Особенности лейкоцитарного пула концентрата клеток пуповинной крови, заготовленного для долгосрочного криохранения

Аллогенная трансплантация гемопоэтических клеток входит в стандарт лечения пациентов с острым лейкозом высокого риска. Пуповинная кровь (ПК) является альтернативным источником аллогенных стволовых гемопоэтических клеток для пациентов, которые нуждаются в трансплантации, но не имеют родственного донора. Цель исследования: изучение особенностей лейкоцитарного пула (клеточного состава, иммунофенотипа) концентрата клеток пуповинной крови (ПК), которые заготавливаются для публичного долгосрочного криохранения для нужд трансплантологии. Проведено исследование 1096 образцов пуповинной крови доношенных новорожденных до и после процессинга (выделения концентрата гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Показано, что при использовании критерия обработки образцов ПК с количеством лейкоцитов не менее 15 × 10⁸ лейкоцитов в пересчете на объем заготовленного образца ПК до обработки с антикоагулянтом среднее количество клеток в концентрате ГСК ПК объемом 25 мл, находящегося на долгосрочном криохранении составляет: лейкоцитов – 17,41±0,36 × 10⁸, ГСК с иммунофенотипом (CD34⁺) – 5,25±3,6 × 10⁶, натуральных киллерных клеток (CD3-CD16⁺CD56⁺) – 1,65±0,7 × 10⁸. Изучена субпопуляционная структура NKлимфоцитов в концентрате ГСК ПК: иммунофенотип CD56^dimCD16^dim клеток встречался в большинстве случаев – 45,15±18,1%, а минорные субпопуляции CD56^dimCD16^bright, CD56^-CD16⁺, CD56^brightCD16 составили 0,27±0,2, 1,33±0,7 и 0,99±0,4% соответственно. При анализе популяции NKT-клеток было выявлено 6,22±2,1% клеток с иммунофенотипом СD3⁺CD16/СD56⁺, количество CD3⁺CD56⁺ клеток составило 3,69±2,4%, количество CD3⁺CD16⁺ – 2,53±1,2%. В пуле NKT-клеток выявлены 5,15±2,1% CD56⁺CD16^- клеток, также определены две минорные субпопуляции, которые отличаются по экспрессии антигенов CD56 и CD16: уровень CD56^-CD16⁺ составил 2,91±1,2%, а CD56⁺CD16⁺ оказалось равным 0,69±0,3%. Полученные данные о количестве и характеристике иммунофенотипа клеток, также гетерогенности популяции NK- и NKT-лимфоцитов в концентрате ГСК ПК, заложенных на долгосрочное криохранение, необходимо учитывать для подбора концентрата ГСК ПК с целью трансплантации при онкогематологических заболевания.

1. Абакушина Е.В. Метод проточной цитометрии для оценки NK-клеток и их активности // Клиническая лабораторная диагностика, 2015. № 11. С. 37-44.

2. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 25 июля 2003 г. № 325 «О развитии клеточных технологий».

3. Ремизова И.И., Чистякова Г.Н., Ляпунов В.А., Черешнев В.А., Устьянцева Л.С., Газиева И.А. Особенности фенотипического состава и функциональной активности иммунокомпетентных клеток пуповинной крови в зависимости от гестационного возраста // Медицинская иммунология, 2016. Т. 18, № 3. С. 291-298. [

4. Румянцев С.А., Боякова Е.В., Шутьева А.Б., Майорова О.А., Панков Д.Д., Сахаровская Е.Л. Состав лейкоцитарного пула и гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови доношенных новорожденных // АГ-инфо, 2011. № 2. С. 6-11.

5. РУСКОРД. Ассоциация Рускорд открывает новую веху стандартизации для банков пуповинной крови в России. [Электронный ресурс]. Режим доступа: https://ruscord.com/bez-kategorii/assocziacziyaruskord-otkryvaet-novuyu-vehu-standartizaczii-dlya-bankov-pupovinnoj-krovi-v-rossii/

6. Табаков Д.В., Заботина Т.Н., Борунова А.А., Панчук И.О., Короткова О.В., Кадагидзе З.Г. Гетерогенность популяций NK- и NKT-лимфоцитов у здоровых доноров // Медицинская иммунология, 2017. Т. 19, № 4. С. 401-408.

7. Тюмина О.В., Волчков С.Е., Овчинников П.А. Применение гематопоэтических стволовых клеток пуповинной крови // Гены и Клетки, 2019. Т. 14, № 3. С. 236-237.

8. Abu-Ghosh A., Goldman S., Slone V., van de Ven C., Suen Y., Murphy L., Sender L., Cairo M. Immunological reconstitution and correlation of circulating serum inflammatory mediators/ cytokines with the incidence of acute graft-versus-host disease during the first 100 days following unrelated umbilical cord blood transplantation. Bone Marrow Transplant., 1999, Vol. 24. pp. 535-544.

9. Barker J.N., Wagner J.E. Umbilical-cord blood transplantation for the treatment of cancer. Nat. Rev. Cancer, 2003, Vol. 3, pp. 526-532.

10. Biron C.A., Nguyen K.B., Pien G.C., Cousens L.P., Salazar-Mather T.P. Natural killer cells in antiviral defense: function and regulation by innate cytokines. Annu. Rev. Immunol., 1999, Vol. 17, pp. 189-220.

11. Dalle J.H., Menezes J., Wagner E., Blagdon M., Champagne J., Champagne M.A., Duval M. Characterization of cord blood natural killer cells: implications for transplantation and neonatal infections. Pediatr. Res., 2005, Vol. 57, pp. 649-655.

12. Damele L., Spaggiari G.M., Parodi M., Mingari M.C., Vitale M., Vitale C. Cord blood-derived natural killer cell exploitation in immunotherapy protocols: more than a promise? Cancers, 2022, Vol. 14, 4439. doi: 10.3390/cancers14184439.

13. Eapen M., Rubinstein P., Zhang M.-J., Stevens C., Kurtzberg J., Scaradavou A., Loberiza F.R., Champlin R.E., Klein J.P., Horowitz M.M., Wagner J.E. Outcomes of transplantation of unrelated donor umbilical cord blood and bone marrow in children with acute leukaemia: a comparison study. Lancet, 2007, Vol. 369, pp. 1947-1954.

14. Escobedo-Cousin M., Jackson N., Laza-Briviesca R., Ariza-McNaughton L., Luevano M., Derniame S., Querol S., Blundell M., Thrasher A., Soria B., Cooper N., Bonnet D., Madrigal A., Saudemont A. Natural killer cells improve hematopoietic stem cell engraftment by increasing stem cell clonogenicity in vitro and in a humanized mouse model. PLoS One, 2015, Vol. 10, e0138623. doi: 10.1371/journal.pone.0138623.

15. Verneris M.R., Mille J.S. The phenotypic and functional characteristics of umbilical cord blood and peripheral blood natural killer cell. Br. J. Haematol., 2009, Vol. 147, no. 2, pp. 185-191.