Сайтгалина Мария Александровна – младший научный сотрудник лаборатории молекулярной иммунологии.
197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14
Тел.: 8 (981) 834-66-32
Maria A. Saitgalina - Junior Research Associate, Laboratory of Molecular Immunology, Saint Petersburg Pasteur Institute.
14 Mira St St. Petersburg 197101
Phone: +7 (981) 834-66-32
Останкова Юлия Владимировна – кандидат биологических наук, заведующая лабораторией иммунологии и вирусологии ВИЧ-инфекции, старший научный сотрудник лаборатории молекулярной иммунологии.
Санкт-Петербург
Yulia V. Ostankova - PhD (Biology), Head, Laboratory of Immunology and Virology HIV, Senior Research Associate, Laboratory of Molecular Immunology Saint Petersburg Pasteur Institute.
St. Petersburg
Седых Анна Васильевна – младший научный сотрудник лаборатории молекулярной иммунологии.
Санкт-Петербург
Anna V. Sedykh - Junior Research Associate, Laboratory of Molecular Immunology Saint Petersburg Pasteur Institute.
St. Petersburg
Тотолян Арег Артемович – доктор медицинских наук, профессор, академик РАН, заведующий лабораторией молекулярной иммунологии, директор ФБУН «Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера»; заведующий кафедрой иммунологии ФГБОУ ВО «ПСПбГМУ им. И.П. Павлова» МЗ РФ.
Санкт-Петербург
Areg A. Totolian - PhD, MD (Medicine), Professor, Full Member, Russian Academy of Sciences, Head, Laboratory of Molecular Immunology, Director, Saint Petersburg Pasteur Institute; Head, Department of Immunology, First St. Petersburg State I. Pavlov Medical University.
St. Petersburg
Использование сухих пятен крови (dried blood spots – DBS), полученных из пяток младенцев, имеет много преимуществ по сравнению со сбором образцов цельной крови. Экстрагированная из DBS ДНК может быть использована для выявления генетических заболеваний методом ПЦР, что способствовало развитию популяционного скрининга новорожденных во всем мире. C января 2023 г. в список выявляемых заболеваний входит группа первичных иммунодефицитов (ПИД), связанных с отсутствием или снижением уровней Т- и/или В-лимфоцитов, определяемых в рамках скрининга по уровням молекул TREC и KREC в периферической крови соответственно. Количественный анализ требует особого внимания к биологическому материалу. Цель – оценить влияние преаналитического этапа на количественный анализ уровней TREC/KREC в периферической крови.
Материалом служили 5219 образцов DBS, полученных от младенцев на 3-4-й день жизни, а также DBS, приготовленные из цельной крови 100 условно здоровых лиц в возрасте от 18 до 29 лет. Методом ПЦР-РВ, применяя тест-системы для оценки уровней TREC и KREC в периферической крови, проводили сравнительный анализ количества молекул TREC/KREC в корректно и не корректно взятых DBS от новорожденных и взрослых лиц, а также в зависимости от объема наносимого материала; качество DBS оценивали визуально.
В первые месяцы проекта выявлено значительное количество неправильно взятых образцов – свыше трети всех полученных за каждый соответствующий месяц ДНК-карт. В результате дополнительного обучения медперсонала количество некорректно взятого материала снизилось до уровня, не превышающего 1% от всех ежемесячно собираемых образцов. При использовании ДНК, выделенной из DBS с ошибками нанесения, у большей части образцов (для новорожденных 64%, для взрослых лиц 78%) не удавалось получить результат. В остальных случаях полученные результаты были значительно ниже нормальных уровней содержания TREC/KREC, определяемых в этих же образцах при корректном взятии DBS (во всех случаях p < 0,0001, 95% ДИ). Объем крови, используемый при корректном нанесении на карты Гатри, не влиял на получаемые результаты, уровни TREC и KREC были сопоставимы, при сравнении медиан, рассчитанных для каждой группы образцов, значимых различий не выявлено (p > 0,05).
При количественном анализе уровней TREC/KREC в периферической крови корректно взятый материал имеет принципиальное значение для получения достоверных показателей, в первую очередь для исключения ложноположительных результатов. Чтобы свести к минимуму погрешности преаналитического этапа, для контроля и/или корректировки ошибок, необходимо дополнительное обучение медицинского персонала.
The use of dried blood spots (DBS) obtained from the heels of infants has many advantages over the collection of whole blood samples. DNA extracted from DBS can be used to detect genetic diseases by PCR, which has contributed to the development of population-based newborn screening worldwide. Since January 2023, the list of identified diseases includes a group of primary immunodeficiencies (PIDs), associated with the absence or decrease in the levels of T and/or B lymphocytes, determined as part of screening by the levels of TREC and KREC molecules in peripheral blood, respectively. Quantitative analysis requires special attention to biological material. The aim is to evaluate the impact of the preanalytical step on the quantitative analysis of TREC/KREC levels in peripheral blood.
The material included 5219 DBS obtained from infants on days 3-4 of life, as well as DBS prepared from the whole blood of 100 apparently healthy individuals aged 18 to 29 years. A comparative analysis of the TREC/KREC molecules number in correctly and incorrectly collected DBS from newborns and adults, as well as depending on the volume of applied blood, was carried out by RT-PCR using test systems to assess the levels of TREC and KREC in peripheral blood. DBS quality was assessed visually.
In the first months of the project, a significant number of incorrectly taken samples were identified – over a third of all DNA maps received for each corresponding month. As a result of additional training of medical staff, the amount of incorrectly collected material decreased to a level not exceeding 1% of all monthly samples collected. When using DNA extracted from DBS with application errors, the majority of samples (64% for newborns, 78% for adults) failed to obtain a result. In the remaining cases, the results obtained were significantly lower than the normal levels of TREC/KREC determined in the same samples with correct DBS collection (all p < 0.0001, 95% CI). The volume of blood used when correctly applied to Guthrie cards did not affect the results obtained, TREC and KREC levels were comparable; when comparing the medians calculated for each group of samples, no significant differences were identified (p > 0.05).
When quantitatively analyzing TREC/KREC levels in peripheral blood, correctly taken material is fundamental importance to obtain reliable indicators, primarily to exclude false-positive results. To minimize errors in the preanalytical stage, additional training of medical personnel is necessary to control and/or correct errors.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.