mimmunМедицинская иммунологияMedical Immunology (Russia)1563-06252313-741XSPb RAACI10.15789/1563-0625-PPO-2403mimmun-2403Research ArticleКРАТКИЕ СООБЩЕНИЯSHORT COMMUNICATIONSФенотипический профиль NK-клеток периферической крови в условиях культивирования с клетками трофобласта и цитокинами IL-15 и IL-18Phenotypic Profile of Peripheral Blood NK Cells under Culturing with Trophoblast Cells and IL-15 and IL-18 Cytokineshttps://orcid.org/0000-0003-1328-8157МихайловаВ. А.MikhailovaV. A.

Валентина Анатольевна Михайлова – кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории межклеточных взаимодействий НИИАГР имени Д.О. Отта; ассистент кафедры иммунологии Первый Санкт-Петербургский ГМУ имени академика И.П. Павлова.

199034, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, 3. Тел.: 8 (812) 328-98-50

Valentina Anatolievna Mikhailova - PhD (Biology), Senior Research Associate, Laboratory of Intercellular Interactions, D. Ott RIOGR; Assistant Professor, Department of Immunology, First St. Petersburg State I. Pavlov MU.

St. Petersburg

 

mva_spb@mail.ruГребенкинаП. В.GrebenkinaP. V.

Полина Владимировна Гребенкина – лаборант-исследователь лаборатории межклеточных взаимодействий  НИИАГР имени Д.О. Отта.

Санкт-Петербург

Polina Vladimirovna Grebenkina - Laboratory Assistant, Laboratory of Intercellular Interactions.

St. Petersburg

grebenkinap@gmail.comТыщукЕ. В.TyshchukE. V.

Елизавета Владимировна Тыщук – лаборант-исследователь лаборатории межклеточных взаимодействий НИИАГР имени Д.О. Отта.

СанктПетербург

Elisaveta Vladimirovna Tyshchuk - Laboratory Assistant, Laboratory of Intercellular Interactions.

St. Petersburg

tyshhuk.elizaveta@gmail.comДавыдоваА. А.DavydovaA. A.

Елизавета Владимировна Тыщук – лаборант-исследователь лаборатории межклеточных взаимодействий НИИАГР имени Д.О. Отта.

СанктПетербург

Alina Alekseevna Davydova - Junior Research Associate, Laboratory of Intercellular Interactions.

St. Petersburg

alyadavydova@gmail.comЗагайноваВ. А.ZagaynovaV. A.

Валерия Алексеевна Загайнова – аспирант.

СанктПетербург

Valeriya Alekseevna Zagaynova - Postgraduate Student.

St. Petersburg

zagaynovav.al.52@mail.ruКоганИ. Ю.KoganI. Yu.

Игорь Юрьевич Коган – доктор медицинских наук, профессор, член-корр. РАН, директор.

Санкт-Петербург

Igor Yurevich Kogan - PhD, MD (Medicine), Professor, Corresponding Member, Russian Academy of Sciences, Director, D. Ott RIOGR.

St. Petersburg

iagmail@ott.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1560-7529СельковС. А.SelkovS. A.

Сергей Алексеевич Сельков – доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, заведующий отделом иммунологии и межклеточных взаимодействий НИИАГР имени Д.О. Отта; профессор кафедры иммунологии Первый Санкт-Петербургский ГМУ имени академика И.П. Павлова.

Санкт-Петербург

Sergey Alekseevich Selkov - PhD, MD (Medicine), Professor, Honoured Science Worker, Head, Department of Immunology and Intercellular Interactions, D. Ott RIOGR; Professor, Department of Immunology, First St. Petersburg State I. Pavlov MU.

St. Petersburg

selkovsa@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5749-2531СоколовД. И.SokolovD. I.

Дмитрий Игоревич Соколов – доктор биологических наук, доцент, заведующий лабораторией межклеточных взаимодействий НИИАГР имени Д.О. Отта; доцент кафедры иммунологии Первый Санкт-Петербургский ГМУ имени академика И.П. Павлова.

Санкт-Петербург

Dmitry Igorevich Sokolov - PhD, MD (Biology), Associate Professor, Head, Laboratory of Intercellular Interactions, D. Ott RIOGR; Associate Professor, Department of Immunology, First St. Petersburg State I. Pavlov MU.

St. Petersburg

falcojugger@yandex.ruФГБНУ Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта; ФГБОУ ВО Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения РФРоссияD. Ott Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology; First St. Petersburg State I. Pavlov Medical UniversityRussian FederationФГБНУ Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. ОттаРоссияD. Ott Research Institute of Obstetrics, Gynecology and ReproductologyRussian Federation20212112202123613831388Copyright © Михайлова В.А., Гребенкина П.В., Тыщук Е.В., Давыдова А.А., Загайнова В.А., Коган И.Ю., Сельков С.А., Соколов Д.И., 20212021Михайлова В.А., Гребенкина П.В., Тыщук Е.В., Давыдова А.А., Загайнова В.А., Коган И.Ю., Сельков С.А., Соколов Д.И.Mikhailova V.A., Grebenkina P.V., Tyshchuk E.V., Davydova A.A., Zagaynova V.A., Kogan I.Y., Selkov S.A., Sokolov D.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.mimmun.ru/mimmun/article/view/2403

Естественные киллеры (NK-клетки) являются лимфоцитами врожденного иммунитета. Дифференцировка NK-клеток находится под контролем клеток микроокружения и продуцируемых ими цитокинов, в том числе IL-2, IL-15 и IL-18. NK-клетки представлены в различных тканях, где они формируют пулы тканерезидентных естественных киллеров, одним из таких пулов являются NK-клетки децидуальной оболочки. Предполагаемым источником клеток для дифференцировки NK-клеток децидуальной оболочки являются NK-клетки периферической крови (pNK). В матке NK-клетки контактируют с клетками трофобласта, что может влиять на их фенотип. Вклад клеток трофобласта и цитокинов IL-2, IL-15 и IL-18 в регуляцию фенотипа pNK-клеток недостаточно изучен. В связи с этим целью работы была оценка влияния клеток трофобласта на фенотип pNK-клеток в условиях культивирования в среде с IL-2, IL-15, IL-18. В работе использовали мононуклеары, полученные из периферической крови здоровых небеременных женщин репродуктивного возраста, с регулярным менструальным циклом (n = 21). Мононуклеары культивировали в присутствии IL-2 и одного из цитокинов, регулирующих дифференцировку NK-клеток – IL-15 или IL-18. В качестве клеток трофобласта использовали клетки линии JEG-3. Оценивали экспрессию pNK-клетками рецепторов CD45, CD3, CD56, CD14, KIR3DL1, KIR2DL3, KIR2DL4, KIR2DS4, NKp44, CD215, CD122, CD127, NKG2D, KIR2DL1, NKG2C. Установлено, для pNK-клеток, прокультивированных в присутствии клеток трофобласта линии Jeg-3, характерна более низкая интенсивность экспрессии рецептора CD56 по сравнению с pNK-клетками, прокультивированными без клеток трофобласта. Эти изменения выявлены в случае культивирования как в среде с IL-15, так и в среде с IL-18. Выявлено сниженное количество NKG2C+ pNK-клеток в присутствии клеток трофобласта линии Jeg-3 по сравнению с NK-клетками, прокультивированными без клеток трофобласта, при культивировании в среде c IL-15. Выявленные изменения экспрессии CD56 и NKG2C pNK-клетками в присутствии клеток трофобласта противоположны ранее установленным для NK-клеток линии NK-92. Вероятно, помимо клеток трофобласта, моноциты, присутствующие в составе мононуклеаров, под действием цитокинов, могут влиять на фенотип pNK-клеток в использованной модельной системе. Так как моноциты/макрофаги присутствуют в децидуальной оболочке, требуются дальнейшие исследования влияния цитокинов и клеток микроокружения, в том числе моноцитов, на pNK-клетки.

Natural killer cells (NK cells) are innate immunity lymphocytes. NK cell differentiation is controlled by the cellular microenvironment and locally produced cytokines, including IL-2, IL-15 and IL-18. NK cells are present in various tissues, forming pools of tissue-resident NK cells, e.g., decidual NK cell pool. Peripheral blood NK cells (pNK cells) are considered a supposed source of cells for decidual NK cell differentiation. In the uterus, NK cells contact with trophoblast cells, which can affect their phenotype. Contribution of trophoblast cells and IL-2, IL-15 and IL-18 cytokines to the pNK cell phenotype regulation is scarcely studied. In this regard, the aim of our research was to evaluate the effect of trophoblast cells on the phenotype of pNK cells when cultured in medium with IL-2, IL-15, and IL-18. We used mononuclear cells obtained from peripheral blood of healthy non-pregnant women at their reproductive age, with regular menstrual cycle (n = 21). Mononuclear cells were cultured in presence of IL-2, and either of cytokines regulating NK cell differentiation (IL-15, or IL-18). JEG-3 cells were used as trophoblast cells. We evaluated expression of CD45, CD3, CD56, CD14, KIR3DL1, KIR2DL3, KIR2DL4, KIR2DS4, NKp44, CD215, CD122, CD127, NKG2D, KIR2DL1, NKG2C receptors by pNK cells. It was found that pNK cells cultured in presence of trophoblast cells (JEG-3 cell line) were characterized by lower intensity of CD56 receptor expression, compared to pNK cells cultured without trophoblast cells. These changes were detected upon culturing both in medium supplied by IL-15, and with IL-18. A reduced number of NKG2C+ pNK cells was detected in presence of JEG-3 trophoblast cells, compared to NK cells cultured without trophoblast cells in medium with IL-15. The detected changes in the CD56 and NKG2C expression by pNK cells in presence of trophoblast cells proved to be opposite to those previously detected for NK cells derived from NK-92 cell line. Along with trophoblast cells, the monocytes isolated among mononuclear cells and being affected by cytokines, can apparently influence the phenotype of pNK cells in the model system used. Since monocytes/macrophages are present in decidua, further research is required to study the effect of cytokines and cellular microenvironment, including monocytes, on pNK cells.

 

NK-клеткипериферическая кровьтрофобластIL-15IL-18фенотипCD56NK cellsperipheral bloodtrophoblastIL-15IL-18phenotypeCD56РФФИ (грант № 20-015-00014), Государственная программа № АААА-А20-120041390033-4 , Государственная программа № AAAA-A19-119021290116-1Foundation for Basic Research Grant No. 20-015-00014 (receptor expression assessment), the government program No. АААА-А20-120041390033-4 (forming the group for trial), the government program No. AAAA-A19-119021290116-1 (cell culturing)ReferencesCarrada G., Caneda C., Salaiza N., Delgado J., Ruiz A., Sanchez B., Gutierrez-Kobeh L., Aguirre M., Becker I. Monocyte cytokine and costimulatory molecule expression in patients infected with Leishmania mexicana. Parasite Immunol., 2007, Vol. 29, no 3, pp. 117-226.Carrada G., Caneda C., Salaiza N., Delgado J., Ruiz A., Sanchez B., Gutierrez-Kobeh L., Aguirre M.,Becker I. Monocyte cytokine and costimulatory molecule expression in patients infected with Leishmania mexicana. Parasite Immunol, 2007, Vol.29, no 3, pp. 117-26. [10.1111/j.1365-3024.2006.00924.x] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17266739Dias-Melicio L.A., Fernandes R.K., Rodrigues D.R., Golim M.A., Soares A.M. Interleukin-18 increases TLR4 and mannose receptor expression and modulates cytokine production in human monocytes. Mediators Inflamm., 2015, Vol. 2015, 236839. doi: 10.1155/2015/236839.https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdfdirect/10.1111/j.1365-3024.2006.00924.x?download=true]el-Darawish Y., Li W., Yamanishi K., Pencheva M., Oka N., Yamanishi H., Matsuyama T., Tanaka Y., Minato N., Okamura H. Frontline science: IL-18 primes murine NK cells for proliferation by promoting protein synthesis, survival, and autophagy. J. Leukoc. Biol., 2018, Vol. 104, no. 2, pp. 253-264.Dias-Melicio L.A., Fernandes R.K., Rodrigues D.R., Golim M.A.,Soares A.M. Interleukin-18 increases TLR4 and mannose receptor expression and modulates cytokine production in human monocytes. Mediators Inflamm, 2015, Vol.2015, no, pp. 236839. [10.1155/2015/236839] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25873755]Gordon S.M., Nishiguchi M.A., Chase J.M., Mani S., Mainigi M.A.,Behrens E.M. IFNs Drive development of novel IL-15-responsive macrophages. J. Immunol., 2020, Vol. 205, no. 4, pp. 1113-1124.El-Darawish Y., Li W., Yamanishi K., Pencheva M., Oka N., Yamanishi H., Matsuyama T., Tanaka Y., Minato N.,Okamura H. Frontline Science: IL-18 primes murine NK cells for proliferation by promoting protein synthesis, survival, and autophagy. J Leukoc Biol, 2018, Vol.104, no 2, pp. 253-264. [10.1002/JLB.1HI1017-396RR] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29603367Jena M.K., Nayak N., Chen K., Nayak N.R. Role of macrophages in pregnancy and related complications. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz), 2019, Vol. 67, no. 5, pp. 295-309.https://jlb.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/JLB.1HI1017-396RR]Kobyzeva P.A., Streltsova M.A., Erokhina S.A., Kanevskiy L.M., Telford W.G., Sapozhnikov A.M., Kovalenko E.I. CD56(dim) CD57(-) NKG2C(+) NK cells retaining proliferative potential are possible precursors of CD57(+) NKG2C(+) memory-like NK cells. J. Leukoc. Biol., 2020, Vol. 108, no. 4, pp. 1379-1395.Gordon S.M., Nishiguchi M.A., Chase J.M., Mani S., Mainigi M.A.,Behrens E.M. IFNs Drive Development of Novel IL-15-Responsive Macrophages. J Immunol, 2020, Vol.205, no 4, pp. 1113-1124. [10.4049/jimmunol.2000184] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32690654Koka R., Burkett P.R., Chien M., Chai S., Chan F., Lodolce J.P., Boone D.L.,Ma A. Interleukin (IL)- 15R[alpha]-deficient natural killer cells survive in normal but not IL-15R[alpha]-deficient mice. J. Exp. Med., 2003, Vol. 197, no. 8, pp. 977-984.https://www.jimmunol.org/content/205/4/1113.long]Li J., Li Y., Zhou X., Wei L., Zhang J., Zhu S., Zhang H., Gao X., Sharifu L.M., Wang S., Xi L.,Feng L. Upregulation of IL-15 in the placenta alters trophoblasts behavior contributing to gestational diabetes mellitus. Cell Biosci., 2021, Vol. 11, no. 1, 33. doi: 10.1186/s13578-021-00533-4.Jena M.K., Nayak N., Chen K.,Nayak N.R. Role of Macrophages in Pregnancy and Related Complications. Arch Immunol Ther Exp (Warsz), 2019, Vol.67, no 5, pp. 295-309. [10.1007/s00005-019-00552-7] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31286151Liu M., Meng Y., Zhang L., Han Z.,Feng X. High-efficient generation of natural killer cells from peripheral blood with preferable cell vitality and enhanced cytotoxicity by combination of IL-2, IL-15 and IL-18. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2021, Vol. 534, pp. 149-156.https://link.springer.com/content/pdf/10.1007/s00005-019-00552-7.pdf]Mikhailova V., Khokhlova E., Grebenkina P., Salloum Z., Nikolaenkov I., Markova K., Davidova A., Selkov S.,Sokolov D. NK-92 cells change their phenotype and function when cocultured with IL-15, IL-18 and trophoblast cells. Immunobiology, 2021, Vol. 226, no. 5, 152125. doi: 10.1016/j.imbio.2021.152125.Kobyzeva P.A., Streltsova M.A., Erokhina S.A., Kanevskiy L.M., Telford W.G., Sapozhnikov A.M.,Kovalenko E.I. CD56(dim) CD57(-) NKG2C(+) NK cells retaining proliferative potential are possible precursors of CD57(+) NKG2C(+) memory-like NK cells. J Leukoc Biol, 2020, Vol.108, no 4, pp. 1379-1395. [10.1002/JLB.1MA0720-654RR] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32930385Mikhailova V.A., Kudryavtsev I.V., Serebryakova M.K., Milyutina Y.P., Demidova E.S., Panina A.N., Bazhenov D.O., Belikova M.E., Selkov S.A., Sokolov D.I. Trophoblast cell influence on peripheral blood natural killer cell proliferation and phenotype in non-pregnant women and women in early pregnancy. Immunobiology, 2020, Vol. 225, no. 3, 151910. doi: 10.1016/j.imbio.2020.151910.https://jlb.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/JLB.1MA0720-654RR]Romee R., Schneider S.E., Leong J.W., Chase J.M., Keppel C.R., Sullivan R.P., Cooper M.A., Fehniger T.A. Cytokine activation induces human memory-like NK cells. Blood, 2012, Vol. 120, no. 24, pp. 4751-4760.Koka R., Burkett P.R., Chien M., Chai S., Chan F., Lodolce J.P., Boone D.L.,Ma A. Interleukin (IL)-15R[alpha]-deficient natural killer cells survive in normal but not IL-15R[alpha]-deficient mice. J Exp Med, 2003, Vol.197, no 8, pp. 977-84. [10.1084/jem.20021836] [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12695489]Tokmadzic V.S., Tsuji Y., Bogovic T., Laskarin G., Cupurdija K., Strbo N., Koyama K., Okamura H., Podack E.R., Rukavina D. IL-18 is present at the maternal-fetal interface and enhances cytotoxic activity of decidual lymphocytes. Am. J. Reprod. Immunol., 2002, Vol. 48, no. 4, pp. 191-200.Li J., Li Y., Zhou X., Wei L., Zhang J., Zhu S., Zhang H., Gao X., Sharifu L.M., Wang S., Xi L.,Feng L. Upregulation of IL-15 in the placenta alters trophoblasts behavior contributing to gestational diabetes mellitus. Cell Biosci, 2021, Vol.11, no 1, pp. 33. [10.1186/s13578-021-00533-4] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/33557944]Tornroos H., Hagerstrand H., Lindqvist C. Culturing the human natural killer cell line NK-92 in Interleukin-2 and Interleukin-15 - implications for clinical trials. Anticancer Res., 2019, Vol. 39, no. 1, pp. 107-112.Liu M., Meng Y., Zhang L., Han Z.,Feng X. High-efficient generation of natural killer cells from peripheral blood with preferable cell vitality and enhanced cytotoxicity by combination of IL-2, IL-15 and IL-18. Biochem Biophys Res Commun, 2021, Vol.534, no, pp. 149-156. [10.1016/j.bbrc.2020.12.012] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/33309274]Wu Y., Tian Z.,Wei H. Developmental and functional control of natural killer cells by cytokines. Front. Immunol., 2017, Vol. 8, 930. doi: 10.3389/fimmu.2017.00930.Mikhailova V., Khokhlova E., Grebenkina P., Salloum Z., Nikolaenkov I., Markova K., Davidova A., Selkov S.,Sokolov D. NK-92 cells change their phenotype and function when cocultured with IL-15, IL-18 and trophoblast cells. Immunobiology, 2021, Vol.226, no 5, pp. 152125. [10.1016/j.imbio.2021.152125] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/34365089]Mikhailova V.A., Kudryavtsev I.V., Serebryakova M.K., Milyutina Y.P., Demidova E.S., Panina A.N., Bazhenov D.O., Belikova M.E., Selkov S.A.,Sokolov D.I. Trophoblast cell influence on peripheral blood natural killer cell proliferation and phenotype in non-pregnant women and women in early pregnancy. Immunobiology, 2020, Vol.225, no 3, pp. 151910. [10.1016/j.imbio.2020.151910] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32044150]Mikhailova V.A., Kudryavtsev I.V., Serebryakova M.K., Milyutina Y.P., Demidova E.S., Panina A.N., Bazhenov D.O., Belikova M.E., Selkov S.A.,Sokolov D.I. Trophoblast cell influence on peripheral blood natural killer cell proliferation and phenotype in non-pregnant women and women in early pregnancy. Immunobiology, 2020, Vol.225, no 3, pp. 151910. [10.1016/j.imbio.2020.151910] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32044150]Romee R., Schneider S.E., Leong J.W., Chase J.M., Keppel C.R., Sullivan R.P., Cooper M.A.,Fehniger T.A. Cytokine activation induces human memory-like NK cells. Blood, 2012, Vol.120, no 24, pp. 4751-60. [10.1182/blood-2012-04-419283] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22983442]Romee R., Schneider S.E., Leong J.W., Chase J.M., Keppel C.R., Sullivan R.P., Cooper M.A.,Fehniger T.A. Cytokine activation induces human memory-like NK cells. Blood, 2012, Vol.120, no 24, pp. 4751-60. [10.1182/blood-2012-04-419283] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22983442]Tokmadzic V.S., Tsuji Y., Bogovic T., Laskarin G., Cupurdija K., Strbo N., Koyama K., Okamura H., Podack E.R.,Rukavina D. IL-18 is present at the maternal-fetal interface and enhances cytotoxic activity of decidual lymphocytes. Am J Reprod Immunol, 2002, Vol.48, no 4, pp. 191-200. [10.1034/j.1600-0897.2002.01132.x] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12516629]Tokmadzic V.S., Tsuji Y., Bogovic T., Laskarin G., Cupurdija K., Strbo N., Koyama K., Okamura H., Podack E.R.,Rukavina D. IL-18 is present at the maternal-fetal interface and enhances cytotoxic activity of decidual lymphocytes. Am J Reprod Immunol, 2002, Vol.48, no 4, pp. 191-200. [10.1034/j.1600-0897.2002.01132.x] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12516629]Tornroos H., Hagerstrand H.,Lindqvist C. Culturing the Human Natural Killer Cell Line NK-92 in Interleukin-2 and Interleukin-15 - Implications for Clinical Trials. Anticancer Res, 2019, Vol.39, no 1, pp. 107-112. [10.21873/anticanres.13085] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30591446Tornroos H., Hagerstrand H.,Lindqvist C. Culturing the Human Natural Killer Cell Line NK-92 in Interleukin-2 and Interleukin-15 - Implications for Clinical Trials. Anticancer Res, 2019, Vol.39, no 1, pp. 107-112. [10.21873/anticanres.13085] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30591446https://ar.iiarjournals.org/content/anticanres/39/1/107.full.pdf]https://ar.iiarjournals.org/content/anticanres/39/1/107.full.pdf]Wu Y., Tian Z.,Wei H. Developmental and Functional Control of Natural Killer Cells by Cytokines. Front Immunol, 2017, Vol.8, no, pp. 930. [10.3389/fimmu.2017.00930] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28824650Wu Y., Tian Z.,Wei H. Developmental and Functional Control of Natural Killer Cells by Cytokines. Front Immunol, 2017, Vol.8, no, pp. 930. [10.3389/fimmu.2017.00930] [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28824650https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5543290/pdf/fimmu-08-00930.pdf]https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5543290/pdf/fimmu-08-00930.pdf]

The authors declare that there are no conflicts of interest present.