к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории молекулярной онкологии
344037, г. Ростов-на-Дону, 14 линия, 63, корп. 8.Тел.: 8 (863) 300-02-00 (доб. 472).
PhD (Biology), Senior Research Associate, Laboratory of Molecular Oncology
344037, Rostov-on-Don, 14 Line, 63, bldg 8.Phone: 7 (863) 300-02-00 (add. 472).
аспирант
г. Ростов-на-Дону
Postgraduate Student
Rostov-on-Don
Раково-тестикулярные антигены (РТА) могут использоваться в качестве мишени при иммунотерапии злокачественных опухолей различных локализаций, в том числе рака шейки матки. Однако иммунотерапия часто применяется в комплексе с химиотерапией антрациклиновыми антибиотиками, в частности доксорубицином (DXR), эффекты которого на экспрессию генов РТА не изучены. Поэтому целью исследования стало изучение влияния разных концентраций доксорубицина и времени экспозиции на транскрипционный профиль 16 раково-тестикулярных (РТ) генов клеток HeLa ССL-2. В работе использовали культуру клеток человека – рак шейки матки линии HeLa CCL- 2. Культивирование клеток HeLa CCL-2 проводилось в стерильных культуральных флаконах с адгезионной поверхностью и вентилируемыми крышками в условиях 5% CO2 и 95% влажности при 37 °C в среде RPMI-1640 c 10% фетальной телячьей сывороткой при концентрации гентамицина 50 мкг/мл и различными концентрациями доксорубицина: 0 мкг/мл (контроль), 2 мкг/мл и 4 мкг/мл. Определение уровня экспрессии 16 РТ-генов проводили методом количественной RT-PCR на термоциклере Bio-Rad CFX96. Нормализацию проводили по референсному гену и экспрессии соответствующих генов в образцах контроля. Установлено, что существенное влияние на экспрессию генов MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, MAGEB1, MAGEB2, GAGE1, GAGE3, BAGE, XAGE3, NY-ESO1, PRAME1 и SYCP1 оказывает время культивирования и концентрация DXR, при этом на экспрессию SSX2, MAGEA2, GAGE4 и MAGEC1 эти факторы существенного влияния не оказывают, а концентрация DXR, отдельно взятая, не влияет на экспрессию MAGEB1 и MAGEB2. Полученные данные по скорости ответа на воздействие DXR позволили выделить ранние РТ-гены (повышающие экспрессию – MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, NY-ESO1, SYCP1, и снижающие экспрессию – GAGE1 и BAGE) и поздние РТ-гены (повышающие экспрессию – GAGE3 и XAGE3). Эти результаты необходимо учитывать при проведении иммунотерапии, основанной на технологии дендритно-клеточных вакцин.
Cancer-testis antigens (CTA) can be used as a target for immunotherapy of various malignant tumors, including cervical cancer. However, immunotherapy is often used in combination with anthracycline chemotherapy, in particular, doxorubicin (DXR). Their effects upon expression of CTA genes have not been yet studied. Therefore, we studied the effects of doxorubicin at different concentrations and exposure time upon transcriptional profile of 17 cancer-testicular (CT) genes of HeLa CCL-2 cells. A long-term line of human cervical cancer cells (HeLa CCL-2 line) was used in this work. Culturing of HeLa CCL-2 cells was carried out in sterile culture flasks with adhesive surface and ventilated lids at 5% CO2, and 95% humidity at 37 °C, in RPMI-1640 medium with 10% fetal bovine serum, supplied with gentamicin (50 μg/ml), and different concentrations of doxorubicin: 0 μg/ml (control), 2 μg/ml, and 4 μg/ml. Expression levels of 16 RT-genes were determined by quantitative RT-PCR using a Bio-Rad CFX96 thermal cycler. Normalization of results was performed against a reference gene, and expression of tested genes in the control samples. We have found that the time of in vitroexposure, and concentration of doxorubicin exert a significant influence upon expression of MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, MAGEB1, MAGEB2, GAGE1, GAGE3, BAGE, CTAG1B, XAGE3, NY-ESO1, PRAME1 and SYCP1 genes, however, without affecting the SSX2, MAGEA2, GAGE4 and MAGEC1 expression, and DXR concentration as a single factor did not affect MAGEB1 and MAGEB2 expression. Time of response to DXR effects enabled us to discern early cancer testicular genes with increased expression (MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, NY-ESO1, SYCP1), reduced expression (GAGE1 and BAGE), and late inducible testicular genes (GAGE3 and XAGE3). These results must be taken into account when carrying out immunotherapy based on the dendritic-cell vaccine technology.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.