Гельм Юлия Витальевна – научный сотрудник отделения клинической иммунологии.
Обнинск
249031, Обнинск, ул. Маршала Жукова, 10. Тел.: 8 (48439) 2-96-04
Yulia V. Gelm - Researcher, Department of Clinical Immunology.
10 Marshal Zukov St Obninsk 249031 Phone: +7 (48439) 2-96-04
.б.н., заведующая отделением клинической иммунологии.
Обнинск
PhD, MD (Biology), Head, Department of Clinical Immunology, A. Tsyb Medical Radiological Research Centre.
Obninsk
к.м.н., заведующая отделением трансфузиологии.
Обнинск
PhD (Medicine), Head, Department of Transfusiology, A. Tsyb Medical Radiological Research Centre.
Obninsk
младший научный сотрудник отделения клинической иммунологии.
Обнинск
Junior Researcher, Department of Clinical Immunology, A. Tsyb Medical Radiological Research Centre.
Obninsk
научный сотрудник отделения клинической иммунологии.
Обнинск
Researcher, Department of Clinical Immunology, A. Tsyb Medical Radiological Research CentreObninsk
д.м.н., член-корр. РАН, директор Медицинского радиологического научного центра имени А.Ф. Цыба – филиала ФГБУ «НМИЦР» Министерства здравоохранения РФ; профессор кафедры онкологии и рентгенорадиологии имени В.П. Харченко Медицинского института ФГАОУ ВО «РУДН имени Патриса Лумумбы».
Москва
PhD, MD (Medicine), Corresponding Member, Russian Academy of Sciences, Director, A. Tsyb Medical Radiological Research Centre, a Branch of National Medical Research Radiological Centre; Professor, V. Kharchenko Department of Oncology and Radiology, Medical Institute, P. Lumumba РFUR.
Obnins
.м.н., профессор, академик РАН, генеральный директор ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр радНМИЦРиологии» Министерства здравоохранения РФ; заведующий кафедрой онкологии и рентгенорадиологии им. В.П. Харченко Медицинского института ФГАОУ ВО «РУДН имени Патриса Лумумбы»; директор Московского научно-исследовательского онкологического института имени П.А. Герцена – филиала ФГБУ «НМИЦР» Министерства здравоохранения РФ.
Москва
PhD, MD (Medicine), Professor, Full Member, RAS, General Director, National Medical Research Radiological Center; Head, V. Kharchenko Department of Oncology and Radiology, Medical Institute, P. Lumumba РFUR; Director, P. Herzen Moscow Oncology Research Institute, a Branch of National Medical Research Radiological Centre.
Moscow
Способность цитокин-индуцированных киллеров (ЦИК) распознавать и лизировать опухолевые клетки продемонстрирована в доклинических исследованиях in vitro. На портале ClinicalTrials. gov на данный момент зарегистрировано более 600 завершенных клинических исследований, посвященных методике клеточной иммунотерапии, из них более 30 применению ЦИК. Существует множество способов получения клеточных препаратов на основе лимфоцитов. Их общим недостатком, на наш взгляд, является необходимость дополнительных заборов крови для получения клеточного препарата в больших объемах, поэтому остается актуальным разрабатывать новые подходы с учетом решения данной проблемы. Была предложена идея извлечения лимфоцитов из лейкоцитарных фильтров с последующей активацией данных клеток в условиях in vitro. Целью исследования являлась оценка возможности применения лейкоцитарных фильтров в качестве источника лимфоцитов для получения больших доз клеток ЦИК. В исследование включены данные 30 доноров. В статье подробно описана процедура извлечения лимфоцитов из лейкоцитарных фильтров. Выделенные лимфоциты культивировали в пластиковых флаконах в СО2-инкубаторе 10-14 суток в среде на основе RPMI- 1640, в которую предварительно добавили IL-2 и IL-15. Оценку уровня активации клеток проводили методами иммуноферментного анализа и проточной цитометрии. Оценивали субпопуляционный состав Т-, NK-, TNK-, B-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, CD19, CD45, CD56) и маркеры активации на них (CD38 и HLA-DR) до и после активации клеток. Оценена возможность применения лейкоцитарных фильтров после сепарации плазмы с оставшимися на них лейкоцитами. Изучена функциональная активность извлеченных лимфоцитов и цитокиновый состав супернатантов после культивирования в полной питательной среде. Показано, что пептидный комплекс-супернатант содержал высокие дозы сигналинговых белков: IL-2, IL-6 IL-10, IFNγ, TNFα и сохранял свою функциональную активность после длительного хранения при низких температурах. Препарат является стерильным и состоит преимущественно из Т-, ТNK- и NK-клеток с высоким уровнем жизнеспособности и содержит маркеры активации: HLA-DR, CD38. Таким образом, из одного фильтра получали до 350 млн активированных лимфоцитов и аликвоты с супернатантом. Препарат может применяться как для фундаментальных исследований, так и для проведения адоптивной иммунотерапии (АИТ) онкологическим больным с целью восстановления собственного потенциала противоопухолевого иммунитета пациентов. Данное количество клеточного и бесклеточного препарата является достаточным для проведения большего количества курсов АИТ без дополнительных заборов крови.
The ability of cytokine-induced killer (CIK) cells to recognize and lyse tumor cells has been shown in preclinical in vitro studies. The database ClinicalTrials.gov currently registers over 600 completed clinical studies on cellular immunotherapy including more than 30 trials with CIK cells. There are many ways to obtain the lymphocyte-based cell products. In our opinion, their common drawback is the need for additional blood samples to obtain cell preparation in large volumes, thus requiring the development of new approaches in the field. We have proposed an idea of lymphocyte extraction using leukocyte filters with subsequent in vitro activation of these cells. The purpose of our study was to test the opportunity of using leukocyte filters as a source of lymphocytes to obtain large doses of CIK. The study included data from 30 donors. The article describes in detail the procedure for extracting lymphocytes from leukocyte filters. The isolated lymphocytes were cultured in plastic bottles in the CO2-incubator for 10-14 days in a medium based on RPMI-1640 supplied with IL-2 and IL-15. The level of cell activation was assessed using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and flow cytometry. The subpopulation profile of T, NK, TNK, B lymphocytes (CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, CD19, CD45, CD56) and surface activation markers (CD38 and HLA-DR) before and after cell activation were assessed. We have assessed the possibility of using leukocyte filters as a tool of cell separation from leukocyte-rich plasma. The functional activity of extracted lymphocytes and cytokine contents of supernatants were studied after cultivation in a complete nutrient medium. The supernatant peptide complex was shown to contain high doses of signaling proteins, i.e., IL-2, IL-6 IL-10, IFNγ, TNFα and retained its functional activity after long-term storage at low temperatures. The resulting cell product is sterile and consists predominantly of T, TNK and NK cells with a high level of viability and expressed activation markers (HLA-DR, CD38). Each single filter procedure allowed getting of up to 350 million activated lymphocytes and supernatant aliquots. This preparation may be used both for basic research and for administering autologous immune therapy to cancer patients in order to restore the patients’ own antitumor immunity potential. This amount of cellular and cell-free products is sufficient to conduct more courses of immune therapy without additional blood sampling.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.