mimmunМедицинская иммунологияMedical Immunology (Russia)1563-06252313-741XSPb RAACI10.15789/1563-0625-2009-1-7-14mimmun-34Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESКЛОНИРОВАНИЕ, ЭКСПРЕССИЯ И ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНОГО ПОЛИПЕПТИДА НА ОСНОВЕ С5a ПЕПТИДАЗЫ СТРЕПТОКОККОВ ГРУППЫ ВCLONING, EXPRESSION AND STLJDY OF IMMIJNOLOGICAL PROPERTIES OF THE STREPTOCOCCI GROUP B C5A PEPTIDASE RECOMBINANT PROTEINДупликН. В.DuplikN. V.nadezhdaduplik@gmail.comКоролеваИ. В.KorolevaI. V.nadezhdaduplik@gmail.comСуворовА. Н.SuvorovA. N.nadezhdaduplik@gmail.comГосударственное учреждение «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН», Санкт-ПетербургRussian Federation200908072014111714Copyright © Дуплик Н.В., Королева И.В., Суворов А.Н., 20142014Дуплик Н.В., Королева И.В., Суворов А.Н.Duplik N.V., Koroleva I.V., Suvorov A.N.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.mimmun.ru/mimmun/article/view/34

Полученный с помощью полимеразной цепной реакции фрагмент гена, кодирующий N-терминальную аминокислотную последовательность С5а пептидазы стрептококка группы В (СГВ), был проклонирован в гетерологичной системе E. coli. Рекомбинантный полипептид SCPB1 был экспрессирован в E. coli и аффинно очищен с помощью Ni-сефарозы. Молекулярная масса SCPB1 оказалась равной 43,0±0,5 kDa. Иммуногенные свойства SCPB1 изучали в опытах по иммунизации лабораторных животных. Максимальный титр специфических антител класса G к SCPB1 в иммунных сыворотках (1:5,1 x 104 и 1:1,6 x 106 для мышей и кроликов соответственно) позволяет утверждать, что SCPB1 обладаетиммуногенностью. Кроме того, в сыворотках от женщин, перенесших СГВ-инфекцию, также обнаруживались антитела к SCPB1, что свидетельствует о гуморальном иммунном ответе человеческого организма на исследуемую часть С5а пептидазы. Протективные свойства антител к SCPB1 были продемонстрированы in vitro (опсонофагоцитарный тест) и in vivo (модель генерализованной инфекции у мышей).

Molecular mass of SCPB1 was estimated to be equal to 43.0±0.5 kDa. Immunization experiments were performed in laboratory animals to investigate the SCPB1 immunogenic properties. Maximum titers of IgG antibodies against SCPB1 (1:5,1 х 104 и 1:1,6× x 106 for mice and rabbits, respectively) indicated to SCPB1 immunogenicity. Moreover, the antibodies against SCPB1 were revealed in sera from women infected with GBS thus designating the humoral immune response of human organism to C5a peptidase fragment under study. Protective properties of anti-SCPB1 antibodies against were demonstrated by experiments in vitro (opsonophagocytosis), and in vivo (a model of GBS infection in mice).

стрептококк группы ВС5а пептидазарекомбинантный полипептид SCPB1иммуногенностьантителаstreptococcus group BС5а peptidaserecombinant polipeptide SCPB1immunogenesityantibodiesReferencesГрабовская К.Б., Леонтьева Г.Ф., Мерингова Л.Ф., Воробьева Е.И., Суворов А.Н., Тотолян А.А.Протективные свойства некоторых поверхностных рекомбинантных полипептидов стрептококков группы В//ЖМЭИ. -2007. -№ 5. -С. 44-51.Грабовская К.Б., Леонтьева Г.Ф., Мерингова Л.Ф., Воробьева Е.И., Суворов А.Н., Тотолян А.А.Протективные свойства некоторых поверхностных рекомбинантных полипептидов стрептококков группы В//ЖМЭИ. -2007. -№ 5. -С. 44-51.Мерингова Л.Ф., Войцеховский Б.Л., Духин А.И., Крамская Т.А., Поляк Р.Я. Применение методов химической кинетики для оценки аффинитета циркулирующих свободных и связанных с антигеном антител (модель экспериментальный грипп)//Иммунология. -1986. -№ 6. -С. 48-51.Мерингова Л.Ф., Войцеховский Б.Л., Духин А.И., Крамская Т.А., Поляк Р.Я. Применение методов химической кинетики для оценки аффинитета циркулирующих свободных и связанных с антигеном антител (модель экспериментальный грипп)//Иммунология. -1986. -№ 6. -С. 48-51.Baker C.J., Rench M.A., Edwards M.S. Immunization of pregnant woman with a polysaccharide vaccine of Group B streptococci//N. Engl. J. Med. -1988. -Vol. 319, N 18. -Р. 1180-1185.Baker C.J., Rench M.A., Edwards M.S. Immunization of pregnant woman with a polysaccharide vaccine of Group B streptococci//N. Engl. J. Med. -1988. -Vol. 319, N 18. -Р. 1180-1185.Beckmann C., Waggoner J.D., Harris T.O., Tamura G.S., Rubens C.E. Identification of novel adhesins from group B streptococci by use of phage display reveals that C5a peptidase mediates fibronectin binding//Infect. Immun. -2002. -Vol. 70, N 6. -Р. 2869-2876.Beckmann C., Waggoner J.D., Harris T.O., Tamura G.S., Rubens C.E. Identification of novel adhesins from group B streptococci by use of phage display reveals that C5a peptidase mediates fibronectin binding//Infect. Immun. -2002. -Vol. 70, N 6. -Р. 2869-2876.Bohnsack J.F., Chang J.K., Hill H.R. Restricted ability of Group B Streptococcal C5a-asa to inactivate C5a prepared from different animal species//Infect. Immun. -1993. -Vol. 61. -N 4. -P. 1421-1426.Bohnsack J.F., Chang J.K., Hill H.R. Restricted ability of Group B Streptococcal C5a-asa to inactivate C5a prepared from different animal species//Infect. Immun. -1993. -Vol. 61. -N 4. -P. 1421-1426.Chen C.C., Cleary P.P. Complete nucleotide sequence of the streptococcal C5a peptidase gene of Streptococcus pyogenes//J. Biol. Chem. -1990. -Vol. 265, N 6. -Р. 3161-3167.Chen C.C., Cleary P.P. Complete nucleotide sequence of the streptococcal C5a peptidase gene of Streptococcus pyogenes//J. Biol. Chem. -1990. -Vol. 265, N 6. -Р. 3161-3167.Cheng Q., Debol S., Lam H., Eby R., Edwards L., Matsuka Y., Olmsted S., Cleary P. Immunization with C5a Peptidase or Peptidase-Type III Polysaccharide Conjugate Vaccines Enhances Clearance of Group B Streptococci from Lungs of Infected Mice//Infect. Immun. -2002. -Vol. 70, N 11. -Р. 6409-6415.Cheng Q., Debol S., Lam H., Eby R., Edwards L., Matsuka Y., Olmsted S., Cleary P. Immunization with C5a Peptidase or Peptidase-Type III Polysaccharide Conjugate Vaccines Enhances Clearance of Group B Streptococci from Lungs of Infected Mice//Infect. Immun. -2002. -Vol. 70, N 11. -Р. 6409-6415.Cheng Q., Stafslien D., Purushothaman S.S., Cleary P. The group B streptococcal C5a peptidase is both a specific protease and an invasion//Infect. Immun. -2002. -Vol. 70, N 5. -P. 2408-2413.Cheng Q., Stafslien D., Purushothaman S.S., Cleary P. The group B streptococcal C5a peptidase is both a specific protease and an invasion//Infect. Immun. -2002. -Vol. 70, N 5. -P. 2408-2413.Cheng, Q., Carlson B., Pillai S., Eby R., Edwards L., Olmsted S.B., Cleary P. Antibody against surface-bound C5a peptidase is opsonic and initiates macrophage killing of group B streptococci//Infect. Immun. -2001. -Vol. 69, N 4. -Р. 2302-2308.Cheng, Q., Carlson B., Pillai S., Eby R., Edwards L., Olmsted S.B., Cleary P. Antibody against surface-bound C5a peptidase is opsonic and initiates macrophage killing of group B streptococci//Infect. Immun. -2001. -Vol. 69, N 4. -Р. 2302-2308.Chmourigina Suvorov A.N., Ferrieri P., Cleary P.P. Conservation of the C5a peptidase genes in group A and B streptococci//Infect. Immun. -1996. -Vol. 67, N 7. -P. 2387-2390.Chmourigina Suvorov A.N., Ferrieri P., Cleary P.P. Conservation of the C5a peptidase genes in group A and B streptococci//Infect. Immun. -1996. -Vol. 67, N 7. -P. 2387-2390.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.