Определение референтных интервалов циркулирующих в крови эксцизионных колец TREC и KREC у лиц старше 18 лет

Все большее внимание обращают на себя способы выявления первичных и вторичных Т- и/или В-клеточных иммунодефицитов, внедрение которых в лабораторную диагностику способствовало бы скорейшему выявлению иммунодефицитных состояний. В настоящее время неуклонно увеличивается количество выявленных взрослых больных с иммунодефицитами различного генеза. Поскольку пол, возраст и раса пациентов могут являться значимыми факторами состояния иммунитета, определение популяционных референтных интервалов содержания молекул TREC и KREC в периферической крови взрослой популяции для дальнейшего выявления и углубленного обследования сложных случаев как врожденных, так и приобретенных иммунодефицитных состояний является актуальной задачей современной молекулярно-генетической лабораторной диагностики. Цель – определить референтные интервалы количественного содержания фрагментов ДНК TREC и KREC в периферической крови среди взрослого населения Санкт-Петербурга. Использовали образцы цельной крови, полученные от 717 условно здоровых добровольцев в возрасте от 18 до 108 лет в рамках программы оценки популяционного иммунитета жителей СанктПетербурга. Критерием исключения добровольца из исследования являлось наличие диагноза иммунодефицит любого генеза, вирусный гепатит А, В, С, ВИЧ-инфекция. Определение количественного содержания целевых фрагментов ДНК TREC и KREC проводили с использованием набора реагентов для количественного определения эксцизионных колец TREC и KREC методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени (TREC/KREC-AMP PS). Определение референтных интервалов прямым методом проводили согласно рекомендациям Международной федерации клинической химии и Государственного стандарта (ГОСТ) Р 53022.3-2008. В рамках исследования добровольцы были разделены на шесть возрастных групп: 18-29 лет, 30-39 лет, 40-49 лет, 50-59 лет, 60-69 лет и лица старше 70 лет. Определено количественное содержание молекул TREC и KREC в каждом образце крови для всех групп. Корреляционный анализ позволил установить отрицательную зависимость концентрации молекул TREC в образцах крови с возрастом участников исследования (коэффициент корреляции Спирмена r = -0,80 (p-value < 0,0001)). Выявлены достоверные различия в уровнях TREC между разными возрастными группами. Корреляционной зависимости содержания молекул KREC в образцах крови от возраста и различий между возрастными группами не установлено. Определены референсные интервалы уровня TREC для каждой выделенной возрастной группы. Для всех групп установлен единый референсный интервал уровней молекул KREC. Определенные РИ TREC и KREC у взрослых людей значительно ниже, чем у новорожденных. Полученные результаты, позволившие определить референсные интервалы уровней TREC и KREC для взрослых людей, будут способствовать эффективной персонифицированной лабораторной диагностике иммунодефицитных состояний различного генеза.

1. ГОСТ Р 53022.3-2008. Технологии лабораторные клинические. Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Часть 3. Правила оценки клинической информативности лабораторных тестов. Введ. 2010-01-01. М.: Стандарт информ, 2009. 19 с.

2. Евгина С.А., Савельев Л.И. Современные теория и практика референтных интервалов // Лабораторная служба, 2019. T. 8, № 2. С. 36-44.

3. Клинические рекомендации. Первичные иммунодефициты преимущественно с недостаточностью антител (D80- D 80.9; D83 – D83.2; D83.8; D83.9). 2018. [Электронный ресурс]. Режим доступа: https://nrcii.ru/specialistam/klinrecommend/pid.pdf.

4. Сайтгалина М.А., Останкова Ю.В., Любимова Н.Е., Семенов А.В., Кузнецова Р.Н., Тотолян А.А. Модифицированный метод количественного определения уровней TREC и KREC в периферической крови у больных с иммунодефицитными состояниями // Инфекция и иммунитет, 2022, T. 12, № 5. С. 981-996. doi: 10.15789/2220-7619-MMF-2039.

5. Тузанкина И.А., Каракина М.Л., Власова Е.В. Анализ клинических проявлений дебюта первичных иммунодефицитов у взрослых // Медицинская иммунология, 2014. Т. 4, № 16. C. 367-374. doi: 10.15789/1563-0625-2014-4-367-374.

6. Ярилин А.А. Иммунология. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. C. 251-260.

7. Argudo-Ramírez A., Martín-Nalda A., Marín-Soria J.L., López-Galera R.M., Pajares-García S., González de Aledo-Castillo J.M., Martínez-Gallo M., García-Prat M., Colobran R., Riviere J.G., Quintero Y., Collado T., García-Villoria J., Ribes A., Soler-Palacín P. First Universal Newborn Screening Program for Severe Combined Immunodeficiency in Europe. Two-Years’ Experience in Catalonia (Spain). Front. Immunol., 2019, Vol. 10, 2406. doi:10.3389/fimmu.2019.02406.

8. Brown J.J., Datta V., Browning M.J., Swift P.G.F. Graves’ disease in DiGeorge syndrome: patient report with a review of endocrine autoimmunity associated with 22q11.2 deletion. J. Pediatr. Endocrinol. Metab., 2004, Vol. 17, pp. 1575-1579.

9. CLSI Document C28-A3c. Defining, establishing, and verifying reference intervals in the clinical laboratory. Approved guideline. Third edition. Wayne. Pa. USA: CLSI. 2010. Available at: https://clsi.org/media/1421/ep28a3c_sample.pdf.

10. Dar N., Gothelf D., Korn D., Frisch A., Weizman A., Michaelovsky E., Carmel M., Yeshayahu Y., DubnovRaz G., Pessach I.M., Simon A.J., Lev A., Somech R. Thymic and bone marrow output in individuals with 22q11.2 deletion syndrome. Pediatr. Res., 2015, Vol. 4, no. 7, pp. 579-585.

11. di Renzo M., Pasqui A.L., Auteri A. Common variable immunodeficiency: a review. Clin. Exp. Med., 2004, Vol. 3, no. 4, pp. 211-217.

12. Garcia-Prat M., Álvarez-Sierra D., Aguiló-Cucurull A., Salgado-Perandrés S., Briongos-Sebastian S., Franco-Jarava C., Martin-Nalda A., Colobran R., Montserrat I., Hernández-González M., Pujol-Borrell R., SolerPalacin P., Martínez-Gallo M. Extended immunophenotyping reference values in a healthy pediatric population. Cytometry B Clin. Cytom., 2019, Vol. 96, no. 3, pp. 223-233.

13. Gathmann B. The European internet-based patient and research database for primary immunodeficiencies: update 2011. Clin. Exp. Immunol., 2012, Vol. 167, no. 3, pp. 479-491.

14. Hazenberg M.D., Verschuren M.C., Hamann D., Miedema F., van Dongen J.J. T cell receptor excision circles as markers for recent thymic emigrants: basic aspects, technical approach, and guidelines for interpretation. J. Mol. Med., 2001, Vol. 79, no. 11, pp. 631-640.

15. Jung D., Alt F.W. Unraveling V(D)J recombination; insights into gene regulation. Cell, 2004, Vol. 116, no. 2, pp. 299-311.

16. Just H.L., Deleuran M., Vestergaard C., Deleuran B., Thestrup-Pedersen K. T-cell receptor excision circles (TREC) in CD4+ and CD8+ T-cell subpopulations in atopic dermatitis and psoriasis show major differences in the emission of recent thymic emigrants. Acta Derm. Venereol., 2008, Vol. 88, no. 6, pp. 566-572.

17. Kamae C., Nakagawa N., Sato H., Honma K., Mitsuiki N., Ohara O., Kanegane H., Pasic S., PanHammarström Q., van Zelm M.C., Morio T., Imai K., Nonoyama S. Common variable immunodeficiency classification by quantifying T-cell receptor and immunoglobulin κ-deleting recombination excision circles. J. Allergy Clin. Immunol., 2013, Vol. 131, no. 5, pp. 1437-1440.

18. Kwok J.S.Y., Cheung S.K.F., Ho J.C.Y., Tang I.W.H., Chu P.W.K., Leung E.Y.S. Establishing simultaneous T Cell Receptor Excision Circles (TREC) and K-Deleting Recombination Excision Circles (KREC) quantification assays and laboratory reference intervals in healthy individuals of different age groups in Hong Kong. Front. Immunol., 2020, Vol. 11, 1411. doi: 10.3389/fimmu.2020.01411.

19. Lucas M., Lee M., Lortan J., Lopez-Granados E., Misbah S., Chapel H. J. Infection outcomes in patients with common variable immunodeficiency disorders: relationship to immunoglobulin therapy over 22 years. J. Allergy Clin. Immunol., 2010, Vol. 125, no. 6, pp. 1354-1360.

20. Naylor K., Li G., Vallejo A.N., Lee W.W., Koetz K., Bryl E. The influence of age on T cell generation and TCR diversity. J. Immunol., 2005, Vol. 174, no. 11, pp. 7446-7452.

21. Peyvandi S., Lupo P.J., Garbarini J. 22q11.2 deletion in patients with conotruncal defects: data from 1610 consecutive cases. Pediatr. Cardiol., 2013, Vol. 34, no. 7, pp. 1687-1694.

22. Pido-Lopez J., Imami N., Aspinall R. Both age and gender affect thymic output: more recent thymic migrants in females than males as they age. Clin. Exp. Immunol., 2001, Vol. 125, no. 3, pp. 409-413.

23. Quinti I., Soresina A., Spadaro G., Martino S., Donnanno S., Agostini C. Long-term follow-up and outcome of a large cohort of patients with common variable immunodeficiency. J. Clin. Immunol., 2007, Vol. 27, no. 3, pp. 308-316.

24. Siest G., Henny J., Grasbeck R., Wilding P., Petitclerc C., Queralto J., Petersen P. The theory of reference values: an unfinished symphony. CCLM, 2013, Vol. 51, no. 1, pp. 47-64.

25. Sottini A., Serana F., Bertoli D., Chiarini M., Valotti M., Vaglio Tessitore M., Lmberti L. Simultaneous quantification of T-cell receptor excision circles (TRECs) and K-deleting recombination excision circles (KRECs) by real-time PCR. J. Vis. Exp., 2014, Vol. 94, 52184. doi: 10.3791/52184.

26. Tangye S.G., Al-Herz W., Bousfiha A., Chatila T., Cunningham-Rundles C., Etzioni A. Human inborn errors of immunity: 2019 update on the classification from the international union of immunological societies expert committee. J. Clin. Immunol., 2020, Vol. 40, no. 1, pp. 24-64.

27. Törlén J., Gaballa A., Remberger M., Mörk L.M., Sundberg B., Mattsson J., Uhlin M. Effect of graftversus-host disease prophylaxis regimens on T and B cell reconstitution after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. Biol. Blood Marrow Transplant., 2019, Vol. 25, no. 6, pp. 1260-1268.

28. Tuano K.S., Seth N., Chinen J. Secondary immunodeficiencies: An overview. Ann. Allergy Asthma Immunol., 2021, Vol. 127, no. 6, pp. 617-626.

29. Urm S.H. Asthma and risk of selective IgA deficiency or common variable immunodeficiency: a population based case control study. Mayo Clin. Proc., 2013, Vol. 88, no. 8, pp. 813-821.

30. Vadamalai K. Screening for humoral immunodeficiency in patients with community-acquired pneumonia. J. Hosp. Med., 2019, Vol. 14, no. 1, pp. 33-37.

31. van Zelm M.C., van der Burg M., Langerak A.W., van Dongen J.J. PID comes full circle: applications of V(D) J recombination excision circles in research, diagnostics and newborn screening of primary immunodeficiency disorders. Front Immunol., 2011, Vol. 2, 12. doi: 10.3389/fimmu.2011.00012.

32. Verbsky J.W. Newborn screening for severe combined immunodeficiency; The wisconsin experience (2008- 2011). J. Clin. Immunol., 2012, Vol. 32, no. 1, pp. 82-88.

33. Verma N. Therapeutic management of primary immunodeficiency in older patients. Drugs Aging, 2013, Vol. 30, no. 7, pp. 503-512.

34. Verstegen R.H.J. Impact of Down syndrome on the performance of neonatal screening assays for severe primary immunodeficiency diseases. J. Allergy Clin. Immunol., 2014, Vol. 133, no. 4, pp. 1208-1211.

35. Zhao Q., Dai R., Li Y., Wang Y., Chen X., Shu Z., Zhou L., Ding Y., Tang X., Zhao X. Trends in TREC values according to age and gender in Chinese children and their clinical applications. Eur. J. Pediatr., 2022, Vol. 181, no. 2, pp. 529-538.