МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА И РЕКОМБИНАНТНЫЕ БЕЛКИ ФИЛОВИРУСОВ. ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОСТИ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДЛЯ ИММУНОДИАГНОСТИКИ

Панель моноклональных антител (МКА) к VP35, VP40 и NP белкам вирусов Эбола и Марбург была использована для исследования способности МКА к вирусным белкам VP35, VP40 и NP взаимодействовать с их рекомбинантными белками-аналогами. Было установлено, что МКА эффективно распознавали рекомбинантные белки-аналоги филовирусов. Это позволило предложить вариант иммуноферментного анализа на основе МКА для захвата вирусного антигена и МКА меченых биотином, который эффективно и специфически выявлял рекомбинантные и вирусные белки вирусов Эбола и Марбург в пределах от 1 до 150 нг/мл. Эта позволило сделать вывод о том, что МКА и рекомбинантные белки VP35, VP40 и NP вирусов Эбола и Марбург перспективны для разработки нового поколения средств иммунодиагностики и для исследования особенностей иммунологии филовирусных инфекций.

вирус Марбург (ВМ), вирус Эбола (ВЭ), моноклональные антитела (МКА), рекомбинантные белки, иммунодиагностика

1. Борисевич В.Н., Михайлов В.В., Краснянский Б.П., Градобоев В.Н., Лебединская Е.В., Потрываева Н.В., Тиманькова Г.Д. Разработка и изучение свойств иммуноглобулинов против лихорадки Эбола//Вопросы вирусологии. -1996. -№ 6. -C. 270-273.

2. Букреев А.А., Скрипченко А.А., Гусев Ю.М., Фролов В.Г., Кандрушин Е.В., Красницкая И.М., Шестопалов А.М. Перспективный метод препаративной наработки и очистки вируса Марбург//Вопросы вирусологии. -1995. -№ 4. -С. 161-165.

3. Владыко А.С., Чепурнов А.А., Быстрова С.И., Лемешко И.Н., Лукашевич И.С. Выявление антигена вируса Марбург методом твердофазного иммуноферментного анализа//Вопросы вирусологии. -1991. -№ 5. -С. 419-421.

4. Казачинская Е.И., Перебоев А.В., Чепурнов А.А., Беланов Е.Ф., Разумов И.А. Моноклональные антитела к вирусу Эбола: получение, характеризация и изучение перекрестной реактивности с вирусом Марбург//Вопросы вирусологии. -2000. -№ 3. -С. 40-44.

5. Казачинская Е.И., Терновой В.А., Рудзевич Т.Н., Нетесов С.В., Чепурнов А.А., Разумов И.А. Исследование антигенной структуры белка VP35 вируса Эбола//Вопросы вирусологии. -2001. -№ 5. -C. 25-31.

6. Кизимов Н.В., Луб М.Ю., Черный Н.Б., Беланов Е.Ф. Использование иммуноферментного анализа (ИФА) для обнаружения антигена вируса Марбург//Межведомственная конференция «Изучение и профилактика особо опасных вирусных инфекций»/Тезисы докладов. 7-8 апреля 1993 г., Кольцово.

7. Луб М.Ю., Сергеев А.Н., Пьянкова О.Г., Пьянков О.В., Петрищенко В.А., Котляров Л.А. Клинико-вирусологические характеристики заболевания морских свинок, аэрогенно инфицированных вирусом Марбург//Вопросы вирусологии. -1995. -№3. -С. 119-121.

8. Луб М.Ю., Сергеев А.Н., Пьянков О.В., Пьянкова О.Г., Петрищенко В.А., Котляров Л.А. Некоторые патогенетические характеристики заболевания обезьян, аэрогенно инфицированных вирусом Марбург//Вопросы вирусологии. -1995. -№ 4. -С. 158-161.

9. Мерзликин Н.В., Чепурнов А.А., Истомина Н.Н., Офицеров В.И., Воробьева М.С. Разработка и применение иммуноферментных тест-систем для диагностики лихорадки Эбола//Вопросы вирусологии. -1995. -№ 1. -С. 31-35.

10. Мерзликин Н.В. Иммуноферментные тест-системы для изучения лихорадки Эбола: Автореф. дис.... канд. биол. наук. -Кольцово, 1995.

11. Никифоров В.В., Туровской Ю.И, Калинин П.П., Акинфеева Л.А., Каткова Л.Р., Бармин В.С., Рябчикова Е.И., Попкова Н.И., Шестопалов А.М., Назаров В.П., Ведищев С.В.,

12. Нетесов С.В. Случай лабораторного заражения лихорадкой Марбург//Микробиология. -1994. -№ 3. -C. 104-110.

13. Остерман П.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. -М.: Наука, 1981. -С. 37-64.

14. Пьянков О.В., Сергеев А.Н., Пьянкова О.Г., Перебоева Л.А. Патологические изменения в организме приматов, аэрозольно инфицированных вирусом Эбола//Межведомственная конференция «Изучение и профилактика особо опасных вирусных инфекций»: Тезисы докладов. 7-8 апреля 1993 г., Кольцово.

15. Разумов И.А., Беланов Е.Ф. Букреев А.А., Казачинская Е.И. Моноклональные антитела к белкам вируса Марбург и их иммунохимическая характеризация//Вопросы вирусологии. -1998. -№ 6. -С. 274-279.

16. Ручко С.В., Лебедев В.Н., Пащенко Ю.И., Борисевич Г.В., Семенова И.С., Хамитов Р.А., Максимов В.А., Фирсова И.В., Петровский А.В. Получение и изучение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к структурному гликопротеину вируса Марбург//Вопросы вирусологии. -2001. -№ 6. -С. 21-24.

17. Сорокин А.В., Казачинская Е.И., Качко А.В., Иванова А.В., Букреев А.А., Разумов И.А. Сравнительное исследование антигенных и иммуногенных свойств природного и рекомбинантного белков VP35 вируса Марбург//Вопросы вирусологии. -1999. -№ 5. -C. 206-213.

18. Турьянов М.Х., Царегородцев А.Д., Лобзин Ю.В. Инфекционные болезни -М.: Медицина, 1998.

19. Чепурнов А.А., Мерзликин Н.В., Рябчикова Е.И., Чепурнова Т.С., Волчков В.Е., Истомина Н.И., Кузьмин В.А., Воробьева М.С. Получение очищенного вируса Эбола//Вопросы вирусологии. -1994. -№ 6. -С. 254-257.

20. Чепурнов А.А., Мерзликин Н.В., Чепурнова Т.С., Воробьева М.С. Получение кроличьих антисывороток к вирусу Эбола//Вопросы вирусологии. -1994. -№ 6. -C. 286-288.

21. Чепурнов А.А., Чернухин И.В., Терновой В.А., Кудоярова Н.М., Махова Н.М., Азаев М.Ш., Смолина М.П. Попытка получения вакцины против лихорадки Эбола//Вопросы вирусологии. -1995. -№ 6. -С. 257-260.

22. Чепурнова Т.С., Писанко В.А., Бакулина Л.Ф., Жуков В.А., Чепурнов А.А. Определение содержания вируса Марбург в крови и выделениях экспериментально инфицированных животных//Вопросы вирусологии. -2000. -№ 2. -C. 18-20.

23. Bazin H., Malache I.M, Nisol F., Delaunay T. Rat hybridomas and rat monoclonal antibodies. -Florida: CRC Press. -1990. -P. 165-201.

24. Bayer EA, Wilchek M. The use of the avidin-biotin complex as a tool in molecular biology//Methods Biochem. Anal. -1980. -Vol. 26. -P. 1-45.

25. Becker S., Feldmann H., Will C., Slenczka W. Evidence for occurrence of filovirus antibodies in humans and imported monkeys: do subclinical filovirus infections occur worldwide?//J. Med. Microbiol. Immunol. -1992. -Vol. 181. -P. 43-55.

26. Bente D., Gren J., Strong J.E., Feldmann H. Disease modeling for Ebola and Marburg viruses//Dis. Model Mech. -2009. -Vol. 2 -P. 12-17.

27. Bowen E.T., Lloyd G., Harris W.J., Platt G.S., Baskerville A., Vella E.E. Viral haemorrhagis fever in southern Sudan and northern Zaire/Preliminary studies on the aetiological agent//Lancet -1977. -Vol. 1. -P. 571-573.

28. Elliott L.H., Kiley M.P., McCormick J.B. Descriptive analysis of Ebola virus protein//Virology. -1985. -Vol. 147. -P. 169-176.

29. Ignatyev G.M., Agafonov A.P., Streltsova N.A., Kashentseva E.A. Inactivated Marburg virus elicits a nonprotective immune response in Rhesus monkeys//J. of Biotechnology. -1996. -Vol. 44. -P. 111-118.

30. Gear J.H. Hemorrahagic fevers, with special reference to recent outbreaks in southern Africa//J. Rev. Infect. Dis. -1979. -Vol. 1. -P. 571-591.

31. Geisbert T.W., Geisbert J.B., Leung A., Daddario-DiCaprio K.M., Hensley L.E., Grolla A., Feldmann H. Single-injection vaccine protects nonhuman primates against infection with Marburg virus and three species of Ebola virus//J. Virol. -2009. -Vol. 83. -P. 7296-304.

32. Gefler M.L., Margulies D.H., Scharff M.D. A simple method for polyethyleneglycol promoted hybridization of mouse myeloma cells//J. Somat. Cell Genet. -1977. -Vol. 3. -P. 231-236.

33. Hevey M., Negley D., Geisbert J., Jahrling P., Schmalijohn A. Antigenicity and vaccine potential of Marburg virus glycoprotein expressed by baculovirus recombinants//J. Virology. -1997. -Vol. 239. -P. 206-216.

34. Johnson E., Jaax N., White J., Jahrling P. Lethal experimental infection of rhesus monkeys by aerosolized Ebola virus//Int J. Exp Pathol. -1995. -Vol. 76, № 4. -P. 227-236.

35. Kalstrom G., Warfield K.L., Swenson D.L., Mort S., Panchal R.G., Ruthel G., Bavari S., Aman M.J. Analysis of Ebola virus and VLP release using an immunocapture assay//J. Virological. Methods. -2005. -Vol. 127, № 1. -P. 1-9.

36. Ksiazek T.G., Rollin P.E., Jahring P.B., Johnson E., Dalgard D.W. Enzyme immunosorbent assay for Ebola virus in tissues og infected primates//J. of Clinical Microbiology. -1992. -Vol. 30, № 4. -P. 947-950.

37. Leroy E.M., Kumulungui B., Pourrut X., Rouquet P., Hassanin A., Yaba P., Delicat A., Paweska J.T., Gonzalez J.P., Swanepoel R. Fruit bats as reservoirs of Ebola virus//Nature. -2005. -Vol. 438. -P. 575-576.

38. Lupton H.W., Lambert R.D., Bumgardner D.L., Moe J.B., Eddy G.A. Inactivated vaccine for Ebola virus efficacious in guinea pig model//Lancet. -1980. -Vol. 2. -P. 1294-1295.

39. Luch A., Grunov R., Otterbein C., Moller P., Feldmann H., Becker S. Production of monoclonal antibolies and development of an antigen capture ELISA directed against envelope glycoprotein GP of Ebola virus//J. Med. Microbiol. Immunol. -2004. -Vol. 193. -P. 181-187.

40. Luch A., Grunov R., Moller P., Feldmann H., Becker S. Development, characterization and use of monoclonal VP40-antibodies for the detection of Ebola virus//J. of Virological. Methods. -2003. -Vol. 111. -P. 21-28.

41. Luch A., Formenty P., Feldmann H., Gotz M., Leroy E., Batabourila P., Groll A., Feldmann F., Wittmann T., Campbell P., Atsangandoko C., Boumandoki P., Finke E.J., Miethe P., Becker S., Grunow R. Development of an immunofiltration-based antigen-detection assay for rapid diagnosis of Ebola virus infection//J. Infect. Dis. -2007. -Vol. -15. -P. 184-192.

42. Mitchel S.W., McCormick J.B. Phisicochemical inactivation of Lassa, Ebola and Marburg viruses and effect on clinical laboratory analyses// J. Clin. Microbiol. -1984. -Vol. 20. -P. 486-489.

43. Niikura M., Ikegami T., Saijo M., Kurane I., Miranda M.E., Morikawa S. Detection of Ebola viral antigen by enzyme-linked immunosorbent assay using a novel monoclonal antibody to nucleoprotein//J. of Clinical Microbiology. -2001. -Vol. 39. -P. 3267-3271.

44. Noda T., Watanabe S., Sagara H., Kawaoka Y. Mapping of the VP40-binding regions of the nucleoprotein of Ebola virus//J. Virol. -2007. -Vol. 81. -P. 3554-3562.

45. Saijo M., Niikura M., Maeda A., Sata T., Kurata T., Kurane I., Morikawa S. Characterization of monoclonal antibodies to Marburg virus nucleoprotein (NP) that can be used for NP-capture enzyme-linked immunosorbent assay // J. Med. Virol. - 2005. - Vol. 76. - P. 111-118.

46. Science News. Pоaching, logging, and outbreaks of Ebola threaten central african gorillas and chimpanzees // Science Daily Aug. 31. - 2005.

47. Swenson D., Wang D., Luo M., Warfield K.L., Woraratanadharm J., Holman D.H., Dong J.Y., Pratt W.D. Complet protection of nonhuman primates against multistrain Ebola and Marburg virus infections//J. Clin. Vaccine Immunol. -2008. -Vol. 15. -P. 460-467.

48. Towner J.S., Khristova M.L., Sealy T.K., Vincent M.J., Erickson B.R., Bawiec D.A., Hartman A.L., Comer J.A., Zaki S.R., Strher U., Gomes da Silva F., del Castillo F., Rollin P.E., Ksiazek T.G., Nichol S.T. Marburgvirus genomics and association with a large hemorrhagic fever outbreak in Angola//J. Virol. -2006. -Vol. 80. -P. 6497-6516.

49. Towner J.S., Rollin P.E., Bausch D.G., Sanchez A., Crary S.M., Vincent M., Lee W.F., Spiropoulou C.F., Ksiazek T.G., Lukwiya M., Kaducu F., Downing R., Nichol S.T. Rapid diagnosis of Ebola fever by reverse transcription-PCR in an outbreak setting and assessment of patient viral load as a predictor of outcome//J. Virol. -2004. -Vol. 78. -P. 4330-4341.

50. Rowe A.K., Bertolli J., Mukunu R., Muyembe-Tamfum J.J., Bressler D., Williams A.J., Peters C.J., Rodriguez L., Feldmann H., Nichol S.T., Rollin P.E., Ksiazek T.G. Clinical, virologic and immunologic follow up of convalescent Ebola haemorrhagic fever patients and their household contacts, Kikwit Democratic Republic of the Congo//J. Infect. Dis. -1999. -Vol. 179. -P. 28-35.

51. Volchkov V.E., Chepurnov A.A., Volchkova V.A., Ternovoj V.A., Klenk H.D. Molecular characterization of guinea pig -adapted variants of Ebola virus//Virology. -2000. -Vol. 277. -P. 147-155.

52. Watanabe S., Noda T., Kawaoka Y. Functional mapping of nucleoprotein of Ebola virus//J. Virol. -2006. -Vol. 80. -P. 3743-3751.

53. WHO report 1995, 2007. Ebola haemorrhagic fever in Zaire.

54. WHO reports 1996, 1997, 2001, 2002. Ebola haemorrhagic fever in Gabon.

55. WHO reports 2000, 2001, 2007. Ebola haemorrhagic fever in Uganda.

56. WHO reports 2002, 2003, 2005. Ebola haemorrhagic fever in Congo.

57. WHO report 2004. Ebola haemorrhagic fever in Sudan.