Preview

Медицинская иммунология

Расширенный поиск

Опыт культивирования NK-клеток человека с фидерными клетками in vitro

https://doi.org/10.15789/1563-0625-IVE-2481

Полный текст:

Аннотация

Адоптивная иммунотерапия с использованием NK-клеток стала многообещающим терапевтическим направлением. NK-клетки являются компонентом врожденной иммунной системы, действуют как ключевые регуляторы и обладают выраженной противоопухолевой цитолитической активностью. Для того чтобы стало возможным оценить терапевтический эффект адоптивной NKклеточной иммунотерапии на доклинических этапах существует потребность в надежных протоколах для получения NK-клеток in vitro. Существует большое количество публикаций о способах активации и генерации NK-клеток человека, в том числе с использованием фидерных клеток и различных цитокинов. В статье описан опыт совместного культивирования NK-клеток от онкологических больных или доноров с фидерными клетками и без них (контрольная группа). В качестве фидера использовали клеточную линию К562 после облучения двух видов: после генной модифицикации К562 (гмК562) мембраносвязанными mbIL15, mbIL21 и без нее. NK-клетки смешивали с фидером в соотношении 1:1, 1:2 и 1:5 на 0-й, 7-й и 14-й день соответственно. Ежедневная морфологическая оценка показала, что после 3 суток культивирования NK-клетки как доноров, так и онкологических больных начинали пролиферировать и увеличиваться в размерах, а жизнеспособность фидерных клеток начинала снижаться, и к окончанию сроков культивирования составляла менее 20%. В контрольной группе без фидера после 3-го дня культивирования NK-клетки доноров и онкологических больных уходили в апоптоз, уровень их жизнеспособности снижался до 70%.

Проведена сравнительная оценка двух разных способов получения NK-клеток человека. Показано, что при выделении NK-клеток после магнитной селекции доля CD3-CD56+CD16+ клеток составляла более 90%, а после удаления адгезивных клеток – не менее 60%. При культивировании NK-клеток онкологических больных после магнитной селекции совместно с гмК562 на 21-е сутки количество NK-клеток увеличивалось в 85 раз. При культивировании NK-клеток доноров совместно с обычными К562 на 21-е сутки количество NK-клеток увеличивалось только до 8 раз. Показано, что в супернатантах, собранных в процессе культивирования NK-клеток с фидерными клетками двух видов, многократно увеличивались концентрации TNFα и IFNγ относительно контрольной группы. Экспериментальным путем подобраны оптимальные условия генерации NK-клеток.

Об авторах

Ю. В. Гельм
Медицинский радиологический научный центр имени А.Ф. Цыба – филиал ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр радиологии Министерства здравоохранения РФ
Россия

Юлия Витальевна Гельм – научный сотрудник отделения клинической иммунологии.

249036, Калужская область, Обнинск, ул. Королева, 4. Тел.: 8 (48439) 2-96-04


Конфликт интересов:

нет



И. А. Пасова
Медицинский радиологический научный центр имени А.Ф. Цыба – филиал ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр радиологии Министерства здравоохранения РФ
Россия

Ирина Алексеевна Пасова – врач аллерголог-иммунолог отделения клинической иммунологии.

Обнинск, Калужская обл.


Конфликт интересов:

нет



Л. Ю. Гривцова
Медицинский радиологический научный центр имени А.Ф. Цыба – филиал ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр радиологии Министерства здравоохранения РФ
Россия

 

Людмила Юрьевна Гривцова – Доктор биологических наук, заведующая отделением клинической иммунологии.

Обнинск, Калужская обл.


Конфликт интересов:

нет



Т. В. Константинова
Медицинский радиологический научный центр имени А.Ф. Цыба – филиал ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр радиологии Министерства здравоохранения РФ
Россия

Татьяна Викторовна Константинова – научный сотрудник отделения клинической иммунологии.

Обнинск, Калужская обл.


Конфликт интересов:

нет



Н. В. Михайловский
Текон Медицинские приборы, ООО
Россия

Николай Васильевич Михайловский – научный сотрудник отдела по разработке и исследованиям в области иммунологии.

Москва


Конфликт интересов:

нет



В. А. Рыбачук
Текон Медицинские приборы, ООО; ФГБОУ ВО Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова
Россия

Виктория Александровна Рыбачук – лаборант-исследователь отдела по разработке и исследованиям в области иммунологии ООО «Текон Медицинские приборы»; студент магистратуры биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова

Москва


Конфликт интересов:

нет



Е. В. Абакушина
Текон Медицинские приборы, ООО
Россия

 

Елена Вячеславовна Абакушина – доктор медицинских наук, заместитель генерального директора, руководитель отдела по разработке и исследованиям в области иммунологии.

Москва


Конфликт интересов:

нет



С. А. Иванов
Медицинский радиологический научный центр имени А.Ф. Цыба – филиал ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр радиологии Министерства здравоохранения РФ; ФГАОУ ВО Российский университет дружбы народов
Россия

Сергей Анатольевич Иванов – доктор медицинских наук, профессор РАН, директор МОНЦ имени А.Ф. Цыба – филиала ФГБУ НИРЦР; профессор кафедры онкологии и рентгенорадиологии имени В.П. Харченко медицинского института РУДН.

Обнинск, Калужская обл; Москва


Конфликт интересов:

нет



А. Д. Каприн
ФГАОУ ВО Российский университет дружбы народов; ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр радиологии Министерства здравоохранения РФ
Россия

Андрей Дмитриевич Каприн – доктор медицинских наук, профессор, академик РАН, генеральный директор ФГБУ НИРЦР; заведующий кафедрой онкологии и рентгенорадиологии имени В.П. Харченко медицинского института РУДН.

Обнинск, Калужская обл; Москва


Конфликт интересов:

нет



Список литературы

1. Абакушина Е.В., Маризина Ю.В., Каприн А.Д. Морфофункциональная характеристика лимфоцитов человека после активации in vitro // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2016. Т. 161, № 5. С. 678-683.

2. Абакушина Е.В., Маризина Ю.В., Неприна Г.С. Эффективность совместного применения IL-2 и IL-15 для активации цитотоксических лимфоцитов in vitro // Гены и клетки, 2015. Т. 10, № 2. C. 78-85.

3. Абакушина Е.В., Пасова И.А., Маризина Ю.В., Кудрявцев Д.В., Кудрявцева Г.Т., Фомина Е.С. Клиническая эффективность сопроводительной иммунотерапии активированными лимфоцитами больной меланомой (случай из практики) // Сибирский онкологический журнал, 2016. Т. 15, № 5. С. 89-94.

4. Боробова Е.А., Жеравин А.А. Натуральные киллеры в иммунотерапии онкологических заболеваний // Сибирский онкологический журнал, 2018. Т. 17, № 6. C. 97-104.

5. Вашкевич Е.П., Мигас А.А., Мелешко А.Н., Матвеенко М.А., Струшкевич Н.В., Шман Т.В. Экспансия и активация естественных киллерных клеток человека ex vivo в присутствии трансгенных фидерных клеточных линий // Цитология, 2020. Т. 62, № 4. С. 258-265.

6. Гривцова Л.Ю. Рецепторный репертуар NK-клеток как молекулярный базис аллореактивности (литературный обзор) // Иммунология гемопоэза, 2018. Т. 16, № 1. С. 62-108.

7. Лежнин Ю.Н., Христиченко А.Ю., Ратникова Н.М., Кравченко Ю.Е., Чумаков С.П. Клеточная иммунотерапия – современный подход к лечению онкологических заболеваний // Медицинская иммунология, 2018. Т. 20, № 3. С. 313-340. doi: 10.15789/15630625-2018-3-313-340.

8. Непомнящих Т.С., Антонец Д.В., Максютов Р.А. Краткий обзор клинических испытаний средств иммунотерапии онкологических заболеваний // Медицинская иммунология, 2017. Т. 19, № 2. С. 127-144. doi: 10.15789/1563-0625-2017-2-127-144.

9. Шамова Т.В., Ситковская А.О., Ващенко Л.Н., Кечеджиева Э.Э. Адоптивная клеточная терапия: достижения последних лет // Южно-российский онкологический журнал, 2020. Т. 1, № 1. С. 43-59.

10. Abakushina E.V., Gelm Yu.V., Pasova I.A., Bazhin A.V. Immunotherapeutic approaches for the treatment of colorectal cancer. J. Biochemistry (Moscow), 2019, Vol. 84, no. 7, pp. 720-728.

11. del Zotto G., Marcenaro E., Vacca P., Sivori S., Pende D., Della Chiesa M., Moretta F., Ingegnere T., Mingari M.C., Moretta A., Moretta L. Markers and function of human NK cells in normal and pathological conditions. J. Cytometry B Clin. Cytom., 2017, Vol. 92, no. 2, pp. 100-114.

12. Fang F., Xiao W., Tian Z. NK cell-based immunotherapy for cancer. J. Semin Immunol., 2017, Vol. 31, pp. 37-54.

13. Granzin M., Wagner J., Kohl U., Cerwenka A., Huppert V., Ullrich E. Shaping of natural killer cell antitumor activity by ex vivo cultivation. J. Front. Immunol., 2017, Vol. 8, 458. doi: 10.3389/fimmu.2017.00458.

14. Lee D.A. Cellular therapy: Adoptive immunotherapy with expanded natural killer cells. J. Immunol. Rev., 2019, Vol. 1, no. 290, pp. 85-99.

15. Shin M.H., Kim J., Lim S.A., Kim J., Kim S.J., Lee K.M. NK Cell-Based immunotherapies in cancer. J. Immune Netw, 2020, Vol. 20, no. 2, e14. doi: 10.4110/in.2020.20.e14.

16. Tarazona R., Lopez-Sejas N., Guerrero B., Hassouneh F., Valhondo I., Pera A., Sanchez-Correa B., Pastor N., Duran E., Alonso C., Solana R. Current progress in NK cell biology and NK cell-based cancer immunotherapy. J. Cancer Immunol. Immunother., 2020, Vol. 5, no. 69, pp. 879-899.


Дополнительные файлы

Рецензия

Для цитирования:


Гельм Ю.В., Пасова И.А., Гривцова Л.Ю., Константинова Т.В., Михайловский Н.В., Рыбачук В.А., Абакушина Е.В., Иванов С.А., Каприн А.Д. Опыт культивирования NK-клеток человека с фидерными клетками in vitro. Медицинская иммунология. 2022;24(3):481-490. https://doi.org/10.15789/1563-0625-IVE-2481

For citation:


Gelm Yu.V., Pasova I.A., Grivtsova L.Yu., Konstantinova T.V., Mikhaylovsky N.V., Rybachuk V.A., Abakushina E.V., Ivanov S.A., Kaprin A.D. In vitro experience of human natural killer cell culture with feeder cells. Medical Immunology (Russia). 2022;24(3):481-490. (In Russ.) https://doi.org/10.15789/1563-0625-IVE-2481

Просмотров: 58


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 1563-0625 (Print)
ISSN 2313-741X (Online)