РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСА ТЕСТ-СИСТЕМ НА ОСНОВЕ ОТ-ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ В МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТКАХ КРОВИ И СИНОВИАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ

Резюме. Дисбаланс синтеза провоспалительных и противовоспалительных цитокинов играет ключевую роль в патогенезе ревматоидного артрита (РА), в том числе в эрозивном поражении суставов. Различия цитокинового профиля при РА достаточно хорошо изучены. Вместе с тем вопрос о связи цитокинового профиля с иммуновоспалительной активностью, прогрессированием и прогнозом РА требует дополнительного исследования. В связи с активным поиском новых мишеней для антицитокиновой терапии при РА оценка уровня цитокинов в периферический крови и синовиальной жидкости остается актуальной. Поэтому использование новых методов, основанных на технологиях определения уровня экспрессии мРНК генов цитокинов, является перспективным. Цель работы состояла в разработке тест-систем для количественного определения мРНК цитокинов: TNFα, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-17, IL-15, IL-10, IFNγ, IL-4, IL-2. В данной статье дана характеристика тест-систем, описаны принципы метода, приведено сравнение уровня экспрессии генов цитокинов в периферической крови и синовиальной жидкости при РА.

ОТ-ПЦР, цитокиновый профиль, мононуклеарные клетки, ревматоидный артрит, TNFα, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-17, IL-15, IL-10, IFNγ, IL-4, IL-2

1. Насонов E.Л., Гукасян Д.А., Насонова М.Б. Иммунопатология ревматоидного артрита и остеопороз: новые данные // Остеопороз и остеопатии. – 2000. – № 2. – С. 4-7.

2. Abbas A.K. Murphy K.M., Sher A. Functional diversity of T helper lymphocytes // Nature. – 1996. – Vol. 383. – P. 787-793.

3. Arnett F.C., Edworthy S.M., Bloch D.A., McShane D.J., Fries J.F., Cooper N.S., Healy L.A., Kaplan S.R., Liang M.H., Luthra H.S. at al. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis // Arthritis Rheum. – 1988. – Vol. 31. – P.315-324.

4. Dolhain R.J., van der Heiden A.N., ter Haar N.T. Breedveld F.C., Miltenburg A.M. Shift toward T lymphocytes with a T helper 1 cytokine-secretion profile in the joints of patient with rheumatoid arthritis // Arthritis Rheum. – 1996. – Vol. 39. – P. 1961-1969.

5. Gracie J.A., Forsey R.J., Chan W.L., Gilmour A., Leung B.P., Greer M.R., Kennedy K., Carter R., Wei X.Q., Xu D., Field M., Foulis A., Liew F.Y., McInnes I.B. A proinflammatory role for IL-18 in rheumatoid arthritis // J Clin Invest. – 1999. – Vol. 104. – P. 1393 - 1401.

6. Gaffen S.L. Biology of recently discovered cytokines: Interleukin-17 – a unique inflammatory cytokine with roles in bone biology and arthritis // Arthritis Res Ther. – 2004. – Vol. 6. – P. 240-247.

7. Kim K-W., Cho M-L, Park M-K., Yoon C.H., Park S.H., Lee S.H., Kim H.Y. Increased interleukin-17 production via a phosphoinositide 3-kinase/Akt and nuclear factor kB-dependent pathway in patients with rheumatoid arthritis // Arthritis Res Ther. – 2005. – Vol. 7.– P. 139-148.

8. McInnes I.B., Gracie J.A., Harnett M., Harnett W., Liew F.Y. New strategies to control inflammatory synovitis: interleukin 15 and beyond // Ann Rheum Dis. – 2003. – Vol. 62. – P. 51-54.

9. McInnes I.B., Gracie J.A. Interleukin 15: a proinflammatory role in rheumatoid arthritis synovitis // Immunol Today. – 1998. – Vol. 19. – P. 75-79.

10. Miosses P.,van den Berg W. Th1/Th2 cytokine balance inarthritis // Arthritis Rheum. – 1997. – Vol. 40. – P. 2105-2115.

11. Morita Y., Yamamura M., Kawashima M. Harada S., Tsuji K., Shibuya K., Maruyama K., Makino H. Flow cytometric singl-cell analisis of cytokine production by CD4+ T cell in synovial tissue and periferal blood from patients with rheumatoid arthritis // Arthritis Rheum. – 1998. – Vol. 41. – P. 1669 - 1676.

12. Park J.Y., Pillinger M.H. Interleukin-6 the pathogenesis of rheumatoid arthritis // Bull NYU Hosp Joint Dis. – 2007. – Vol. 65. – P. 4-10.

13. Simon A.K., Seipelt E., Sieper J. Divergent T-cell cytokine patterns in iflammatory arthritis // Proc Natl Acad Sci USA. – 1994. – Vol. 91. – P. 8562 - 8566.

14. Van Roon J.A., van Roy J.L.,Duits A., Lafeber F.P., Bijlsma J.W. Proinflammatory cytokine production and cartilage damage due to rheumatoid synovial T-helper-1 activition is inhibited by interleukin-4 // Ann Rheum Dis. – 1995. – Vol.54. – P. 836-840.