КЛОНИРОВАНИЕ, ЭКСПРЕССИЯ И ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНОГО ПОЛИПЕПТИДА НА ОСНОВЕ С5a ПЕПТИДАЗЫ СТРЕПТОКОККОВ ГРУППЫ В

Полученный с помощью полимеразной цепной реакции фрагмент гена, кодирующий N-терминальную аминокислотную последовательность С5а пептидазы стрептококка группы В (СГВ), был проклонирован в гетерологичной системе E. coli. Рекомбинантный полипептид SCPB1 был экспрессирован в E. coli и аффинно очищен с помощью Ni-сефарозы. Молекулярная масса SCPB1 оказалась равной 43,0±0,5 kDa. Иммуногенные свойства SCPB1 изучали в опытах по иммунизации лабораторных животных. Максимальный титр специфических антител класса G к SCPB1 в иммунных сыворотках (1:5,1 x 104 и 1:1,6 x 106 для мышей и кроликов соответственно) позволяет утверждать, что SCPB1 обладает
иммуногенностью. Кроме того, в сыворотках от женщин, перенесших СГВ-инфекцию, также обнаруживались антитела к SCPB1, что свидетельствует о гуморальном иммунном ответе человеческого организма на исследуемую часть С5а пептидазы. Протективные свойства антител к SCPB1 были продемонстрированы in vitro (опсонофагоцитарный тест) и in vivo (модель генерализованной инфекции у мышей).

1. Грабовская К.Б., Леонтьева Г.Ф., Мерингова Л.Ф., Воробьева Е.И., Суворов А.Н., Тотолян А.А.Протективные свойства некоторых поверхностных рекомбинантных полипептидов стрептококков группы В//ЖМЭИ. -2007. -№ 5. -С. 44-51.

2. Мерингова Л.Ф., Войцеховский Б.Л., Духин А.И., Крамская Т.А., Поляк Р.Я. Применение методов химической кинетики для оценки аффинитета циркулирующих свободных и связанных с антигеном антител (модель экспериментальный грипп)//Иммунология. -1986. -№ 6. -С. 48-51.

3. Baker C.J., Rench M.A., Edwards M.S. Immunization of pregnant woman with a polysaccharide vaccine of Group B streptococci//N. Engl. J. Med. -1988. -Vol. 319, N 18. -Р. 1180-1185.

4. Beckmann C., Waggoner J.D., Harris T.O., Tamura G.S., Rubens C.E. Identification of novel adhesins from group B streptococci by use of phage display reveals that C5a peptidase mediates fibronectin binding//Infect. Immun. -2002. -Vol. 70, N 6. -Р. 2869-2876.

5. Bohnsack J.F., Chang J.K., Hill H.R. Restricted ability of Group B Streptococcal C5a-asa to inactivate C5a prepared from different animal species//Infect. Immun. -1993. -Vol. 61. -N 4. -P. 1421-1426.

6. Chen C.C., Cleary P.P. Complete nucleotide sequence of the streptococcal C5a peptidase gene of Streptococcus pyogenes//J. Biol. Chem. -1990. -Vol. 265, N 6. -Р. 3161-3167.

7. Cheng Q., Debol S., Lam H., Eby R., Edwards L., Matsuka Y., Olmsted S., Cleary P. Immunization with C5a Peptidase or Peptidase-Type III Polysaccharide Conjugate Vaccines Enhances Clearance of Group B Streptococci from Lungs of Infected Mice//Infect. Immun. -2002. -Vol. 70, N 11. -Р. 6409-6415.

8. Cheng Q., Stafslien D., Purushothaman S.S., Cleary P. The group B streptococcal C5a peptidase is both a specific protease and an invasion//Infect. Immun. -2002. -Vol. 70, N 5. -P. 2408-2413.

9. Cheng, Q., Carlson B., Pillai S., Eby R., Edwards L., Olmsted S.B., Cleary P. Antibody against surface-bound C5a peptidase is opsonic and initiates macrophage killing of group B streptococci//Infect. Immun. -2001. -Vol. 69, N 4. -Р. 2302-2308.

10. Chmourigina Suvorov A.N., Ferrieri P., Cleary P.P. Conservation of the C5a peptidase genes in group A and B streptococci//Infect. Immun. -1996. -Vol. 67, N 7. -P. 2387-2390.