Субпопуляционный состав лимфоцитов цереброспинальной жидкости детей с острой респираторной вирусной инфекцией, протекающей с синдромом менингизма

Актуальность изучения особенностей интратекального клеточного иммунного ответа на инфекции центральной нервной системы обусловлена ограниченностью имеющихся сведений о механизмах иммунной защиты мозга в норме и патологии. Использование в клинической лабораторной диагностике метода многоцветной проточной цитометрии позволило углубленно изучать клеточный состав биологических жидкостей, включая цереброспинальную жидкость (ЦСЖ). Однако в современной литературе данные о субпопуляционном составе лимфоцитов ЦСЖ единичны. Существенной проблемой остается получение референсных значений. Исследование состава пула лимфоцитов ЦСЖ у пациентов с подозрением на инфекционное поражение мозга, не подтвержденным проведенным обследованием, может явиться одним из возможных решений проблемы. К числу таких заболеваний относятся острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ), протекающие с синдромом менингиз-ма. Цель работы — охарактеризовать субпопуляционный состав лимфоцитов ЦСЖ детей с ОРВИ без менингита для получения базисных (контрольных) значений в диагностике воспалительных заболеваний ЦНС. Исследован субпопуляционный состав лимфоцитов ЦСЖ 27 детей, переносящих ОРВИ с синдромом менингизма, методом проточной цитометрии на анализаторе FACSCalibur с использованием реагентов BD MultiTEST IMK Kit и последующей обработкой данных с помощью программы FlowJo. Исследовано содержание основных: Т-клеток (CD3⁺), Т-хелперов (CD3⁺CD4⁺Th), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3⁺CD8⁺CTL), натуральных киллеров (СD3^-CD16⁺CD56⁺NK), В-клеток (CD3^-CD19⁺) и малых субпопуляций лимфоцитов: двойных позитивных (DP) (CD3⁺CD4⁺CD8⁺) и двойных негативных (DN) (CD3⁺CD4^-CD8^-) Т-клеток, NKT (СD3⁺CD16⁺CD56⁺), CD3⁺CD8^bright, CD3⁺CD8^dim, CD3^-CD8⁺NK. Статистическая обработка данных выполнена с использованием стандартной программы GraphPad Prism 5. Среди основных популяций в ЦСЖ выявлено доминирование Т-лимфоцитов (96,2%) и их субпопуляций — CD4Th (53,4%) и CD8⁺CTL (28,2%) — при незначительном количестве NK (2,2%) и B-лимфоцитов (0,7%). Среднее относительное содержание малых субпопуляций — DN или DP Т-клеток и NKT-клеток — составило 5,3, 4,0 и 9% соответственно. Выявлены возрастные особенности содержания основных и малых субпопуляций. C увеличением возраста у детей в ЦСЖ нарастает относительное количество CD3⁺T^-KneTOK и CD4⁺Th (как и соотношение CD4/CD8) и снижается доля NK, а также DN и CD3⁺CD8^dimТ-лимфоцитов. Полученные результаты характеризуют особенности лимфоцитарного пула ЦСЖ у детей без воспалительного процесса в ЦНС и могут быть использованы в качестве контроля (отсутствие признаков воспаления в ЦСЖ) при изучении иммунопатогенеза нейроинфекций и других воспалительных заболеваний ЦНС у детей разных возрастных групп.

1. Алексеева Л.А., Железникова Г.Ф., Жирков А.А., Скрипченко Н.В., Вильниц А.А., Монахова Н.Е., Бессонова Т.В. Субпопуляции лимфоцитов и цитокины в крови и цереброспинальной жидкости при вирусных и бактериальных менингитах у детей // Инфекция и иммунитет, 2016. Т. 6, № 1. С. 33-44. doi: 10.15789/2220-7619-2016-1-33-44.

2. Балмасова И.П., Венгеров Ю.Я., Раздобарина С.Е, Нагибина М.В. Иммунопатогенетические особенности бактериальных гнойных менингитов // Эпидемиология и инфекционные болезни, 2014. Т. 19, № 5. С. 17-22.

3. Скрипченко Н.В., Алексеева Л.А., Железникова Г.Ф. Ликвор и его клиническое значение при инфекционных заболеваниях нервной системы // Педиатр, 2011. Т. 2, № 3. С. 21-31.

4. Хайдуков С.В., Байдун Л.В. Современные подходы к оценке клеточной составляющей иммунного статуса // Медицинский алфавит, 2015. Т. 2, № 8. С. 44-51.

5. Alvermann S., Hennig C., Olaf S., Heinz W., Stangel M. Immunophenotyping of cerebrospinal fluid cells in multiple sclerosis in search of biomarkers. JAMA Neurology, 2014, Vol. 71, no. 7, pp. 905-912.

6. Campbell J.P., Guy K., Cosgrove C., Florida-James G.D., Simpson R.J. Total lymphocyte CD8 expression is not a reliable marker of cytotoxic T-cell populations in human peripheral blood following an acute bout of high-intensity exercise. Brain. Behav. Immun., 2008, Vol. 22, no. 3, pp. 375-380.

7. d’Acquisto F., Crompton T. CD3+CD4-CD8- (double negative) T cells: saviours or villains of the immune response? Biochem. Pharmacol., 2011, Vol. 82, no. 4, pp. 333-340.

8. Das G., Augustine M. M., Das J., Bottomly K., Ray P., Ray A. An important regulatory role for CD4+CD8aa T cells in the intestinal epithelial layer in the prevention of inflammatory bowel disease. PNAS, 2003, Vol. 100, no. 9, pp. 5324-5329.

9. de Graaf M.T., Smitt P.A., Luitwieler R.L., van Velzen C., van den Broek P.D., Kraan J., Gratama J.W. Central memory CD4+T cells dominate the normal cerebrospinal fluid. Cytometry Part B (Clinical Cytometry), 2011, Vol. 80, no. 1, pp. 43-50.

10. Eller M.A., Goonetilleke N., Tassaneetrithep B., Eller L.A., Costanzo C., Johnson S., Betts M.R., Krebs S.J., Slike B.M., Nitayaphan S., Rono K., Tovanabutra S., Maganga L., Kibuuka H., Jagodzinski L., Peel S., Rolland M., Marovich M.A., Kim J.H., Michael N.L., Robb M.L., Streeck H. Expansion of inefficient HIV-specific CD8+ T cells during acute infection. J. Virol., 2016, Vol. 90, no. 8, pp. 4005-4016.

11. Ichiyama T., Kajimoto M., Matsushige T., Shiraishi M., Suzuki Y., Furukawa S. Mononuclear cell subpopulations in CSF and blood of children with bacterial meningitis. J. Infect., 2009, Vol. 58, no. 1, pp. 28-31.

12. Kitchen S.G., Jones N.R., LaForge S., Whitmire J.K., Vu B.A., Galic Z., Brooks D.G., Brown S.J., Kitchen C.M., Zack J.A. CD4 on CD8+ T cells directly enhances effector function and is a target for HIV infection. PNAS, 2004, Vol. 101, no. 23, pp. 8727-8732.

13. Subira D., Castanon S., Aceituno E., Hernandez J., Jimenez-garofano C., Jimenez A., Jimenez A.M., Roman A., Orfao A. Flow cytometric analysis of cerebrospinal fluid samples and its usefulness in routine clinical practice. Am. J. Clin. Pathol., 2002, Vol. 117, no. 6, pp. 952-958.

14. Svenningsson A., Andersen O., Edsbagge M., Stemme S. Lymphocyte phenotype and subset distribution in normal cerebrospinal fluid. J. Neuroimmunol., 1995, Vol. 63, no 1, pp. 39-46.