Определение антител к терапевтическим препаратам эритропоэтина: возможно ли создание универсальной тест-системы?

Целью данной работы является оценка влияния препарата эритропоэтина, используемого для получения иммуносорбента, на выявление IgG-антител к ЭПО иммуноферментным методом в сыворотках крови пациентов, проходящих терапию препаратами чрЭПО.

Проанализированы 294 сывороток крови пациентов, получавших препараты эритропоэтина и 127 образцов пациентов, не получавших препараты чрЭПО. Исследование проводили методом твердофазного ИФА путем связывания исследуемых препаратов чрЭПО на планшете с иммобилизованными моноклональными антителами к ЭПО.

Выявление антител к эритропоэтину проводили с использованием мышиных моноклональных антител к IgG, IgG1 и IgG4 человека, конъюгированных с пероксидазой хрена. В работе исследовали препараты: эритропоэтин рекомбинантный человеческий рчЭПО-бета (Shandong Kexing Bioproducts), европейский стандарт эритропоэтина BRP 3, коммерческие препараты Аранесп (Amgen Europe B.V), Мирцера (F. Hoffmann-La Roche, Ltd.), Эпрекс (ОО «Джонсон & Джонсон»), Эральфон (ЗАО «ФармФирма «Сотекс»).

Чувствительность характеризовали индексом позитивности (ИП), вычисляемом по формуле ИП = ОПобразца/ОПпорог., где ОПпорог. = ОПср.К- + 3SD, где ОПср.К— среднее арифметическое значение регистрируемого сигнала для выборки сывороток крови пациентов, никогда не получавших препараты эритропоэтина, SD-стандартное отклонение. Результаты оценивали как положительные с ИП > 1,1 и отрицательные с ИП < 0,9. Результаты в диапазоне 0,9 ≤ ИП < 1,1 рассматривали как неопределенные.

Из 294 проанализированных образцов при определении суммарных специфических IgG-антител 32 образца оценивали как положительные или неопределенные во всех случаях, при этом доля неопределенных была выявлена в 1,0-1,7% образцов. Из них антитела субкласса IgG1 были обнаружены у 50-56,3% пациентов, антитела субкласса IgG4 у 43,8-50% пациентов. Тест Манна-Уитни показал достоверное различие между исследуемыми образцами по сравнению с контрольной группой для всех модификаций ИФА (р = 0,001). Тест Краскела-Уоллиса не выявил существенных различий для пяти выборок данных по ИП, полученных при иммунохимической иммобилизаций различных препаратов ЭПО (р = 0,05).

Коэффициент корреляции индексов позитивности находился в диапазоне 0,99-0,96 для суммарных IgG и > 0,98 для двух подклассов антител. Коэффициент линейной регрессии был близок к единице, что указывает на незначительные различия в чувствительности сравниваемых методик.

Проведенные исследования указывают на возможность определять антитела к эритропоэтину у пациентов, получавших различные препараты чрЭПО, в одной тест-системе, что открывает возможность для разработки универсальной коммерческой тест-системы.

1. Кудряшова А.М., Борисова О.В., Михайлова Н.А., Лоншаков Д.В., Катлинский А.В. Влияние методов иммобилизации эритропоэтина на чувствительность выявления специфических IgG антител в сыворотках крови экспериментальный животных // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2017. Т 6. С. 49-55.

2. Кудряшова А.М., Нестеренко Л.Н., Генералова Г.А., Абасеева Т.Ю., Михайлова Н.А., Борисова О.В. Характеристика антител к эритропоэтину у пациентов, проходящих терапию препаратами рекомбинантного человеческого эритропоэтина // Медицинская иммунология, 2020. Т. 22, № 1. С. 143-152. doi: 10.15789/1563-0625-COE-1879.

3. Barger T.E., Kuck A.J., Chirmule N., Swanson S.J., Mytych D.T. Detection of anti-ESA antibodies in human samples from PRCA and non-PRCA patients: an immunoassay platform comparison. Nephrol. Dial. Transplant., 2012, Vol. 27, pp. 688-693.

4. Barger T.E., Wrona D., Goletz T.J., Mytych D.T. A detailed examination of the antibody prevalence and characteristics of anti-ESA antibodies. Nephrol. Dial. Transplant., 2012, Vol. 27, no. 10, pp. 3892-3899.

5. Bennett C.L., Luminari S., Nissenson A.R., Tallman M.S., Klinge S.A., McWilliams N., McKoy J.M., Kim B., Lyons E.A., Trifilio S.M., Raisch D.W, Evens A.M., Kuzel T.M., Schumock G.T., Belknap S.M., Locatelli F., Rossert J., Casadevall N. Pure red-cell aplasia and epoetin therapy. N. Engl. J. Med., 2004, Vol. 351, no. 14, pp. 1403-1408.

6. Casadevall N. Antibodies against rHuEPO: native and recombinant. Nephrol. Dial.Transplant., 2002, Vol. 17, no. 5, pp. 42-47.

7. Casadevall N., Eckardt K.U., Rossert J. Epoetin-induced autoimmune pure red cell aplasia. J. Am. Soc. Nephrol., 2005, Vol. 16, no. 1, pp. 67-69.

8. Casadevall N., Nataf J., Viron B. Kolta A., Kiladjian J.J., Martin-Dupont P., Michaud P., Papo T., Ugo V, Teyssandier I., Varet B., Mayeux P. Pure red-cell aplasia and antierythropoietin antibodies in patients treated with recombinant erythropoietin. N. Engl. J. Med., 2002, Vol. 346, no. 7, pp. 469-475.

9. El-Din M., Attia F., Labib S., Omar W. Detection of circulating antierythropoietin antibodies in patients with end stage renal disease on regular hemodialysis. Int. J. Lab. Hematol., 2010, Vol. 32, no. 3, pp. 336-343.

10. Gross J., Moller R., Henke W Detection of anti-EPO antibodies in human sera by a bridging ELISA is much more sensitive when coating biotinylated rhEPO to streptavidin rather than using direct coating of rhEPO. J. Immunol. Methods, 2006, Vol. 313, no. 1-2, pp. 176-182.

11. Guideline on immunogenicity assessment of therapeutic proteins. European Medicines Agency. Committee for Medicinal Products for Human Use (CHMP), 2017.

12. Herrington W, Wieser C., Rosenkranz A.R. Pure red cell aplasia after treatment of renal anaemia with epoetin theta. Clin. Kidney J., 2013, Vol. 6, no. 5, pp. 539-542.

13. Hoesel W, Gross J., Moller R., Kanne B., Wessner A., Muller G., Muller A., Gromnica-Ihle E., Fromme M., Bischoff S., Haselbeck A. Development and evaluation of a new ELISA for the detection and quantification of antierythropoietin antibodies in human sera. J. Immunol. Methods, 2004, Vol. 294, no. 1-2, pp. 101-110.

14. Macdougall I.C., Casadevall N., Locatelli F., Combe C., London G.M., Di Paolo S., Kribben A., Fliser D., Messner H., McNeil J., Stevens P, Santoro A., De Francisco A.L., Percheson P, Potamianou A., Foucher A., Fife D., Merit V., Vercammen E. Incidence of erythropoietin antibody-mediated pure red cell aplasia: the Prospective Immunogenicity Surveillance Registry (PRIMS). Nephrol. Dial. Transplant., 2015, Vol. 30, no. 3, pp. 451-460.

15. Macdougall I.C., Roger S.D., de Francisco A., Goldsmith D.J., Schellekens H., Ebbers H., Jelkmann W., London G., Casadevall N., H5rl W.H., Kemeny D.M., Pollock C. Antibody-mediated pure red cell aplasia in chronic kidney disease patients receiving erythropoiesis stimulating agents: new insights. Kidney Int., 2012, Vol. 81, no. 8, pp. 727-732.

16. Nakane P.K., Kawaoi A.J. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugation. Histochem. Cytochem., 1974, Vol. 22, no. 2, pp. 1084-1091.

17. Ozturk S., Gumu§ A., Memili V, Duz M.E., Cebeci E., Kolda§ M., Kazancioglu R. Antierythropoietin antibodies in hemodialysis patients treated with recombinant erythropoietin. Turk. Neph. Dial. Transpl., 2014, Vol. 23, no. 2, pp. 125-130.

18. Weeraratne D.K., Kuck A.J., Chirmule N., Mytych D.T. Measurement of anti-erythropoiesis-stimulating agent IgG4 antibody as an indicator of antibody-mediated pure red cell aplasia. Clin. Vaccine Immunol., 2013, Vol. 20, no. 1, pp. 46-51.