лимфоцитов (р = 0,001-0,003), увеличение долей повышенных значений IgА – 4,1 раза, IgМ – в 7,3 раза, IgG – в 13,2 раза (р < 0,001), IL-4 – в 8,1 раза и IL-6 – в 4,6 раза (р = 0,002-0,004) при наличии связей средней и относительно сильной силы с алопецией. У детей с алопецией определена в 3,3 раза большая доля сниженных значений абсолютного фагоцитоза и в 3,7 раза – сниженных значений процента фагоцитоза (р = 0,001-0,028) при установленной связи от слабой до средней силы с алопецией, а также более низкие значения медианы фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа в группе наблюдения (р < 0,001) при установленной связи средней силы в структуре результатов. Проведенный корреляционный анализ между формой алопеции (очаговая, субтотальная, тотальная) и лабораторными показателями не выявил ни одной статистически значимой связи. Таким образом, у детей с алопецией установлен дисбаланс компонентов иммунной системы, проявляющийся, с одной стороны, признаками гиперфункции, характерных в том числе для аутоиммунного и аллергического процессов, сопровождающихся более частой регистрацией аутоиммунного тиреоидита и аллергического ринита, с другой признаками иммунной недостаточности, характеризующимися снижением фагоцитарной активности и большей частотой обычного вариабельного иммунодефицита и хронического тонзиллита.

Цель исследования – изучение особенностей экспрессии молекул HLA-G и HLA-DR на лимфоцитах женщин и их детей с ВПС под воздействием аллогенных и аутогенных сывороток крови. Обследовано 38 женщин и их детей со спорадическими септальными врожденными пороками сердца (основная группа). Группами сравнения были: 21 женщина и их дети без ВПС (первая группа сравнения), а также 17 условно здоровых мужчин (вторая группа сравнения). Всего обследовано 115 индивидуумов. Выполнялись исследования по методологии «cross-match» на проточном цитофлуориметре CytoFlex (Beckman Coulter, США). Оценивалось влияние аутогенных и аллогенных сывороток крови на изменение экспрессии молекул HLA-G и HLA-DR на лимфоцитах. Статистическая обработка полученных результатов проводилась в пакетах программ Statistica for WINDOWS фирмы StatSoftInc. Версия 10.0 и MedCalc 17.5.3. по правилам вариационной статистики.
Выявлено, что под воздействием аутогенной сыворотки экспрессия молекул HLA-G и HLA-DR значимо не меняется на лимфоцитах мужчин и женщин, имеющих детей с врожденными пороками сердца. В то же время у женщин, имеющих более двух родов и всех условно здоровых детей, аутогенная сыворотка значимо подавляет экспрессию молекул HLA-G и HLA-DR на лимфоцитах. Особо выраженное и значимое подавление под воздействием аутогенной сыворотки отмечено для молекулы HLA-DR на CD3 положительных лимфоцитах. Другие значимые различия касались влияния аутогенной и аллогенной (материнской) сывороток на экспрессию молекул HLA-G и HLA-DR на лимфоцитах детей. Показано, что в группе детей с септальным ВПС, аутогенные и аллогенные сыворотки не подавляли экспрессию HLA-G и HLA-DR на лимфоцитах. В то же время в группе условно здоровых детей аутогенные и аллогенные (материнские) сыворотки подавляли экспрессию HLA-G и HLA-DR на лимфоцитах. Причем эффект подавления экспрессии как HLA-G, так и HLA-DR был значимо выше аллогенной сыворотки (материнской), чем аутогенной (p < 0,01). Данный эффект, вполне вероятно, определяется наличием аутои аллоиммунных антител к молекулам HLA-G и HLA-DR в сыворотке крови многорожавших женщин.
Супрессорная активность женской сыворотки по отношению к аллогенным (эмбриона/плода/ребенка) и аутогенным (собственным) молекулам HLA-G и HLA-DR определяет протективный эффект в отношении формировании септальных врожденных пороков сердца у потомства.

На сегодняшний день остаются сложными задачами диагностика и лечение тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных – врожденной пневмонии (ВП) и неонатального сепсиса (НС). Поиск чувствительных и специфичных диагностических маркеров тяжести бактериального воспалительного процесса, раннее и эффективное лечение имеют решающее значение для исхода и прогноза данных жизнеугрожающих заболеваний. Цель исследования – изучение влияния внутривенных иммуноглобулинов (ВВИГ) на негативно трансформированные субпопуляции нейтрофильных гранулоцитов (НГ) СD64^-CD16⁺СD32⁺СD11b⁺, СD64⁺CD16⁺СD32⁺СD11b⁺ и их функциональную активность у новорожденных с ВП и НС. Под наблюдением находилось 38 доношенных новорожденных. В группу 1 вошли 19 новорожденных с (ВП), их них 11 детей, получивших традиционную терапию и ВВИГ (группа 1.1), и 8 детей, находящихся на традиционной терапии (группа 1.2). В группу 2 вошли 19 детей с НС, из них 12 детей, получивших традиционную терапию и ВВИГ (группа 2.1), и 7 детей, находящихся на традиционной терапии (группа 2.2). Группа сравнения – 22 здоровых доношенных новорожденных. Тестирование системы НГ включало: определение методом проточной цитометрии количества субпопуляций НГ, одномоментно экспрессирующих CD11b CD64, CD32, CD16, и их фенотипических особенностей с учетом плотности экспрессии рецепторов (MFI); оценку фагоцитарной и микробицидной активности НГ. Установлена негативная трансформация субпопуляций CD64^-CD16⁺CD32⁺CD11b⁺НГ и CD64⁺CD16⁺CD32⁺CD11b⁺НГ при ВП и НС с наибольшей диагностической значимостью увеличения содержания субпопуляции CD64⁺CD16⁺CD32⁺CD11b⁺НГ по мере прогрессирования тяжести бактериального инфекционно-воспалительного процесса – при ВП в 18,7 раза, при НС в 52,3 раза, а также преобладающим снижением экспрессии мембранных рецепторов. Данные изменения фенотипа были сопряжены с нарушением фагоцитарной и киллинговой активности НГ. Эффект влияния ВВИГ на наиболее нарушенные механизмы антибактериального иммунитета связан не только с уменьшением дефицита IgG, но и с позитивным ремоделированием негативно трансформированных субпопуляций CD64^-CD16⁺CD32⁺CD11b⁺НГ и CD64⁺CD16⁺CD32⁺CD11b⁺НГ, улучшением эффекторных функций НГ, особенно при ВП. Так, после лечения ВВИГ сниженное количество субпопуляции СD64^-CD16⁺CD32⁺CD11b⁺НГ полностью восстановилось при ВП, а при НС увеличилось в 1,5 раза, а количество диагностически значимой субпопуляции СD64⁺CD16⁺CD32⁺CD11b⁺НГ значимо снизилось как при ВП (в 2 раза), так и при НС (в 2,6 раза), оставаясь выше содержания данной субпопуляции у здоровых новорожденных. Одновременно отмечалось восстановление или модулирующий характер изменений плотности экспрессии тригерных молекул в субпопуляциях НГ. Лимитирование негативной трансформации функционально-значимых субпопуляций НГ у новорожденных с ВП и НС сопровождалось позитивными клиническими эффектами – оптимизацией антибактериальной терапии, уменьшением длительности лечения, улучшением показателя летальности.

Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток применяется для лечения гемобластозов и некоторых других заболеваний. В зависимости от диагноза используют аутологичные клетки самого пациента, либо аллогенные, полученные от здорового родственного или неродственного донора. Для успешного проведения трансплантации необходимо достаточное количество заготовленных гемопоэтических клеток-предшественников. В настоящее время для их заготовки широко применяется стимуляция выхода в периферическую кровь гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (G-CSF) с последующим сбором методом лейкафереза. Гемопоэтические стволовые клетки покидают костномозговую нишу, образованную стромальным микроокружением, после разрыва удерживающих связей. Мезенхимальные стромальные клетки регулируют выход гемопоэтических предшественников, продуцируя различные цитокины и другие биологически активные вещества. Поэтому изучение функциональных свойств мезенхимальных клеток костного мозга может помочь в решении проблемы заготовки недостаточного числа гемопоэтических клеток, что встречается у пациентов с множественной миеломой.

Цель исследования - оценить зависимость результатов мобилизации гемопоэтических стволовых клеток от цитокинпродуцирующей способности мезенхимальных стромальных клеток костного мозга доноров и пациентов с множественной миеломой.

Результаты заготовки гемопоэтических предшественников изучили у 10 доноров (медиана возраста – 27 лет) и 18 пациентов с множественной миеломой (медиана возраста– 57 лет). У доноров выход гемопоэтических стволовых клеток в периферическую кровь стимулировали подкожным введением препарата G-CSF в дозе 10 мкг/кг/сут. Больным множественной миеломой назначали винорельбин в дозе 35 мг/м² поверхности тела с последующим введением препарата G-CSF (10 мкг/кг/сут подкожно). Из костного мозга, взятого до начала мобилизации, получали культуру мезенхимальных стромальных клеток и исследовали содержание интерлейкинов IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α и IFN-γ в супернатантах методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов реагентов производства АО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск). Пациенты с множественной миеломой в целом отличались высокой секрецией провоспалительного цитокина IL-2 (4,70 пг/мл vs 3,55 пг/мл у здоровых лиц, p=0,003) и низкой IFN-γ (0,41 пг/мл vs 2,14 пг/мл у здоровых лиц, p<0,001). Настоящее исследование показало, что у больных с неэффективной заготовкой гемопоэтических предшественников низкая секреция стромальными клетками IL-8 (308,08 пг/мл vs 561,29 пг/мл у здоровых лиц, p=0,04). Полученные результаты согласуются с литературными данными о важной роли IL-8 в мобилизации гемопоэтических стволовых клеток, что позволяет рассматривать IL-8 как информативный маркер для прогнозирования неэффективности заготовки гемопоэтических предшественников.

Экспериментальная медицина предоставляет научной общественности большой массив сведений о терапевтической эффективности пробиотических штаммов. Однако, с позиции доказательной медицины, перечень нозологий, контролируемых пробиотиками, ограничен антибиотико-ассоциированной диареей у взрослых и детей, диареей, ассоциированной с Clostridium difficile, острой инфекционной диареей у детей и взрослых, эрадикационной терапией, язвенным колитом и синдромом раздраженной кишки. В последнее время к этим заболеваниям прибавляются обоснованные рекомендации врачей для применения пробиотических препаратов с целью модулирования иммунитета. В продолжение представленного ряда заболеваний, учитывая проницаемость для патогенной и условно-патогенной микробиоты барьеров ЖКТ и иммунной системы, представляется логичным предположение об эффективности пробиотиков, как симбиотических регуляторов, в отношении нервной и сердечно-сосудистой систем. Также необходимо учитывать, что цивилизационным приобретением в человеческой популяции являются нарушения метаболизма в виде ожирения, с воспали тельным ответом низкой интенсивности, с характерным цитокиновым паттерном. В этой связи, нами предлагается научная гипотеза об эффективности пробиотических штаммов в отношении увеличения устойчивости миокарда к ишемическому-реперфузионному повреждению, благодаря их способности блокирования отдельных звеньев цитокинового каскада при формировании ответной воспалительной реакции, для последующей трансляции в клиническую практику.

Разработка и валидация новой экспериментальной модели синдрома системного воспалительного ответа (ССВО) на крысах самцах стока Wistar, включающей ожирение, острый воспалительный процесс толстой кишки и антибиотик-индуцированный дисбиоз, стала основой для исследования эффективности пробиотических препаратов в отношении устойчивости миокарда к ишемическомуреперфузионному повреждению (ИРП). У крыс с ССВО обнаружено значимое увеличение размера зоны инфаркта на 28% в экспериментах на изолированном перфузируемом сердце при глобальной ишемии-реперфузии. Существенные изменения лейкоцитарной формулы и иммунологических показателей, сопутствующие ССВО, корректировались введением смеси пробиотических штаммов L. acidophilus (LA-5) и B. animalis subsp. lactis (BB-12), а также изолированного штамма L. delbrueckii TS1-06. У крыс обеих групп с пробиотической коррекцией наблюдали уменьшение зоны инфаркта по сравнению с группой ССВО. Отмечены общие и специфические изменения IL-2, трансформирующего фактора роста-b (TGF-b) и фактора некроза опухолей-a (TNFa). Уменьшение размера инфаркта миокарда при помощи пробиотиков может быть связано с блокированием цитокинов первого порядка, что приводит к «разрыву» провоспалительного каскада. Подтверждена необходимость глубокого исследования механизмов кардиопротекции, опосредованной пробиотиками, в связи с перспективами их применения как симбиотической альтернативы биологическим препаратам, блокирующим основные провоспалительные цитокины.

Тирозиновая протеинфосфатаза (общий лейкоцитарный антиген СD45) регулирует FcᵧR-опосредованную передачу клеточных сигналов и секреторную функцию нейтрофильных гранулоцитов (НГ) при взаимодействии с иммунными комплексами антиген-антитело. Цель работы - изучить изменения в экспрессии CD45 на поверхности гранулоцитов крови человека при моделировании бактериемии ex vivo живыми клетками вакцинного штамма  Yersinia pestis EV НИИЭГ и оценить праймирующий эффект вакцины чумной живой (ВЧЖ) в условиях in vivo по данному показателю. Плотность экспрессии CD45 на НГ определяли методом проточной цитометрии в условных единицах интенсивности флуоресценции (MFI)  после окраски клеток реагентом меченых мышиных антител CD45-FITC (Backman Coulter, USA) при иммунофенотипировании лейкоцитов крови по Lyse/No Wash протоколу. У ранее не прививавшихся против чумы доноров (группа 1) значение показателя оценивали до и через 30 мин, 2 ч, 6 ч  после добавления  в цельную кровь клеток Y. pestis EV в дозе 10⁸ мк/мл, а также через 1 и 6 месяцев после противочумной вакцинации. У лиц,  ранее неоднократно прививавшихся ВЧЖ по эпидемиологическим показаниям (группа 2), экспрессию СD45 на гранулоцитах крови определяли перед очередной прививкой и  через 1, 6 месяцев спустя. Попадая в кровь человека, живые клетки вакцинного штамма Y. pestis EV уже через 30 мин индуцировали изменение фенотипа НГ, связанное с повышением в 3,5 раза поверхностной экспрессии СD45, которое сохранялось на достигнутом уровне в течение 6 ч. Интенсивность функциональной активации клеток  врожденного иммунитета по исследуемому показателю в опытах ex vivo зависела от степени устойчивости чумного микроба к  фагоцитозу и киллингу НГ.  In vivo аналогичный стимулирующий эффект на НГ периферической крови человека оказывала противочумная вакцинация. Под влиянием ВЧЖ экспрессия CD45 повышалась на НГ крови в группах 1 и 2  через месяц после прививки и изменения сохранялись  у добровольцев в течение 6 месяцев.  Полученные в работе экспериментальные данные могут отражать результат прайминга НГ липополисахаридом и другими антигенами Y. pestis. Зарегистрированная функциональная активация НГ по экспрессии тирозиновой протеинфосфатазы, вероятно, свидетельствует о формирования под влиянием ВЧЖ «иммунной памяти» на уровне рецепторов клеток врожденного иммунитета,  функционированием которой  объясняют развитие более быстрого и интенсивного антигенспецифического иммунного ответа  на повторное введение в организм чумной вакцины.

Полифенолы обладают широким спектром биологических эффектов, в том числе иммуномодулирующим. Изучение влияния флавоноидов на фагоцитарную активность профессиональных фагоцитов представляется достаточно перспективным направлением для их дальнейшего использования в качестве фармакологического (терапевтического) агента. К наиболее распространенным представителям флавоноидов с плейотропным действием относятся кверцетин и лютеолин. Углубленное изучение и понимание иммунотропных механизмов (в том числе на примере регуляции фагоцитоза) является необходимым условием для проведения адекватной фармакотерапии при инфекционных процессах, воспалительных заболеваниях неспецифической этиологии, аутоиммунных и онкологических состояниях. Цель работы – изучить влияние флавоноидов на фагоцитарную активность профессиональных фагоцитов (нейтрофилов) в системе in vitro. В работе использован биологический материал (венозная кровь) 30 практически здоровых человек (взрослые n = 15, дети n = 15). Исследование выполнено в соответствии с установленными международными правилами. В опытные пробы вносили 0,5 мг/л Luteolin (содержание основного вещества ≥ 98%) и Quercetin (содержание основного вещества ≥  95%) и инкубировали 20 мин при 37 °С. Процент фагоцитоза, фагоцитарное число (количество поглощенных формалинизированных эритроцитов барана одной клеткой нейтрофила) определяли с помощью световой микроскопии в контрольных и опытных образцах. В системе in vitro отмечен однонаправленный характер угнетения фагоцитоза кверцетином и лютеолином. Идентифицировано статистически значимое (p < 0,05) ослабление на 10% интенсивности фагоцитоза в опытных образцах крови, полученной от взрослых пациентов, относительно контрольных значений. При добавлении кверцетина и лютеолина в пробы крови, полученной от детей, отмечено статистически значимое (p < 0,05) снижение на 30% фагоцитоза по сравнению с контрольными величинами. Вместе с тем среднее значение процента фагоцитоза и фагоцитарного числа в образцах крови после добавления флавоноидов регистрировались в диапазоне референтных значений, что демонстрирует адекватность и физиологичность угнетения чрезмерной агрессивности компартментов врожденного иммунитета кверцетином и лютеолином. Установлено, что в указанной концентрации более выраженное супрессорное действие флавоноиды оказывали на фагоцитарную активность у детей. Моделирование иммунного ответа на примере индикаторных показателей фагоцитоза с его верификацией на экспериментальных моделях in vitro на нейтрофилах, полученных у практически здоровых взрослых и детей, позволяет расширить понимание механизма иммунотропного эффекта флавоноидов кверцетина и лютеолина для задач коррекции иммунопатологических состояний.

Самым сильным аллергеном амброзии (Ambrosia artemisiifolia) является antigen E (Amb a 1). У 97% пациентов с пыльцевой аллергией на амброзию в сыворотке крови обнаруживаются антитела IgE класса к Amb a 1 аллергену в совокупности с положительным кожным прик-тестом с аллергеном Amb a 1. В результате контакта сенсибилизированного человека с данным аллергеном в организме происходит одномоментное высвобождение из тучных клеток фермента – Homo sapiens tryptase alpha/beta 1 (TPSAB1). Особенностью этого фермента является отсутствие в организме человека его ингибитора. Нами были предприняты попытки определить наиболее значимые точки воздействия TPSAB1 после расщепления его на пептидные фрагменты. Пептидазное расщепление осуществлялось с использованием компьютерной программы Биоскан 9.14 ОДО «НИКП Ресан» (Беларусь) и базы данных Национального центра биотехнологической информации США (NCBI). Для вычислений и представления результатов использовали международный однобуквенный код аминокислотной последовательности. Данные о взаимодействии пептидов с белками человека получены с помощью программы SwissTargetPrediction. Исследуемый образец: Ambrosia artemisiifolia antigen E (Amb a 1) GenBank: AAA32665.1. Расщепление образца проведено с 1-й по последнюю – 396-ю аминокислоту. Длина фрагментов расщепления не задана. Фермент: Homo sapiens tryptase alpha/beta 1 (TPSAB1) Gene ID: 7177, updated on 13-May-2022. Тип фермента: эндопептидаза. Позиции расщепления: 1 r|x и 2 k|x. Аминокислотная последовательность Ambrosia artemisiifolia antigen E (Amb a 1) GenBank: AAA32665.1. Установлено, что в состав Ambrosia artemisiifolia antigen E (Amb a 1) входят 396 аминокислотных остатка. Получены 40 пептидных фрагментов расщепленного образца. Анализу лиганд-рецепторного взаимодействия подвергнуты пептиды длиной от 2 до 4 аминокислотных остатков, как имеющие наиболее сильный регуляторный потенциал (p1-4 mgik, р56-57 gk, р127-129 ldk, p143-145 gak, р274-276 mpr). Показано, что каждый из пептидов, входящих в состав Amb a 1, действует как лиганд для специфических рецепторов, опосредующих влияние на те или иные механизмы в организме больного. Дальнейшее изучение указанных взаимодействий позволило выявить наиболее значимые белки (ферменты), воздействие на которых антигена Ambrosia artemisiifolia antigen E (Amb a 1) приводит к изменению функциональной активности регуляторных систем организма человека, страдающего от аллергии.

Markers for identification of ER⁺/PR⁺ breast cancer (BC) risks and conversion of ER⁺/ER⁺ to ER^-/PR^- tumors are necessary for effective prevention and therapy of BC by the selective ER modifying drugs. Our purpose was to reveal the suggested associations of gene polymorphisms of ESR1 and ESR2 and antiidiotypic antibodies to estradiol (IgG₂-E2) with ER⁺/PR⁺ BC risk, and conversion of ER⁺/PR⁺ to ER-/PR- tumors and to study interrelations between gene variants of ESR and IgG₂-E2 in healthy women and BC patients. Polymorphic loci of ESR1 (rs2234693) and ESR2 (rs4986938) were studied by the real-time PCR in 370 healthy women and 1169 BC patients. ER and PR in the tumor tissues were detected by standard immunohistochemical techniques. Serum IgG₂-E2 were studied using non-competitive enzyme immunoassay. TT, TC and CC genotypes of ESR1 were revealed at the equal frequency in healthy women and stage I BC patients. GG homozygotes of ESR2 were detected rarely, but AA were more frequent in BC patients with ER⁺/PR⁺ tumors (stage I) than in healthy women (44.0% and 14.2% vs 52.7% and 8.4%, respectively; p = 0.005). Low levels of IgG₂-ES were revealed more rarely but high levels were detected more frequently in BC patients with ER⁺/PR⁺ tumors (stage I) than in healthy persons (39.8% vs 60.2%, and 58.0% vs 42.0%, respectively; p = 0.0002). Decreasing proportion of ER⁺/PR⁺ tumors and corresponding increase of ER-/PR- tumors from stage I to II–IV (71.7% to 58.9% and 13.9% to 23.1%; p = 0.006) were revealed only for the TC heterozygotes of ESR1. The same conversion of ER⁺/PR⁺ tumors to ER^-/PR^- was detected for the GG homozygotes of ESR2 (p = 0.004). A similar ER/PR changes were revealed in BC patients with high IgG₂-E2 levels (74.7% to 57.6% and 11.3%, to 25.0%, respectively, p < 0.0001). High and low IgG₂-E2 levels showed similar frequency at any genotypes of ESR1 and ESR2, either among healthy women, or in BC patients. ESR1-2 gene polymorphisms and serum IgG₂-E2 levels may be used as independent markers for prediction of ER⁺/PR⁺ breast cancer, and for assessment of ER⁺/PR⁺ to ER^-/PR^- tumor conversion during BC progression.

Диабетическая ретинопатия представляет распространенное осложнение сахарного диабета и особенно в пожилом возрасте, что обусловлено увеличением данной группы в популяции многих стран. Однако участие иммунной системы у пациентов с диабетической ретинопатией и в процессе старения не получило должного отражения в научных публикациях. Цель исследования – изучение содержания системных интерлейкинов у пациентов с диабетической ретинопатией с ускоренным и физиологическим старением. В клинических условиях обследовано 240 пациентов в возрасте 60-74 лет с диабетической ретинопатией и 115 пациентов такого же возраста без диабетической ретинопатии. Диагностика диабетической ретинопатии осуществлялась в соответствии с Клиническими рекомендациями Общероссийской ассоциации врачей –офтальмологов «Диагностика и лечение диабетической ретинопатии и диабетического макулярного отека». Биологический возраст обследованных определялся автоматически сфигмоманометром VaSera VS – 1500. Содержание интерлейкинов в плазме крови определялось иммуноферментным анализом с применением набора «Протеиновый контур». Установлено, что хронологический (календарный) возраст пациентов с диабетической ретинопатией и без диабетической ретинопатии не имел статистически значимых различий и составлял соответственно 70,9±0,7 лет и 70,2±0,8 лет (р>0,05). Однако биологический возраст в данных группах существенно (р<0,001) различался, составив 75,7±1,1 и 72,3±1,0 лет соответственно, что свидетельствует об ускоренном старении пациентов, страдающих диабетической ретинопатией. Изучение концентрации интерлейкинов крови у пациентов с диабетической ретинопатией с ускоренным старением по сравнению с пациентами с диабетической ретинопатией с физиологическим старением выявило статистически значимые различия по большинству проанализированных интерлейкинов. Особенно выраженное увеличение в плазме крови пациентов с диабетической ретинопатией с укоренным старением присуще IL-6, концентрация которого составила 25,7±1,8 пг/мл против 4,2±0,5 пг/мл у пациентов с диабетической ретинопатией с физиологическим старением (р<0,001). Значительное повышение интерлейкинов на системном уровне среди пациентов с диабетической ретинопатией с ускоренным старением установлено для IL-13 и IL-17. Содержание IL-13 у пациентов с диабетической ретинопатией с ускоренным старением достижимо 2,2±0,3 пг/мл против 0,7±0,2 пг/мл у пациентов с диабетической ретинопатией с физиологическим старением (р<0,001), IL-17 – 19,8±0,6 пг/мл против 8,4±0,9 пг/мл соответственно. Среди пациентов с диабетической ретинопатией с ускоренным старением повысилась достоверно также концентрация IL-1β, IL-3. Вместе с тем в плазме крови пациентов с диабетической ретинопатией с ускоренным старением по сравнению с пациентами с диабетической ретинопатией с физиологическим старением произошло статистически значимое снижение противовоспалительных интерлейкинов и особенно IL-10 до 7,4±0,6 пг/мл против 19,2±0,7 пг/мл (р<0,001). Следовательно, IL-6, IL-8, IL-13, IL-17, IL-4 и IL-10 следует использовать в качестве иммуннологических предикторов ускоренного старения у пациентов с диабетической ретинопатией.

Сходство клинических проявлений и некоторых патогенетических механизмов при ревматоидном артрите (РА) и остеоартрите (ОА) вызывает определенный интерес в изучении особенностей образования внеклеточных ловушек нейтрофилов (NETs) при данных заболеваниях костномышечной системы.
Цель – оценить образование внеклеточных ловушек циркулирующими периферическими нейтрофилами в зависимости от аутоиммунного воспаления при РА и реактивного воспаления при ОА.
Основную группу составили 39 больных РА, контрольную – 35 больных ОА, референтную – 33 условно здоровых лица. Нейтрофилы выделяли одноэтапным центрифугированием в ступенчатом градиенте йогексола. Стимулировали генерацию NETs форбол-12-миристат-13-ацетата (ФМА). Визуализация NETs осуществлялась методом флуоресцентной микроскопии.
У больных РА при включении в исследование активность по шкале DAS28 была ≤ 2,6 балла; больные ОА были вне обострения. В ходе динамического наблюдения у 17 больных РА выявлено повышение DAS28 > 3,2 балла, у 25 больных ОА – обострение.  Средняя доля NETs спонтанных и индуцированных в референтной группе составила 3,8 (2,6-5,0) % и 12,2 (9,0-15,4) % соответственно; у больных с неактивным РА – 5,9 (5,6-6,2) % и 26 (23,9-28,1) %, активным РА – 16,6 (16,1-17,1) % и 38,0 (36,6-39,4)% соответственно; при ОА вне обострения: 5,4 (5,2-5,6) % и 20,3 (18,3-22,3) %, при обострении ОА с развитием синовита: 13,1 (12,6-18,1) % и 28,3 (6,4-30,2) % соответственно. Прирост спонтанных NETs при активации РА – 181,4%, индуцированных – 46,2%; а при обострении ОА – 142,6% и – 39,4% соответственно. Темп прироста спонтанного образования NETs оказался выше индуцированного в 3,9 у больных РА и в 3,6 раза при ОА. Прирост спонтанных NETs относительно индуцированных выражен в большей степени при активном РА по сравнению с ОА с синовитом. Основное различие в составе NETs у больных активным РА (в 88% случаев) и ОА с синовитом (в 50% случаев) обусловлено содержанием цитруллиновых эпитопов (р = 0,03).
Переход РА из состояния ремиссии к активному воспалению и обострение ОА сопровождаются значительным приростом образования NETs, особенно спонтанного. При этом степень роста была выше при РА, что, по-видимому, свидетельствует о большей заинтересованности нейтрофилов в генерации NETs при аутоиммунном воспалении по сравнению с реактивным. Преобладание цитруллинированных эпитопов в составе NETs демонстрирует их влиянии на индукцию и поддержание аутоиммунной реакции к специфическим для РА аутоантигенам.

Гломерулонефриты (ГН) – группа иммуновоспалительных заболеваний почек с преимущественным поражением клубочков, трудно поддающихся лечению. Наибольшие проблемы доставляет лечение ГН с нефротическим синдромом, который зачастую имеет рецидивирующее течение. Цель исследования – изучение эффективности включения рекомбинантного интерлейкина-2 (rIL-2) в комплекс лечения ГН с с нефротическим синдромом. В исследование было отобрано 62 пациента с нефротической формой первичного ГН с частыми рецидивами, госпитализированных в нефрологическое отделение. Возраст больных – от 18 до 65 лет. Больным проводили стандартное обследование, а также иммунологические исследования до назначения противорецидивного лечения и через 12 месяцев от начала лечения: иммунофенотипирование лимфоцитов с идентификацией Т- и В-лимфоцитов, иммунорегуляторных и активированных субпопуляций Т-лимфоцитов, определение в моче уровней иммуноглобулинов IgM, IgG, IgA иммунотурбидиметрическим методом, провоспалительных цитокинов – IL-1β, IL-8, IL-17А и противовоспалительного цитокина IL-10 методом иммуноферментного анализа. В результате проведенного исследования у обследованных больных установлено увеличение показателей содержания Т-хелперных, активированных Т-лимфоцитов (CD8⁺HLA-DR⁺CD45⁺, CD3⁺CD8^brightCD38⁺) на фоне уменьшения числа Treg-клеток и повышенное содержание в моче провоспалительных цитокинов IL-1β, IL-8, IL-17А и иммуноглобулинов всех трех классов.

Когорта отобранных в исследование пациентов с ГН была разделена на две группы (основная группа и группа сравнения). Схема лечения больных основной группы включала помимо нефропротективной и стероидной терапии rIL-2, а группы сравнения – Циклофосфан. Независимо от применяемого способа в результате лечения снижались относительно исходных значений уровни белка, IgG и IL-17А в моче, уменьшалось содержание В-клеток и HLA-DR⁺-цитотоксических Т-лимфоцитов в крови. Отмеченные изменения были более выражены в основной группе больных и спустя 12 месяцев от начала лечения перечисленные показатели основной группы стали существенно различаться от таковых в группе сравнения. Сывороточный уровень креатинина, число Т-хелперных клеток и Treg-клеток, уровень IL-1β в моче не претерпевали существенных изменений в группе сравнения, в то время как в основной группе пациентов происходило снижение уровней креатинина в сыворотке крови и IL-1b в моче, уменьшалось число Т-хелперов и увеличивалось число Treg-клеток. В основной группе больных, леченных rIL-2, среднее число рецидивов за год уменьшилось в 4 раза, в сравниваемой группе – лишь в 1,2 раза. Терапия низкими дозами rIL-2 может рассматриваться как эффективная и безопасная альтернатива традиционной иммуносупрессивной терапии и как новый вариант таргетного лечения ГН с частыми рецидивами нефротического синдрома.

Во всем мире циркулирующие вирусы гриппа ежегодно приводят к серьезным медицинским и социально-экономическим последствиям. Вакцинация является наиболее эффективной и безопасной стратегией предотвращения гриппа и его осложнений. В целях снижения побочных эффектов при использовании живых вирусов широкое применение находят расщепленные и субъединичные гриппозные вакцины. Особенности формирования В-клеточного ответа на фоне иммунизации гриппозными вакцинами до настоящего времени остаются недостаточно изученными. В связи с этим, целью нашего исследования является изучение динамики субпопуляционного состава В-лимфоцитов периферической крови при иммунизации различными типами вакцин «Гриппол плюс», «Совигрипп» и «Ультрикс». Исследование проведено на базе клинического отделения ФГБУ «НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева» Минздрава России в эпидемический по гриппу сезон 2018-2019 гг. Образцы венозной крови были получены у 39 добровольцев до вакцинации, на 7-е и 21-е сутки после вакцинации. Субпопуляционный состав В-лимфоцитов оценивали методом проточной цитометрии с применением панели флюоресцентно-меченных антител к CD3, CD19, CD20, CD27, CD38, IgD, IgA (BioLegend, США). Для анализа использовали образцы криоконсервированных мононуклеаров с концентрацией 1 × 10⁶ клеток/образец. Обработку результатов проводили с помощью штатного программного обеспечения (Н., Cytexpert, Beckman Coulter, Inc., США) и дополнительного ПО Kaluza 2.0 software (Beckman Coulter, Inc., США). При статистическом анализе различия с данными до вакцинации оценивали с использованием U-теста Манна–Уитни и считали достоверными при p < 0,05.

В результате проведенных исследований были выявлены следующие популяции В-лимфоцитов (CD3^-CD19⁺): наивные В-клетки (CD20⁺CD27^-IgD⁺), непереключенные В-клетки памяти (CD20⁺CD27⁺IgD⁺), переключенные В-клетки памяти (CD20⁺CD27⁺IgD^-), эффекторные В-клетки памяти (CD20⁺CD27^-IgD^-), плазмобласты (CD20^-CD38^hiCD27^hi). Активацию В-клеточного иммунного ответа оценивали путем измерения относительного содержания CD38⁺B-клеток, относящихся к популяциям наивных, эффекторных В-лимфоцитов, переключенных и непереключенных В-клеток памяти. При анализе В-клеточного ответа после иммунизации исследуемыми вакцинами было выявлено увеличение как общего числа В-лимфоцитов, так и отдельных популяций, в том числе плазмобластов и активированных переключенных В-клеток памяти. Для адьювантных вакцин «Гриппол плюс» и «Совигрипп» по сравнению с расщепленной вакциной «Ультрикс» было показано раннее увеличение относительного количества плазмобластов на 7-й день исследования. При этом все три вакцины в одинаковой мере способствовали повышению числа активированных В-клеток памяти с переключенным изотипом антител. Таким образом, оценка В-клеточного ответа выявила значительные изменения в субпопуляционном составе В-лимфоцитов периферической крови в ответ на вакцинацию «Гриппол плюс», «Совигрипп» или «Ультрикс».

Основная причина отека при наследственном ангиоотеке (НАО) связана с повышенным уровнем брадикинина, вызванным дефицитом/изменением функциональной активности C1-INH, связанными с мутациями в гене SERPING1 или мутациями в генах F12, PLG, ANGPT1, KNG1, MYOF и HS3ST6 при нормальном уровне и функциональности ингибитора С1-эстеразы. Выявление новых мутаций, которые могут играть роль в патогенезе НАО, является важным шагом в понимании и лечении заболевания. Однако оценка или анализ влияния конкретных мутаций или комбинаций мутаций на организм остается серьезной проблемой. Целью работы являлся прогностический анализ in silico редкого синонимичного варианта NC_000003.12:g.186725098T>C гена KNG1 и его влияние на развитие симптомов НАО. Материалом служил образец цельной крови, полученный от женщины с клиническими проявлениями наследственного ангиоотека без снижения уровней и функции C1-ингибитора. Методы исследования включали секвенирование полного экзома пациентки, биоинформатический анализ мутации гена KNG1 с использованием ряда баз данных и веб-ресурсов. Результаты. При обработке данных полноэкзомного секвенирования нами обнаружен синонимичный вариант в гене KNG1 (экзон 4, изоформа 1): NC_000003.12:g.186725098T>C. Пациентка является гетерозиготным носителем варианта, который, по данным TOPMED, встречается с частотой 0,000004 (1:264690). Однако этот синонимичный вариант не имеет данных о патогенности и не помечен в базе данных ClinVar. Анализ показал, что вариант является патогенным из-за изменений, затрагивающих сайт сплайсинга. Потеря функции возможна в положениях с 28 по 132 (цистатин-кининогеновый домен) и в положениях со 120 по 628, среди которых особенно значимы положения 379-380/389-390 (где происходит расщепление калликреина), 380-389 (отвечает за образование Lys-брадикинина) и 381-389 (отвечает за образование брадикинина). Предположительно, выявленный вариант может приводить к развитию спорадических отеков несколькими путями, связанными с образованием брадикинина или его аналогов. А именно: (1) мутантный высокомолекулярный кининоген легче активируется калликреином и становится источником образования брадикинина посредством калликреин-кининовой системы; (2) механизм образования брадикинина претерпевает значительные изменения и приводит к образованию функционально активного, но аберрантного брадикинина, что изменяет его инактивацию ферментами с последующим увеличением периода полужизни; (3) изменения в положениях 380-389 приводят к изменениям в репродукции Lys-брадикинина, так что на последующих этапах он «легче» расщепляется до брадикинина аргининаминопептидазой. Таким образом, результаты нашего исследования указывают на возможную роль идентифицированного варианта гена KNG1 в развитии НАО. Кроме того, результаты также подчеркивают важность дальнейших исследований синонимичных вариантов гена KNG1, которые могут пролить свет на этиологию заболевания.

We present the results of studies related to antigen reactivity of T lymphocyte population under ex vivo conditions and the intensity of protective post-vaccination immunity to causative agent of brucellosis. Due to peculiarities of immunopathogenesis in brucellosis infection and prevailing role of adaptive T cell immunity for protection against the causative agent of infection, a predictive evaluation of protective immunity against brucellosis using CAST-tests is considered the most important issue in the field. There is an obvious need for ex vivo analysis of correlations between the activity of antigen stimulation of T cells, and the intensity of protective immunity raised after vaccination. A close direct relationship was established between the number of live microbial cells of Brucella abortus 19BA vaccine strain administered, and increase in ex vivo CD3 cell activation. A close correlation (r = -0.841 ÷ -0.966, R2 = 0.708 ÷ 0.969) was revealed between ex vivo values of antigen-induced stimulation of CD3 lymphocytes, and the levels of post-vaccination immunological protection against brucellosis infection. We have shown that, in biomodels vaccinated against brucellosis with a T lymphocyte stimulation coefficient of 50% or more (according to intensity of antigen-induced ex vivo CD25 expression), 100% protection against brucellosis infection was achieved after contamination with Brucella melitensis at a dose of 1 × 10³ live microbial cells. At the same time, a lack of a close correlation was noted between an increased dose of Brucella vaccine strain administered to biomodels, and a change in geometric mean of antibody titer (R2 = 0.357 ÷ 0.404), along with a weak relationship between the levels of agglutinins and immunological protection of biomodels from developing brucellosis infection and indices of bacterial contamination.

These results suggest an opportunity to quantify development and protective activity of T cell immunity to the causal agent of brucellosis based ex vivo levels of antigen reactivity of CD3 lymphocytes. A correlation analysis between the state of T cell antigen reactivity and immunological resistance to brucellosis infection indicated a high degree of closeness between these indices. The key influence on activity of protective immunity is exerted by the levels of antigen reactivity of T lymphocytes, whereas the quotient of antigenic stimulation in CD3⁺CD25⁺ population may be considered the most informative index of immune protective activity. The data obtained and the described methodology may be used as a predictive criterion in assessing protective level of cellular immunity to causative agent of brucellosis in vaccinated or recovering patients, testing the efficiency of specific prophylaxis in brucellosis and studying immunogenicity and protective properties of candidate vaccines against brucellosis.