ФЕНОМЕН ФОРМИРОВАНИЯ АГРЕГИРОВАННЫХ ДНК-СОДЕРЖАЩИХ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ЛОВУШЕК У БОЛЬНЫХ С ДИАБЕТИЧЕСКИМ ПОРАЖЕНИЕМ СТОП

Нейтрофильные внеклеточные ловушки (НВЛ) представляют собой фибриллярные структуры из деконденсированного хроматина и бактерицидных белков, играющие важную роль в патогенезе осложнений сахарного диабета. Особый интерес вызывают агрегированные формы НВЛ (агНВЛ) – макроскопические конгломераты, способные ограничивать воспаление путем деградации цитокинов, но одновременно создающие риск окклюзии сосудистого русла. Цель исследования: провести сравнительный анализ интенсивности формирования агрегированных и неагрегированных внеклеточных ловушек  (ВЛ) клетками различных фракций лейкоцитов периферической крови у пациентов с диабетическим поражением стоп.

В поперечное исследование были включены 73 пациента (53 с СДС, 20 с НОА) и 20 здоровых лиц контрольной группы. Анализ продукции ВЛ проводился раздельно во фракциях мононуклеаров и гранулоцитов с использованием флуоресцентной микроскопии. Формирование ВЛ оценивали в спонтанных условиях и при воздействии стимуляторов: тромбина и стимулятора бактериального происхождения.

В ходе исследования выявлено значимое повышение концентрации CitH3 в сыворотке крови пациентов с НОА (Me=7,12 нг/мл) по сравнению с контролем (Me=1,42 нг/мл; p=0,0003). В мононуклеарной фракции больных НОА зафиксирована максимальная интенсивность спонтанного формирования неагрегированных (Me=8,05% против 0,40% в контроле; p=0,0079) и агВЛ (Me=4,70% против 0,00%; p=0,0072). Стимуляция тромбином также показала гиперреактивность мононуклеарной фракции при НОА: доля неагрегированных ВЛ (Me=20,10%) значимо превышала показатели контроля (p=0,0003) и группы СДС (p=0,0067). Также в группе НОА отмечен статистически значимый рост количества тромбин-индуцированных агВЛ (p=0,0155). При микробной стимуляции значимое увеличение уровня агрегатов наблюдалось у пациентов с НОА в мононуклеарной фракции (p=0,0051) и у пациентов с СДС в гранулоцитарной фракции (p=0,0055).

Таким образом, пациенты с НОА характеризуются повышенной спонтанной способностью клеток мононуклеарной фракции к формированию как агрегированных, так и неагрегированных ВЛ по сравнению с контрольной группой и группой пациентов с СДС. Повышение способности к формированию ВЛ наблюдается у больных с диабетическим поражением стоп в условиях происходящего in vivo нетоза, о чем свидетельствует повышение уровня citH3 в крови. Обнаруженные во фракции мононуклеаров нейтрофилы низкой плотности (15-30%) могут являться основным источником формируемых ВЛ, что требует дальнейшего изучения их роли в патогенезе НОА.

1. Ramos-Martínez E., Hernández-González L., Ramos-Martínez I., Pérez-Campos Mayoral L., López-Cortés G.I., Pérez-Campos E., Mayoral Andrade G., Hernández-Huerta M.T., José M.V. Multiple Origins of Extracellular DNA Traps. Front. Immunol., 2021, Vol. 12, pp. 621311. doi: 10.3389/fimmu.2021.621311.

2. Yousefi S., Simon H.U. NETosis - Does It Really Represent Nature's "Suicide Bomber"? Front. Immunol., 2016, Vol. 7, pp. 328. doi: 10.3389/fimmu.2016.00328.

3. Yao M., Ma J., Wu D., Fang C., Wang Z., Guo T., Mo J. Neutrophil extracellular traps mediate deep vein thrombosis: from mechanism to therapy. Front. Immunol., 2023, Vol. 14, pp. 1198952. doi: 10.3389/fimmu.2023.1198952.

4. Schauer C., Janko C., Munoz L.E., Zhao Y., Kienhöfer D., Frey B., Lell M., Manger B., Rech J., Naschberger E., Holmdahl R., Krenn V., Harrer T., Jeremic I., Bilyy R., Schett G., Hoffmann M., Herrmann M. Aggregated neutrophil extracellular traps limit inflammation by degrading cytokines and chemokines. Nat. Med., 2014, Vol. 20, no. 5, pp. 511-517. doi: 10.1038/nm.3547.

5. Wang H., Kim S.J., Lei Y., Wang S., Wang H., Huang H., Zhang H., Tsung A. Neutrophil extracellular traps in homeostasis and disease. Signal Transduct. Target Ther., 2024, Vol. 9, no. 1, pp. 235. doi: 10.1038/s41392-024-01933-x.

6. Leppkes M., Schick M., Hohberger B., Mahajan A., Knopf J., Schett G., Muñoz L.E., Herrmann M. Updates on NET formation in health and disease. Semin. Arthritis Rheum., 2019, Vol. 49, no. 3S, pp. S43-S48. doi: 10.1016/j.semarthrit.2019.09.011.

7. Yaykasli K.O., Schauer C., Muñoz L.E., Mahajan A., Knopf J., Schett G., Herrmann M. Neutrophil Extracellular Trap-Driven Occlusive Diseases. Cells, 2021, Vol. 10, no. 9, pp. 2208. doi: 10.3390/cells10092208.

8. Wong S.L., Demers M., Martinod K., Gallant M., Wang Y., Goldfine A.B., Kahn C.R., Wagner D.D. Diabetes primes neutrophils to undergo NETosis, which impairs wound healing. Nat. Med., 2015, Vol. 21, no. 7, pp. 815-819. doi: 10.1038/nm.3887.

9. Menegazzo L., Ciciliot S., Poncina N., Mazzucato M., Persano M., Bonora B., Albiero M., Vigili de Kreutzenberg S., Avogaro A., Fadini G.P. NETosis is induced by high glucose and associated with type 2 diabetes. Acta Diabetol., 2015, Vol. 52, no. 3, pp. 497-503. doi: 10.1007/s00592-014-0676-x.

10. Новиков Д.Г., Золотов А.Н., Савочкина А.Ю., Индутный А.В., Корпачева О.В., Кириченко Н.А. Опыт разработки и применения метода исследования способности нейтрофилов к формированию внеклеточных ловушек. // Медицинская иммунология. – 2025. – Т. 27, № 6. – С. 1435-1443. [Novikov G. D., Zolotov A. N., Savochkina A. Yu., Indutny A. V., Korpacheva O. V., Kirichenko N. A. Experience in development and application of a technique for studying the ability of neutrophils to form extracellular traps. Meditsinskaya Immunologiya = Medical Immunology, 2025, Vol. 27, no. 6, pp. 1435-1443. (In Russ.)]. doi: 10.15789/1563-0625-EID-3200.

11. Li Y., Cao X., Liu Y., Zhao Y., Herrmann M. Neutrophil Extracellular Traps Formation and Aggregation Orchestrate Induction and Resolution of Sterile Crystal-Mediated Inflammation. Front. Immunol., 2018, Vol. 9, pp. 1559. doi: 10.3389/fimmu.2018.01559.

12. Mohammed M.H., Abdulrazzaq S.A., Khalaf A.A., Bishoyi A.K., R R., Kashyap A., Joshi K.K., Kadim A.S., Kariem M., Kadhim A.J. A comprehensive insight into NETosis-extracellular vesicle crosstalk in autoimmune diseases. Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol., 2026, Vol. 399, no. 2, pp. 1871-1895. doi: 10.1007/s00210-025-04564-3.

13. Li W., Wang Z., Su C., Liao Z., Pei Y., Wang J., Li Z., Fu S., Liu J. The effect of neutrophil extracellular traps in venous thrombosis. Thromb. J., 2023, Vol. 21, no. 1, pp. 67. doi: 10.1186/s12959-023-00512-4.