В обзоре данных литературы и материалах собственных исследований анализируются ряд предрасполагающих и патогенетических факторов в развитии распространенной коморбидной патологии – диабет-ассоциированного остеоартрита (ДАОА). Поскольку у исследователей и клиницистов пока не сложилось четкого представления о ДАОА как отдельном клиническом варианте ОА, авторам не удалось найти в литературе работ, посвященных изучению роли генетических факторов в развитии именно этого варианта болезни. Особое внимание обращено на исследования, посвященные поиску перекрестных генов – кандидатов риска развития как СД 2 типа, так и ОА: PPARγ, FTO, ADIPOQ, RAGE, которые экспрессируют белки, потенциально способные участвовать в патогенезе как ОА, так и СД. Немногочисленные данные оказались противоречивы: в некоторых работах показана ассоциация перечисленных генов с развитием диабета и остеоартрита, в других исследованиях таких связей не выявлено. Рассмотрены работы, посвященные описанию клинической характеристики ОА, ассоциированного с СД. Показана патогенетическая роль хронической гипергликемии, инсулино-резистентности, конечных продуктов гликирования (advanced glycation age products, AGE) в развитии ОА и осложнений СД. Обсуждаются механизмы развития воспаления, гуморального и клеточного иммунного ответа к компонентам хряща, участие этих механизмов в прогрессии ОА. Подчеркивается сходство механизмов вялотекущего воспаления у больных ОА и сосудистых осложнений сахарного диабета. Заключается, что ДАОА не является простым механическим сочетанием двух заболеваний. ОА и СД имеют некоторые сходные генетические, патогенетические механизмы, особый фенотип болезни и нацеливают врача, ученого на новый, холистический (персонифицированный) подход к профилактике, диагностике, лечению и прогнозу этой коморбидной патологии. Рассматриваются возможности фармакотерапии ДАОА, учитывающей ключевую характеристику коморбидных заболеваний – эмерджентность (возникающие свойства). Предполагается, что изучение универсальных сетевых взаимодействий, происходящих на геномном, молекулярном, клеточном уровнях, которые приводят к поражению различных органов-мишеней, позволит успешно использовать подход «сетевой фармакологии» в терапии коморбидных заболеваний. Приводятся примеры успешного использования такого лечения при некоторых полипатиях (фармакологический агонист PPARα фенофибрат, ингибитор ГМГ-КоА редуктазы симвастатин при ОА, РА и псориазе). Обсуждается реальность этих подходов в терапии ДАОА. В частности, приводится пример использования в пилотных исследованиях донатора метильной группы адеметионина.

Breg угнетают патологические процессы при воспалительных и аутоиммунных заболеваниях. Регуляторные функции Breg обусловлены в основном секрецией IL-10. Роль Breg в гуморальном иммунном ответе не изучалась. В данной работе было исследовано влияние IL-10 и Breg при иммунном ответе В1- и В2-клеток мыши на Т-зависимые и Т-независимые антигены в модельной системе in vitro. В качестве Т-зависимого антигена использовали водорастворимый антиген бараньих эритроцитов, Т-независимого антигена 1 типа – LPS, Т-независимых антигенов 2 типа поливинилпирролидон и α(1→3) декстран. В1- и В2-лимфоциты были выделены из клеток перитонеальной полости и селезенки мышей линии СВА соответственно. Клетки культивировались в среде RPMI 1640 с 10% ЭТС и всеми необходимыми добавками с антигенами, IL-10 и без них. Число антитело- и иммуноглобулин-образующих клеток определяли методом ELISPOT.

Под действием водорастворимого антигена бараньих эритроцитов число антитело- и иммуноглобулин-образующих клеток в культурах В1- и В2-лимфоцитов возрастало. Добавление IL-10 приводило к снижению числа антителопродуцентов в среднем на 27%. IL-10 снижал также число индуцированных LPS антитело- и иммуноглобулин-образующих клеток в культуре В2-лимфоцитов на 75%. Под действием IL-10 в культуре В1-клеток, активированных Т-независимыми антигенами 2 типа, число антителопродуцентов уменьшалось в среднем на 50%.

Для изучения функциональной активности Breg выделяли из клеток перитонеальной полости и селезенки мышей линии СВА. Количество Breg после активации В-клеток LPS, иономицином и форболовым эфиром возрастало в 20 раз (с 4 до 96%). Основным изотипом иммуноглобулинов, секретируемых Breg, являлся IgM. При чистоте Вreg 96% иммуноглобулины секретировали ~12% этих клеток. Это означает, что некоторая часть Breg одновременно синтезирует иммуноглобулины и IL-10.

Получение высокоочищенных Breg и использование трансвеллов позволило исследовать бесконтактное влияние Breg на иммунный ответ в культуре спленоцитов xid-мышей линии CBA/N. Было установлено, что как специфический, так и поликлональный ответ в культуре этих клеток на водорастворимый антиген бараньих эритроцитов Breg угнетали. Таким образом, Breg участвуют в гуморальном иммунном ответе, подавляя функциональную активность спленоцитов мышей линии CBA/N на Т-зависимый антиген. Очевидно, что сущеcтвенную роль в этом играет секретируемый Breg IL-10.

С помощью молекулярно-генетических методов исследовали уровень экпрессии мРНК генов Glut1, mTOR и AMPK1α в ПЛУ крыс с экспериментальным стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом (ЭСИСД) и после введений метформина. Для определения уровня мРНК исследуемых генов проводили ОТ-ПЦР в реальном времени на амплификаторе CFX96™ Real-Time PCR Detection Systems (“Bio-Rad Laboratories, Inc.”, США). Иммунопозитивные mTOR+ лимфоциты были идентифицированы с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител. Установлено, что гипергликемия вызывала транскрипционную индукцию генов транспортеров глюкозы Glut1 (в  9,9-28,9 раз, p < 0,05) и  протеинкиназы mTOR (в  5,3-3,3 раза, p < 0,05) в клетках ПЛУ. Развитие диабета также сопровождалось увеличением общего числа mTOR+ клеток в ПЛУ на 5 неделе патологического процесса на 24-34% (р < 0,05) и концентрации мишени рапамицина в иммунопозитивных клетках. Введения метформина диабетическим крысам приводили к увеличению уровня мРНК гена AMPK1α на 87% (p < 0,05) на 3 неделе и в 38 раз (p < 0,05) на 5 неделе развития ЭСИСД и угнетению экспрессии mTOR в ПЛУ (в 3-14,7 раз, p < 0,05), сопровождаясь снижением на 40% (р < 0,05) суммарной плотности mTOR+ клеток в мякотных тяжах ПЛУ у животных с 5-ти недельным ЭСИСД.

Интерфероны I типа являются мощными индукторами дифференцировки моноцитов в дендритные клетки (ДК), однако чувствительность таких ДК к толерогенному эффекту глюкокортикоидов ранее не исследовалась. Целью работы явилось изучение влияния дексаметазона на созревание и функции интерферон-альфа-индуцированных ДК (IFN-ДК) здоровых доноров. ДК генерировали из моноцитов крови, которые культивировали в течение 5 суток с GM-CSF и IFNα в отсутствие и присутствии декасаметазона (10-6 M), вносимого на 3 сутки. Добавление дексаметазона блокировало созревание IFN-ДК, что проявлялось возрастанием доли CD14+ клеток и снижением содержания CD83+ клеток. Дексаметазон не оказывал значимого влияния на экспрессию HLADR, CD86 и B7-H1, однако 2-кратно усиливал экспрессию толерогенной молекулы TLR-2. Наряду с подавлением созревания IFN-ДК, дексаметазон ингибировал продукцию ими провоспалительных/Th1-цитокинов (TNFα, IL-1, IL-2, IFNγ, IL-12) и хемокинов (MIP-1α, RANTES). IFN-ДК, генерированные в присутствии дексаметазона, отличались 2-кратным снижением аллостимуляторной активности в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ). При этом способность IFN-ДК стимулировать пролиферативный ответ Т-клеток в алло-СКЛ прямо коррелирует с экспрессией на ДК молекулы CD83 и обратно – с экспрессией СD14 и TLR-2. Оценка Th1-/Th2-поляризующей активности IFN-ДК показала, что дексаметазон оказывал выраженное ингибирующее влияние на способность ДК стимулировать Т-клетки к продукции IFNγ, тогда как супрессорный эффект на способность ДК стимулировать продукцию IL-6 был менее выраженным, что свидетельствует о доминировании Th2- поляризующей активности IFN-ДК под влиянием дексаметазона. В целом показано, что IFN-ДК чувствительны к толерогенному действию дексаметазона и, следовательно, могут опосредовать иммуномодулирующий эффект глюкокортикоидной терапии, а также рассматриваться в качестве новых кандидатов для разработки толерогенных лечебных ДК-вакцин при аутоиммунной патологии.

Изучено содержание VEGF-A в сыворотке крови, слезной жидкости, стекловидном теле пациентов при различных клинических вариантах осложненной пролиферативной диабетической ретинопатии (ПДР). Обследованы 50 больных сахарным диабетом (I, II тип), 12 пациентов с регматогенной отслойкой сетчатки и 15 здоровых лиц. Выявлено, что осложненная ПДР ассоциируется с повышением уровня VEGF-A в сыворотке крови и слезной жидкости пациентов по сравнению с та- ковым больных со стабильной ПДР и здоровых лиц, а также высоким содержанием VEGF-A в стекловидном теле, достоверно превосходящим значения концентрации этого цитокина при регматогенной отслойке сетчатки. Наиболее тяжелые клинические проявления осложненной ПДР, интраоперационные геморрагические осложнения ассоциировались с резким повышением VEGF-А в сыворотке крови и стекловидном теле, отражавшим нарушения на локальном и системном уровнях.

Исследователями предложен новый методический подход к экспресс-оценке степени интенсивности специфической сенсибилизации при остром бруцеллезе, обладающий высокой чувствительностью – 96,6%, специфичностью – более 95,7%. Выявлено наличие прямой связи интенсивности специфической IgE-зависимой сенсибилизации с формированием у больных бруцеллезом иммуносупрессивного состояния: снижение общего количества CD3+ клеток на 17,9%, CD3+CD4+ – на 13,3%, CD16+CD56+ – на 4,39%, фагоцитарной активности нейтрофилов крови – в среднем на 25,8%. Показано, что повышение степени реагин-обусловленной аллергизации при бруцеллезе тесно ассоциировано с формированием выраженной иммуносупрессии.

Были обследованы 47 практически здоровых лиц и 82 больных бронхиальной астмой (БА): 42 с аллергической БА и 40 с неаллергической БА. Экспрессию мРНК FоxP3 оценивали путем про- ведения ПЦР с обратной транскрипцией (RT-PCR).

Полученные данные показывают, что у больных бронхиальной астмой (независимо от клинико-патогенетического варианта) отмечается снижение уровня экспрессии мРНК FoxP3 по сравнению с контрольной группой. При этом больные АБА и НАБА тяжелой степени имеют показатели экспрессии мРНК FoxP3, наименьшие посравнению со средней и легкой степенями тяжести заболевания.

Выявленное снижение экспрессии мРНК FoxP3 в мононуклеарах периферической крови и повышение уровня IL-17 в сыворотке крови больных бронхиальной астмой может рассматриваться как проявление выраженного воспалительного процесса на фоне, вероятно, существующего дефекта регуляции экспрессии транскрипционного фактора FoxP3, что заставляет предполагать его ключевую роль в регуляции активности воспалительного процесса при бронхиальной астме.

Целью исследования явилось изучение особенностей фенотипического состава В-лимфоцитов в периферической крови у больных хроническим эндометритом и аднекситом. Обследовано 89 женщин репродуктивного возраста (от 18 до 45 лет) с хроническим эндометритом (48 чел.) и аднекситом (41 чел.). В качестве контроля обследовано 98 здоровых женщин аналогичного возрастного диапазона. Исследование фенотипического состава В-лимфоцитов проводили методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител в следующих панелях: CD5-FITC/CD23-PE/ CD19-ECD/CD45-PC5/CD27-PC7. Обнаружено, что в периферической крови женщин с хроническими эндометритами и аднекситами значительно снижается содержание В-лимфоцитов. Понижение их количества определяется пониженными уровнями как B2- (основная фракция В-лимфоцитов), так и В1-клеток (минорная фракция), что определяет недостаточную реактивность специфического гуморального иммунитета, в том числе и на слизистых оболочках. Однако если при эндометрите наблюдается снижение только процентного количества В2-лимфоцитов, то при аднексите выявляется понижение и относительного, и абсолютного уровня содержания данной субпопуляции В-клеток. Особенностью фенотипического состава В-лимфоцитов при хронических эндометритах и аднекситах является так- же понижение содержания наивных В-лимфоцитов в крови. Причем у больных аднекситами уровень наивных В-клеток понижается более выраженно, чем при эндометритах. В качестве функционального маркера В-лимфоцитов была исследована экспрессия CD23-антигена (низкоаффинный рецептор к IgE). Доказано, что у больных хроническими эндометритами в периферической крови снижается количество всех исследуемых субпопуляций В-лимфоцитов, экспрессирующих CD23. При хронических аднекситах у женщин количество различных фракций В-клеток, экспрессирующих CD23-антиген, также снижено, в том числе и относительно уровней, выявленных у больных хроническими эндометритами. Более выраженные нарушения со стороны В-клеточного иммунитета выявлены при хронических аднекситах, что связано с большей площадью локализации инфекционно-воспалительного процесса (задействована не только слизистая матки, но и придатков) и клиническим проявлением заболевания. Полученные результаты определяют необходимость оценки фенотипического состава В-лимфоцитов как маркеров неадекватного иммунного ответа при инфекционно-воспалительных заболеваниях органов малого таза и проведение эффективной иммунотерапии для повышения эффективности лечения.

Вирусный гепатит С, будучи наиболее частой причиной поражения печени, представляет глобальную проблему, поскольку характеризуется широкой распространенностью, высокими показателями хронизации и значительно повышает риск возникновения цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Многочисленными исследованиями показано, что ключевую роль в патогенезе и исходе инфекции, обусловленной вирусом гепатита С, играют антиген-специфические CD4+ и CD8+T-клетки. Развитие сильного устойчивого и мультиэпитопного Т-клеточного ответа приводит к элиминации вируса, тогда как несостоятельность адаптивного Т-клеточного ответа ассоциируется с персистенцией вируса. В настоящем обзоре приводятся данные о патогенетической значимости Т-клеточного ответа в элиминации вируса, вирусной персистенции и развитии гепатита, а также обсуждаются возможные механизмы несостоятельности Т-клеточного ответа при хронической инфекции.

Выявление свободных легких цепей (СЛЦ) иммуноглобулинов (Ig) и их соотношения (каппа/лямбда коэффициент) используют при диагностике и мониторинге миеломной болезни и других гаммапатий, первичного амилоидоза и рассеянного склероза. Разработанный ранее метод детекции СЛЦ, основанный на применении моноклональных антител (МКАТ) против криптических и постоянно экспонируемых эпитопов СЛЦ, не обеспечивал выявления редких вариантов белков Бенс-Джонса лямбда-типа и значительной части свободных лямбда-цепей, экскретируемых с мочой. Для усовершенствования метода использовано новое МКАТ (1С8) изотипа IgG2b, которое связывает СЛЦ лямбда-типа, но не взаимодействует сцелостными молекулами IgG, IgA иIgM. МКАТ распознает эпитоп лямбда цепей, который присутствует на антигене в циркулирующей крови здоровых доноров и пациентов с миеломной болезнью, не разрушается и не маскируется в процессе почечной фильтрации. Цель исследования состояла в определении основных характеристик новой системы и в оценке ее диагностических возможностей при выявлении моноклональных гаммапатий. В качестве калибраторов использованы смеси белков Бенс-Джонса каппа- или лямбда-типа, выделенных из мочи пациентов с миеломной болезнью. Предложенный метод позволяет выявлять в сыворотке и в моче СЛЦ каппа- и лямбда-типа в интервале концентраций от 1 до 100 нг/мл, что на три порядка превышает возможности метода Freelite, основанного на использовании поликлональных антител. Предложенный метод позволяет выявлять сопоставимые концентрации СЛЦ и вычислять коэффициент каппа/ лямбда. Метод обеспечивает выявление в сыворотке и моче СЛЦ в присутствии 10-тысячекратного избытка целостных молекул IgG. Калибровочные графики для определения концентраций СЛЦ обоих типов имеют в логарифмической системе координат вид линейных зависимостей с одинаковым углом наклона. Порог детекции СЛЦ каппа- и лямбда-типа равен 5 и 3 нг/мл соответственно. В сыворотках крови здоровых доноров средние величины концентраций (М±SD) свободных каппа-цепей составили 6,7±2,1, в моче – 4,2±3,8 мкг/мл. Соответствующие значения для лямбда-цепей составили 4,7±1,96 и 1,6±1,0 мкг/мл. Величины коэффициентов каппа/лямбда в сыворотке крови и моче сопоставимы с данными, приводимыми в литературе. В сыворотках и моче пациентов с множественной миеломой выявлены моноклональные СЛЦ того же типа, что и парапротеин, обнаруженный в сыворотке крови с помощью электрофореза с последующей иммунофиксацией. Значения коэффициентов каппа/лямбда при этом соответствовали типу выявленной гаммапатии.