Preview

Медицинская иммунология

Расширенный поиск

Новый метод, базирующийся на использовании иммобилизованных однодоменных антител для удаления определенных мажорных белков из плазмы крови, способствует уменьшению неспецифического сигнала в иммуноанализе.

Аннотация

Ахиллесовой пятой иммуноанализа является порой недооцениваемая проблема его восприимчивости к различным интерференциям (помехам, вмешательствам в анализ). Присутствие в пробе пациента мешающих веществ может привести к ошибочному результату теста,следствием чего может стать неправильная диагностика и катастрофические последствия для пациента, поэтому следует уделять особое внимание выявлению возможных интерференций в используемых тест-системах и при возможности разрабатывать и применять методы их преодоления. Особенно остро вопрос борьбы с интерференциями стоит в случае иммуноанализа биомаркеров в плазме или сыворотке крови человека. Для уменьшения возможных интерференций желательно было бы иметь возможность специфичной и адаптируемой предобработки препаратов крови для конкретного анализируемого маркерного белка, для конкретной тест-системы. Мы предполагаем, что такую предобработку можно сделать с помощью комбинирования иммуносорбентов, базирующихся на использовании особых однодоменных антител  (‘нанотел’). Нанотела – рекомбинантные белки, производные однодоменных антиген-узнающих вариабельных фрагменов особых антител, состоящих из димера укороченных тяжелых цепей при полном отсутствии легких цепей. Такие особые антитела присутствуют в норме, наряду с обычными антителами, у представителей семейства Camelidae (Верблюдовые) и у некоторых видов хрящевых рыб. Особые свойства нанотел могут обеспечить определенные преимущества при их использовании по сравнению с антителами традиционной структуры и их производными. В данной работе впервые показано, что иммуносорбенты на основе определенной комбинации используемых в качестве лигандов однодоменных антител, способных специфически связывать (и удалять) конкретные мажорные белки крови человека, могут быть подобраны для заданного маркерного антигена  крови таким образом, что будут эффективным инструментом предобработки крови с целью уменьшения возможных эффектов интерференции и повышения чувствительности при диагностическом иммуноферментном анализе «сэндвич» -типа. Новый метод предобработки плазмы крови продемонстрирован на примере препаратов плазмы крови (в разведении 1:40) двух пациентов. Ранее разработанная модельная система детекции белка лактоферрина была использована для анализа образцов плазмы крови.  Показано, что можно существенно повысить соотношение суммарного детектируемого сигнала к неспецифическому фону, связанному с интерференциями,  за счет сильного уменьшения этого фона путем аффинного удаления (с помощью соответствующих иммобилизованных однодоменных антител) из препаратов плазмы крови фракции трех мажорных белков: фибриногена, иммуноглобулинов класса G, альфа-2-макроглобулина.

Об авторах

Оксана Сергеевна Горяйнова
ФГБУН Институт биологии гена Российской академии наук
Россия

младший научный сотрудник

зав. лаб. молекулярных биотехнологий



Евгения Олеговна Хан
ФГБУН Институт биологии гена Российской академии наук
Россия

кандидат биологических наук, м.н.с.

зав. лаб. молекулярных биотехнологий



Татьяна Ильинична Иванова
ФГБУН Институт биологии гена Российской академии наук
Россия

кандидат биологических наук, научный сотрудник

зав. лаб. молекулярных биотехнологий



Сергей Владимирович Тиллиб
ФГБУН Институт биологии гена Российской академии наук
Россия

доктор биологических наук

зав. лаб. молекулярных биотехнологий



Список литературы

1. Ward G., Simpson A., Boscato L., Hickman P. E. The investigation of interferences in immunoassay. Clinical Biochemistry, 2017, Vol. 50, pp. 1306–1311.

2. Bolstad N., Warren D. J., Nustad K. Heterophilic antibody interference in immunometric assays. Best Pract. Res. Clin. Endocrinol. Metab., 2013, Vol. 27, pp. 647–661.

3. Hamers-Casterman C., Atarhouch T., Muyldermans S., et al. Naturally occurring antibodies devoid of light chains. Nature, 1993, Vol. 363, pp.446–448.

4. Harmsen M.M., De Haard H.J. Properties, production, and applications of camelid single-domain antibody fragments. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2007, Vol. 77, pp. 13–22.

5. Muyldermans S., Baral T.N., Retamozzo V.C., et al. Camelid immunoglobulins and nanobody technology. Vet. Immunol. Immunopathol., 2009, Vol. 128, pp. 178–183.

6. Muyldermans S. Nanobodies: natural single-domain antibodies. Annu. Rev. Biochem., 2013, Vol. 82, pp/775–797.

7. Тиллиб С.В., Вятчанин А.С., Муилдерманс С. Молекулярный анализ структуры особых антител Сamelus bactrianus, состоящих только из тяжелых цепей.// Биохимия.− 2014. –Т. 79. № 12, −С. 1687 – 1697. (S. V. Tillib, A. S. Vyatchanin, and S. Muyldermans. Molecular Analysis of Heavy Chain-Only Antibodies of Camelus bactrianus. Biochemistry (Moscow), 2014, Vol. 79, No. 12, pp. 1382-1390).

8. Steeland S., Vandenbroucke R.E., Libert C. (Nanobodies as therapeutics: big opportunities for small antibodies. Drug Discovery Today., 2016, Vol. 21, pp.1077–1113.

9. О. С. Горяйнова, Т. И. Иванова, М. В. Рутовская, С. В. Тиллиб. Метод параллельного и

10. последовательного генерирования однодоменных антител для протеомного анализа плазмы крови человека.// Молекулярная биология. − 2017. − Т. 51. № 6. − С. 985–996. (Goryainova O.S., Ivanova T.I., Rutovskaya M.V., Tillib S.V. A Method for the Parallel and Sequential Generation of Single-Domain Antibodies for the Proteomic Analysis of Human Blood Plasma. Mol Biol (Mosk)., 2017, Vol. 51, no.6, pp.985-996.)

11. Tillib S.V., Privezentseva M.E., Ivanova T.I., et al. (2014) Single-domain antibody-based ligands for immunoaffinity separation of recombinant human lactoferrin from the goat lactoferrin of trasgenic goat milk. J. Chromatogr. B: Anal. Technol. Biomed. Life Sci. 949–950, 48–57.

12. Moreno-Expósito L., Illescas-Montes R., Melguizo-Rodrígueza L. et al. Multifunctional capacity and therapeutic potential of lactoferrin. Life Sciences,2018, Vol. 195, pp.61–64.

13. Boehm Т.К., Sojar Н., DeNardin E. Concentration-dependent Effect of Fibrinogen on IgG-specifiAntigen Binding and Phagocytosis. Cell Immunol. 2010 ; 263(1): 41–48.

14. Wyatt A.R., Kumita J.R., Farrawell N/E. et al. Alpha-2-Macroglobulin Is Acutely Sensitive to Freezing and Lyophilization: Implications for Structural and Functional Studies. PLoS ONE, 2015, Vol. 10(6): e0130036.


Дополнительные файлы

1. Метаданные
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (14KB)    
Метаданные
2. Титульный лист
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (13KB)    
Метаданные
3. Резюме статьи
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (13KB)    
Метаданные
4. Литература
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (25KB)    
Метаданные
5. Рисунок 1
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (92KB)    
Метаданные
6. Рисунок 2
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (381KB)    
Метаданные
7. Рисунок 3
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (62KB)    
Метаданные
8. Резюме на английском языке
Тема
Тип Исследовательские инструменты
Скачать (12KB)    
Метаданные
9. Подписи авторов
Тема
Тип Прочее
Скачать (999KB)    
Метаданные
10. Файл предыдущей статьи тех же авторов, базовой для данной статьи
Тема
Тип Прочее
Скачать (534KB)    
Метаданные
11. Файл предшествующей статьи о получении нанотел к лактоферрину
Тема
Тип Прочее
Скачать (2MB)    
Метаданные
12. Текст статьи с исправлениями в написании Списка литературы
Тема
Тип Прочее
Скачать (50KB)    
Метаданные
13. Литература_исправленный файл
Тема
Тип Прочее
Скачать (30KB)    
Метаданные
14. Подписи к рисункам_ Горяйнова и др.
Тема
Тип Прочее
Скачать (12KB)    
Метаданные
15. Список литературы_ Горяйнова и др._испр.
Тема
Тип Прочее
Скачать (15KB)    
Метаданные
16. Литература_таблица_исправлен
Тема
Тип Прочее
Скачать (24KB)    
Метаданные
17. Figure Legends
Тема
Тип Прочее
Скачать (12KB)    
Метаданные
18. Рисунок 1 с добавленной подписью оси ординат
Тема
Тип Прочее
Скачать (94KB)    
Метаданные
19. Рисунок 3 с добавленной подписью оси ординат
Тема
Тип Прочее
Скачать (63KB)    
Метаданные
20. Figure 1
Тема
Тип Прочее
Скачать (97KB)    
Метаданные
21. Figure 2
Тема
Тип Прочее
Скачать (381KB)    
Метаданные
22. Figure 3
Тема
Тип Прочее
Скачать (60KB)    
Метаданные
23. Figure Legends_corrected
Тема
Тип Прочее
Скачать (12KB)    
Метаданные
24. текст статьи с исправлениями
Тема
Тип Прочее
Скачать (53KB)    
Метаданные
25. текст статьи с исправлениями
Тема
Тип Прочее
Скачать (53KB)    
Метаданные
26. Рис. 1_универс
Тема
Тип Прочее
Скачать (25KB)    
Метаданные
27. Рис. 2_универс
Тема
Тип Прочее
Скачать (663KB)    
Метаданные
28. Рис. 3_универс
Тема
Тип Прочее
Скачать (47KB)    
Метаданные

Для цитирования:


Горяйнова О.С., Хан Е.О., Иванова Т.И., Тиллиб С.В. Новый метод, базирующийся на использовании иммобилизованных однодоменных антител для удаления определенных мажорных белков из плазмы крови, способствует уменьшению неспецифического сигнала в иммуноанализе. Медицинская иммунология. 0;.

For citation:


., ., ., . Medical Immunology (Russia). 0;.

Просмотров: 8


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 1563-0625 (Print)
ISSN 2313-741X (Online)