mimmunМедицинская иммунологияMedical Immunology (Russia)1563-06252313-741XSPb RAACI10.15789/1563-0625-2019-4-765-772mimmun-1677Research ArticleКРАТКИЕ СООБЩЕНИЯSHORT COMMUNICATIONSСУБПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ УВЕАЛЬНОЙ МЕЛАНОМЕSUBPOPULATION COMPOSITION OF PERIPHERAL BLOOD LYMPHOCYTES IN UVEAL MELANOMAСаакянС. В.SaakyanSvetlana Vladimirovna

д.м.н., проф., начальник отдела офтальмоонкологии и радиологии

105062, Россия, Москва, ул. Садовая-Черногрязская, 14/19

MD, Professor (Medicine), Head of the department of ophthalmooncology and radiology

svsaakyan@yandex.ruБалацкаяН. В.BalatskayaNatalya Vladimirovna

к.б.н., ведущий научный сотрудник, начальник отдела иммунологии и вирусологии

105062, Россия, Москва, ул. Садовая-Черногрязская, 14/19

PhD (Biology), Leading Research Associate, Department of Immunology and Virology, Head of the Department of Immunology and Virology

balnat07@rambler.ruКатаргинаЛ. А.KatarginaLudmila Anatolievna

Doctor of Medical Sciences, Professor (Medicine), Head of the Children's Eye Pathology Department, Deputy Director for Research

myakoshina@mail.ruКуликоваИ. Г.KulikovaIrina Gennadievna

старший научный сотрудник отдела иммунологии и вирусологии

105062, Россия, Москва, ул. Садовая-Черногрязская, 14/19

Senior Research Associate, Department of Immunology and Virology

ig-kulikova@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2087-7155МякошинаЕ. Б.MyakoshinaElena Borisovna

к.м.н., научный сотрудник отдела офтальмоонкологии и радиологии

105062, Россия, Москва, ул. Садовая-Черногрязская, 14/19

Тел.: 8 (916) 196-90-30

PhD (Medicine), Research Associate, Department of Ophthalmology and Radiology

myakoshina@mail.ruФГБУ «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФРоссияMoscow Helmholtz Research Institute of Eye DiseasesRussian FederationФГБУ «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФРоссияMoscow Helmholtz Research Institute of Eye Diseases, MoscowRussian Federation201911032019214препринт765772Copyright © Саакян С.В., Балацкая Н.В., Катаргина Л.А., Куликова И.Г., Мякошина Е.Б., 20192019Саакян С.В., Балацкая Н.В., Катаргина Л.А., Куликова И.Г., Мякошина Е.Б.Saakyan S.V., Balatskaya N.V., Katargina L.A., Kulikova I.G., Myakoshina E.B.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.mimmun.ru/mimmun/article/view/1677

Увеальная меланома – злокачественная опухоль нейроэктодермального происхождения. Несмотря на радикальное первичное лечение с применением энуклеации глаза или лучевой терапии, у почти 50% пациентов развивается метастатическая болезнь. Эффективность различных методов лечения злокачественных новообразований, прогноз заболевания в значительной степени зависят от состояния иммунной системы пациента. Данные о соотношении лимфоцитов разных популяций, их взаимосвязи со стадиями увеальной меланомы в настоящее время отсутствуют. Обследовано 84 пациента с увеальной меланомой (44 женщины и 40 мужчин; средний возраст 53,7 ± 12,2 года). В 1 группу (малые опухоли) вошли 36 больных, во 2-ю (опухоли среднего размера) - 26 пациентов, 22 пациента составили 3 группу (большие опухоли). В группу контроля вошли 33 практически здоровых донора. Материалом исследования служили пробы цельной крови, взятой из локтевой вены натощак в утренние часы при помощи вакуумных систем в пробирки Vaсuette® c антикоагулянтом К3EDTA. Иммунофенотипирование проводили методом проточной лазерной цитофлуориметрии с использованием системы моноклональных антител Multitest 6-Color TBNK Reagent в пробирках BD TruСount (Becton Dickinson, CША), цитометре BD FACSCanto II (Becton Dickinson, CША). Лизис эритроцитов и фиксацию лейкоцитов производили с помощью лизирующего раствора BD FACS TM Lysing Solution (Becton Dickinson, CША). Относительное и абсолютное содержание популяций и субпопуляций лимфоцитов определяли в программе Canto (Becton Dickinson, CША), с выделением анализируемого региона по общей популяции, экспрессирующей CD45+ антиген и по гранулярности клеток (CD45+PerCP-Cy5,5*/SSC); использовались меченые флуорохромами антитела к СD3+(FITC), CD4+(PE-Cy7*), CD8+ (APC-CY7*), CD16+/56+(PE), CD19+(APC*), позволяющие дифференцировать: Т-лимфоциты (CD3+), Т-хелперы (CD3+CD4+CD8-), T-цитотоксические (СD3+CD4-CD8+), T-дубль позитивные (СD3+CD4+CD8+), NK-клетки (CD16+СD56+), В-лимфоциты (CD19+), вычислить соотношение субпопуляцийСD3+CD4+/СD3+CD8+ - индекс, отражающий баланс T-хелперов и цитотоксических Т-клеток (СD4+/ СD8+). Проведенный нами индивидуальный анализ состава лимфоцитов позволяет заключить, что рост увеальной меланомы сопровождается системными разнонаправленными сдвигами в качественном и количественном составе иммунокомпетентных клеток, затрагивая как врожденное (NK клетки), так и адаптивное (Т-лимфоциты) звенья противоопухолевой иммунной защиты. Полученные результаты представляются важными для разработки персонифицированных подходов к прогнозу и лечению пациентов с увеальной меланомой. Динамика изменения количественного состава субпопуляций лимфоцитов при онкологических заболеваниях может представлять ценность для мониторинга иммунотерапевтических воздействий и дополнить клиническую оценку течения основного заболевания.

Uveal melanoma is a malignant neuroectodermal tumor. Despite of radical primary treatment with the use of enucleation of the eye or radiation therapy, almost in 50% of patients develop metastatic disease. The effectiveness of various methods of treatment of malignant tumors, the prognosis of the disease largely depend on the state of the patient's immune system. Data on the ratio of lymphocytes of different populations, their relationship with the stages of uveal melanoma are currently not available. 84 patients with uveal melanoma were examined (44 women and 40 men; mean age 53.7 ± 12.2 years). In group 1 (small tumors) included 36 patients, in the 2nd (medium-sized tumors) - 26 patients, 22 patients made up the 3rd group (large tumors). The control group included 33 practically healthy donors. The material of the study was samples of whole blood taken from the ulnar vein on an empty stomach in the morning with the help of vacuum systems in test tubes Vacuette® with anticoagulant K3EDTA. Immunophenotyping was performed using flow laser cytofluorimetry using the Multitest 6-Color TBNK Reagent monoclonal antibody system in BD TruСount test tubes (Becton Dickinson, USA), BD FACSCanto II cytometer (Becton Dickinson, USA). Erythrocyte lysis and leukocyte fixation were performed using a BD FACS ™ Lysing Solution lysing solution (Becton Dickinson, USA). The relative and absolute levels of lymphocyte populations and subpopulations were determined in the Canto program (Becton Dickinson, USA), with the selection of the analyzed region in the general population expressing CD45 + antigen and cell granularity (CD45 + PerCP-Cy5,5 * / SSC); fluorochromes labeled antibodies to CD3 + (FITC), CD4 + (PE-Cy7 *), CD8 + (APC-CY7 *), CD16 + / 56 + (PE), CD19 + (APC *) were used to differentiate: T-lymphocytes (CD3 +), T-helper cells (CD3 + CD4 + CD8-), T-cytotoxic (CD3 + CD4-CD8 +), T-double positive (CD3 + CD4 + CD8 +), NK-cells (CD16 + CD56 +), B-lymphocytes (CD19 +) , calculate the ratio of CD3 + CD4 + / CD3 + CD8 + subpopulations - the index reflecting the balance of T-helper cells and cytotoxic T-cells (CD4 + / CD8 +). Our individual analysis of the composition of lymphocytes allows us to conclude that the growth of uveal melanoma is accompanied by systemic multidirectional changes in the qualitative and quantitative composition of immunocompetent cells, affecting both innate (NK cells) and adaptive (T-lymphocytes) links of antitumor immune defense. The results are important for the development of personalized approaches to the prognosis and treatment of patients with uveal melanoma. The dynamics of changes in the quantitative composition of lymphocyte subpopulations in oncological diseases may be of value for monitoring immunotherapeutic effects and supplement the clinical assessment of the course of the underlying disease.

 

 

 

 

 

 

субпопуляция лимфоцитов периферической кровиувеальная меланомаsubpopulation of peripheral blood lymphocytesuveal melanomaReferencesАбакушина Е.В., Кузьмина Е.Г., Коваленко Е.И. Основные свойства и функции NK-клеток человека // Иммунология, 2012. Т. 33, № 4. С. 220-224.Abakushina E.V., Kuzmina E.G., Kovalenko E.I. The main characteristics of human natural killers cells. Immunologiya = Immunology, 2012, Vol. 33, no. 4, pp. 220-224. (In Russ.)Балацкая Н.В., Еремеева Е.А., Слепова О.С., Рябина М.В., Куликова И.Г., Сорожкина Е.С. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у пациентов с возрастной макулярной дегенерацией // Медицинская иммунология, 2015. Т. 17, № 5. С. 461-466. doi: 10.15789/1563-0625-2015-5-461-466.Balatskaya N.V., Eremeeva E.A., Slepova O.S., Ryabina M.V., Kulikova I.G., Sorozhkina E.S., Peripheral blood subpopulation of lymphocytes of patients with agerelated macular degeneration. Meditsinskaya Immunologiya = Medical Immunology (Russia), 2015, Vol. 17, no. 5, pp. 461-466. (In Russ.) doi: 10.15789/1563-0625-2015-5-461-466.Бровкина А.Ф. Офтальмоонкология. М.: Медицина, 2002. 421 с.Brovkina A.F. Ophthalmooncology. Moscow: Medicine, 2002. 421 p.Мякошина Е.Б. Комплексная диагностика начальной меланомы хориоидеи. Russian Electronic Journal of Radiology, 2016. Т. 6, № 4. С. 19-28.Myakoshina E.B. Complex diagnostics of early choroidal melanoma. Russian Electronic Journal of Radiology, 2016, Vol. 6, no. 4, pp. 19-28. (In Russ.)Кадагидзе З.Г., Черткова А.И., Заботина Т.Н., Короткова О.В., Славина Е.Г., Борунова А.А. Новые возможности регуляции противоопухолевого иммунного ответа // Злокачественные опухоли, 2015. Т. 1. С. 24- 30.Kadagidze Z.G., Chertkova A.I., Zabotina T.N., Korotkova O.V., Slavina E.G., Borunova A.A. New regulation of antitumor immune response. Zlokachestvennye opukholi = Malignant Tumours, 2015, Vol. 1, pp. 24-30. (In Russ.)Саакян С.В., Катаргина Л.А., Кричевская Г.И., Мякошина Е.Б., Денисова Е.В. Специфические иммуноглобулины G и М в сыворотке крови при ретинобластоме и «псевдоретинобластомах» // Вестник офтальмологии, 2017. Т. 133, № 4. С. 12-16.Saakyan S.V., Katargina L.A., Krichevskaya G.I., Myakoshina E.B., Denisova E.V. Specific immunoglobulins G and M in blood serum in retinoblastoma and “pseudoretinoblastoma”. Vestnik oftalmologii = Bulletin of Ophthalmologу, 2017, Vol. 133, no. 4, pp. 12-16. (In Russ.)Лихванцева В.Г., Бровкина А.Ф., Гусев Г.А., Юровская Н.Н. Способ выявления скрытого метастазирования при увеальной меланоме. Патент № 2147373.Likhvantseva V.G., Brovkina A.F., Gusev G.A., Yurovskaya N.N. A method for detecting latent metastasis in uveal melanoma. Patent No. 2147373.Саакян С.В., Амирян А.Г., Цыганков А.Ю., Склярова Н.В., Залетаев Д.В. Клинические, патоморфологические и молекулярно-генетические особенности увеальной меланомы с высоким риском метастазирования // Российский офтальмологический журнал, 2015. Т. 8, № 2. С. 47-52.Saakyan S.V., Amiryan A.G., Tsygankov A.Yu., Sklyarova N.V., Zaletaev D.V. Clinical, pathomorphological and molecular genetic aspects of uveal melanoma with high metastatic risk. Rossiyskiy oftalmologicheskiy zhurnal = Russian Ophthalmology Journal, 2015, Vol. 8, no. 2, pp. 47-52. (In Russ.)Чернявская М.А., Ефремов А.В., Черных В.В. Взаимосвязь цитокинов в слезной и внутриглазной жидкости при меланоме хориоидеи. Вестник Тамбовского университета. Серия: Естественные и технические науки, 2015. Т. 20, № 3. С. 710-712.Chernyavskaya M.A., Efremov A.V., Chernykh V.V. Interrelation of cytokines in the lacrimal and intraocular fluid in choroidal melanoma. Vestnik Tambovskogo universiteta. Seriya: Estestvennye i tekhnicheskie nauki. = Bulletin of Tambov University. Series: Natural and Technical Sciences, 2015, Vol. 20, no. 3, pp. 710-712. (In Russ.)Desfrancois J. Double positive CD4CD8 alpha beta T cells: a new tumor-reactive population in human melanomas. PLoS ONE, 2010, Vol. 5, no. 1, e8437. doi: 10.1371/journal.pone.0008437.Desfrancois J. Double positive CD4CD8 alpha beta T cells: a new tumor-reactive population in human melanomas. PLoS ONE, 2010, Vol. 5, no. 1, e8437. doi: 10.1371/journal.pone.0008437.Filaci G., Fenoglio D., Fravega M. CD8+CD28- T regulatory lymphocytes inhibiting T cell proliferative and cytotoxic functions infiltrate human cancers. J. Immunol., 2007, Vol. 179, рр. 4323-4334.Filaci G., Fenoglio D., Fravega M. CD8+CD28- T regulatory lymphocytes inhibiting T cell proliferative and cytotoxic functions infiltrate human cancers. J. Immunol., 2007, Vol. 179, рр. 4323-4334.Houghton A.N., Gold J.S., Blachere N.E. Immunity against cancer: lessons learned from melanoma. Curr. Opin. Immunol., 2001, Vol. 13, pp. 134-140.Houghton A.N., Gold J.S., Blachere N.E. Immunity against cancer: lessons learned from melanoma. Curr. Opin. Immunol., 2001, Vol. 13, pp. 134-140.Meloni F., Morosini M., Solari N. Foxp3 expressing CD4+CD25+ and CD8+CD28- T regulatory cells in the peripheral blood of patients with lung cancer and pleural mesothelioma. Hum. Immunol., 2006, Vol. 67, pp. 1-12.Meloni F., Morosini M., Solari N. Foxp3 expressing CD4+CD25+ and CD8+CD28- T regulatory cells in the peripheral blood of patients with lung cancer and pleural mesothelioma. Hum. Immunol., 2006, Vol. 67, pp. 1-12.Shields J.A. Diagnosis and management of intraocular tumors – St. Louis: The C.V. Mosby Company, 1983, p. 703.Shields J.A. Diagnosis and management of intraocular tumors – St. Louis: The C.V. Mosby Company, 1983, p. 703.Singh A.D., Turell M.E., Topham A.K. Uveal melanoma: trends in incidence, treatment, and survival. Ophthalmology, 2011, Vol. 118, no. 9, pp. 1881-1885.Singh A.D., Turell M.E., Topham A.K. Uveal melanoma: trends in incidence, treatment, and survival. Ophthalmology, 2011, Vol. 118, no. 9, pp. 1881-1885.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.