Экспрессия маркеров контрольных точек иммунного ответа лимфоцитами периферической крови у женщин с фиброаденомой молочной железы

Изменения иммунного статуса при фиброаденоме (ФА) и других доброкачественных патологиях молочной железы – малоисследованный вопрос, равно как и участие регуляторов контрольных точек иммунного ответа (КИТ) в патогенезе данной группы заболеваний. Целью работы являлось сравнение уровня экспрессии маркеров КИТ CD279/PD-1, CD274/PD-L1, CD366/TIM3 и CD223/ LAG3 в общей популяции лимфоцитов, ее Т-клеточного звена и, в отдельности, CD4 и CD8 субпопуляций в периферической крови женщин с ФА и здоровых доноров. Образцы периферической крови были получены от 12 женщин с диагнозом фиброаденома молочной железы (23-54 лет) и 15 здоровых женщин (22-52 лет), составивших группу контроля. Забор крови в группе больных производился непосредственно перед хирургической операцией, далее образцы анализировались методом мультипараметрической проточной цитометрии с использованием моноклональных антител: CD3-VioBlue, CD4/CD8-FITC, PD1-PE, PD-L1-PerCP-Cy.5.5, TIM3/LAG3-APC. Каждый образец инкубировался с 4 комбинациями антител: CD3/CD4/PD1/PD-L1/TIM3, CD3/CD4/PD1/PD-L1/LAG3, CD3/CD8/ PD1/PD-L1/TIM3, CD3/CD8/PD1/PD-L1/LAG3. Была проведена оценка моноэкспрессии каждого из 4-х маркеров контрольных иммунных точек (КИТ) в лимфоцитарном гейте обеих групп. В образцах крови группы ФА получено значимое увеличение экспрессии PD-L1, выраженной в % окрашенных клеток и приросте интенсивности флуоресценции. При анализе моноэкспрессии КИТ в популяции CD3⁺Т-лимфоцитов, кроме достоверного увеличения % PD-L1⁺, также обнаружено повышение доли PD1⁺Т-клеток в группе ФА. В отношении различий между изменениями моноэкспрессии КИТ в CD4⁺ и CD8⁺ Т-клеточном звене, в группе ФА наблюдалось более выраженное увеличение доли CD8⁺PD1⁺Т-клеток, по сравнению с CD4. Характер изменений PD-L1 был сопоставим для CD4 и CD8 субпопуляций (в обоих случаях достоверное увеличение в группе ФА). Были проанализированы изменения профиля коэкспрессии двух КИТ в CD4⁺ и CD8⁺ звене Т-клеток. Наиболее заметным оказалось увеличение частоты фенотипа PD1⁺PD-L1⁺ в обеих субпопуляциях Т-клеток при сравнении ФА и группы контроля. В отношении совместной экспрессии трех маркеров КИТ в CD4 и CD8 субпопуляциях, было получено достоверное увеличение %-доли PD1⁺PD-L1⁺TIM3⁺ клеток среди CD4 Т-хелперов. Таким образом, в системной циркуляции женщин с диагнозом ФА могут наблюдаться специфические изменения фенотипа Т-клеток, связанные с (ко-)экспрессией регуляторов КИТ.

1. Adhikary S., Hoskin T.L., Stallings-Mann M.L., Arshad M., Frost M.H., Winham S.J., Peña A., Lee D.J., Murphy L.M., Rakoff M. Cytotoxic T cell depletion with increasing epithelial abnormality in women with benign breast disease. Breast Cancer Res. Treat., 2020, Vol. 180, no. 1, pp. 55-61.

2. Chen Z., Zhang Y., Li W., Gao C., Huang F., Cheng L., Jin M., Xu X., Huang J. Single cell profiling of female breast fibroadenoma reveals distinct epithelial cell compositions and therapeutic targets. Nat. Commun., 2023, Vol. 14, no. 1, 3469. doi: 10.1038/s41467-023-39059-3.

3. Guan H., Wan Y., Lan J., Wang Q., Wang Z., Li Y., Zheng J., Zhang X., Wang Z., Shen Y., Xie F. PD-L1 is a critical mediator of regulatory B cells and T cells in invasive breast cancer. Sci. Rep., 2016, no. 6, 35651. doi: 10.1038/srep35651.

4. Hou H., Lyu Y., Jiang J., Wang M., Zhang R., Liew C.C., Wang B., Cheng C. Peripheral blood transcriptome identifies high-risk benign and malignant breast lesions. PLoS One, 2020, Vol. 15, no. 6, e0233713. doi: 10.1371/journal.pone.0233713.

5. Li X., Vail E., Maluf H., Chaum M., Leong M., Lownik J., Che M., Giuliano A., Cao D., Dadmanesh F. Gene Expression Profiling of Fibroepithelial Lesions of the Breast. Int. J. Mol. Sci., 2023, Vol. 24, no. 10, 9041. doi: 10.3390/ijms24109041.

6. Md Nasir N.D., Ng C.C.Y., Rajasegaran V., Wong S.F., Liu W., Ng G.X.P. International Fibroepithelial Consortium; Tan P., Teh B.T., Tan P.H. Genomic characterisation of breast fibroepithelial lesions in an international cohort. J. Pathol., 2019, Vol. 249, no. 4, pp. 447-460.

7. Ogony J., Hoskin T.L., Stallings-Mann M., Winham S., Brahmbhatt R., Arshad M.A., Kannan N., Peña A., Allers T., Brown A. Immune cells are increased in normal breast tissues of BRCA1/2 mutation carriers. Breast Cancer Res. Treat., 2023, Vol. 197, no. 2, pp. 277-285.

8. Sinha I., Fogle R.L., Gulfidan G., Stanley A.E., Walter V., Hollenbeak C.S., Arga K.Y., Sinha R. Potential Early Markers for Breast Cancer: A Proteomic Approach Comparing Saliva and Serum Samples in a Pilot Study. Int. J. Mol. Sci., 2023, Vol. 24, no. 4, 4164. doi: 10.3390/ijms24044164.

9. Winham S.J., Wang C., Heinzen E.P., Bhagwate A., Liu Y., McDonough S.J., Stallings-Mann M.L., Frost M.H., Vierkant R.A., Denison L.A. Somatic mutations in benign breast disease tissues and association with breast cancer risk. BMC Med. Genomics., 2021, Vol. 14, no. 1, 185. doi: 10.1186/s12920-021-01032-8.

10. Yin Lee J.P., Thomas A.J., Lum S.K., Shamsudin N.H., Hii L.W., Mai C.W., Wong S.F., Leong C.O. Gene expression profiling of giant fibroadenomas of the breast. Surg. Oncol., 2021, no. 37, 101536. doi: 10.1016/j.suronc.2021.101536.