Preview

Медицинская иммунология

Расширенный поиск

ОПРЕДЕЛЕНИЕ мРНК АНГИОГЕННЫХ И АНГИОСТАТИЧЕСКИХ ХЕМОКИНОВ И ИХ РЕЦЕПТОРОВ В СИНОВИАЛЬНОЙ ОБОЛОЧКЕ МЕТОДОМ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

https://doi.org/10.15789/1563-0625-2013-6-525-534

Полный текст:

Аннотация

Резюме. В настоящее время в иммунопатогенезе различных заболеваний суставов большая роль отводится хемокинам. При обследовании больных с патологией суставов (ревматоидный артрит, остеоартроз, псориатический артрит и др.), помимо периферической крови, основным биоматериалом является синовиальная жидкость. В то же время не меньший интерес представляет исследование синовиальной оболочки (СО), в которой развиваются основные патологические процессы, и, соответственно, анализ хемокинов и их рецепторов в СО может предоставить более полную информацию об иммунопатогенезе заболеваний суставов различной этиологии. В данной работе была проведена оптимизация методики количественного определения экспрессии мРНК ангиогенных и ангиостатических хемокинов и их рецепторов в СО с помощью ПЦР в реальном времени с обратной транскрипцией. Подробно описаны все этапы проведения исследования, начиная от взятия биоматериала, заканчивая анализом результатов ПЦР. Приведены границы нормальных значений изучаемых показателей по результатам обследования лиц с травмой суставов в анамнезе и с отсутствием на момент обследования каких-либо признаков внутри- и внесуставного воспаления. Показано, что данный метод может быть информативен для сравнения внутрисуставной экспрессии хемокинов и рецепторов между группами и может использоваться для изучения роли хемокинов в развитии соответствующих иммунопатологических процессов.

Об авторах

Д. А. Жебрун
ФБУН «НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера», Санкт-Петербург; ФГБУ «ФЦСКЭ имени В.А. Алмазова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Россия

младший научный сотрудник

197341, ул. Аккуратова, 2. Тел.: 8 (812) 702-37-77



А. Л. Маслянский
ФГБУ «ФЦСКЭ имени В.А. Алмазова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Россия

к.м.н., старший научный сотрудник НИЛ ревматологии



А. Г. Титов
ФГБУ «ФЦСКЭ имени В.А. Алмазова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Россия
к.м.н., врач-травматолог отделения ревматологии


А. П. Патрухин
ФБУН «НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера», Санкт-Петербург
Россия
врач-травматолог


А. А. Костарева
ФГБУ «ФЦСКЭ имени В.А. Алмазова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Россия

к.м.н., директор института Молекулярной биологии и генетики



И. С. Гольцева
ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный технологический институт», Санкт-Петербург
Россия
студенка-магистр


Арег А. Тотолян
ФБУН «НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера», Санкт-Петербург; ФГБУ «ФЦСКЭ имени В.А. Алмазова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Россия

д.м.н., профессор, член-корр. РАМН, заместитель директора по научной работе; заведующий НИЛ иммунологии



Список литературы

1. Arenberg D.A., Keane M.P., DiGiovine B., Kunkel S.L., Morris S.B., Xue Y.Y., Burdick M.D., Glass M.C., Iannettoni M.D., Strieter R.M. Epithelial neutrophil activating peptide (ENA-78) is an important angiogenic factor in non-small cell lung cancer. J. Clin Invest., 1998, vol. 102, pp. 465-472.

2. Blades M.C., Ingegnoli F., Wheller S.K., Manzo A., Wahid S., Panayi G.S., Perretti M., Pitzalis C. Stromal cell-derived factor 1 (CXCL12) induces monocyte migration into human synovium transplanted onto SCID Mice. Arthritis Rheum., 2002, vol. 46, no. 3, pp. 824-836.

3. Boulday G., Haskova Z., Reinders M.E., Pal S., Briscoe D.M. Vascular endothelial growth factorinduced signaling pathways in endothelial cells that mediate overexpression of the chemokine IFN-gammainducible protein of 10 kDa in vitro and in vivo. J. Immunol., 2006, vol. 176, pp. 3098-3107.

4. Bustin S.A., Nolan T. Pitfalls of quantitative real-time reverse-transcription polymerase chain reaction. J. Biomol. Tech., 2004, vol. 15, pp. 155-166.

5. Chen Z., Malhotra P.S., Thomas G.R., Ondrey F.G., Duffey D.C., Smith C.W., Enamorado I., Yeh N.T., Kroog G.S., Rudy S., McCullagh L., Mousa S., Quezado M., Herscher L.L., Van Waes C. Expression of proinflammatory and proangiogenic cytokines in patients with head and neck cancer. Clin. Cancer Res., 1999, vol. 5, pp. 1369-1379.

6. Esche C., Stellato C., Beck L.A. Chemokines: key players in innate and adaptive immunity. J. Invest. Dermatol., 2005, vol. 125, pp. 615-628.

7. Firestein G.S. Etiology and pathogenesis of rheumatoid arthritis. Kelly’s Textbook of Rheumatology. Philadelphia, PA, Saunders Elsevier, 2009, pp. 1035-1086.

8. Frangogiannis N.G., Entman M.L. Chemokines in myocardial ischemia. Trends Cardiovasc. Med., 2005, vol. 15, pp. 163-169.

9. Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M. Real time quantitative PCR. Genome Res.,1996, vol. 6, no. 10, pp. 986-994.

10. Hellemans J., Mortier G., De Paepe A., Speleman F., Vandesompele J. qBase relative quantification framework and software for management and automated analysis of real-time quantitative PCR data. Genome Biology, 2007, vol. 8, p. R19.

11. Hitchon C.A., Alex P., Erdile L.B., Frank M.B., Dozmorov I., Tang Y., Wong K., Centola M., El- Gabalawy H.S. A distinct multicytokine profile is associated with anti-cyclical citrullinated peptide antibodies in patients with early untreated inflammatory arthritis. J. Rheumatol., 2004 Dec, vol. 31, no. 12, pp. 2336-2346.

12. Keane M.P., Donnelly S.C., Belperio J.A., Goodman R.B., Dy M., Burdick M.D., Fishbein M.C., Strieter R.M. Imbalance in the expression of CXC chemokines correlates with bronchoalveolar lavage fluid angiogenic activity and procollagen levels in acute respiratory distress syndrome. J. Immunol., 2002, vol. 169, pp. 6515-6521.

13. Kitadai Y., Haruma K., Sumii K., Yamamoto S., Ue T., Yokozaki H., Yasui W., Ohmoto Y., Kajiyama G., Fidler I.J., Tahara E. Expression of IL-8 correlates with vascularity in human gastric carcinomas. Am. J. Pathol., 1998, vol. 152, pp. 93-100

14. K nig A., Krenn V., Toksoy A., Gerhard N., Gillitzer R. MIG, GROα and RANTES messenger RNA expression in lining layer, infiltrates and different leucocyte populations of synovial tissue from patients with rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis and osteoarthritis. Virchows Arch., 2000, vol. 436, pp. 449-458.

15. Maurer A.M., Zhou B., Han Z.C. Roles of platelet factor 4 in hematopoiesis and angiogenesis. Growth Factors, 2006, vol. 24, pp. 242-252.

16. Murphy P.M., Baggiolini M., Charo I.F., Hebert C.A., Horuk R., Matsushima K., Miller L.H., Oppenheim J.J., Power C.A. International union of pharmacology. XXII. Nomenclature for chemokine receptors. Pharmacol. Rev., 2000, vol. 52, pp. 145-176.

17. Overbergh L., Giulietti A., Valckx D., Decallonne R., Bouillon R., Mathieu C. The use of real-time reverse transcriptase PCR for the quantification of cytokine gene expression. J. Biomol. Tech., 2003, vol. 14, no. 1, pp. 33-43.

18. Overbergh L, Gysemans C, Mathieu C. Quantification of chemokines by real-time reverse transcriptase PCR: applications in type 1 diabetes. Expert Rev. Mol. Diagn., 2006 Jan, vol. 6, no. 1, pp. 51-64.

19. Pierer M., Rethage J., Seibl R., Lauener R., Brentano F., Wagner U., Hantzschel H., Michel B.A., Gay R.E., Gay S., Kyburz D. Chemokine secretion of rheumatoid arthritis synovial fibroblasts stimulated by Tolllike receptor 2 ligands. J. Immunol., 2004, vol. 172, no. 2, pp. 1256-1265.

20. Schmittgen T., Livak K. Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method. Nature Protocols, 2008, vol. 3, no. 6, pp. 1101-1108.

21. Schmutz C., Hulme A., Burman A., Salmon M., Ashton B., Buckley C., Middleton J. Chemokine receptors in the rheumatoid synovium: upregulation of CXCR5. Arthritis Res. Ther., 2005, vol. 7, no. 2, pp. R217-229.

22. Schroeder A., Mueller O., Stocker S., Salowsky R., Leiber M., Gassmann M., Lightfoot S., Menzel W., Granzow M., Ragg T. The RIN: an RNA integrity number for assigning integrity values to RNA measurements. BMC Mol Biol., 2006, vol. 7, p. 3 http://www.biomedcentral.com/1471-2199/7/3

23. Stamatovic S.M., Keep R.F., Mostarica-Stojkovic M., Andjelkovic A.V. CCL2 regulates angiogenesis via activation of Ets-1 transcription factor. J. Immunol., 2006, vol. 177, pp. 2651-2661.

24. Strieter R.M., Polverini P.J., Kunkel S.L., Arenberg D.A., Burdick M.D., Kasper J., Dzuiba J., Van Damme J., Walz A., Marriott D., Chan S.-Y., Roczniak S., Shanafelt A.B. The functional role of the ELR motif in CXC chemokine-mediated angiogenesis. J. Biol. Chem., 1995, vol. 270, pp. 27348-27357.

25. Van Damme J., Mantovani A. From cytokines to chemokines. Cytokine & Growth Factor Reviews 16, 2005, pp. 549-551.

26. Van der Voort R., Antoine W.T. van Lieshout, Liza W.J. Toonen, Annet W. Sl etjes, Wim B. van den Berg, Carl G. Figdor, Timothy R.D.J. Radstake, Gosse J. Adema. Elevated CXCL16 expression by synovial macrophages recruits memory T cells into rheumatoid joints. Arthritis Rheum., 2005, vol. 52, no. 5, pp. 1381-1391.

27. Vandesompele J., De Preter K., Pattyn F., Poppe B., Van Roy N., De Paepe A., Speleman F. Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes. Genome Biology, 2002, vol. 3, no. 7: http://genomebiology.com/2002/3/7/research/0034.5

28. Volin M.V., Woods J.M., Amin M.A., Connors M.A., Harlow L.A., Koch A.E. Fractalkine: A novel angiogenic chemokine in rheumatoid arthritis. Am. J. Pathol., 2001, vol. 159, pp. 1521-1526.

29. Yoshida S., Arakawa F., Higuchi F., Ishibashi Y., Goto M., Sugita Y., Nomura Y., Niino D., Shimizu K., Aoki R., Hashikawa K., Kimura Y., Yasuda K., Tashiro K., Kuhara S., Nagata K., Ohshima K. Gene expression analysis of rheumatoid arthritis synovial lining regions by cDNA microarray combined with laser microdissection: up-regulation of inflammation-associated STAT1, IRF1, CXCL9, CXCL10, and CCL5. Scand. J. Rheumatol., 2012, vol. 41, pp. 170-179.

30. Zlotnik A., Yoshie O. Chemokines: a new classification system and their role in immunity. Immunity, 2000, vol. 12, pp. 121-127.


Для цитирования:


Жебрун Д.А., Маслянский А.Л., Титов А.Г., Патрухин А.П., Костарева А.А., Гольцева И.С., Тотолян А.А. ОПРЕДЕЛЕНИЕ мРНК АНГИОГЕННЫХ И АНГИОСТАТИЧЕСКИХ ХЕМОКИНОВ И ИХ РЕЦЕПТОРОВ В СИНОВИАЛЬНОЙ ОБОЛОЧКЕ МЕТОДОМ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ. Медицинская иммунология. 2013;15(6):525-534. https://doi.org/10.15789/1563-0625-2013-6-525-534

For citation:


Zhebrun D.A., Maslyansky A.L., Titov A.G., Patruhin A.P., Kostareva A.A., Goltseva I.S., Totolian A.A. ANALYSIS OF EXPRESSION OF ANGIOGENIC AND ANGIOSTATIC CHEMOKINES AND THEIR RECEPTORS IN SYNOVIAL TISSUE BY QUANTITATIVE REAL-TIME PCR. Medical Immunology (Russia). 2013;15(6):525-534. (In Russ.) https://doi.org/10.15789/1563-0625-2013-6-525-534

Просмотров: 447


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 1563-0625 (Print)
ISSN 2313-741X (Online)