Применение IFNγ или TNFα-Т в протоколах получения ЦИК для адоптивной иммунотерапии

Методы иммунокоррекции, основанные на введении в организм аутологичных лейкоцитов, активированных в условиях in vitro различными иммуномодуляторами, получают все более широкое распространение. Ранее проведенные нами исследования позволяют утверждать об эффективности применения иммунотерапии лимфоцитами, активированными in vitro с помощью цитокинов для лечения онкологических больных и хорошей переносимости данной терапии. В данной статье рассмотрены варианты применения препаратов рекомбинантного интерферона гамма (IFNγ) и рекомбинантного фактора некроза опухоли-альфа-тимозина-альфа-1 (TNFα-Т) для получения цитокин-индуцированных киллеров (ЦИК) человека in vitro. Целью исследования являлась оценка возможности применения препаратов IFNγ и TNFα-Т в протоколах получения ЦИК человека в условиях in vitro. Мононуклеары (МНК), выделенные из крови 15 доноров, культивировали в условиях СО2- инкубатора до 12 суток. Для оценки токсичности IFNγ и TNFα-Т в отношении лимфоцитов in vitro концентрации препаратов были выверены экспериментальным путем с учетом контроля уровня жизнеспособности клеток. Уровни цитокинов в супернатантах на этапах культивирования клеток определяли методом иммуноферментного анализ (ИФА). До и после культивирования оценивали наличие адгезии и гранулярности изучаемых лимфоцитов, фенотип клеток изучали методом проточной цитометрии, оценку уровня жизнеспособности активированных лимфоцитов проводили в камере Горяева. Проведен сравнительный анализ способов культивирования лимфоцитов в различных средах, содержащих: только IFNγ (группа 1); IFNγ, интерлейкин-2 (IL-2) и интерлейкин-15 (IL-15) (группа 2); только TNFα-Т (группа 3); TNFα-Т, IL-2 и IL-15 (группа 4) и только IL-2 и IL-15 (группа контроля). При активации МНК в среде, содержажей IFNγ, IL-2 и IL-15 или в среде, содержащей TNFα-Т, IL-2 и IL-15, отмечена общая тенденцию к значительному увеличению показателей Т-цитотоксических клеток (CD3⁺CD8⁺), NKТ-клеток (CD3⁺CD16⁺CD56⁺), активированных лимфоцитов (HLA-DR⁺), активированных Т-лимфоцитов (CD3⁺HLA-DR⁺) и маркеров активации на всех лимфоцитах (CD38⁺) и на Т-клетках (CD3⁺CD38⁺). Оценена возможность применения препаратов IFNγ и TNFα-Т для получения ЦИК человека in vitro. Полученные данным способом активированные цитотоксические лимфоциты могут применяться для фундаментальных исследований по выявлению новых закономерностей и морфо-функциональных особенностей активированных лимфоцитов человека, а также для проведения адоптивной иммунотерапии онкологическим больным.

1. Абакушина Е.В., Гельм Ю.В., Пасова И.А., Бажин А.В. Иммунотерапевтические подходы к лечению больных колоректальным раком // Биохимия, 2019. Т. 84, № 7. С. 923-933.

2. Гельм Ю.В., Абакушина Е.В., Пасова И.А., Гривцова Л.Ю. Разработка подходов к клеточной иммунотерапии онкологических больных // Медицинская иммунология, 2021. Т. 23, № 2. С. 381-388. doi: 10.15789/1563-0625-DOA-2135.

3. Гельм Ю.В., Кузьмина Е.Г., Абакушина Е.В. Функциональная активность лимфоцитов здоровых доноров и онкологических больных при культивировании в присутствии ИЛ-2 и ИЛ-15 // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2019. Т. 167, № 4. С. 471-477.

4. Горчаков А.А., Кулемзин С.В., Чикаев А.Н., Таранин А.В. NK-клеточная линия, экспрессирующая PSMA-специфический химерный антигенный рецептор и секретирующая блокатор взаимодействия CD47/SIRPa. Патент RU 2757353 C1, 12.10.2020.

5. Земсков В.М., Земсков А.М., Нейманн В.В., Пронько К.Н., Земскова В.А., Демидова В.С. Противоречия клинической иммунологии. Полезные и вредные свойства иммунотерапии // Успехи современной биологии, 2021. Т. 141. № 3. С. 258-264.

6. Лежнин Ю.Н., Христиченко А.Ю., Ратникова Н.М. Клеточная иммунотерапия – современный подход к лечению онкологических заболеваний // Медицинская иммунология, 2018. Т. 20, № 3. С. 313-340. doi: 10.15789/1563-0625-2018-3-313-340.

7. Ниёзова Ш.Х. Экстракорпоральные методы иммунокоррекции при лечении злокачественных новообразований // Вестник науки и образования, 2019. № 17. С. 83-91.

8. Методические рекомендации по применению препаратов Рефнот и Ингарон. НПП Фармаклон. [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://www.pharmaclon.ru/publikatsii/onkologiya/metodicheskierekomendatsii-po-primeneniyu-preparatov-refnot-i-ingaron/ (дата обращения: 14.03.2024).

9. Парк С.В., Сон Й.О., Сон Ч.Х., Парк Й.С., Бан Д.Х., Ли К.-Г., Дзанг Д.С., Канг Ч.Д., Ким В.-С., Ан К.Ч., Ли Б.Ч., Ким Д.И., Парк Е.К., Чой С.Х. Способ производства активированных лимфоцитов для иммунотерапии. Заявка 2009110156, 27.09.2010.

10. Пинегин Б.В., Хаитов Р.М. Современные принципы создания иммунотропных лекарственных препаратов // Иммунология, 2019. Т. 40, № 6. С. 57–62.

11. Селедцов В.И., Селедцова Г.В., Доржиева А.Б., Иванова И.П. Иммунотерапия в комплексном лечении опухолевых заболеваний // Сибирский онкологический журнал, 2022. Т. 21, № 2. С. 118-129.

12. Сенников С.В., Курилин В.В., Облеухова И.А., Лопатникова Ю.А., Якушенко Е.В., Якушенко В.К. Способ генерации антиген-специфических цитотоксических клеток с противоопухолевой активностью. Патент RU 2458985 C1, 18.03.2011.

13. Сенников С.В., Облеухова И.А., Курилин В.В., Красильников С.Э., Тархов А.В., Гончаров М.А. Способ генерации антиген-специфических цитотоксических клеток с активностью против клеток рака яичника. Патент RU 2508298 C2, 03.02.2012.

14. Сенников С.В., Шевченко Ю.А., Хантакова Ю.Н., Курилин В.В., Лопатникова Ю.А., Сидоров С.В., Волгушев С.А., Оглоблин В.П., Ефимова Л.В., Теплова Н.В. Способ генерации антиген-специфических цитотоксических клеток с противоопухолевой активностью при раке молочной железы. Патент RU 2521506 C1, 01.04.2013.

15. Хаитов Р.М. Иммуномодуляторы: мифы и реальность // Иммунология, 2020. Т. 41, № 2. С. 101-106.

16. Цой О.Г., Макишев А.К., Цой Н.О., Рутжанулы И.Р. Иммуномодуляторы химио и лучевой терапии // Медицинский журнал Астаны, 2019. № 3. С. 60-70.

17. Черных Е.Р., Олейник Е.А., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Тыринова Т.В., Старостина Н.М., Останин А.А. Индукция HCV-специфического клеточного ответа in vitro дендритными клетками, генерированными в присутствии интерферона-α // Инфекция и иммунитет, 2019. Т. 9, № 1. С. 76-86. doi: 10.15789/2220-7619-2019-1-76-86.

18. Lee D.A. Cellular therapy: Adoptive immunotherapy with expanded natural killer cells. Immunol. Rev., 2019, Vol. 290, Iss. 1, pp. 85-99.