Гельм Ю.В. – научный сотрудник отделения клинической иммунологии
г. Обнинск
Gelm Yu.V., Research Associate, Department of Clinical Immunology
Obninsk
Гривцова Л.Ю. – д.б.н., заведующая отделением клинической иммунологии
г. Обнинск
Grivtsova L.Yu., PhD, MD (Biology), Head, Department of Clinical Immunology
Obninsk
Пасова И.А. – врач – аллерголог-иммунолог отделения клинической иммунологии
г. Обнинск
Pasova I.A., Allergologist-Immunologist, Department of Clinical Immunology
Obninsk
Константинова Т.В. – биолог отделения клинической иммунологии
г. Обнинск
Konstantinova Т.V., Biologist, Department of Clinical Immunology
Obninsk
Мушкарина Т.Ю. – научный сотрудник отделения клинической иммунологии
г. Обнинск
Mushkarina Т.Yu., Research Associate, Department of Clinical Immunology
Obninsk
Иванов С.А. – д.м.н., член-корр. РАН, директор; профессор кафедры онкологии и рентгенорадиологии имени В.П. Харченко медицинского института
г. Обнинск;Москва
Ivanov S.A., PhD, MD (Medicine), Corresponding Member, Russian Academy of Sciences, Director; Professor, V. Kharchenko Department of Oncology and Radiology,
Obninsk;Moscow
Каприн А.Д. – д.м.н., профессор, академик РАН, генеральный директор; заведующий кафедрой онкологии и рентгенорадиологии имени В.П. Харченко медицинского института; директор
г. Обнинск;Москва
Kaprin A.D., PhD, MD (Medicine), Professor, Full Member, Russian Academy of Sciences, General Director; Director; Head, V. Kharchenko Department of Oncology and Radiology
Obninsk;Moscow;Moscow
Методы иммунокоррекции, основанные на введении в организм аутологичных лейкоцитов, активированных в условиях in vitro различными иммуномодуляторами, получают все более широкое распространение. Ранее проведенные нами исследования позволяют утверждать об эффективности применения иммунотерапии лимфоцитами, активированными in vitro с помощью цитокинов для лечения онкологических больных и хорошей переносимости данной терапии. В данной статье рассмотрены варианты применения препаратов рекомбинантного интерферона гамма (IFNγ) и рекомбинантного фактора некроза опухоли-альфа-тимозина-альфа-1 (TNFα-Т) для получения цитокин-индуцированных киллеров (ЦИК) человека in vitro. Целью исследования являлась оценка возможности применения препаратов IFNγ и TNFα-Т в протоколах получения ЦИК человека в условиях in vitro. Мононуклеары (МНК), выделенные из крови 15 доноров, культивировали в условиях СО2- инкубатора до 12 суток. Для оценки токсичности IFNγ и TNFα-Т в отношении лимфоцитов in vitro концентрации препаратов были выверены экспериментальным путем с учетом контроля уровня жизнеспособности клеток. Уровни цитокинов в супернатантах на этапах культивирования клеток определяли методом иммуноферментного анализ (ИФА). До и после культивирования оценивали наличие адгезии и гранулярности изучаемых лимфоцитов, фенотип клеток изучали методом проточной цитометрии, оценку уровня жизнеспособности активированных лимфоцитов проводили в камере Горяева. Проведен сравнительный анализ способов культивирования лимфоцитов в различных средах, содержащих: только IFNγ (группа 1); IFNγ, интерлейкин-2 (IL-2) и интерлейкин-15 (IL-15) (группа 2); только TNFα-Т (группа 3); TNFα-Т, IL-2 и IL-15 (группа 4) и только IL-2 и IL-15 (группа контроля). При активации МНК в среде, содержажей IFNγ, IL-2 и IL-15 или в среде, содержащей TNFα-Т, IL-2 и IL-15, отмечена общая тенденцию к значительному увеличению показателей Т-цитотоксических клеток (CD3+CD8+), NKТ-клеток (CD3+CD16+CD56+), активированных лимфоцитов (HLA-DR+), активированных Т-лимфоцитов (CD3+HLA-DR+) и маркеров активации на всех лимфоцитах (CD38+) и на Т-клетках (CD3+CD38+). Оценена возможность применения препаратов IFNγ и TNFα-Т для получения ЦИК человека in vitro. Полученные данным способом активированные цитотоксические лимфоциты могут применяться для фундаментальных исследований по выявлению новых закономерностей и морфо-функциональных особенностей активированных лимфоцитов человека, а также для проведения адоптивной иммунотерапии онкологическим больным.
Methods of immunocorrection based on injection of in vitro activated autologous leukocytes are becoming widespread. Our previous studies suggest that implementation of immunotherapy with in vitro activated lymphocytes using cytokines is effective for the treatment of cancer patients, and that this therapy is well tolerated. This article discusses the use of biological drugs, i.e., recombinant interferon-gamma (IFNγ) and recombinant tumor necrosis factor-alpha-thymosin-alpha-1 (TNFα-T) for the in vitro production of human cytokine-induced killer cells (CIC). The purpose of our study was to assess the possibility of IFNγ and TNFα-T usage within protocols for in vitro production of human CIC. Isolated mononuclear blood cells from 15 donors were cultured in a CO2 incubator for 12 days and the morpho-functional characteristics of lymphocytes were studied. To assess the in vitro toxicity of IFNγ and TNFα-T towards lymphocytes, the drug concentrations have been adjusted experimentally, with respect to control of cell viability. The levels of cytokines in the supernatants at the stages of cell culture were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Before and after cultivation, the presence of adhesion and granularity of the studied lymphocytes was assessed, the phenotype of cultured cells was studied by flow cytometry, and the level of viability of activated lymphocytes was assessed in a haemocytometer chamber. We carried out a comparison of methods for culturing lymphocytes under different conditions. We studied culture media containing the following supplements: only IFNγ (group 1); IFNγ, interleukin-2 (IL-2) and interleukin-15 (IL-15) (group 2); TNFα-T only (group 3); TNFα-T, IL-2 and IL-15 (group 4), and only IL-2 and IL-15 (control group). When mononuclear cells are activated in a medium containing IFNγ, IL-2 and IL-15, or in a medium containing TNFα-T, IL-2 and IL-15, we observed a general trend towards significant increase in T-cytotoxic cells (CD3 +CD8+), NKT cells (CD3+CD16+CD56+), activated lymphocytes (HLA-DR+), activated T lymphocytes (CD3+HLA-DR+), and activation markers of all lymphocytes (CD38+) and on T cells ( CD3+CD38+). We assessed the possibility of using IFNγ and TNFα-T to obtain human CIK in vitro. Activated cytotoxic lymphocytes obtained by this approach may be used for fundamental research, in order to identify new patterns and morpho-functional characteristics of activated human lymphocytes, as well as for adoptive immunotherapy for cancer patients.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.