Применение лейкоцитарных фильтров для получения препарата на основе цитокин-индуцированных киллеров

Способность цитокин-индуцированных киллеров (ЦИК) распознавать и лизировать опухолевые клетки продемонстрирована в доклинических исследованиях in vitro. На портале ClinicalTrials. gov на данный момент зарегистрировано более 600 завершенных клинических исследований, посвященных методике клеточной иммунотерапии, из них более 30 применению ЦИК. Существует множество способов получения клеточных препаратов на основе лимфоцитов. Их общим недостатком, на наш взгляд, является необходимость дополнительных заборов крови для получения клеточного препарата в больших объемах, поэтому остается актуальным разрабатывать новые подходы с учетом решения данной проблемы. Была предложена идея извлечения лимфоцитов из лейкоцитарных фильтров с последующей активацией данных клеток в условиях in vitro. Целью исследования являлась оценка возможности применения лейкоцитарных фильтров в качестве источника лимфоцитов для получения больших доз клеток ЦИК. В исследование включены данные 30 доноров. В статье подробно описана процедура извлечения лимфоцитов из лейкоцитарных фильтров. Выделенные лимфоциты культивировали в пластиковых флаконах в СО₂-инкубаторе 10-14 суток в среде на основе RPMI- 1640, в которую предварительно добавили IL-2 и IL-15. Оценку уровня активации клеток проводили методами иммуноферментного анализа и проточной цитометрии. Оценивали субпопуляционный состав Т-, NK-, TNK-, B-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, CD19, CD45, CD56) и маркеры активации на них (CD38 и HLA-DR) до и после активации клеток. Оценена возможность применения лейкоцитарных фильтров после сепарации плазмы с оставшимися на них лейкоцитами. Изучена функциональная активность извлеченных лимфоцитов и цитокиновый состав супернатантов после культивирования в полной питательной среде. Показано, что пептидный комплекс-супернатант содержал высокие дозы сигналинговых белков: IL-2, IL-6 IL-10, IFNγ, TNFα и сохранял свою функциональную активность после длительного хранения при низких температурах. Препарат является стерильным и состоит преимущественно из Т-, ТNK- и NK-клеток с высоким уровнем жизнеспособности и содержит маркеры активации: HLA-DR, CD38. Таким образом, из одного фильтра получали до 350 млн активированных лимфоцитов и аликвоты с супернатантом. Препарат может применяться как для фундаментальных исследований, так и для проведения адоптивной иммунотерапии (АИТ) онкологическим больным с целью восстановления собственного потенциала противоопухолевого иммунитета пациентов. Данное количество клеточного и бесклеточного препарата является достаточным для проведения большего количества курсов АИТ без дополнительных заборов крови.

1. Абакушина Е.В., Гельм Ю.В., Пасова И.А., Бажин А.В. Иммунотерапевтические подходы к лечению больных колоректальным раком // Биохимия, 2019. Т. 84, № 7. С. 923-933.

2. Абакушина Е.В., Маризина Ю.В., Пасова И.А., Каприн А.Д., Неприна Г.С. Способ лечения онкологических больных цитотоксическими лимфоцитами. Патент RU 2596505 C1, 10.09.2016.

3. Гельм Ю.В., Абакушина Е.В., Пасова И.А., Гривцова Л.Ю. Разработка подходов к клеточной иммунотерапии онкологических больных // Медицинская иммунология, 2021. Т. 23, № 2. С. 381-388. doi: 10.15789/1563-0625-DOA-2135.

4. Гельм Ю.В., Кузьмина Е.Г., Абакушина Е.В. Функциональная активность лимфоцитов здоровых доноров и онкологических больных при культивировании в присутствии ИЛ-2 и ИЛ-15 // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2019. Т. 167, № 4. С. 471-477.

5. Киселевский М.В., Анисимова Н.Ю., Соснов А.В. Способ получения активированных мононуклеарных лейкоцитов. Патент RU 2402338 C1, 27.10.2010.

6. Мельникова В.Н., Селиванов Е.А., Кирьянова Г.Ю., Ефимова Т.А. Метод заготовки лейкофильтрованных отмытых эритроцитов // Трансфузиология, 2010. Т. 11, № 3. С. 4-11.

7. Национальная медицинская библиотека: официальный сайт правительства США, результаты поиска: клеточная иммунотерапия [Электронный ресурс]. Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/search?intr=cellular%20immunotherapy&aggFilters=status:com/ (дата обращения: 31.01.2025).

8. Национальная медицинская библиотека: официальный сайт правительства США, результаты поиска: ЦИК [Электронный ресурс]. Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/search?intr=CIK/ (дата обращения: 31.01.2025).

9. Одобренные продукты клеточной и генной терапии: официальный сайт правительства США [Электронный ресурс]. Режим доступа:https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/cellular-gene-therapy-products/approved-cellular-and-gene-therapy-products/ (дата обращения: 31.01.2025).

10. Свадовский А.И., Пушкина Е.А., Гультяев М.М. Способ лечения внутримозговой опухоли головного мозга. Патент RU 2201762 С1, 10.04.2003.

11. Чикилева И.О., Анисимова Н.Ю., Верескунова Н.В., Киселевский М.В. Способ получения активированных лейкоцитов для адъювантной адаптивной иммунотерапии злокачественных новообразований. Патент RU 2414915 C2, 27.03.2011.

12. Kim J.S., Kim Y.G., Pyo M., Lee H.K., Hong J.T., Kim Y., Han S.B. Adoptive cell therapy of melanoma with cytokine-induced killer cells. Immune Netw., 2015, Vol. 15, no. 2, pp. 58-65.

13. Schmidt-Wolf I.G., Negrin R.S., Kiem H.P., Blume K.G., Weissman I.L. Use of a SCID mouse/human lymphoma model to evaluate cytokine-induced killer cells with potent antitumor cell activity. J. Exp. Med., 1991, Vol. 174, no. 1, pp. 139-149.

14. Schmidt-Wolf I.G., Finke S., Trojaneck B., Denkena A., Lefterova P., Schwella N., Heuft H.G., Prange G., Korte M., Takeya M., Dorbic T., Neubauer A., Wittig B., Huhn D. Phase I clinical study applying autologous immunological effector cells transfected with the interleukin-2 gene in patients with metastatic renal cancer, colorectal cancer and lymphoma. Br. J. Cancer, 1999, Vol. 81, no. 6, pp. 1009-1016.

15. Wang F.Sh., Liu M.X., Zhang B., Shi M., Lei Zh.Y., Sun W.B., Du Q.Y., Chen J.M. Antitumor activities of human autologous cytokine-induced killer (CIK) cells against hepatocellular carcinoma cells in vitro and in vivo. World J. Gastroenterol., 2002, Vol. 8, no. 3, pp. 464-468.