биолог сектора иммунологии и патоморфологии особо опасных инфекций лаборатории бруцеллеза
г. Ставрополь
Biologist, Sector of Immunology and Pathomorphology of Highly Dangerous Infections
Stavropol
к.м.н., врач клинической лаборатоной диагностики сектора иммунологии и патоморфологии особо опасных инфекций лаборатории бруцеллеза
г. Ставрополь
PhD (Medicine), Doctor for Clinical Laboratory Diagnostics, Sector of Immunology and Pathomorphology of Highly Dangerous Infections
Stavropol
к.б.н., заведующий лабораторией бруцеллеза
355035, г. Ставрополь, ул. Советская, 13-15.Тел.: 8 (8652) 26-03-37. Тел./факс: 8 (8652) 26-03-12.
PhD (Biology), Head, Laboratory of Brucellosis
355035, Stavropol, Sovetskaya str., 13-15.Phone: 7 (8652) 26-03-37. Phone/Fax: 7 (8652) 26-03-12.
к.б.н., заведующая сектором иммунологии и патоморфологии особо опасных инфекций лаборатории бруцеллеза
г. Ставрополь
PhD (Biology), Head, Sector of Immunology and Pathomorphology of Highly Dangerous Infections
Stavropol
к.б.н., заведующая научно-производственной лабораторией препаратов для диагностики особо опасных и других инфекций
г. Ставрополь
PhD (Biology), Head, Research and Production Laboratory of Diagnostic Preparations for Highly Dangerous and other infections
Stavropol
биолог лаборатории бруцеллеза
г. Ставрополь
Biologist, Brucellosis Laboratory
Stavropol
к.м.н., врач-бактериолог лаборатории бруцеллеза
г. Ставрополь
PhD (Medicine), Bacteriologist, Brucellosis Laboratory
Stavropol
д.м.н., профессор, член-корр. РАН, директор
г. Ставрополь
PhD, MD (Medicine), Professor, Corresponding Member, Russian Academy of Sciences, Director
Stavropol
Нормативно-методическая база, регламентирующая проведение оценки иммунологической эффективности вакцинации против бруцеллеза и выраженности иммунологической поствакцинальной перестройки не разработана. Учитывая ведущую роль клеточного иммунитета в формировании иммунологической защиты от бруцеллеза, оценку клеточной реакции в ответ на антигенную стимуляцию можно считать наиболее информативным и объективным подходом для анализа иммунологической перестройки организма при вакцинации. Для разработки наиболее диагностически информативных методик постановки антиген-стимулированных клеточных тестов in vitro необходим тщательный подбор стимулирующего агента (антигена), обладающего достаточным активирующим потенциалом и обеспечивающим специфичность реакции в условиях in vitro. Цель исследования – изучить в условиях in vitro специфическую активность белково-полисахаридного антигенного комплекса из штамма Brucella abortus 19 BA (БрАг) и возможность его применения для оценки формирования поствакцинального клеточного иммунитета против бруцеллеза.
Объект исследования – белые лабораторные мыши (n = 50), иммунизированные штаммом Brucella abortus 19 BA. Контрольную группу (n = 50) составили лабораторные мыши, которым введен стерильный физиологический раствор в объеме 0,5 мл. Взятие крови у иммунизированных и контрольных биомоделей осуществляли до вакцинации и на 7, 14, 21 и 30 сутки после иммунизации. При цитометрическом исследовании определяли активационные молекулы CD25, CD69, MHC II и CD95, экспрессированные на Т-лимфоцитах (CD3+CD69+, CD3+CD25+, CD3+CD95+, CD3+MHC+). Для оценки формирования иммунитета уровень интенсивности экспрессии маркеров активации Т-лимфоцитов рассчитывали с использованием коэффициента стимуляции. Для специфической стимуляции Т-лимфоцитов in vitro применяли БрАг. В качестве антигена для сравнения при изучении возможности применения БрАг для оценки формирования поствакцинального иммунитета использовали аллерген бруцеллезный жидкий – бруцеллин.
Анализ результатов исследования показал, что БрАг обладает выраженной специфической активностью, не вызывает неспецифических реакций (активации) Т-лимфоцитов в условиях in vitro, что дает возможность использования его в качестве тест-антигена при постановке реакции антигенспецифической активации Т-лимфоцитов для оценки формирования адаптивного вакцинального иммунитета против бруцелл.
Анализ применения экспериментального бруцеллезного антигена, для постановки антигенстимулированных клеточных реакций in vitro, с целью оценки формирования поствакцинального иммунитета против бруцеллеза показал, что использование БрАг способствует повышению диагностической чувствительности (в эксперименте) клеточных реакций in vitro. Полученный экспериментальный антиген имеет реальную перспективу применения при разработке алгоритмов лабораторной диагностики бруцеллеза и оценки фактической привитости контингентов риска после вакцинации против бруцеллеза.
Regulatory framework and methodological approaches to evaluation of immunological effects of vaccination against brucellosis are not established, and the degree of immunological post-vaccinal rearrangement is not yet developed. Due to leading role of cellular immunity in formation of immune protection against brucellosis, evaluation the cellular response in response to antigenic stimulation may be considered the most informative and objective approach to analysis of immune changes in the body during vaccination. In order to develop the most diagnostically informative methods for design of antigen-stimulation cell tests in vitro, a careful selection of a stimulating agent (antigen) is required, which should have a sufficient activating potential, thus providing specificity of reaction under in vitro conditions. The aim of the present study is to study the in vitro specific activity of a protein-polysaccharide antigenic complex from the Brucella abortus 19 BA strain (BrAg), and an opportunity of its application in order to assess the formation of post-vaccinal cellular immunity against brucellosis.
The study was performed with white laboratory mice (n = 50) immunized with the Brucella abortus 19 BA strain. The control group (n = 50) consisted of laboratory mice that received a sterile saline solution in a volume of 0.5 ml. Blood samples were taken from immunized and control animals before vaccination, and 7, 14, 21, and 30 days after immunization. By means of flow cytometry, the activation molecules CD25, CD69, MHC II and CD95, expressed on T lymphocytes (CD3+CD69+, CD3+CD25+, CD3+CD95+, CD3+MHC+) were determined. To observe the development of immunity, the intensity of expression of T lymphocyte activation markers was calculated using the stimulation quotient. BrAg was used for specific in vitro stimulation of T lymphocytes. The liquid brucellosis allergen (brucellin) was used as an antigen for comparison, when studying opportunity of BrAg usage for assessing the postvaccinal immunity development.
The following results were obtained: BrAg has pronounced specific activity, it did not cause non-specific in vitro reactions (activation) of T lymphocytes, thus enabling its application as a test antigen when evaluating development of adaptive vaccine immunity against brucella.
Experimental testing of brucellosis antigen for carrying out the in vitro antigen-stimulated cellular reactions, aiming for evaluation of post-vaccinal immunity development against brucellosis, showed that the usage of BrAg promotes increase in diagnostic sensitivity of cellular reactions under in vitro experimental conditions. The applied experimental antigen is a quite promising tool for development of laboratory algorithms for brucellosis diagnostics, and assessment of actual vaccination efficiency in cohorts previously vaccinated against brucellosis.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.