Количественное определение С1-эстеразного ингибитора в сыворотке крови человека методом иммуноферментного анализа: корреляция с турбидиметрическим методом
Н. П. Горбунов,
А. В. Жахов,
И. Н. Горбунова,
А. М. Миличкина,
И. В. Дрозд,
А. В. Губанова,
Е. М. Данилова,
Р. Н. Кузнецова,
Т. В. Савин,
А. Г. Бурцева,
Н. В. Пигарева,
А. М. Ищенко,
Арег А. Тотолян https://doi.org/10.15789/1563-0625-QOC-2794
Аннотация
С1-ингибитор сериновых протеаз (C1-INH) выполняет регуляторную функцию в системе комплемента и проницаемости сосудов. Дефицит С1-INH приводит к различным формам ангиооте- ков, в том числе наследственному ангионевротическому отеку (НАО). Причиной НАО является генетически обусловленное нарушение синтеза С1-INH. Снижение уровня С1-INH до 50% относительно нормы приводит к увеличению продукции брадикинина, что является основанием для постановки диагноза «НАО». Разработка доступных иммуноферментных тест-систем (ИФА) для количественного определения d-INH является востребованным направлением для клиницистов. В процессе разработки нового набора для количественного определения С1-INH были получены два моноклональных антитела мыши (МАТ), обладающих разной эпитопной специфичностью. На их основе была разработана ИФА тест-система по типу сэндвич. Специфичность полученных МАТ была подтверждена с использованием коммерческого препарата «Беринерт». Для приготовления калибраторов С1-INH был аффинноочищен из плазмы крови человека с использованием сорбента с иммбилизованными МАТ. Идентичность белку С1-INH подтверждали при помощи электрофореза в ПААГ, иммуноблоттинга и масс-спектрометрии на MALDI-TOF/TOF масс-спектрометре UltrafleXtreme. Для оценки показателей качества разработанного набора реагентов были проведены исследования в соответствии с ГОСТ Р 51352-2013 и ТУ 21.20.23-041-01967164-2022. Значения показателей качества: точность (правильность) — 93,53%; интервал линейности измерений — 22,00-176,07 нг/мл. Присутствие интерферирующих агентов (гемоглобина, билирубина, триглицеридов) не влияло на эффективность измерений. С помощью разработанной ИФА тест-системы нами были исследованы 28 сывороток крови здоровых доноров и 7 сывороток крови пациентов с подтвержденным диагнозом «НАО». В этих же образцах определяли содержание C1-INH при помощи турбидиметрического метода, используя медицинское изделие «Реагенты диагностические для иммунохимических исследований in vitro специфических белков крови. Модель: С1-ингибитор эстеразы (C1 EsteraseInhibitor)» (Aptec, Бельгия). Коэффициент корреляция составил 0,94 (p < 0,05). Было установлено, что диагностическая чувствительность и специфичность разработанной тест-системы составляет 100%. В результате проведенного исследования разработана оригинальная ИФА тест-система для количественного определения C1-INH «Набор реагентов для иммуноферментного количественного определения С1-ингибитора человека (C1-inh PS)».
Об авторах
Н. П. Горбунов
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Горбунов Николай Петрович — младший научный сотрудник лаборатории гибридомных технологий.
197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14
Тел.: 8 (921) 786-38-16
Конфликт интересов:
Нет
А. В. Жахов
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Жахов Александр Владимирович — научный сотрудник лаборатории гибридомных технологий.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
И. Н. Горбунова
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Горбунова Ирина Николаевна — научный сотрудник лаборатории гибридомных технологий.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
А. М. Миличкина
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Кандидат медицинских наук, главный врач.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
И. В. Дрозд
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Кандидат биологических наук, заведующая центральной клинико-диагностической лабораторией.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
А. В. Губанова
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Врач клинической лабораторной диагностики центральной клинико-диагностической лаборатории.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
Е. М. Данилова
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Кандидат медицинских наук, заведующая диспансерно-поликлиническим отделением.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
Р. Н. Кузнецова
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Кандидат медицинских наук, врач — аллерголог-иммунолог диспансерно-поликлинического отделения.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
Т. В. Савин
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Врач — аллерголог-иммунолог диспансерно-поликлинического отделения.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
А. Г. Бурцева
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Бурцева Анастасия Геннадиевна — младший научный сотрудник лаборатории гибридомных технологий.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
Н. В. Пигарева
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Пигарева Наталья Васильевна — Кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории гибридомных технологий.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
А. М. Ищенко
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Ищенко Александр Митрофанович — кандидат биологических наук, заведующий лабораторией гибридомных технологий.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
Арег А. Тотолян
ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»; ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ
Россия
Конфликт интересов:
Россия
Тотолян Арег А. — доктор медицинских наук, профессор, академик РАН, заведующий лабораторией молекулярной иммунологии, директор ФБУН «Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера»; заведующий кафедрой иммунологии ФГБОУ ВО «ПСПбГМУ им. И.П. Павлова» МЗ РФ.
Санкт-Петербург
Конфликт интересов:
Нет
Список литературы
1. Borisova N.V., Sokurenko S.I. Classification, diagnosis, and approach, to treatment for angioedema. Clinical Practice, 2014, Vol. 10, no. 3, pp. 71-79. (In Russ.)
2. Davis A.E., III, Mejia P., Lu F. Biological activities of C1 inhibitor. Mol. Immunol., 2008, Vol. 45, no. 16, pp. 4057-4063.
3. Drouet C., Lopez-Lera A., Ghannam A., Lopez-Trascasa M., Cichon S., Ponard D., Parsopoulou F., Grombirikova H., Freiberger T., Rijavec M., Veronez C.L., Pesquero J.B., Germenis A.E. SERPING1 variants and C1- INH biological function: a close relationship with C1-INH-HAE. Front. Allergy, 2022, Vol. 3, 835503. doi: 10.3389/falgy.2022.835503
4. Karnaukhova E. C1-Inhibitor: structure, functional diversity and therapeutic development. Curr. Med. Chem., 2022, Vol. 29, no. 3, pp. 467-488.
5. Tange C.E., Kaur A., Verma N., Hickey A., Grigoriadou S., Scott C., Kiani S., Steven R., Ponsford M., El- Shanawany T., Jolles S., Harding S., Parker A.R. Quantification of human C1 esterase inhibitor protein using an automated turbidimetric immunoassay, J. Clin. Lab. Anal., 2019, Vol. 33, no. 1, e22627. doi: 10.1002/jcla.22627.
6. Wagenaar-Bos I.G.A., Drouet C., Aygoren-Pursun E., et al. Functional Ci-inhibitor diagnostics in hereditary angioedema: assay evaluation and recommendations. J. Immunol. Methods, 2008, Vol. 338, no. 1-2, pp. 14-20.
Дополнительные файлы
Рецензия
Для цитирования:
Горбунов Н.П., Жахов А.В., Горбунова И.Н., Миличкина А.М., Дрозд И.В., Губанова А.В., Данилова Е.М., Кузнецова Р.Н., Савин Т.В., Бурцева А.Г., Пигарева Н.В., Ищенко А.М., Тотолян А.А. Количественное определение С1-эстеразного ингибитора в сыворотке крови человека методом иммуноферментного анализа: корреляция с турбидиметрическим методом. Медицинская иммунология. 2023;25(5):1197-1204. https://doi.org/10.15789/1563-0625-QOC-2794
For citation:
Gorbunov N.P., Zhakhov A.V., Gorbunova I.N., Milichkina A.M., Drozd I.V., Gubanova A.V., Danilova E.M., Kuznecova R.N., Savin T.V., Burtseva A.G., Pigareva N.V., Ischenko A.M., Totolian A.A. Quantification of C1 esterase inhibitor in human serum by enzyme-linked immunosorbent assay: Correlation with turbidimetric immunoassay. Medical Immunology (Russia). 2023;25(5):1197-1204. https://doi.org/10.15789/1563-0625-QOC-2794
Просмотров: 165
Послать статью по эл. почте 