Бедина Светлана Александровна — кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник клинико-биохимической лаборатории.
400138, Волгоград, ул. им. Землячки, 76.
Тел.: 8 (8442) 78-90-95.
Svetlana A. Bedina - PhD (Medicine), Senior Research Associate, Department of Clinical Biochemistry, A. Zborovsky Institute of Clinical and Experimental Rheumatology.
400138, Volgograd, Zemlyachki str., 76.
Phone: 7 (8442) 78-90-95.
Мозговая Елена Эдуардовна — кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник клинико-биохимической лаборатории.
400138, Волгоград, ул. им. Землячки, 76.
Elena E. Mozgovaya - PhD (Medicine), Leading Research Associate, Department of Clinical Biochemistry, A. Zborovsky Institute of Clinical and Experimental Rheumatology.
400138, Volgograd, Zemlyachki str., 76.
Трофименко Андрей Степанович — кандидат медицинских наук, заведующий клинико-биохимической лабораторией.
400138, Волгоград, ул. им. Землячки, 76.
Andrey S. Trofimenko - PhD (Medicine), Head, Laboratory of Clinical Biochemistry, A. Zborovsky Institute of Clinical and Experimental Rheumatology
400138, Volgograd, Zemlyachki str., 76.
Спицина Светлана Сергеевна — младший научный сотрудник клинико-биохимической лаборатории.
400138, Волгоград, ул. им. Землячки, 76.
Svetlana S. Spitsyna - Junior Research Associate, Department of Clinical Biochemistry, A. Zborovsky Institute of Clinical and Experimental Rheumatology.
400138, Volgograd, Zemlyachki str., 76.
Мамус Мария Анатольевна — младший научный сотрудник клинико-биохимической лаборатории.
400138, Волгоград, ул. им. Землячки, 76.
Mariya A. Mamus - Junior Research Associate, Department of Clinical Biochemistry, A. Zborovsky Institute of Clinical and Experimental Rheumatology.
400138, Volgograd, Zemlyachki str., 76.
Учитывая значение, которое придается антицитруллиновым антителам (АЦЦП) в аутоиммунном ответе при ревматоидном артрите (РА), особый интерес представляет поиск субклеточных структур, которые включают наиболее типичные для РА антигены в одном компартменте и подвержены систематическому цитруллинированию. Наиболее вероятным кандидатом на роль таких структур можно рассматривать внеклеточные ловушки нейтрофилов (NET) и моноцитов (ЕТ). Цель — оценить способность нейтрофилов и моноцитов периферической крови к спонтанному и индуцированному образованию внеклеточных ловушек у больных РА. В исследование были включены 32 больных РА и 30 практически здоровых лиц, составивших референтную группу. Выделение нейтрофилов и моноцитов периферической крови производили с помощью одноэтапного центрифугирования в тройном ступенчатом градиенте фиколла-амидотризоата. Качественный состав лейкоцитарных фракций оценивали микроскопически, их жизнеспособность — с использованием трипанового синего, неспецифическую активацию клеток — по тесту с нитросиним тетразолием. Индукцию образования внеклеточных ловушек нейтрофилами in vitro выполняли с использованием форбол-12-миристат-13-ацетата, моноцитами — при помощи пирогенала. Оценку спонтанного и индуцированного образования внеклеточных ловушек производили методом люминесцентной микроскопии.
Полученные клеточные фракции содержали низкий процент примесей и высокую долю жизнеспособных клеток, находящихся в неактивированном состоянии. Обнаружено, что у больных РА средняя доля спонтанного образования NET и ET выше по сравнению с контрольной группой. При этом частота ловушкообразования для нейтрофилов больных РА, позитивных по АЦЦП, имела тенденцию к повышению по сравнению с образцами АЦЦП-негативных пациентов. Для моноцитов существенного различия между данными подгруппами не зафиксировано. Морфология внеклеточных ловушек при люминесцентной микроскопии нейтрофилов и моноцитов здоровых лиц и больных РА не демонстрировала существенных межиндивидуальных различий. Средняя доля индуцированного ловушкообразования при РА была значительно выше в сравнении с референтной группой. Уровень включения миелопероксидазы в ЕТ был существенно ниже по сравнению с NET. Полученные нами данные дают основание рассматривать NET как возможный источник цитруллинированных аутоантигенов, участвующих в продукции аутоантител и стимуляции воспалительных аутоиммунных реакции при РА. В то же время роль ЕТ в этом процессе выражена в меньшей степени.
Detection of subcellular structures containing typical citrullinated rheumatoid autoantigens in a single compartment presents a special interest, due to importance of anticitrulline autoantibodies for the autoimmune response in RA. Neutrophil and monocyte extracellular traps (NETs and ETs, respectively) may be considered such candidate structures. Our objective was to assess ability of blood neutrophils and monocytes from RA patients to generate NETs and ETs spontaneously and after in vitro induction.
32 patients with verified RA and 30 healthy volunteers as controls were included into the study. Circulating neutrophils and monocytes were isolated with one-step density gradient centrifugation using three layers of ficoll-amidotrizoate gradient. Composition of isolated cellular fractions, their viability, and non-specific activation were evaluated microscopically using Trypan Blue exclusion test, as well as Nitro-Blue Tetrazolium test. The NETs were induced by phorbol-12-myristate-13-acetate, and ETs by bacterial LPS. Spontaneous and induced formation of extracellular traps was assessed using fluorescence microscopy. Neutrophil and monocyte fractions contained minute percentages of impurities and low extents of activated and dead cells. Spontaneous NET and ET formation in RA patients was significantly increased comparing to healthy controls. Neutrophils from ACPA-positive RA patients were found to have higher frequency of NET formation, compared to ACPA-negative RA patients. The monocytes did not demonstrate such differences between these subgroups. There were no substantial morphological differences in NETs and ETs patterns between the individuals from both groups. Induced extracellular trap production in RA was significantly higher compared to healthy controls. The level of myeloperoxidase-specific fluorescence in ETs was considerably lower than in NETs. NETs could probably be considered as a source of citrulline autoantigen participating in autoantibody production and stimulation of inflammatory autoimmune responses in RA, whereas ETs may play less important role in this process.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.