<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE article PUBLIC "-//NLM//DTD JATS (Z39.96) Journal Publishing DTD v1.3 20210610//EN" "JATS-journalpublishing1-3.dtd">
<article article-type="research-article" dtd-version="1.3" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" xml:lang="ru"><front><journal-meta><journal-id journal-id-type="publisher-id">mimmun</journal-id><journal-title-group><journal-title xml:lang="ru">Медицинская иммунология</journal-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>Medical Immunology (Russia)</trans-title></trans-title-group></journal-title-group><issn pub-type="ppub">1563-0625</issn><issn pub-type="epub">2313-741X</issn><publisher><publisher-name>SPb RAACI</publisher-name></publisher></journal-meta><article-meta><article-id pub-id-type="doi">10.15789/1563-0625-2017-2-157-164</article-id><article-id custom-type="elpub" pub-id-type="custom">mimmun-1218</article-id><article-categories><subj-group subj-group-type="heading"><subject>Research Article</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="section-heading" xml:lang="ru"><subject>ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="section-heading" xml:lang="en"><subject>ORIGINAL ARTICLES</subject></subj-group></article-categories><title-group><article-title>ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ОБРАЗЦОВ КОНЪЮГИРОВАННЫХ ВАКЦИН НАОСНОВЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ ОЛИГОСАХАРИДНЫХ ЛИГАНДОВ И БЕЛКА-НОСИТЕЛЯ CRM197</article-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>ANTIGENIC ACTIVITY ASSAYS OF EXPERIMENTAL CONJUGATE VACCINES BASED ON SYNTHETIC OLIGOSACCHARIDE LIGANDS AND CRM197 CARRIER PROTEIN</trans-title></trans-title-group></title-group><contrib-group><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Богомолова</surname><given-names>Е. Г.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Bogomolova</surname><given-names>E. G.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>младший научный сотрудник, лаборатория генетической инженерии вакцин</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Junior Research Associate, Laboratory of Genetically Engineered Vaccines</p></bio><email xlink:type="simple">bogomolovaele@inbox.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Добровольская</surname><given-names>О. А.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Dodrovolskaya</surname><given-names>O. A.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>младший научный сотрудник, лаборатория генетической инженерии вакцин</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Junior Research Associate, Laboratory of Genetically Engineered Vaccines</p></bio><email xlink:type="simple">bogomolovaele@inbox.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Федорова</surname><given-names>Е. А.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Fedorova</surname><given-names>E. A.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>научный сотрудник, лаборатория генетической инженерии вакцин</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Research Associate, Laboratory of Genetically Engineered Vaccines</p></bio><email xlink:type="simple">bogomolovaele@inbox.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Кондрашкина</surname><given-names>А. М.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Kondrashkina</surname><given-names>A. M.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>старший лаборант, лаборатория генетической инженерии вакцин</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Senior Laboratory Assistant, Laboratory of Genetically Engineered Vaccines</p></bio><email xlink:type="simple">bogomolovaele@inbox.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Колмаков</surname><given-names>Н. Н.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Kolmakov</surname><given-names>N. N.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>старший научный сотрудник, лаборатория генетической инженерии вакцин</p></bio><bio xml:lang="en"><p>Senior Research Associate, Laboratory of Genetically Engineered Vaccines</p></bio><email xlink:type="simple">bogomolovaele@inbox.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Ищук</surname><given-names>С. А.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Ishchuk</surname><given-names>S. A.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>инженер первой категории, лаборатория генетической инженерии вакцин</p></bio><bio xml:lang="en"><p>First Rank Engineer, Laboratory of Genetically Engineered Vaccines</p></bio><email xlink:type="simple">bogomolovaele@inbox.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Духовлинов</surname><given-names>И. В.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Dukhovlinov</surname><given-names>I. V.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>к.б.н., начальник лаборатории генетической инженерии вакцин</p></bio><bio xml:lang="en"><p>PhD (Biology), Chief, Laboratory of Genetically Engineered Vaccines</p></bio><email xlink:type="simple">bogomolovaele@inbox.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Симбирцев</surname><given-names>А. С.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Simbirtsev</surname><given-names>A. S.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>д.м.н., профессор, директор</p></bio><bio xml:lang="en"><p>PhD, MD (Medicine), Professor, Director</p></bio><email xlink:type="simple">bogomolovaele@inbox.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-2"/></contrib></contrib-group><aff-alternatives id="aff-1"><aff xml:lang="ru"><institution>ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России, Санкт-Петербург</institution><country>Россия</country></aff><aff xml:lang="en"><institution>Research Institute of Highly Pure Biopreparations, Russian Federal Agency for Medicine and Biology, St. Petersburg</institution><country>Russian Federation</country></aff></aff-alternatives><aff-alternatives id="aff-2"><aff xml:lang="ru"><institution>ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России, Санкт-Петербург&#13;
ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург</institution><country>Россия</country></aff><aff xml:lang="en"><institution>Research Institute of Highly Pure Biopreparations, Russian Federal Agency for Medicine and Biology, St. Petersburg&#13;
Pavlov First St. Petersburg State Medical University, St. Petersburg</institution><country>Russian Federation</country></aff></aff-alternatives><pub-date pub-type="collection"><year>2017</year></pub-date><pub-date pub-type="epub"><day>05</day><month>05</month><year>2017</year></pub-date><volume>19</volume><issue>2</issue><fpage>157</fpage><lpage>164</lpage><permissions><copyright-statement>Copyright &amp;#x00A9; Богомолова Е.Г., Добровольская О.А., Федорова Е.А., Кондрашкина А.М., Колмаков Н.Н., Ищук С.А., Духовлинов И.В., Симбирцев А.С., 2017</copyright-statement><copyright-year>2017</copyright-year><copyright-holder xml:lang="ru">Богомолова Е.Г., Добровольская О.А., Федорова Е.А., Кондрашкина А.М., Колмаков Н.Н., Ищук С.А., Духовлинов И.В., Симбирцев А.С.</copyright-holder><copyright-holder xml:lang="en">Bogomolova E.G., Dodrovolskaya O.A., Fedorova E.A., Kondrashkina A.M., Kolmakov N.N., Ishchuk S.A., Dukhovlinov I.V., Simbirtsev A.S.</copyright-holder><license xml:lang="ru" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.</license-p></license><license xml:lang="en" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.</license-p></license></permissions><self-uri xlink:href="https://www.mimmun.ru/mimmun/article/view/1218">https://www.mimmun.ru/mimmun/article/view/1218</self-uri><abstract><p>В настоящее время отсутствуют эффективные средства лечения ряда социально значимых бактериальных и грибковых заболеваний. β-(1→3)-глюканы, то есть полисахариды, состоящие из остатков глюкозы, связанных между собой β-(1→3)-гликозидными связями, являются принципиальными компонентами клеточной стенки грибов и дрожжей, в том числе таких опасных возбудителей госпитальных инфекций, как Candida albicans, Aspergillus fumigatus и других. В то же время β-(1→3)-глюканы отсутствуют в организме млекопитающих и человека, что делает их перспективными компонентами конъюгированных углевод-белковых вакцин для профилактики и лечения грибковых инфекций. Белок CRM197 является производным дифтерийного токсина и характеризуется единичной мутацией, а именно заменой глицина на глутаминовую кислоту в положении 52, что полностью элиминирует его токсичность. Белок CRM197 нетоксичен, тем не менее сохраняет те же воспалительные и иммуностимулирующие свойства, что и дифтерийный токсин. В настоящее время данный белок широко используется в качестве безопасного носителя в конъюгированных вакцинах. Классическим способом получения CRM197 является выделение их из лизогенных культур Corynebacterium diphtheriae. Альтернативой классическому способу получения CRM197 является экспрессия его гена в клетках Escherichia coli, Bacillus subtilis и Pseudomonas fluorescens. Преимущество использования Escherichia coli в качестве продуцента состоит в том, что данный метод является более простым и дешевым и позволяет получать рекомбинантный CRM197 в короткие сроки с использованием непатогенного микроорганизма. Целью данного исследования было изучение антигенной активности экспериментальных образцов конъюгированных вакцин на основе синтетических олигосахаридных лигандов и белка-носителя CRM197 в реакции конкурентного ИФА. Двукратная иммунизация экспериментальными образцами конъюгированных вакцин на основе олигосахаридных лигандов и белка-носителя CRM197 лабораторных мышей линии Balb/c вызывает формирование высокого титра специфических антител. Все исследованные образцы конъюгированных вакцин на основе олигоглюкозидов с различным содержанием мономерных звеньев в цепи (пентасахариды, гептасахариды, наносахариды, а также ундекасахариды) при их двукратном введении вызывали формирование у иммунизированных животных титра антител на уровне 1:51200. Высокая авидность формирующихся антител к своим олигосахаридным лигандам была показана в реакции конкурентного ИФА. Полученные данные говорят о целесообразности дальнейших доклинических исследований экспериментальных образцов конъюгированных вакцин против грибов Candida и Aspergillus, а также выбора наиболее иммуногенного и эффективного варианта вакцины из исследуемых.</p><p> </p></abstract><trans-abstract xml:lang="en"><p>So far, there is no effective treatment for a number of socially significant bacterial and fungal diseases. β-(1→3) glucans are polysaccharides consisting of glucose units linked together with β-(1→3)- glycoside bonds. They are principal components of the fungal cell wall including such dangerous nosocomial pathogens as Candida albicans, Aspergillus fumigatus and others. At the same time, β-(1→3) glucans are absent in humans and other mammals, thus making them to be promising components of carbohydrate-protein conjugate vaccines for prevention and treatment of fungal infections. The CRM197 protein is a non-toxic derivative of diphtheria toxin, which is widely used as a safe carrier for conjugate vaccines. The CRM197 extraction from lysogenic C. diphtheriae cultures is a classic way of its production. An alternative to the classic method is a transgene-driven CRM197 protein expression in E. coli, B. subtilis and Pseudomonas fluorescens. The advantage for using Escherichia coli in this case is that this method is more simple and inexpensive, and allows of producing recombinant CRM197 within short terms employing a non-pathogenic microorganism. The purpose of this study was to investigate antigenic activity in the samples of experimental conjugate vaccines based on synthetic oligosaccharide ligands and CRM197 carrier protein, by means of a competitive ELISA. A double immunization of laboratory Balb/c mice with experimental samples of conjugate vaccines based on oligosaccharide ligands and CRM197 protein caused induction of specific antibodies at high titers. All the samples of oligoglucoside-based conjugate vaccines with different contents of monomeric units (pentasaccharides, heptasaccharides, nanosaccharides, and undecasaccharides) caused the formation high antibody titer at the level 1: 51,200,following tandem injections. High avidity of antibodies to their oligosaccharide ligands was shown by competitive ELISA reaction. These data suggest a relevance of further pre-clinical trials of conjugate vaccines against Candida and Aspergillus, as well as selection of the most immunogenic and effective version of the conjugate vaccine.</p><p> </p></trans-abstract><kwd-group xml:lang="ru"><kwd>конъюгированные вакцины</kwd><kwd>рекомбинантный CRM197</kwd><kwd>антигенная активность</kwd><kwd>мыши Balb/c</kwd></kwd-group><kwd-group xml:lang="en"><kwd>conjugate vaccines</kwd><kwd>recombinant CRM197</kwd><kwd>antigenic activity</kwd><kwd>Balb/c mice</kwd></kwd-group></article-meta></front><back><ref-list><title>References</title><ref id="cit1"><label>1</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Духовлинов И.В., Федорова Е.А., Богомолова Е.Г., Добровольская О.А., Черняева Е.Н., Аль-Шехадат Р.И., Симбирцев А.С. Получение рекомбинантного белка CRM197 в клетках E. coli. Инфекция и иммунитет. 2015. Т. 5, № 1. С. 37- 44. [Dukhovlinov I.V., Fedorova E.A., Bogomolova E.G., Dobrovolskaya O.A., Chernyaeva E.N., Al-Shekhadat R.I., Simbirtsev A.S. [Production of recombinant protein CRM197 in Escherihia coli. Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2015, Vol. 5, no. 1, pp. 37-44. (in Russ.)]. http://dx.doi.org/10.15789/2220-7619-2015-1-37-44</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Духовлинов И.В., Федорова Е.А., Богомолова Е.Г., Добровольская О.А., Черняева Е.Н., Аль-Шехадат Р.И., Симбирцев А.С. Получение рекомбинантного белка CRM197 в клетках E. coli. Инфекция и иммунитет. 2015. Т. 5, № 1. С. 37- 44. [Dukhovlinov I.V., Fedorova E.A., Bogomolova E.G., Dobrovolskaya O.A., Chernyaeva E.N., Al-Shekhadat R.I., Simbirtsev A.S. [Production of recombinant protein CRM197 in Escherihia coli. Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2015, Vol. 5, no. 1, pp. 37-44. (in Russ.)]. http://dx.doi.org/10.15789/2220-7619-2015-1-37-44</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit2"><label>2</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Blanchard-Rohner, G. The B-cell response to a primary and booster course of MenACWY-CRM197 vaccine administered at 2, 4 and 12 months of age. Vaccine, 2013, Vol. 31, no. 20, pp. 2441-2448.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Blanchard-Rohner, G. The B-cell response to a primary and booster course of MenACWY-CRM197 vaccine administered at 2, 4 and 12 months of age. Vaccine, 2013, Vol. 31, no. 20, pp. 2441-2448.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit3"><label>3</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">CDC. Recommendations of the Immunization Practices Advisory Committee: prevention of pneumococcal pisease. MMWR, 1997, no. 46, p. 8.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">CDC. Recommendations of the Immunization Practices Advisory Committee: prevention of pneumococcal pisease. MMWR, 1997, no. 46, p. 8.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit4"><label>4</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Clements D.A., Gilbert G.L. Immunization for the prevention of Haemophilus influenzae type b infections: a review. Aust. N. Z. J. Med. 1990, no. 20, pp. 828-834.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Clements D.A., Gilbert G.L. Immunization for the prevention of Haemophilus influenzae type b infections: a review. Aust. N. Z. J. Med. 1990, no. 20, pp. 828-834.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit5"><label>5</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Dagan R., Poolman J., Siegrist C.-A. Glycoconjugate vaccines and immune interference: A review. Vaccine. 2010, Vol. 28, no. 34, pp. 5513-5523.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Dagan R., Poolman J., Siegrist C.-A. Glycoconjugate vaccines and immune interference: A review. Vaccine. 2010, Vol. 28, no. 34, pp. 5513-5523.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit6"><label>6</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Ito J.I. T cell immunity and vaccines against invasive fungal diseases. Immunological Investigations. 2011, Vol. 40, pp. 825-838.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Ito J.I. T cell immunity and vaccines against invasive fungal diseases. Immunological Investigations. 2011, Vol. 40, pp. 825-838.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit7"><label>7</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Komarova B.S., Orekhova M.V., Tsvetkov Y.E., Beau R., Aimanianda V., Latgé J.P., Nifantiev N.E. Synthesis of a pentasaccharide and neoglycoconjugates related to fungal α-(1→3)-glucan and their use in the generation of antibodies to trace Aspergillus fumigatus cell wall. Chemistry. 2015, Vol. 21, no. 3, pp. 1029-1035.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Komarova B.S., Orekhova M.V., Tsvetkov Y.E., Beau R., Aimanianda V., Latgé J.P., Nifantiev N.E. Synthesis of a pentasaccharide and neoglycoconjugates related to fungal α-(1→3)-glucan and their use in the generation of antibodies to trace Aspergillus fumigatus cell wall. Chemistry. 2015, Vol. 21, no. 3, pp. 1029-1035.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit8"><label>8</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Retallack D.M. Reliable protein production in a Pseudomonas fluorescens expression system. Protein Expr. Purif. 2012, Vol. 81, no. 2, pp. 157-165.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Retallack D.M. Reliable protein production in a Pseudomonas fluorescens expression system. Protein Expr. Purif. 2012, Vol. 81, no. 2, pp. 157-165.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit9"><label>9</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Van den Biggelaar A.H.J. et al. Pneumococcal conjugate vaccination at birth in a high-risk setting: no evidence for neonatal T-cell tolerance. Vaccine, 2011, Vol. 29, no. 33, pp. 5414-5420.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Van den Biggelaar A.H.J. et al. Pneumococcal conjugate vaccination at birth in a high-risk setting: no evidence for neonatal T-cell tolerance. Vaccine, 2011, Vol. 29, no. 33, pp. 5414-5420.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit10"><label>10</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Wang X.J., Sui X., Yan L., Wang Y., Cao Y.B., Jiang Y.V. Vaccines in the treatment of invasive candidiasis. Virulence, 2015, Vol. 6, no. 4, pp. 309-315.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Wang X.J., Sui X., Yan L., Wang Y., Cao Y.B., Jiang Y.V. Vaccines in the treatment of invasive candidiasis. Virulence, 2015, Vol. 6, no. 4, pp. 309-315.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit11"><label>11</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Yashunsky D.V.,Tsvetkov Y.E., Grachev A.A., Chizhov A.O., Nifantiev N.E. Synthesis of 3-aminopropyl glycosides of linear β-(1→3)-D-glucooligosac-charides. Carbohydrate Research, 2016, Vol. 419, no. 8, p. 17.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Yashunsky D.V.,Tsvetkov Y.E., Grachev A.A., Chizhov A.O., Nifantiev N.E. Synthesis of 3-aminopropyl glycosides of linear β-(1→3)-D-glucooligosac-charides. Carbohydrate Research, 2016, Vol. 419, no. 8, p. 17.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit12"><label>12</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Zhou J. Secretory expression of recombinant diphtheria toxin mutants in B. Subtilis. J. Tongji Med. Univ. Tong Ji Yi Ke Xue Xue Bao, 1999, Vol. 19, no. 4, pp. 253-256.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Zhou J. Secretory expression of recombinant diphtheria toxin mutants in B. Subtilis. J. Tongji Med. Univ. Tong Ji Yi Ke Xue Xue Bao, 1999, Vol. 19, no. 4, pp. 253-256.</mixed-citation></citation-alternatives></ref></ref-list><fn-group><fn fn-type="conflict"><p>The authors declare that there are no conflicts of interest present.</p></fn></fn-group></back></article>
