врач клинической лабораторной диагностики, лаборатория диагностики аутоиммунных заболеваний, НМЦ по молекулярной медицине Министерства здравоохранения РФ.
197022, Россия, Санкт-Петербург, ул. Льва Толстого, 6-8, корп. 28.
Сlinical Laboratory Diagnostician,Laboratory for Diagnostics of Autoimmune Diseases, Center for Molecular Medicine.
197022, Russian Federation, St. Petersburg, L. Tolstoy str., 6-8, bldg 28.
к.м.н., заведующий лабораторией диагностики аутоиммунных заболеваний НМЦ по молекулярной медицине.
PhD (Medicine), Head, Laboratory for Diagnostics of Autoimmune Diseases, Center for Molecular Medicine.
врач-невролог; старший научный сотрудник института экспериментальной медицины.
Санкт-Петербург.
Associate Professor, Department of Physical Methods of Treatment and Sports Medicine; Neurologist; Senior Research Associate, Institute of Experimental Medicine.
врач-невролог.
Санкт-Петербург.
Neurologist.
St. Petersburg.
аспирант кафедры неврологии.
Санкт-Петербург.
Postgraduate student, Neurology Department, Center for Molecular Medicine.
д.м.н., профессор, заслуженный деятель науки РФ, руководитель отдела иммунологии и межклеточных взаимодействий.
PhD, MD (Medicine), Professor, Honoured Worker of Science of the Russian Federation, Head, Department of Immunology.
врач клинической лабораторной диагностики, лаборатория клинической иммунологии.
Сlinical Laboratory Diagnostician, Laboratory of Clinical Immunology.
д.м.н., профессор, академик РАН, заведующий лабораторией молекулярной иммунологии, директор; заведующий кафедрой иммунологии.
PhD, MD (Medicine), Professor, Full Member, Russian Academy of Sciences, Head, Laboratory of Molecular Immunology, Director; Head, Department of Immunology.
д.м.н., профессор; директор.
Зенфтенберг; Далевиц.
PhD, MD (Medicine), Professor; director.
Senftenberg; Dahlewitz.
Лабораторная диагностика антифосфолипидного синдрома (АФС) состоит в выявлении антифосфолипидных антител (АФА) методом иммуноферментного анализа (ИФА), а именно в детекции антикардиолипиновых (аКл) антител и антител к бета-2-гликопротеину (aβ2GP1). Использование классических ИФА тест-систем затруднено их недостаточной стандартизацией. Новым подходом к детекции антифосфолипидных антител является использование мультиплексного лайн-блоттинга (ЛБ), преимуществом которого является сорбция антигенов на гидрофобной PVDF-мембране и детекция спектра АФА.Целью данного исследования является анализ диагностической ценности нового ЛБ в постановке серологического диагноза АФС.Нами была собрана коллекция образцов сывороток 45 пациентов с некардиоэмболическими ишемическими инсультами, 19 пациентов с рецидивирующими тромбозами глубоких вен нижних конечностей и 44 пациента с привычным невынашиванием беременности, а также 50 клинически здоровых доноров. В данных сыворотках были измерены аКл IgG, аКл IgM, aβ2GP1 методом ИФА с помощью тест-систем фирм Euroimmun (ПР1) и Orgentec Diagnostica (ПР2) и аКл IgG, аКл IgM, aβ2GP1, а также некритериальные АФА – методом иммуноблоттинга на тест-системе фирмы Medipan (ПР3). При использовании ИФА тест-систем ПР1 аКл и aβ2GP1 детектировались у 30,5 % пациентов. ИФА методом на тест-системах ПР2 АФА были обнаружены у 38% пациентов. Методом ЛБ аКл и aβ2GP1 были выявлены у 30% пациентов. Встречаемость средних и высоких титров АФА, измеренных методом ИФА на тест-системах ПР1 и ПР2, составила 12 и 11% соответственно, а методом ЛБ – 16,6%. При анализе спектра АФА методом ЛБ чаще всего обнаруживались aβ2GP1, аФс, аКл, аАн V, аФк. Метод мультиплексного лайн-блоттинга ЛБ показывает более высокую чувствительность при детекции средних и высоких титров АФА, а также позволяет выявить пациентов с множественной АФА позитивностью.
Laboratory diagnosis of antiphospholipid syndrome (APS) is based on detection of antiphospholipid antibodies (aPLs). E.g., aPLs are directed against conformational epitopes of the so-called “co-factor” proteins: β2-gycoprotein 1 (β2-GP1), annexin V (An V) and prothrombin (Pt) that are formed during interaction with phospholipids – cardiolipin (CL), phosphatic acid (Pha), phosphatidylcholine (Pch), phosphatidylethanolamine (Pe), phosphatidylglycerol (Pg), phosphatidylinositol (Pi), phosphatidylserine (Ps). A routine methodology of detection based on ELISA testing is challenged by new tests when the antigen is absorbed on another kind of support like microbeads or membranes that can influence density of conformational epitopes for aPL’s binding. The aim of our study was to compare the results of aPLs detection by ELISA and multi-line immunodot assay (MLD). We collected blood serum samples from 45 patients with noncardioembolic ischemic strokes, 19 patients with recurrent deep vein thrombosis of lower limbs, 44 females with recurrent miscarriages, and 50 clinically healthy donors. To compare the results of aPL detection by ELISA and MLD kits, the test systems from different manufacturers were evaluated. We used an ELISA kits for detection of antibodies to CL IgG, aCL IgM, β2-GP1 produced by Euroimmun AG (Mr1) and Orgentec Diagnostica GmbH (Mr2) and MLD – for detection of antibodies to CL, β2-GP1, Pch, Pe, Pg, Pi, Ps, AnV and Pt (Medipan GmbH, Mr3). When a cut-off titer was used as the main index, 30.5% of patients were aPLs-positive with ELISA method by Mr1 and 38%, wiht Mr2. By MLD aPls were detected in 30% of patients. In the same cohort, medium and high aPLs titers (> 40 U/mL) were determined in 12% of patients using ELISA kits. Positive and highly positive aPLs titers were determined in 16% when using a new method by Mr3. Medium and high titer were detected only for antibodies to β2-GP1, CL, An V, Pha and Phs. The use of ELISA approach for detection of aPLs in patients with thrombosis and obstetric pathology is associated with relatively high number of low-positive ELISA results. Due to higher sensitivity for medium and high aPLs titers, MLD testing may be used as a confirming method for APS diagnosis.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.