ИЗУЧЕНИЕ ФОРМИРОВАНИЯ КЛЕТОЧНОГО ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА В ЛИМФОЦИТАРНЫХ ТЕСТАХ IN VITRO C ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО АНТИГЕННОГО КОМПЛЕКСА

Нормативно-методическая база, регламентирующая проведение оценки иммунологической эффективности вакцинации против бруцеллеза и выраженности иммунологической поствакцинальной перестройки не разработана. Учитывая ведущую роль клеточного иммунитета в формировании иммунологической защиты от бруцеллеза, оценку клеточной реакции в ответ на антигенную стимуляцию можно считать наиболее информативным и объективным подходом для анализа иммунологической перестройки организма при вакцинации. Для разработки наиболее диагностически информативных методик постановки антиген-стимулированных клеточных тестов in vitro необходим тщательный подбор стимулирующего агента (антигена), обладающего достаточным активирующим потенциалом и обеспечивающим специфичность реакции в условиях in vitro. Цель исследования – изучить в условиях in vitro специфическую активность белково-полисахаридного антигенного комплекса из штамма Brucella abortus 19 BA (БрАг) и возможность его применения для оценки формирования поствакцинального клеточного иммунитета против бруцеллеза.

Объект исследования – белые лабораторные мыши (n = 50), иммунизированные штаммом Brucella abortus 19 BA. Контрольную группу (n = 50) составили лабораторные мыши, которым введен стерильный физиологический раствор в объеме 0,5 мл. Взятие крови у иммунизированных и контрольных биомоделей осуществляли до вакцинации и на 7, 14, 21 и 30 сутки после иммунизации. При цитометрическом исследовании определяли активационные молекулы CD25, CD69, MHC II и CD95, экспрессированные на Т-лимфоцитах (CD3⁺CD69⁺, CD3⁺CD25⁺, CD3⁺CD95⁺, CD3⁺MHC⁺). Для оценки формирования иммунитета уровень интенсивности экспрессии маркеров активации Т-лимфоцитов рассчитывали с использованием коэффициента стимуляции. Для специфической стимуляции Т-лимфоцитов in vitro применяли БрАг. В качестве антигена для сравнения при изучении возможности применения БрАг для оценки формирования поствакцинального иммунитета использовали аллерген бруцеллезный жидкий – бруцеллин.

Анализ результатов исследования показал, что БрАг обладает выраженной специфической активностью, не вызывает неспецифических реакций (активации) Т-лимфоцитов в условиях in vitro, что дает возможность использования его в качестве тест-антигена при постановке реакции антигенспецифической активации Т-лимфоцитов для оценки формирования адаптивного вакцинального иммунитета против бруцелл.

Анализ применения экспериментального бруцеллезного антигена, для постановки антигенстимулированных клеточных реакций in vitro, с целью оценки формирования поствакцинального иммунитета против бруцеллеза показал, что использование БрАг способствует повышению диагностической чувствительности (в эксперименте) клеточных реакций in vitro. Полученный экспериментальный антиген имеет реальную перспективу применения при разработке алгоритмов лабораторной диагностики бруцеллеза и оценки фактической привитости контингентов риска после вакцинации против бруцеллеза.

1. Вершилова П.А., Чернышева М.И., Князева Э.Н. Патогенез и иммунология бруцеллеза. М.: Медицина, 1974. 272 с.

2. Дармов И.В., Елагин Г.Д., Богачева Н.В., Крючков А.В., Тихвинская О.В. Современные лабораторные методы оценки эффективности проведения иммунизации против опасных и особо опасных инфекций // Клиническая лабораторная диагностика, 2011. № 6. С. 39-42.

3. Куличенко А.Н., Абзаева Н.В., Гостищева С.Е., Ракитина Е.Л., Пономаренко Д.Г., Костюченко М.В. Использование антигенспецифических клеточных тестов in vitro для оценки формирования поствакцинального противочумного иммунитета // Инфекция и иммунитет, 2017. Т. 7, № 2. С. 203-208. doi: 10.15789/2220-7619-2017-2-203-208.

4. Литвинова Л.С., Гуцол А.А., Сохоневич Н.А., Кофанова К.А., Хазиахматова О.Г., Шуплецова В.В., Кайгородова Е.В., Гончаров А.Г. Основные поверхностные маркеры функциональной активности Т-лимфоцитов // Медицинская иммунология, 2014. Т. 16, № 1. C. 7-26. doi: 10.15789/1563-0625-2014-1-7-26.

5. Паттерсон Р., Греммер Л., Гринбергер П. Аллергические болезни. Москва, ГЭОТАР-Медицина, 2000. 768 с.

6. Пономаренко Д.Г. Новый подход к комплексной оценке иммуно-биологической реактивности контингента, подлежащего вакцинации (ревакцинации) против бруцеллеза // Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы, 2015. № 3. С. 28-31.

7. Профилактика бруцеллеза. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.7.2613-10.

8. Сомова Л.М., Беседина Н.Н., Плехова Н.Г. Апоптоз и инфекционные болезни // Инфекция и иммунитет, 2014. Т. 4, № 4. С. 303-318. doi: 10.15789/2220-7619-2014-4-303-318.

9. Таран И.Ф., Лямкин Г.И. Бруцеллез (микробиология, иммунология, эпидемиология, профилактика). Ставрополь, 1996. 173 с.

10. Урбах В.Ю. Биометрические методы. М.: Наука, 1964. 410 с.

11. Фирстова В.В., Бахтеева И.В., Титарева Г.М., Зырина Е.В., Иванов С.А., Киселева Н.В., Копылов П.Х., Анисимов А.П., Дятлов И.А. Определение экспрессии маркера ранней активации CD69 на лимфоцитах им-мунных мышей после стимуляции их антигенами чумного микроба // Проблемы особо опасных инфекций, 2010. № 103. С. 56-59.

12. Shipkova M., Wieland E. Surface markers of lymphocyte activation and markers of cell proliferation. Clinica Chimica Acta, 2012, Vol. 413, pp. 1338-1349.