mimmunМедицинская иммунологияMedical Immunology (Russia)1563-06252313-741XSPb RAACI10.15789/1563-0625-2016-2-129-138mimmun-996Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ОЦЕНКИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОЙ СЕКРЕЦИИ АНТИТЕЛ В-ЛИМФОЦИТАМИ IN VITRO ДЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКИ ИММУНОГЕННОСТИ В КЛИНИЧЕСКИХ ИСПЫТАНИЯХ РЕЗЕРВНЫХ ГРИППОЗНЫХ ВАКЦИН A (H5N1) И A (H5N2)APPLICATION OF METHOD BASED ON IN VITRO ANTIBODY QUANTIFICATION IN PBMC SUPERNATANT SAMPLES FOR IMMUNOGENICITY EVALUATION OF A (H5N1) AND A (H5N2) POTENTIALLY PANDEMIC INFLUENZA VACCINES IN CLINICAL TRIALSЛосевИ. В.LosevI. V.

научный сотрудник, лаборатория иммунологиии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии,

197376, Санкт-Петербург, ул. акад. Павлова, 12

Research Associate, Laboratory of Immunology and Prophylaxis of Viral Infections, Departament of Virology,

197376, St. Petersburg, Acad. Pavlov str., 12

iemlosev@gmail.comДонинаС. А.DoninaS. A.

к.м.н., старший научный сотрудник, лаборатория иммунологиии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии,

Санкт-Петербург

PhD (Medicine), Laboratory of Immunology and Prophylaxis of Viral Infections, Departament of Virology,

St. Petersburg

ПетуховаГ. Д.PetukhovaG. D.

к.б.н., старший научный сотрудник, лаборатория иммунологиии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии,

Санкт-Петербург

PhD (Biology), Senior Research Associate, Laboratory of Immunology and Prophylaxis of Viral Infections, Department of Virology,

St. Petersburg

ЕрофееваМ. К.ErofeevaM. K.

д.м.н., заведующая лабораторией испытаний новых средств защиты от вирусных инфекций,

Санкт-Петербург

PhD, MD (Medicine), Head, Laboratory for Trials of Novel Antiviral Remedies,

St. Petersburg

РуденкоЛ. Г.RudenkoL. G.

д.м.н., профессор, руководитель отдела вирусологии,

Санкт-Петербург

PhD, MD (Medicine), Professor, Head, Department of Virology,

St. Petersburg

НайхинА. Н.NaykhinA. N.

д.м.н., профессор, заведующий лабораторией иммунологиии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии,

Санкт-Петербург

PhD, MD (Medicine), Professor, Head, Laboratory of Immunology and Prophylaxis of Viral Infections, Department of Virology,

St. Petersburg

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины»РоссияResearch Institute of Experimental MedicineRussian FederationФГБУ «Научно-исследовательский институт гриппа» Министерства здравоохранения РФРоссияResearch Institute of InfluenzaRussian Federation201614042016182129138Copyright © Лосев И.В., Донина С.А., Петухова Г.Д., Ерофеева М.К., Руденко Л.Г., Найхин А.Н., 20162016Лосев И.В., Донина С.А., Петухова Г.Д., Ерофеева М.К., Руденко Л.Г., Найхин А.Н.Losev I.V., Donina S.A., Petukhova G.D., Erofeeva M.K., Rudenko L.G., Naykhin A.N.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.mimmun.ru/mimmun/article/view/996

В мире накоплено достаточно данных о необходимости усовершенствования оценки иммуногенности гриппозных вакцин. В нашей стране для определения их иммуногенности регламентирован единственный тест – постановка реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с сыворотками крови вакцинированных лиц. Он далеко не полностью отражает поствакцинальные иммунные изменения в организме. Нами проведено изучение у волонтеров, ранее праймированных резервной живой гриппозной вакциной A (H5N2), иммуногенной активности инактивированной гриппозной вакцины (ИГВ), приготовленной из потенциально пандемического птичьего вируса гриппа A (H5N1) NIBRG-23. Сравнивали три метода: иммуноферментный анализ (ИФА) и РТГА с сыворотками крови (сывороточные антитела), и альтернативный подход, заключающийся в тестировании в ИФА антител, секретируемых В-клетками in vitro в надосадках культур мононуклеаров периферической крови (МПК) (секретируемые антитела). Показано значительное преимущество последнего метода в выявлении количества поствакцинальных конверсий IgA- и IgG-антител на раннем сроке после первой прививки (седьмой день). Эти данные позволили полностью оценить иммуногенность ИГВ H5N1, не прибегая к данным, полученным на более поздних сроках: 28-й день после первой прививки и 28-й день после второй прививки.

Вывод: испытанная методика определения в ИФА секреции антител in vitro может быть использована в качестве альтернативного теста для оценки иммуногенности гриппозных вакцин. Этот метод дает более точное представление о штаммоспецифическом гуморальном иммунном ответе.

There are many data worldwide which suggest that the methods for evaluation of influenza vaccines immunogenicity should be improved. The only method validated in Russia is a HAI (haemagglutination inhibition) assay with serum samples from vaccinated volunteers. This assay does not, however, completely reflect the vaccine-induced immunological changes. In this study, we evaluated antibody immune responses to A (H5N1) inactivated influenza vaccine boosting in healthy volunteers previously primed with A (H5N2) live attenuated influenza vaccine. We compared three methods of antibody detection: (i) HAI assay with serum samples; (ii) ELISA with serum samples; (iii) ELISA with PBMC (peripheral blood mononuclear cells) culture supernates, i.e., an alternative test based on quantification of antibodies secreted by PBMC in vitro. The latter test was shown to have an advantage over other techniques in IgA and IgG antibody detection at early timepoints (day 7) after vaccination. The first two methods allowed immunogenicity assessment at day 28 after vaccination.

Thus, a test based on antibody quantification in PBMC supernatant samples can be used as an alternative method for evaluation of influenza vaccines immunogenicity. This method also exhibits a better strainspecificity.

вирус гриппаопределение иммуногенностииммунный ответгуморальныймононуклеарные клеткипериферическая кровьсупернатантыinfluenza virusimmunogenicityimmune responsehumoralmononuclear cellsperipheral bloodsupernatesReferencesДонина С.А., Петухова Г.Д., Кореньков Д.А., Григорьева Е.П., Кузнецова С.А., Лосев И.В., Руденко Л.Г., Найхин А.Н. Локальный и гуморальный иммунный ответ у больных гриппом и у лиц, привитых против сезонных и пандемических вирусов гриппа А // Вопросы вирусологии, 2013. Т. 58, № 3. С. 37-42. [Donina S.A., Petukhova G.D., Korenkov D.A., Grigorieva E.P., Kuznetsova S.A., Losev I.V., Rudenko L.G., Naykhin A.N. Local Antibody Immune Responses in Influenza Patients and Persons Vaccinated with Seasonal, Pre-pandemic, and Pandemic Live Attenuated Influenza Vaccines. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2013, Vol. 58, no. 3, pp. 37-42. (In Russ.)]Донина С.А., Петухова Г.Д., Кореньков Д.А., Григорьева Е.П., Кузнецова С.А., Лосев И.В., Руденко Л.Г., Найхин А.Н. Локальный и гуморальный иммунный ответ у больных гриппом и у лиц, привитых против сезонных и пандемических вирусов гриппа А // Вопросы вирусологии, 2013. Т. 58, № 3. С. 37-42. [Donina S.A., Petukhova G.D., Korenkov D.A., Grigorieva E.P., Kuznetsova S.A., Losev I.V., Rudenko L.G., Naykhin A.N. Local Antibody Immune Responses in Influenza Patients and Persons Vaccinated with Seasonal, Pre-pandemic, and Pandemic Live Attenuated Influenza Vaccines. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2013, Vol. 58, no. 3, pp. 37-42. (In Russ.)]Найхин А.Н., Артемьева С.А., Выборных Е.Н., Попова Т.Л., Каторгина Л.Г., Ким Т.Н., Кустикова Ю.Г., Денисов Г.М. Роль функциональной активности антител в защищенности людей от гриппа // Вопросы вирусологиия, 1991. Т. 36, № 3. С. 194-197. [Naikhin A.N., Artemyeva S.A., Vybornykh E.N., Popova T.L., Katorgina L.G., Kim T.N., Kustikova Yu.G., Denisov G.M. The role of antibody functional activity in the protection of people against influenza. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 1991, Vol. 36, no. 3, pp. 194-197. (In Russ.)]Найхин А.Н., Артемьева С.А., Выборных Е.Н., Попова Т.Л., Каторгина Л.Г., Ким Т.Н., Кустикова Ю.Г., Денисов Г.М. Роль функциональной активности антител в защищенности людей от гриппа // Вопросы вирусологиия, 1991. Т. 36, № 3. С. 194-197. [Naikhin A.N., Artemyeva S.A., Vybornykh E.N., Popova T.L., Katorgina L.G., Kim T.N., Kustikova Yu.G., Denisov G.M. The role of antibody functional activity in the protection of people against influenza. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 1991, Vol. 36, no. 3, pp. 194-197. (In Russ.)]Найхин А.Н. Гетеросубтипический иммунитет к вирусам гриппа А: эпидемиологические данные, вовлеченность разных иммунологических факторов, вакцинация // Вопросы вирусологии, 2012. Т. 57, № 3. С. 4-9. [Naikhin A.N. Heterosubtypic immunity to influenza A viruses: epidemiological data, involvement of different immunological factors, vaccination. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2012, Vol. 57, no. 3, pp. 4-9. (In Russ.)]Найхин А.Н. Гетеросубтипический иммунитет к вирусам гриппа А: эпидемиологические данные, вовлеченность разных иммунологических факторов, вакцинация // Вопросы вирусологии, 2012. Т. 57, № 3. С. 4-9. [Naikhin A.N. Heterosubtypic immunity to influenza A viruses: epidemiological data, involvement of different immunological factors, vaccination. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2012, Vol. 57, no. 3, pp. 4-9. (In Russ.)]Ярилин А.А. Иммунология: учебник. М.: Гэотар Медиа, 2010. 749 с. [Yarilin A.A. Immunology]. Moscow: GEOTAR-Media, 2010. 749 p.Ярилин А.А. Иммунология: учебник. М.: Гэотар Медиа, 2010. 749 с. [Yarilin A.A. Immunology]. Moscow: GEOTAR-Media, 2010. 749 p.Benner R., Hijmans W., Haaijman J.J. The bone marrow: the major source of serum immunoglobulins, but still a neglected site of antibody formation. Clin. Exp. Immunol., 1981, Vol. 46, no. 1, pp. 1-8.Benner R., Hijmans W., Haaijman J.J. The bone marrow: the major source of serum immunoglobulins, but still a neglected site of antibody formation. Clin. Exp. Immunol., 1981, Vol. 46, no. 1, pp. 1-8.Cox R.J., Brokstad K.A., Zuckerman M.A., Wood J.M., Haaheim L.R., Oxford J.S. An early humoral immune response in peripheral blood following parenteral inactivated influenza vaccination. Vaccine, 1994, Vol. 12, no. 11, pp. 993-999.Cox R.J., Brokstad K.A., Zuckerman M.A., Wood J.M., Haaheim L.R., Oxford J.S. An early humoral immune response in peripheral blood following parenteral inactivated influenza vaccination. Vaccine, 1994, Vol. 12, no. 11, pp. 993-999.Ershler W.B., Moore A.L., Hacker M.P. Specific in vivo and in vitro antibody response to tetanus toxoid immunization. Clin. Exp. Immunol., 1982, Vol. 49, no. 3, pp. 552-558.Ershler W.B., Moore A.L., Hacker M.P. Specific in vivo and in vitro antibody response to tetanus toxoid immunization. Clin. Exp. Immunol., 1982, Vol. 49, no. 3, pp. 552-558.Ershler W.B., Coe C.L., Gravenstein S., Schultz K.T., Klopp R.G. Specific antibody synthesis in vitro. IV. The correlation of in vitro and in vivo antibody response to influenza vaccine in rhesus monkeys. Clin. Exp. Immunol., 1988, Vol. 73, no. 3, pp. 355-3659.Ershler W.B., Coe C.L., Gravenstein S., Schultz K.T., Klopp R.G. Specific antibody synthesis in vitro. IV. The correlation of in vitro and in vivo antibody response to influenza vaccine in rhesus monkeys. Clin. Exp. Immunol., 1988, Vol. 73, no. 3, pp. 355-3659.He X.S., Sasaki S., Narvaez C.F. Plasmablast-derived polyclonal antibody response after influenza vaccination. Journal of Immunological Methods, 2011, Vol. 365, pp. 67-75.He X.S., Sasaki S., Narvaez C.F. Plasmablast-derived polyclonal antibody response after influenza vaccination. Journal of Immunological Methods, 2011, Vol. 365, pp. 67-75.Kunkel E.J., Butcher E.C.. Chemokines and the tissue-specific migration of lymphocytes. Immunity, 2002, Vol. 16, no. 1, pp. 1-4.Kunkel E.J., Butcher E.C.. Chemokines and the tissue-specific migration of lymphocytes. Immunity, 2002, Vol. 16, no. 1, pp. 1-4.Kunkel E.J., Butcher E.C. Plasma-cell homing. Nat. Rev. Immunol., 2003, Vol. 3, no. 10, pp. 822-829.Kunkel E.J., Butcher E.C. Plasma-cell homing. Nat. Rev. Immunol., 2003, Vol. 3, no. 10, pp. 822-829.Rowe T., Abernathy R.A., Hu-Primmer J. Detection of antibody to avian influenza A(H5N1) virus in human serum by using a combination of serologic assay. J. Clin. Microbiol., 1999, Vol. 37, pp. 937-943.Rowe T., Abernathy R.A., Hu-Primmer J. Detection of antibody to avian influenza A(H5N1) virus in human serum by using a combination of serologic assay. J. Clin. Microbiol., 1999, Vol. 37, pp. 937-943.Rudenko L., Naykhin A., Donina S. Assessment of immune responses to H5N1 inactivated influenza vaccine among individuals previously primed with H5N2 live attenuated influenza vaccine. Human Vaccines and Immunotherapeutics, 2015 [in print].Rudenko L., Naykhin A., Donina S. Assessment of immune responses to H5N1 inactivated influenza vaccine among individuals previously primed with H5N2 live attenuated influenza vaccine. Human Vaccines and Immunotherapeutics, 2015 [in print].Qadri F., Ryan E.T., Faruque A.S., Ahmed F., Khan A.I., Islam M.M., Akramuzzaman S.M., Sack D.A., Calderwood S.B. Antigen-specific immunoglobulin A antibodies secreted from circulating B cells are an effective marker for recent local immune responses in patients with cholera: comparison to antibody-secreting cell responses and other immunological markers. Infect. Immun., 2003, Vol. 71, no. 8, pp. 4808-4814.Qadri F., Ryan E.T., Faruque A.S., Ahmed F., Khan A.I., Islam M.M., Akramuzzaman S.M., Sack D.A., Calderwood S.B. Antigen-specific immunoglobulin A antibodies secreted from circulating B cells are an effective marker for recent local immune responses in patients with cholera: comparison to antibody-secreting cell responses and other immunological markers. Infect. Immun., 2003, Vol. 71, no. 8, pp. 4808-4814.Sheikh A., Bhuiyan M.S., Khanam F., Chowdhury F., Saha A., Ahmed D., Jamil K.M., LaRocque R.C., Harris J.B., Ahmad M.M., Charles R., Brooks W.A., Calderwood S.B., Cravioto A., Ryan E.T., Qadri F. Salmonella enterica serovar Typhi-specific immunoglobulin A antibody responses in plasma and antibody in lymphocyte supernatant specimens in Bangladeshi patients with suspected typhoid fever. Clin. Vaccine Immunol., 2009, Vol. 16, no. 11, 1587-1594.Sheikh A., Bhuiyan M.S., Khanam F., Chowdhury F., Saha A., Ahmed D., Jamil K.M., LaRocque R.C., Harris J.B., Ahmad M.M., Charles R., Brooks W.A., Calderwood S.B., Cravioto A., Ryan E.T., Qadri F. Salmonella enterica serovar Typhi-specific immunoglobulin A antibody responses in plasma and antibody in lymphocyte supernatant specimens in Bangladeshi patients with suspected typhoid fever. Clin. Vaccine Immunol., 2009, Vol. 16, no. 11, 1587-1594.Treanor J., Wright P.F. Immune correlates of protection against influenza in the human challenge model. Dev. Biol. (Basel), 2003, Vol. 115, pp. 97-104.Treanor J., Wright P.F. Immune correlates of protection against influenza in the human challenge model. Dev. Biol. (Basel), 2003, Vol. 115, pp. 97-104.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.