В настоящее время для  многих инфекционных  заболеваний человека не  разработаны эффективные способы лечения и профилактики. Одним из  последних достижений биотехнологии является использование аденовирусных векторов, несущих иммунодоминантные антигены различных патогенов, в качестве генно-инженерных вакцин как профилактических, так и терапевтических. Использование генно-инженерных  технологий позволяет не  применять при  производстве вакцин живые вирусы и бактерии, сокращает время разработки и получения новых  вакцинных препаратов. Аденовирусные векторы естественным путем проникают в клетки человека, вызывая довольно длительный и значительный как  гуморальный, так и клеточный иммунный ответ.  Во второй части  обзора  мы  планируем привести сведения о проводимых в настоящее время за рубежом клинических испытаниях вакцин на  основе аденовирусных векторов против таких  инфекционных заболеваний, как грипп, малярия, геморрагическая лихорадка Эбола, туберкулез, гепатит и ряда других. Будут рассмотрены параметры отбора  добровольцев, схемы и дозы, используемые при вакцинации, приведены результаты завершенных экспериментов  и предварительные результаты незаконченных на  данный момент исследований.

Аутоиммунные заболевания и осложнения после  трансплантационных операций являются серьезной проблемой здравоохранения, так как  зачастую приводят к ухудшению качества жизни, снижению трудоспособности и инвалидизации населения. На сегодняшний день многообещающим методом терапии данных состояний  является индукция  антиген-специфической  толерантности, в процессе формирования которой важное место  занимают дендритные клетки. В данном обзоре проведен анализ современных данных по характеристике толерогенных дендритных клеток, по факторам, индуцирующим толерогенные свойства у дендритных клеток, по развитию центральной и периферической толерантности посредством дендритных клеток, по  роли  толерогенных дендритных клеток в формировании В-регуляторных клеток, а также  по  молекулярно-клеточным механизмам, которые принимают участие  в формировании иммунологической толерантности, зависимой от толерогенных дендритных клеток. Толерогенные дендритные клетки играют  ведущую  роль в поддержании  иммунного гомеостаза путем  индукции иммунологической толерантности, механизмы которой связаны с генерацией Т-регуляторных клеток, индукцией анергии или  апоптоза Т-клеток. Формирование толерогенных свойств у дендритных клеток происходит под влиянием различных факторов, регулирующих созревание  и  дифференцировку дендритных клеток и  индуцирующих синтез ими противовоспалительных агентов. Благодаря своей  способности индуцировать натуральные и периферические Т-регуляторные клетки, дендритные клетки вносят свой  вклад  в развитие центральной и периферической толерантности в организме. Анализ результатов экспериментальных  работ  свидетельствует о том,  что помимо индукции Т-регуляторных клеток толерогенные дендритные клетки принимают участие  в генерации В-регуляторных клеток, которые играют  не последнюю роль в формировании толерантности и имеют  способность влиять на популяцию Т-регуляторных клеток. Однако механизмы, которые приводят к формированию популяции В-регуляторных клеток под действием толерогенных дендритных клеток, не вполне установлены. Обзор  литературных данных показал, что молекулярно-клеточные механизмы индукции иммунологической толерантности посредством толерогенных дендритных клеток и других субпопуляций регуляторных клеток, взаимодействующих друг с другом,  во многом схожи. На сегодняшний день роль толерогенных дендритных клеток в поддержании иммунологической толерантности в целом определена, однако некоторые аспекты требуют более глубокого изучения. Последующие экспериментальные исследования приведут к лучшему пониманию механизмов сигнализации и реализации иммунологических функций толерогенных дендритных клеток, что предоставит дополнительную информацию для разработки подходов применения толерогенных дендритных клеток для контроля аутоиммунных заболеваний и трансплантационных осложнений.

В последние годы в мировой вирусологии активно развивается новая стратегия вакцинации  людей  против потенциально панденмических вирусов гриппа А: комбинационная вакцинация (prime-boostvaccination). Она  предусматривает усиление (бустирование) иммунного ответа  к одной вакцине с помощью предварительной прививки (праймирование) другой  вакциной. Нами впервые изучен  вопрос об иммунологических последствиях для людей  праймирования отечественной живой гриппозной вакциной ЖГВ H5N2 с последующим (через  1,5 года)  их бустированием отечественной инактивированной гриппозной вакциной ИГВ  H5N1. В отличие от непраймированных волонтеров у праймированных после  однократной прививки ИГВ  H5N1 наблюдалась ускоренная и усиленная продукция сывороточных антител (РТГА, РМН, ИФА). Это касалось антител к вакцинному штамму А (H5N1) и другим гетерологичным штаммам с гемагглютинином Н5. У праймированных лиц антитела обладали более  высокой авидностью по сравнению с непраймированными. Перед  прививкой ИГВ H5N1 у первых  титры  IgG-антител к вирусу  А(H5N1), а также  уровень специфичных к нему CD4⁺  и CD8⁺Т-клеток иммунологической памяти оказались выше, чем у вторых.  Бустирующий эффект ИГВ H5N1 не коррелировал с данными РТГА  и РМН по иммуногенности праймирующей ЖГВ  H5N2. В целом  полученные результаты обосновывают новое  направление в использовании отечественных ЖГВ для защиты от потенциально пандемического вируса  гриппа А.

Ключевая роль Т-клеток в элиминации вируса и отсутствие сильного Т-клеточного ответа у больных хроническим гепатитом С (ХГС)  позволяет рассматривать активацию антиген-специфических  Т-клеток в качестве перспективного подхода  к повышению эффективности лечения. Учитывая центральную роль  дендритных клеток (ДК) в индукции Т-клеточного ответа,  целью  исследования  явилась оценка влияния иммунотерапии ДК на показатели иммунитета у больных ХГС.  Десять пациентов с хронической HCV-инфекцией (генотип 1) были  вакцинированы ДК,  генерируемыми из моноцитов в присутствии интерферона-α (IFN-ДК) и нагруженными рекомбинантными белками Core (1–120) и NS3 (1192–1457). Вакцинотерапия включала инициирующий (4 вакцинации с недельным  интервалом) и поддерживающий (6 вакцинаций с месячным интервалом) курс с последующим периодом 6-месячного наблюдения. Проведение иммунотерапии ДК  не сопровождалось развитием тяжелых нежелательных явлений, выраженных поствакцинальных реакций или  возрастанием биохимических проявлений активности гепатита. Исследования ex vivo показали, что  иммунотерапия ДК приводила к индукции выраженного устойчивого иммунного ответа  на Core и умеренного ответа на  NS3,  что  проявлялось значимым возрастанием пролиферации и продукции IFNγ при  стимуляции  МНК Core  и усилением продукции IFNγ (при  отсутствии достоверного возрастания пролиферативного ответа) при  стимуляции МНК NS3.  Иммунотерапия ДК  также  приводила к возрастанию до  нормативных значений КонА-индуцированной пролиферации МНК,  свидетельствуя о восстановлении митогенной реактивности Т-клеток. В то же время активация Т-клеточного ответа  не сопровождалась индукцией антиген-специфических Th2-клеток и не приводила к генерации регуляторных СD4⁺CD25⁺CD127-Т-клеток. Несмотря на индукцию иммунного ответа,  иммунотерапия ДК не сопровождалась значимым снижением виремии. Тем не менее  преходящее уменьшение вирусной нагрузки у 4 пациентов и стойкое снижение виремии у двух, а также  наличие обратной взаимосвязи между NS3-специфическим пролиферативным ответом и уровнем вирусной нагрузки (Rs = 0,62; p < 0,05) (на момент завершения 6-месячного наблюдения) указывает на способность антиген-специфических Т-клеток ограничивать репликацию вируса.

Натуральные киллеры (NK)  и  NKT-лимфоциты  являются важными составляющими врожденного  иммунитета и  играют  роль  первой линии защиты от  онкологических заболеваний. Данные популяции отличаются высокой гетерогенностью и разделяются на несколько субпопуляций, отличающихся по  степени экспрессии маркеров CD56  и CD16  и функциональной активностью.  Исследование гетерогенности данных популяций лимфоцитов у здоровых доноров актуально, так как является основой для изучения нарушений баланса между различными субпопуляциями у онкологических больных. Изменения  соотношения выше  представленных субпопуляций  могут обладать прогностическим и клиническим значением при опухолевых заболеваниях. Было  проведено исследование лимфоцитов периферической крови 50 здоровых доноров. При  анализе популяции NK-лимфоцитов было  выявлено 18,0±11,3% антиген-положительных клеток, колебания значений составило от 7,6 до 29,2%, в то время как количество клеток с фенотипами CD3^-CD56⁺  и CD3^-CD16⁺ было равно  16,2±8,1 и 11,0±6,7% соответственно. Анализ субпопуляционной структуры показал, что основной пул NK-клеток представлен CD56^dimCD16^dim   клетками 52,3±19,9%, а минорные субпопуляции CD56^dimCD16^bright, CD56^-CD16⁺, CD56^brightCD16 составляют 0,3±0,2, 1,7±0,9 и 1,3±0,6% соответственно. При  исследовании внутриклеточного содержания перфорина оказалось, что количество CD56⁺Perf⁺  клеток в среднем равно  25,1±14,8%, а CD16⁺Perf⁺ – 23,8±16,0%. Цитометрический анализ  показал, что перфорин преимущественно содержится в CD56^dimCD16^dim NK-лимфоцитах, в то время как  CD56^dimCD16^bright, CD56^-CD16⁺, CD56^brightCD16^- перфорина не содержали. В работе  впервые  обнаружена субпопуляция NK-клеток  с  иммунофенотипом СD56^dimCD16^dim,  не  содержащая внутриклеточный перфорин (2,0%). Популяция NKT-клеток с фенотипом СD3⁺CD16/СD56⁺   выявляется в 7,1% (25% – 3,45; 75% – 8,75) антиген-положительных клеток в диапазоне от 2,5 до 11,9% и не подчиняется законам нормального распределения. При  анализе с помощью комбинации МКА CD3/CD56/CD16 количество CD3⁺CD56⁺  клеток составило 4,33%  (25% – 2,25; 75% – 7,3),  а количество  CD3⁺CD16⁺ – 3,087%  (25% – 0,9; 75% – 6,2).  Оказалось, что различия между  определением с помощью тест-системы CD3/CD16/CD56 и с помощью CD3/CD16 является статистически значимой  (p < 0,05).  Было  показано, что основной пул NKT-клеток составляют CD56⁺CD16^- клетки, количество которых 5,45% (25% – 2,95; 75% – 7,3) среди CD3⁺  лимфоцитов. При  этом были выявлены две минорные субпопуляции, отличающиеся по экспрессии антигенов CD56  и CD16. Так  уровень CD56^-CD16⁺   составил 3% (25%  – 0,25;  75% – 3,05),  а количество CD56⁺CD16⁺   оказалось равным 0,67% (25% – 0,25; 75% – 0,9). Таким образом, широкое фенотипическое разнообразие NK- и NKT- клеток отражает их способность к реализации различной функциональной активности. Данное исследование, указывающее на высокую гетерогенность NK- и NKT-лимфоцитов, может  послужить основой для изучения нарушений баланса между различными субпопуляциями этих клеток у онкологических больных.

Возрастная динамика формирования Th17 и Treg у здоровых людей недостаточно изучена. Целью настоящего исследования было изучить количественные характеристики субпопуляций Th17 и Treg у здоровых людей в зависимости от возраста.

Было  обследовано 352 человека (168 лиц женского пола и 184 – мужского), в возрасте от 1 месяца до 85 лет, в том числе младше 1 года – 79, в возрасте 1-2 года 11 мес. – 34, 3-4 года 11 мес. – 24, 5-6 лет 11 мес. – 28, 7-8 лет 11 мес. – 25, 9-11 лет 11мес. – 36, 12-14 лет 11 мес. – 39, 15-18 лет – 26, 20-35 лет – 25, 36-49 лет – 11, 50-70 лет – 16 и в возрасте более 70 лет – 9 человек. У детей в возрасте до 2 лет исследование проводилось из капиллярной крови, в более  старшем возрасте – из венозной. Определение субпопуляций лимфоцитов крови проводили методом проточной цитофлюорометрии с четырехцветным  окрашиванием в реакции прямой иммунофлюоресценции. Окрашивание проводили в цельной крови с последующим лизированием эритроцитов. Для определения субпопуляций лимфоцитов использовали следующие поверхностные маркеры: CD3, CD4, CD8, CD25, CD127, CD161, CD45R0.

Показано, что процент Treg в гейте  CD3+CD4+   практически не зависит от возраста обследуемых лиц  и  аппроксимируется линейной функцией. В абсолютном выражении уровень Treg  в детском возрасте прогрессивно снижается и после  10 лет выходит  на плато  и аппроксимируется логарифмической кривой. При  исследовании возрастной динамики уровня Th17  обнаружен устойчивый рост этой субпопуляции как в процентном, так и в абсолютном выражении. Процент этих клеток от гейта CD3⁺CD4⁺  и абсолютное количество аппроксимируется квадратными уравнениями. Возраст 10-12 лет является, по-видимому, критическим в процессе формирования иммунной системы, к этому возрасту завершаются основные процессы развития различных звеньев иммунитета и дальше  происходит их созревание. В старшем возрасте (70 лет и более)  выявлено снижение как  процента в составе Т-хелперов, так и абсолютного уровня Treg и Th17-лимфоцитов. Предложенные значения процентного и абсолютного количества клеток субпопуляций Treg и Th17 в периферической крови здоровых людей могут быть использованы в качестве возрастных норм  для этих субпопуляций.

Грануло-опосредованная цитотоксичность для клеток-эффекторов является универсальным механизмом подавления опухолевого роста  и  индукции гибели  клеток-мишеней. Целью работы явилось изучение экспрессии цитолитических молекул дендритными клетками (ДК), генерированными в присутствии IFNα (IFN-ДК),  а также  исследование роли  грануло-опосредованного механизма в реализации цитотоксической активности IFN-ДК против опухолевых клеточных линий. IFN-ДК генерировали путем культивирования прилипающей фракции МНК в присутствии GM-CSF и IFNα в течение 4 суток с последующим дозреванием с ЛПС  в течение 24 ч. Опухолевые линии были получены из фрагментов опухоли пациентов с внутримозговой глиобластомой. Индукция созревания IFN-ДК под действием ЛПС  ассоциировалась с накоплением внутриклеточного пула молекул перфорина и гранзима Б. Экспрессия перфорина в ЛПС-стимулированных IFN-ДК прямо коррелировала с внутриклеточной экспрессией лизосомально-ассоциированного мембранного белка-1 (LAMP-1/ CD107a), при этом  уровень последнего не менялся в ответ на стимуляцию ЛПС. В то же время ЛПС стимулировал дегрануляцию в IFN-ДК, о чем свидетельствовало увеличение доли  клеток, экспрессирующих CD107a на  поверхностной мембране ДК.  Активация ЛПС  генерированных из  моноцитов крови тех же доноров ДК по стандартному протоколу (в присутствии GM-CSF и IL-4  [IL-4-ДК]) не влияла на уровень экспрессии перфорина и гранзима Б в IL-4-ДК, которая была  значимо ниже по  сравнению с аналогичными культурами IFN-ДК.  В ответ  на  стимуляцию ЛПС  отмечалось увеличение внутриклеточного пула CD107a в IL-4-ДК при отсутствии изменений в поверхностной экспрессии CD107a. Исследование цитотоксической активности ЛПС-стимулированных IFN-ДК против  глиобластомных клеточных линий показало вовлеченность перфорин/гранзим  Б-сигнального пути в реализацию цитотоксической активности ДК, поскольку блокирование этого механизма с помощью ингибитора вакуолярной Н⁺-АТФ-азы конканамицина А (СМА) ослабляло цитотоксическую активность IFN-ДК. При  этом  различная выраженность подавления цитотоксичности ДК  с помощью СМА свидетельствовала о существовании перфорин/гранзим Б-независимых механизмах цитотоксического действия IFN-ДК против глиобластомных клеток.

В настоящее время в литературе активно обсуждается неоднозначная роль  распознающих  рецепторов врожденного иммунитета, в частности TLRs,  в иммунопатогенезе бронхиальной астмы  (БА).

Цель нашей работы – исследование экспрессии ТLR2 и TLR4 на уровне  клеток слизистой полости носа и лейкоцитов периферической крови (ЛПК) больных БА разной степени тяжести.

В исследование были  включены 40 детей  с БА (3-12  лет)  и 10 здоровых детей  того  же возраста. Методом ПЦР-РВ оценивали экспрессию генов  TLR2  и TLR4  в соскобах со слизистой полости носа и в ЛПК; методом проточной цитометрии определяли процент моноцитов, лимфоцитов и гранулоцитов,  экспрессирующих TLR2  TLR4, и интенсивность их экспрессии; методом мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа оценивали уровень про и противовоспалительных цитокинов (IL-1β, IL-1ra, IL-6, IL-8, IL-10, TNFα) в назальных смывах.

В результате проведенного исследования выявлена гиперактивация факторов врожденного иммунитета на уровне  слизистой оболочки полости носа  у больных с БА,  проявляющаяся повышением экспрессии генов  TLR2, TLR4  и выработки как  провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов. Выявлена связь  между  уровнем цитокинов и  степенью тяжести бронхиальной астмы. В периферической крови определено достоверное увеличение экспрессии TLR2 и TLR4 на циркулирующих  CD14⁺ моноцитах у детей с БА.

Таким образом, показано увеличение экспрессии генов  TLRs слизистой полости носа  и повышение поверхностной экспрессии TLR2  и TLR4  на циркулирующих моноцитах больных бронхиальной астмой по сравнению со здоровыми детьми. Выявленные изменения свидетельствуют о вовлечении системы TLRs в иммунопатогенез бронхиальной астмы. В дальнейшем TLRs могут быть использованы в качестве маркеров прогноза течения БА и возможных терапевтических мишеней.

Основным  механизмом развития астенических расстройств у ветеранов современных войн  с ранними формами хронической ишемии мозга  после  их возвращения к мирной жизни является неспецифическая  стресс-индуцированная  перегрузка эмоциогенных структур лимбико-ретикулярной системы в условиях дефицита  эндогенных энергетических  ресурсов. Обследовано 30 ветеранов Афганистана с ранними формами хронической ишемии мозга с проявлениями психогенного  астенического синдрома. Курсовой прием производного адамантана в дозе 50 мг 2 раза в день при лечении психогенной астении у ветеранов современных войн приводит к реализации комплекса фармакологических эффектов: психостимулирующего, анксиолитического,  вегетотропного, антигипотимического, гипнотического с редукцией основной психопатологической и соматоневрологической симптоматики. Установлено выраженное иммунотропное действие препарата, выраженное в виде:  усиления процессов иммунопоэза; активации врожденных механизмов защиты; роста  популяции Тreg-лимфоцитов, свидетельствующего об усилении супрессорного влияния на  механизмы  аутоиммунной агрессии; реализации комитогенного и пролиферативного эффекта; антиапоптогенных свойств; противовоспалительного действия (снижения уровня TNFα,  IL-8, hsCRP, роста IL-2) и  связанного с  ним  снижения  функциональной  активности мононуклеаров; вазотропного действия в виде  нормализации баланса вазоактивных факторов (оксида азота,  эндотелина-1), снижения концентрации нитротирозина, свидетельствующего о редукции нитрозативного стресса. Актопротекторное действие препарата реализуется сочетанием психостимулирующего, вазотропного, пролиферативного эффектов и выражается в виде  повышения работоспособности и оптимизации показателей системной гемодинамики.

Бронхиальная астма  – распространенное хроническое аллергическое заболевание легких в детском возрасте. Поиск маркеров неконтролируемого течения атопической бронхиальной астмы у детей  – приоритетная задача  в аллергологии. Цитокины выполняют регуляторную функцию в патогенезе атопической бронхиальной астмы, принимая участие  в инициации, развитии, персистенции  аллергического воспаления в дыхательных путях,  формируя вариации течения болезни (остроту, тяжесть, частоту  обострений). В работе  изучены показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета, а также  уровни некоторых провоспалительных и  противовоспалительных цитокинов в сыворотке периферической крови (IL-4, IL-10, IL-2 и TNFα) с целью определения маркеров неконтролируемого течения атопической бронхиальной астмы  у детей.  В исследование включены дети европеоидного происхождения: 1 группа  – больные среднетяжелой атопической бронхиальной астмой с контролируемым течением заболевания в течение последних 3 месяцев (n = 59), 2 группа – больные тяжелой/среднетяжелой атопической бронхиальной астмой с неконтролируемым течением заболевания в течение последних 3 месяцев (n = 51), 3 группа контроля – практически здоровые дети без признаков атопии (n = 33). Все дети,  включенные в группу больных атопической бронхиальной астмой, регулярно получали моно/комбинированную базисную терапию в высоких/средних терапевтических дозах. При сравнительном анализе показателей клеточного звена иммунитета определено статистически значимо низкий уровень CD3⁺  лимфоцитов, а также  низкий уровень относительного и абсолютного  содержания CD4⁺  и CD8⁺  клеток в группе  с неконтролируемым течением атопической бронхиальной астмы по сравнению с группой контролируемого течения болезни. При  оценке концентрации цитокинов в сыворотке периферической крови у больных с контролируемым и неконтролируемым течением атопической бронхиальной астмы отмечался статистически значимо высокий уровень IL-2, IL-4  и IL-10  в сравнении с группой контроля. Установлено, что концентрация TNFα значимо выше в обеих  группах  больных атопической бронхиальной астмой и превышает в 2-3  раза  уровень этого цитокина в группе  контроля. При  сравнении групп  с различными уровнями контроля над течением заболевания, выявлено, что концентрация TNFα в группе больных неконтролируемой бронхиальной астмой статистически значимо выше, чем в группе  с контролируемым течением заболевания. Таким образом, в качестве маркеров неконтролируемого течения атопической бронхиальной астмы  у детей могут служить: низкий уровень общего количества Т-лимфоцитов в периферической крови и клеток с фенотипом CD4⁺, CD8⁺, гиперпродукция IgE, низкое содержание общего IgA и высокая концентрация TNFα в сыворотке периферической крови.

Открытие полиморфизмов генов  NOD2, ATG16L1, IRGM, ассоциированных с нарушением процесса аутофагии у пациентов с болезнью Крона (БК), позволило по-новому взглянуть на вопрос  этиологии данного заболевания. На  фоне  генетически обусловленной дисфункции макрофагов все более  вероятной представляется важная роль  патогенов в индукции БК, что подтверждается данными о широком распространении среди  пациентов с БК  случаев  хронической инфекции внутриклеточными патогенами Mycobacteriumparatuberculosis и E. coli. Потеря макрофагами способности уничтожать внутриклеточные микроорганизмы ведет к хронической инфекции с повышенной продукцией провоспалительных цитокинов и повреждением собственных тканей.

Контроль за работой макрофагов осуществляют NK-клетки: связывание NKG2D-рецептора с молекулами MICA  на поверхности макрофагов приводит к лизису  последних. Передача сигнала через рецептор NKG2D может  повысить функциональную активность NK  в отношении дефектных макрофагов и, таким образом, усиливать их элиминацию. Кроме того, ввиду повышенной численности NKG2D⁺  лимфоцитов у пациентов с БК, использование растворимых форм  MICA  может  изменить соотношение между  цитотоксическими и регуляторными лимфоцитами в пользу  последних и снизить продукцию провоспалительных цитокинов, которые поддерживают в кишечнике состояние хронического воспаления. В данном обзоре рассмотрены перспективные направления в изучении и терапии БК.

К 70-летию со дня рождения.