mimmunМедицинская иммунологияMedical Immunology (Russia)1563-06252313-741XSPb RAACI10.15789/1563-0625-2018-2-251-254mimmun-1482Research ArticleКРАТКИЕ СООБЩЕНИЯSHORT COMMUNICATIONSОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОВЕЗИКУЛ, ОБРАЗУЕМЫХ NK-КЛЕТКАМИ, МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИEVALUATION OF MICROVESICLES FORMED BY NATURAL KILLER (NK) CELLS USING FLOW CYTOMETRYМихайловаВ. А.MikhailovaV. A.

к.б.н., старший научный сотрудник

лаборатория межклеточных взаимодействий

кафедра иммунологии

PhD (Biology), Senior Research Associate, Laboratory of Cell Interactions

Department оf Immunology,

БеляковаК. Л.BelyakovaK. L.

младший научный сотрудник

лаборатория межклеточных взаимодействий 

Junior Research Associate, Laboratory of Cell Interactions

ВязьминаЛ. П.VyazminaL. P.

младший научный сотрудник

лаборатория межклеточных взаимодействий

Junior Research Associate, Laboratory of Cell Interactions

ШевелеваА. Р.ShevelevaA. R.

лаборант-исследователь

лаборатория межклеточных взаимодействий

Laboratory Research Assistant, Laboratory of Cell Interactions

СельковС. А.SelkovS. A.

д.м.н., профессор, заслуженный деятель науки РФ, заведующий отделом

отдел иммунологии и межклеточных взаимодействий 

PhD, MD (Medicine), Professor, Merited Science Worker, Head, Department of Immunology and Cell Interactions

СоколовД. И.SokolovD. I.

д.б.н., заведующий лабораторией

лаборатория межклеточных взаимодействий

кафедра иммунологии

199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, 3. Тел.: 8 (812) 328-98-50.

PhD, MD (Biology), Head, Laboratory of Cell Interactions

Department оf Immunology

199034, Russian Federation, St. Petersburg, Mendeleevskaya Line, 3. Phone: 7 (812) 328-98-50

falcojugger@yandex.ruФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»; ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФРоссияD.O. Ott Research Institute of Obstetrics, Gynecology, and Reproductology; First St. Petersburg I.P. Pavlov State Medical UniversityRussian FederationФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»РоссияD.O. Ott Research Institute of Obstetrics, Gynecology, and ReproductologyRussian Federation201815032018202251254Copyright © Михайлова В.А., Белякова К.Л., Вязьмина Л.П., Шевелева А.Р., Сельков С.А., Соколов Д.И., 20182018Михайлова В.А., Белякова К.Л., Вязьмина Л.П., Шевелева А.Р., Сельков С.А., Соколов Д.И.Mikhailova V.A., Belyakova K.L., Vyazmina L.P., Sheveleva A.R., Selkov S.A., Sokolov D.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.mimmun.ru/mimmun/article/view/1482

В результате активации и/или апоптоза клетки могут образовывать микровезикулы (MB) размером от 100 нм до 1000 нм. В настоящее время все больше внимания уделяется детекции и оценке динамики содержания МВ лейкоцитарного происхождения. В этой связи большой интерес представляет определение МВ, образуемых NK-клетками, основной функцией которых является индукция апоптоза вирус-инфицированных и опухолевых клеток. В настоящее время нет прямых свидетельств о способности NK-клеток продуцировать МВ. Целью настоящей работы явилась оценка содержания МВ NK-клеток при помощи метода высокоточной проточной цитофлуориметрии. Установлено, что с помощью метода высокоточной проточной цитофлуориметрии возможно выявление МВ размером от 200 нм до 1000 нм, образуемых NK-клетками. Показано, что инкубация NK-клеток в присутствии TNFα не влияла на относительное количество МВ, однако приводила к повышению интенсивности экспрессии CD95 на МВ. Таким образом, метод высокоточной проточной цитофлуориметрии может быть использован для определения МВ и их фенотипа. 

As a result of activation and/or apoptosis, the cells can form microvesicles (MV) from 100 nm up to 1000 nm in size. Nowadays, the attention is being increasingly focused on dynamic detection and evaluation of leukocyte-derived microvesicles by their contents. In this regard, determination of microvesicles formed by NK cells is of utmost interest. The main function of these population is to induce apoptosis of virus-infected and tumor cells. At the present time, there is no direct evidence of the NK cells ability to produce microvesicles. This investigation was performed in order to estimate contents of NK cell-derived microvesicles using highprecision flow cytometric approach. It has been shown that the high-precision flow cytometry allows to detect microvesicles formed by NK cells, ranging from 200 to 1000 nm in size. It was demonstrated that incubation of NK cells in the presence of TNFα did not affect the relative value of microvesicles, however, being associated with increased intensity of CD95 expression on microvesicles. Hence, the high-precision flow cytometry can be used to detect microvesicles and to determine their phenotype. 

NK-клеткипроточная цитофлуориметриямикровезикулымикрочастицыклеточная культураNK-92поверхностные рецепторыNK cellsflow cytometrymicrovesiclesmicroparticlescell cultureNK-92cell surface receptorsРабота поддержана грантом РФФИ № 17-04- 00679 (культивирование клеток) и грантом РНФ № 17-15-01230 (оценка фенотипических характеристик линии NK-92 и их микрочастиц).The present work was supported by the Russian Foundation for Basic Research grant No. 17-04- 00679 (cell cultures) and the Russian Science Foundation grant No. 17-15-01230 (evaluation of the NK-92 cell line phenotype and their microvesicles).ReferencesAgouni A., Ducluzeau P. H., Benameur T., Faure S., Sladkova M., Duluc L., Leftheriotis G., Pechanova O., Delibegovic M., Martinez M.C., Andriantsitohaina R. Microparticles from patients with metabolic syndrome induce vascular hypo-reactivity via Fas/Fas-ligand pathway in mice. PLoS ONE, 2011, Vol. 6, no. 11, e27809. doi: 10.1371/journal.pone.0027809.Agouni A., Ducluzeau P. H., Benameur T., Faure S., Sladkova M., Duluc L., Leftheriotis G., Pechanova O., Delibegovic M., Martinez M.C., Andriantsitohaina R. Microparticles from patients with metabolic syndrome induce vascular hypo-reactivity via Fas/Fas-ligand pathway in mice. PLoS ONE, 2011, Vol. 6, no. 11, e27809. doi: 10.1371/journal.pone.0027809.Albanese J., Meterissian S., Kontogiannea M., Dubreuil C., Hand A., Sorba S., Dainiak N. Biologically active Fas antigen and its cognate ligand are expressed on plasma membrane-derived extracellular vesicles. Blood, 1998, Vol. 91, no. 10, pp. 3862-3874.Albanese J., Meterissian S., Kontogiannea M., Dubreuil C., Hand A., Sorba S., Dainiak N. Biologically active Fas antigen and its cognate ligand are expressed on plasma membrane-derived extracellular vesicles. Blood, 1998, Vol. 91, no. 10, pp. 3862-3874.Camussi G., Deregibus M.C., Bruno S., Grange C., Fonsato V., Tetta C. Exosome/microvesicle-mediated epigenetic reprogramming of cells. Am. J. Cancer Res., 2011, Vol. 1, no. 1, pp. 98-110.Camussi G., Deregibus M.C., Bruno S., Grange C., Fonsato V., Tetta C. Exosome/microvesicle-mediated epigenetic reprogramming of cells. Am. J. Cancer Res., 2011, Vol. 1, no. 1, pp. 98-110.Diehl P., Fricke A., Sander L., Stamm J., Bassler N., Htun N., Ziemann M., Helbing T., El-Osta A., Jowett J.B., Peter K., Microparticles: major transport vehicles for distinct microRNAs in circulation. Cardiovasc. Res., 2012, Vol. 93, no. 4, pp. 633-644.Diehl P., Fricke A., Sander L., Stamm J., Bassler N., Htun N., Ziemann M., Helbing T., El-Osta A., Jowett J.B., Peter K., Microparticles: major transport vehicles for distinct microRNAs in circulation. Cardiovasc. Res., 2012, Vol. 93, no. 4, pp. 633-644.Gelderman M.P., Simak J. Flow cytometric analysis of cell membrane microparticles. Methods Mol. Biol., 2008, Vol. 484, pp. 79-93.Gelderman M.P., Simak J. Flow cytometric analysis of cell membrane microparticles. Methods Mol. Biol., 2008, Vol. 484, pp. 79-93.Gyorgy B., Szabo T. G., Pasztoi M., Pal Z., Misjak P., Aradi B., Laszlo V., Pallinger E., Pap E., Kittel A., Nagy G., Falus A., Buzas E. I. Membrane vesicles, current state-of-the-art: emerging role of extracellular vesicles. Cellular and Molecular Life Sciences, 2011, Vol. 68, no. 16, pp. 2667-2688.Gyorgy B., Szabo T. G., Pasztoi M., Pal Z., Misjak P., Aradi B., Laszlo V., Pallinger E., Pap E., Kittel A., Nagy G., Falus A., Buzas E. I. Membrane vesicles, current state-of-the-art: emerging role of extracellular vesicles. Cellular and Molecular Life Sciences, 2011, Vol. 68, no. 16, pp. 2667-2688.Jayachandran M., Litwiller R.D., Owen W.G., Heit J.A., Behrenbeck T., Mulvagh S.L., Araoz P.A., Budoff M.J., Harman S.M., Miller V.M. Characterization of blood borne microparticles as markers of premature coronary calcification in newly menopausal women. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., 2008, Vol. 295, no. 3, pp. H931-H938.Jayachandran M., Litwiller R.D., Owen W.G., Heit J.A., Behrenbeck T., Mulvagh S.L., Araoz P.A., Budoff M.J., Harman S.M., Miller V.M. Characterization of blood borne microparticles as markers of premature coronary calcification in newly menopausal women. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., 2008, Vol. 295, no. 3, pp. H931-H938.Mause S.F., Weber C. Microparticles: protagonists of a novel communication network for intercellular information exchange. Circ. Res., 2010, Vol. 107, no. 9, pp. 1047-1057.Mause S.F., Weber C. Microparticles: protagonists of a novel communication network for intercellular information exchange. Circ. Res., 2010, Vol. 107, no. 9, pp. 1047-1057.Mikhailova V.A., Ovchinnikova O.M., Zainulina M.S., Sokolov D.I., Selkov S.A. Detection of microparticles of leukocytic origin in the peripheral blood in normal pregnancy and preeclampsia. Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 2014, Vol. 157, no. 6, pp. 721-727.Mikhailova V.A., Ovchinnikova O.M., Zainulina M.S., Sokolov D.I., Selkov S.A. Detection of microparticles of leukocytic origin in the peripheral blood in normal pregnancy and preeclampsia. Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 2014, Vol. 157, no. 6, pp. 721-727.Roos M.A., Gennero L., Denysenko T., Reguzzi S., Cavallo G., Pescarmona G.P., Ponzetto A. Microparticles in physiological and in pathological conditions. Cell Biochemistry and Function, 2010, Vol. 28, no. 7, pp. 539-548.Roos M.A., Gennero L., Denysenko T., Reguzzi S., Cavallo G., Pescarmona G.P., Ponzetto A. Microparticles in physiological and in pathological conditions. Cell Biochemistry and Function, 2010, Vol. 28, no. 7, pp. 539-548.Sokolov D.I., Ovchinnikova O.M., Korenkov D.A., Viknyanschuk A.N., Benken K.A., Onokhin K.V., Selkov S.A. Influence of peripheral blood microparticles of pregnant women with preeclampsia on the phenotype of monocytes. Transl. Res., 2016, Vol. 170, pp. 112-123.Sokolov D.I., Ovchinnikova O.M., Korenkov D.A., Viknyanschuk A.N., Benken K.A., Onokhin K.V., Selkov S.A. Influence of peripheral blood microparticles of pregnant women with preeclampsia on the phenotype of monocytes. Transl. Res., 2016, Vol. 170, pp. 112-123.van der Pol E., Coumans F.A., Grootemaat A.E., Gardiner C., Sargent I.L., Harrison P., Sturk A., van Leeuwen T.G., Nieuwland R. Particle size distribution of exosomes and microvesicles determined by transmission electron microscopy, flow cytometry, nanoparticle tracking analysis, and resistive pulse sensing. J. Thromb. Haemost., 2014, Vol. 12, no. 7, pp. 1182-1192.van der Pol E., Coumans F.A., Grootemaat A.E., Gardiner C., Sargent I.L., Harrison P., Sturk A., van Leeuwen T.G., Nieuwland R. Particle size distribution of exosomes and microvesicles determined by transmission electron microscopy, flow cytometry, nanoparticle tracking analysis, and resistive pulse sensing. J. Thromb. Haemost., 2014, Vol. 12, no. 7, pp. 1182-1192.Xu R., Greening D.W., Zhu H.J., Takahashi N., Simpson R.J. Extracellular vesicle isolation and characterization: toward clinical application. J. Clin. Invest., 2016, Vol. 126, no. 4, pp. 1152-1162.Xu R., Greening D.W., Zhu H.J., Takahashi N., Simpson R.J. Extracellular vesicle isolation and characterization: toward clinical application. J. Clin. Invest., 2016, Vol. 126, no. 4, pp. 1152-1162.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.