Железко Вероника Владимировна – ассистент кафедры клинической лабораторной диагностики, аллергологии и иммунологии
246000, г. Гомель, ул. Ланге, 5
Zhelezko Veronika V., Assistant Professor, Department of Clinical Laboratory Diagnostics, Allergology and Immunology
246000, Gomel, Lange str., 5
Доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой клинической лабораторной диагностики, аллергологии и иммунологии
246000, г. Гомель, ул. Ланге, 5
PhD, MD (Medicine), Professor, Head, Department of Clinical Laboratory Diagnostics, Allergology and Immunology
246000, Gomel, Lange str., 5
Произведена оценка параметров нетоза в комплексе с другими проявлениями функциональной активности нейтрофилов крови у 34 пациентов с системной красной волчанкой (СКВ). Оценивали образование нейтрофильных внеклеточных ловушек (neutrophil extracellular traps, NETs) в культурах клеток, инкубированных в течение 30 и 150 минут в среде (спонтанный уровень; NETСП30 и NETСП150 соответственно) и в присутствии инактивированного нагреванием S. аureus (штамм ATCC 25923, количество микробных тел – 108 КОЕ/мл) (стимулированный уровень; NETСТ30 и NETСТ150 соответственно). При этом за нейтрофильные внеклеточные ловушки принимали тонкие свободнолежащие внеклеточно расположенные фибриллярные структуры, в 2-3 раза превосходящие размер неизмененного гранулоцита. Результат выражали в процентах, как относительное количество внеклеточных ловушек на 100 сосчитанных лейкоцитов. Поглотительную активность нейтрофильных гранулоцитов оценивали в реакции фагоцитоза S. аureus с подсчетом процента нейтрофилов, поглотивших микробные частицы – фагоцитарный индекс (ФИ); среднего числа фагоцитированных объектов на один нейтрофил – фагоцитарное число (ФЧ). АФК-продуцирующую активность определяли в реакции восстановления нитросинего тетразолия в спонтанном и стимулированном S. aureus вариантах (НСТСП и НСТСТ соответственно), результат выражали как процент содержания формазан-положительных клеток на 100 сосчитанных лейкоцитов. Нитроксид-продуцирующие свойства определяли по методу Crow (1999) в спонтанных и стимулированных пробах по накоплению нитрированной аминокислоты тирозина (3-нитротирозина, 3-NТСП и 3-NТСТ соответственно). Выявлены более низкие показатели АФК-продуцирующей, поглотительный и NO-образующей активности нейтрофилов на фоне повышенной способности к нетозу у пациентов с СКВ по сравнению со здоровыми лицами (р < 0,05). Активация нетоза отмечена в культурах клеток без стимуляции, что указывает на образование сетей in vivo при СКВ. Уровень NETs максимально выражен при наличии у пациентов люпус-нефрита (р < 0,05) и в период ремиссии заболевания (р < 0,05). Установлена зависимость параметров NET-образования от длительности и степени активности СКВ (rs = -0,6; р = 0,001 и rs = 0,39; p = 0,02 соответственно); титра аутоантител (anti-dsDNA и ANA; rs = 0,67 ; р = 0,047 и rs = 0,59; р = 0,034 соответственно), активности протромбинового комплекса (rs = 0,6; р = 0,036) и уровней мочевины и креатинина (rs = 0,47; р = 0,037 и rs = 0,39; р = 0,048 соответственно). Полученные данные свидетельствуют о том, что параметры NET-образования можно рассматривать как перспективный биомаркер для верификации диагноза СКВ, оценки клинической активности, тяжести заболевания и прогноза развития осложнений.
The article presents the data on assessment of functional features of neutrophils in 34 patients with systemic lupus erythematosus (SLE). Development of neutrophil extracellular traps (NETs) was evaluated in cell cultures incubated in vitro for 30 and 150 minutes (basal levels, NETBAS30 and NETBAS150, respectively), and in the presence of heat-inactivated S. аureus (strain ATCC 25923, 108 CFU/ml) (stimulated levels, NETST30 and NETST150, respectively). NET looks like thin free-lying extracellular fibrillar structures, 2-3 times exceeding the size of unchanged granulocyte. The result was expressed as percentage and relative amount of extracellular traps per 100 counted leukocytes. Phagocytic activity of neutrophils was evaluated as phagocytosis of S. аureus by counting the percentage of neutrophils that engulfed phagocytic index of microbial particles (PI); the average number of phagocytosed objects per neutrophil phagocytic number (PC). ROS-producing activity was determined in the reduction of Nitroblue Tetrazolium tested in spontaneous and stimulated S. аureus variants (NBTBAS and NBTST, respectively). The result was expressed as the percentage of formazan-positive cells per 100 white blood cells. Nitroxide-producing properties were determined using the Crow (1999) method in spontaneous and stimulated samples for the accumulation of the nitrated amino acid tyrosine (3-nitrothyrosine, 3-NTBAS, and 3-NTST, respectively). We revealed a decrease in ROS production, phagocytosis and NO-forming activity of neutrophils associated with increased netosis. Activation of the netosis was observed in cell cultures without stimulation, indicating the in vivo formation of networks in SLE. The NET increase is most pronounced in the patients with lupus nephritis (p < 0.05), and in remission of the disease (p < 0.05). We have revealed a correlation of NET formation parameters with duration and degree of SLE activity (rs = -0.6; p = 0.001, and rs = 0.39; p = 0.02, respectively); autoantibody titers (anti-dsDNA and ANA) (rs = 0.67; р = 0.047 and rs = 0.59; р = 0.034, respectively); prothrombin complex activity (rs = 0.6; p = 0.036), as well and urea and creatinine levels (rs = 0.47; p = 0.037 and rs = 0.39; p = 0.048, respectively). The parameters of NETs can be considered a promising biomarker for verifying the diagnosis of SLE, evaluation of clinical activity, disease severity, and predicting the development of complications.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.