АКТИВАЦИЯ РАННЕЙ СТАДИИ АПОПТОЗА Т-ЛИМФОЦИТОВ IN VITRO ПОСРЕДСТВОМ ПЕРЕНОСА КОМПОНЕНТОВ АУТОЛОГИЧНОЙ АПОПТОТИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЫ У ПАЦИЕНТОВ С РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ

Известно, что дефекты программированной гибели лимфоцитов периферической крови могут быть причиной аутотолерантности и хронической персистенции воспаления при ревматоидном артрите. По последним данным, процесс апоптоза не является автономным – избыточное скопление клеток в совокупности с обедненным составом среды приводит к скученности клеточного сообщества и влиянию уже ушедших в апоптоз клеток на окружающие клетки посредством морфогенетического повреждения в процессе воздействия механических сил. Такие эффекты называют компенсаторной пролиферацией, или апоптоз-индуцированной пролиферацией. Внеклеточные везикулы (эктосомы и апоптотические тельца) также оказывают негативное воздействие на культивируемые клетки, инициируя запуск программы апоптотической гибели. В свою очередь, апоптоз также может не автономно контролироваться соседними клетками.

Нами были проведены исследования, позволившие оптимизировать методы, направленные на инициацию апоптотической гибели клеток и изучение воздействия апоптотического окружения на аутологичные клетки, находящиеся в физиологических условиях. Подбор условий в совокупности с методом флуоресцентного маркирования лимфоцитов и последующим раздельным анализом их на проточном цитофлуориметре позволили оценить параметры раннего апоптоза субпопуляций Т-лимфоцитов периферической крови при ревматоидном артрите. У пациентов с ревматоидным артритом in vitro установлена выраженная готовность к раннему апоптозу первично (CFSE) и вторично (CFSE+) индуцированных Т-лимфоцитов, стимулированных aCD3-антителами, как относительно исходного уровня апоптоза, так и относительно клеток, находящихся в условиях индукции апоптоза. Полученные данные свидетельствуют о том, что стимуляция Т-лимфоцитов антителами к CD3, и, как следствие, рост пролиферативного процесса клеток in vitro привели к увеличению уровня раннего апоптоза не только непосредственно клеток, получивших пролиферативный стимул, но и повышению влияния клеточного и гуморального компонентов aCD3-стимулированной культуры на нормально пролиферирующие лимфоциты.

Перенос первично индуцированной в условиях скученности и обеднения среды аутологичной апоптотической «aCD3» и дексаметазон-стимулированной культуры активирует процесс раннего апоптоза нормально пролиферирующих клеток. Как известно, глюкокортикоиды служат исполнителями индуцированной активации клеточной смерти. В фармакологических концентрациях глюко- кортикоиды и их синтетические аналоги стимулируют в активированных лимфоцитах эндонуклеазы, разрушающие ДНК в межнуклеосомных участках, что заканчивается апоптозом клеток. Полученные в исследовании результаты свидетельствуют о возможности индукции ранней стадии апоптоза Т-лимфоцитов in vitro у пациентов с ревматоидным артритом посредством переноса клеток, подвергнутых активационному апоптозу. 

1. Насонов Е.Л., Александрова Е.Н., Новиков А.А. Аутоиммунные ревматические заболевания – проблемы иммунопатологии и персонифицированной терапии // Вестник РАМН, 2015. Т. 70, № 2. С. 169-182. [Nasonov E.L., Aleksandrova E.N., Novikov A.A. Аutoimmune rheumatic diseases – problems of immunopathology and personalized treatment. Vestnik RAMN = Annals of the Russian Academy of Medical Sciences, 2015, Vol. 70, no. 2, pp. 169-182. (In Russ.)]

2. Пачкунова М.В. Иммунологический профиль больных ревматоидным артритом // Фундаментальные исследования, 2011. № 1. С. 148-156. [Pachkunova M.V. Immunologic profile sick of rheumatoid arthritis. Fundamentalnye issledovaniya = Fundamental Research, 2011, no. 1, pp. 148-156. (In Russ.)]

3. Сорока Н.Ф., Свирновский Л.И., Рекун A.Л. Влияние иммуносупрессивных лекарственных препаратов на апоптоз лимфоцитов больных системной красной волчанкой in vitro // Научно-практическая ревматология, 2007. № 1. С. 15-21. [Soroka N.F., Svirnovsky A.I., Rekun A.L. Immunosuppressive drugs influence on lymphocyte apoptosis in patients with systemic lupus erythematosus in vitro. Nauchno-prakticheskaya revmatologiya = Rheumatology Science and Practice, 2007, no. 1, pp. 15-21. (In Russ.)]

4. Cao Y., Liu J. Impaired apoptosis of peripheral blood CD4+T cells in patients with rheumatoid arthritis. Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology, 2015, no. 31 (5), pp. 682-685.

5. Fuchs Y., Steller H. Programmed cell death in animal development and disease. Cell, 2011, no. 147 (4), pp. 742-758.

6. Kawamoto Y., Nakajima Y., Kuranaga E. Apoptosis in cellular society: communication between apoptotic cells and their neighbors. Int. J. Mol. Sci., 2016, Vol. 17, pp. 1-15.

7. Morata, G., Shlevkov E., Perez-Garijo A. Mitogenic signaling from apoptotic cells in Drosophila. Dev. Growth Differ, 2011, no. 53, pp. 168-176.

8. Pérez-Garijo A., Steller H. Spreading the word: non-autonomous effects of apoptosis during development, regeneration and disease. Development, 2015, no. 142, pp. 3253-3262.

9. Ryoo H.D., Bergmann A. The role of apoptosis-induced proliferation for regeneration and cancer. Cold Spring Harb. Perspect. Biol., 2012, no. 4, pp. 787-789.

10. Sadallah S., Eken C., Schifferli J.A. Ectosomes as modulators of inflammation and immunity. Clinical and Experimental Immunology, 2011, Vol. 163, pp. 26-32.

11. Szodoray P., Jellestad S., Nakken B. Programmed cell death in rheumatoid arthritis peripheral blood T-cell subpopulations determined by laser scanning cytometry. Lab. Invest., 2003, Vol. 83, no. 12, pp. 1839-1848.

12. Withrow J., Murphy C., Liu Y. Extracellular vesicles in the pathogenesis of rheumatoid arthritis and osteoarthritis. Arthritis Research & Therapy, 2016, Vol. 18, p. 12.