Гликоделин (PP14, PAEP, альфа-2-микроглобулин, димерный гликопротеин с молекулярной массой от 42 до 56 кД) рассматривается как маркер рецептивности репродуктивной ткани. Невзирая на то, что иммунодепрессивные эффекты гликоделина хорошо известны, его роль в регуляции миелоидных супрессорных клеток (MDSC) не изучена. MDSC представляют собой гетерогенную популяцию незрелых миелоидных клеток, которые при патологических состояниях приобретают супрессорный фенотип, подавляя иммунный ответ.

Известно, что MDSC играют важную роль в поддержании иммунной толерантности в период беременности и при трансплантации. Наша гипотеза состоит в том, что гликоделин способен индуцировать формирование MDSC, поскольку уровень этих клеток во время успешной беременности повышается, в то время как спонтанное прерывание беременности и развитие преэклампсии ассоциировано с низким уровнем циркулирующего гликоделина. Таким образом, целью работы являлось изучение роли рекомбинантного гликоделина в физиологических концентрациях, в регуляции дифференцировки MDSC.

Для генерации MDSC in vitro мононуклеарные клетки из периферической крови добровольцев-доноров сепарировали путем центрифугирования на градиенте плотности 1,077 г/см3 (Ficoll-Hypaque, Sigma-Aldrich). Затем полученные клетки культивировали в 24-луночном планшете в концентрации 1 × 106 клеток/мл в ППС с внесенными в среду цитокинами IL-6 (20 нг/мл), GM-CSF (40 нг/мл) в течение 14 суток при 5% CO2 и 37 °C. Замена среды в культуре производилась на 7-е сутки, тогда же повторно вносили цитокины, а на 11-е сутки вносили рекомбинантный гликоделин (MyBioSource. Inc., США) в физиологических концентрациях (0,2; 2 мкг/мл), фармакологическая концентрация была 50 мкг/мл. В культурах оценивали уровень M-MDSC (LinHLA-DRCD33+CD11b+CD14+CD66b- ) и PMN-MDSC (LinHLA-DRCD33+CD11b+CD14- CD66b+) методом проточной цитометрии (СytoFlexS (Beckman Coulter)) при помощи антител R&D Systems по стандартной методике. Статистическую обработку данных проводили в программе GraphPad Prizm 6 при помощи критерия Фридмана.

Установлено, что гликоделин не оказывал существенного влияния на жизнеспособность клеток, оцениваемую методом проточной цитометрии (PI). Высокая концентрация GdA (50 мкг/мл), которая является фармакологической, не оказывала достоверного эффекта на дифференцировку MDSC. В то же время гликоделин в концентрациях, соответствующих нормальной беременности (0,2; 2 мкг/мл), повышал процент MDSC в индуцированных культурах мононуклеарных клеток человека.

При анализе субпопуляций установлено, что этот эффект был обусловлен повышением уровня PMN-MDSC, в то время как уровень M-MDSC достоверно не изменялся. Данный результат можно интерпретировать как фетопротективный эффект гликоделина, поскольку повышение уровня G-MDSC связывают с подавлением иммунного ответа на патернальные антигены. Известно, что уровень PMN-MDSC увеличивается в периферической крови здоровых беременных женщин на всех стадиях беременности по сравнению с небеременными, тогда как число M-MDSC остается без изменений.

В то же время у пациенток с выкидышем более чем на 30% снижено количество MDSC в крови и эндометрии, особенно в первом триместре. В период физиологической беременности PMN-MDSC накапливаются в плаценте, но при спонтанном аборте их количество уменьшается. Плацентарные PMN-MDSC эффективно подавляют Т-клеточный ответ, одновременно поляризуя CD4+-лимфоциты в фенотип Th2. Вероятно, PMN-MDSC играют важную роль в индуцировании и поддержании толерантности к антигенам плода, что позволяет рассматривать их как перспективную мишень терапевтического манипулирования при осложнениях беременности. В целом, мы впервые продемонстрировали влияние GdA на процесс дифференцировки MDSC.