mimmunМедицинская иммунологияMedical Immunology (Russia)1563-06252313-741XSPb RAACI10.15789/1563-0625-QOC-2794mimmun-2794Research ArticleКРАТКИЕ СООБЩЕНИЯSHORT COMMUNICATIONSКоличественное определение С1-эстеразного ингибитора в сыворотке крови человека методом иммуноферментного анализа: корреляция с турбидиметрическим методомQuantification of C1 esterase inhibitor in human serum by enzyme-linked immunosorbent assay: Correlation with turbidimetric immunoassayhttps://orcid.org/0000-0003-4636-0565ГорбуновН. П.GorbunovN. P.

Горбунов Николай Петрович — младший научный сотрудник лаборатории гибридомных технологий.

197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14

Тел.: 8 (921) 786-38-16

Nikolay P. Gorbunov - Junior Research Associate, Laboratory of the Hybridoma Technology, Saint Petersburg Pasteur Institute.

14 Mira St St. Petersburg 197101

Phone: +7 (921) 786-38-16

niko_laygo@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-0377-7088ЖаховА. В.ZhakhovA. V.

Жахов Александр Владимирович — научный сотрудник лаборатории гибридомных технологий.

Санкт-Петербург

Aleksandr V. Zhakhov - Research Associate, Laboratory of the Hybridoma Technology, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg

Zhs2003@list.ruГорбуноваИ. Н.GorbunovaI. N.

Горбунова Ирина Николаевна — научный сотрудник лаборатории гибридомных технологий.

Санкт-Петербург

Irina N. Gorbunova - Research Associate, Laboratory of the Hybridoma Technology, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg

gorbunova55@mail.ruМиличкинаА. М.MilichkinaA. M.

Кандидат медицинских наук, главный врач.

Санкт-Петербург

PhD (Medicine), Chief Physician, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg

ДроздИ. В.DrozdI. V.

Кандидат биологических наук, заведующая центральной клинико-диагностической лабораторией.

Санкт-Петербург

PhD (Biology), Head, Central Clinical Diagnostic Laboratory, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg

ГубановаА. В.GubanovaA. V.

Врач клинической лабораторной диагностики центральной клинико-диагностической лаборатории.

Санкт-Петербург

Doctor, Clinical Laboratory Diagnostics, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg

ДаниловаЕ. М.DanilovaE. M.

Кандидат медицинских наук, заведующая диспансерно-поликлиническим отделением.

Санкт-Петербург

PhD (Medicine), Head, Dispensary and Polyclinic Department, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg

КузнецоваР. Н.KuznecovaR. N.

Кандидат медицинских наук, врач — аллерголог-иммунолог диспансерно-поликлинического отделения.

Санкт-Петербург

PhD (Medicine), Allergist-Immunologist, Dispensary and Polyclinic Department, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg

СавинТ. В.SavinT. V.

Врач — аллерголог-иммунолог диспансерно-поликлинического отделения.

Санкт-Петербург

Allergist-Immunologist, Dispensary-Polyclinic Department, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg

БурцеваА. Г.BurtsevaA. G.

Бурцева Анастасия Геннадиевна — младший научный сотрудник лаборатории гибридомных технологий.

Санкт-Петербург

Anastacia G. Burtseva - Junior Research Associate, Laboratory of the Hybridoma Technology, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg

stacyborc31@gmail.comПигареваН. В.PigarevaN. V.

Пигарева Наталья Васильевна — Кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории гибридомных технологий.

Санкт-Петербург

Natalya V. Pigareva - PhD (Medicine), Senior Research Associate, Laboratory of the Hybridoma Technology, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. Petersburg

nwp66@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6661-6145ИщенкоА. М.IschenkoA. M.

Ищенко Александр Митрофанович — кандидат биологических наук, заведующий лабораторией гибридомных технологий.

Санкт-Петербург

Aleksandr M. Ischenko - PhD (Biology), Head, Laboratory of the Hybridoma Technology, Saint Petersburg Pasteur Institute.

St. etersburg

amischenko1946@mail.ruТотолянАрег А.TotolianAreg A.

Тотолян Арег А. — доктор медицинских наук, профессор, академик РАН, заведующий лабораторией молекулярной иммунологии, директор ФБУН «Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера»; заведующий кафедрой иммунологии ФГБОУ ВО «ПСПбГМУ им. И.П. Павлова» МЗ РФ.

Санкт-Петербург

Areg A. Totolian - PhD, MD (Medicine), Professor, Full Member, Russian Academy of Sciences, Head, Laboratory of Molecular Immunology, Director, Saint Petersburg Pasteur Institute; Head, Department of Immunology, First St. Petersburg State I. Pavlov Medical University.

St. Petersburg

ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»РоссияSaint Petersburg Pasteur InstituteRussian FederationФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»; ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФРоссияSaint Petersburg Pasteur Institute; First St. Petersburg State I. Pavlov Medical UniversityRussian Federation20230106202325511971204Copyright © Горбунов Н.П., Жахов А.В., Горбунова И.Н., Миличкина А.М., Дрозд И.В., Губанова А.В., Данилова Е.М., Кузнецова Р.Н., Савин Т.В., Бурцева А.Г., Пигарева Н.В., Ищенко А.М., Тотолян А.А., 20232023Горбунов Н.П., Жахов А.В., Горбунова И.Н., Миличкина А.М., Дрозд И.В., Губанова А.В., Данилова Е.М., Кузнецова Р.Н., Савин Т.В., Бурцева А.Г., Пигарева Н.В., Ищенко А.М., Тотолян А.А.Gorbunov N.P., Zhakhov A.V., Gorbunova I.N., Milichkina A.M., Drozd I.V., Gubanova A.V., Danilova E.M., Kuznecova R.N., Savin T.V., Burtseva A.G., Pigareva N.V., Ischenko A.M., Totolian A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.mimmun.ru/mimmun/article/view/2794

С1-ингибитор сериновых протеаз (C1-INH) выполняет регуляторную функцию в системе комплемента и проницаемости сосудов. Дефицит С1-INH приводит к различным формам ангиооте- ков, в том числе наследственному ангионевротическому отеку (НАО). Причиной НАО является генетически обусловленное нарушение синтеза С1-INH. Снижение уровня С1-INH до 50% относительно нормы приводит к увеличению продукции брадикинина, что является основанием для постановки диагноза «НАО». Разработка доступных иммуноферментных тест-систем (ИФА) для количественного определения d-INH является востребованным направлением для клиницистов. В процессе разработки нового набора для количественного определения С1-INH были получены два моноклональных антитела мыши (МАТ), обладающих разной эпитопной специфичностью. На их основе была разработана ИФА тест-система по типу сэндвич. Специфичность полученных МАТ была подтверждена с использованием коммерческого препарата «Беринерт». Для приготовления калибраторов С1-INH был аффинноочищен из плазмы крови человека с использованием сорбента с иммбилизованными МАТ. Идентичность белку С1-INH подтверждали при помощи электрофореза в ПААГ, иммуноблоттинга и масс-спектрометрии на MALDI-TOF/TOF масс-спектрометре UltrafleXtreme. Для оценки показателей качества разработанного набора реагентов были проведены исследования в соответствии с ГОСТ Р 51352-2013 и ТУ 21.20.23-041-01967164-2022. Значения показателей качества: точность (правильность) — 93,53%; интервал линейности измерений — 22,00-176,07 нг/мл. Присутствие интерферирующих агентов (гемоглобина, билирубина, триглицеридов) не влияло на эффективность измерений. С помощью разработанной ИФА тест-системы нами были исследованы 28 сывороток крови здоровых доноров и 7 сывороток крови пациентов с подтвержденным диагнозом «НАО». В этих же образцах определяли содержание C1-INH при помощи турбидиметрического метода, используя медицинское изделие «Реагенты диагностические для иммунохимических исследований in vitro специфических белков крови. Модель: С1-ингибитор эстеразы (C1 EsteraseInhibitor)» (Aptec, Бельгия). Коэффициент корреляция составил 0,94 (p < 0,05). Было установлено, что диагностическая чувствительность и специфичность разработанной тест-системы составляет 100%. В результате проведенного исследования разработана оригинальная ИФА тест-система для количественного определения C1-INH «Набор реагентов для иммуноферментного количественного определения С1-ингибитора человека (C1-inh PS)».

C1 inhibitor of serine proteases (C1-INH) performs a regulatory function in the complement system and vascular permeability. Deficiency of C1-INH leads to various forms of angioedema, including hereditary angioedema (HAE). The cause of HAE is a genetically determined violation of the synthesis of C1-INH. A decrease in the level of C1-INH to 50% relative to the norm leads to an increase in the production of bradykinin, which is the basis for the diagnosis of HAE. The development of affordable ELISA for the quantitative determination of C1-INH is a popular direction for clinicians. During the development of a new kit for quantitative determination of C1-INH, two mouse monoclonal antibodies (mAb) with different epitope specificities were obtained. On their basis, a sandwich-type ELISA was developed. The specificity of the obtained mAb's was confirmed using the medical device “Berinert”. To prepare calibrators, C1-INH was affinity purified from human blood plasma using a sorbent with immobilized mAbs. The identity of the C1-INH protein was confirmed by PAGE electrophoresis, immunoblotting, and mass spectrometry on MALDI-TOF/TOF UltrafleXtreme mass spectrometer. To assess the quality indicators of developed reagents kit, studies were carried out in accordance with GOST R 51352-2013 and TU 21.20.23-041-01967164-2022. Values of quality indicators: accuracy — 93.53%; measurement linearity interval — 22.00-176.07 ng/mL. Using the developed ELISA test system, we examined 28 blood sera from healthy donors and 7 blood sera from patients with confirmed HAE. In the same samples, the content of C1-INH was determined by turbidimetric method, using the "Diagnostic reagents for in vitro immunochemical studies of specific blood proteins. Model: C1-esterase inhibitor (C1 EsteraseInhibitor)" (Aptec, Belgium). The correlation coefficient was 0.94 (p < 0.05). It was found that the diagnostic sensitivity and specificity of the developed ELISA is 100%. As a result of the study, an original ELISA test system for the quantitative determination of C1-INH was developed "Reagent kit for enzyme-linked immunosorbent assay of human C1-inhibitor (C1-inh PS)".

С1-ингибитормоноклональное антителоиммуноферментный анализтурбидиметриякалибраторкорелляционный анализC1 inhibitormonoclonal antibodyenzyme immunoassayturbidimetrycalibratorcorrelation analysisReferencesBorisova N.V., Sokurenko S.I. Classification, diagnosis, and approach, to treatment for angioedema. Clinical Practice, 2014, Vol. 10, no. 3, pp. 71-79. (In Russ.)Borisova N.V., Sokurenko S.I. Classification, diagnosis, and approach, to treatment for angioedema. Clinical Practice, 2014, Vol. 10, no. 3, pp. 71-79. (In Russ.)Davis A.E., III, Mejia P., Lu F. Biological activities of C1 inhibitor. Mol. Immunol., 2008, Vol. 45, no. 16, pp. 4057-4063.Davis A.E., III, Mejia P., Lu F. Biological activities of C1 inhibitor. Mol. Immunol., 2008, Vol. 45, no. 16, pp. 4057-4063.Drouet C., Lopez-Lera A., Ghannam A., Lopez-Trascasa M., Cichon S., Ponard D., Parsopoulou F., Grombirikova H., Freiberger T., Rijavec M., Veronez C.L., Pesquero J.B., Germenis A.E. SERPING1 variants and C1- INH biological function: a close relationship with C1-INH-HAE. Front. Allergy, 2022, Vol. 3, 835503. doi: 10.3389/falgy.2022.835503Drouet C., Lopez-Lera A., Ghannam A., Lopez-Trascasa M., Cichon S., Ponard D., Parsopoulou F., Grombirikova H., Freiberger T., Rijavec M., Veronez C.L., Pesquero J.B., Germenis A.E. SERPING1 variants and C1- INH biological function: a close relationship with C1-INH-HAE. Front. Allergy, 2022, Vol. 3, 835503. doi: 10.3389/falgy.2022.835503Karnaukhova E. C1-Inhibitor: structure, functional diversity and therapeutic development. Curr. Med. Chem., 2022, Vol. 29, no. 3, pp. 467-488.Karnaukhova E. C1-Inhibitor: structure, functional diversity and therapeutic development. Curr. Med. Chem., 2022, Vol. 29, no. 3, pp. 467-488.Tange C.E., Kaur A., Verma N., Hickey A., Grigoriadou S., Scott C., Kiani S., Steven R., Ponsford M., El- Shanawany T., Jolles S., Harding S., Parker A.R. Quantification of human C1 esterase inhibitor protein using an automated turbidimetric immunoassay, J. Clin. Lab. Anal., 2019, Vol. 33, no. 1, e22627. doi: 10.1002/jcla.22627.Tange C.E., Kaur A., Verma N., Hickey A., Grigoriadou S., Scott C., Kiani S., Steven R., Ponsford M., El- Shanawany T., Jolles S., Harding S., Parker A.R. Quantification of human C1 esterase inhibitor protein using an automated turbidimetric immunoassay, J. Clin. Lab. Anal., 2019, Vol. 33, no. 1, e22627. doi: 10.1002/jcla.22627.Wagenaar-Bos I.G.A., Drouet C., Aygoren-Pursun E., et al. Functional Ci-inhibitor diagnostics in hereditary angioedema: assay evaluation and recommendations. J. Immunol. Methods, 2008, Vol. 338, no. 1-2, pp. 14-20.Wagenaar-Bos I.G.A., Drouet C., Aygoren-Pursun E., et al. Functional Ci-inhibitor diagnostics in hereditary angioedema: assay evaluation and recommendations. J. Immunol. Methods, 2008, Vol. 338, no. 1-2, pp. 14-20.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.